脐血间充质干细胞分离培养与鉴定-新桥医院

人脐带间充质干细胞分离培养鉴定及诱导分化实验谢娜;娄鸣;饶国洲;朱勇;唐成芳;王琳【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2015(000)003【摘要】目的：建立人脐带间充质干细胞（MSCs）分离培养方法，并进行生物学鉴定及定向诱导分化研究。

方法采用酶消化 Wharton 胶法体外分离培养人脐带干细胞，通过流式细胞仪分析其表面标记分子，并向成骨、成脂方向诱导分化，钙钴法染色检测 ALP，茜素红染色检测矿化结节，油红“O”染色检测脂肪滴，进行干细胞的成骨成脂活性鉴定。

结果分离培养的脐带间充质干细胞 CD73，CD90和CD105均表达阳性，阳性率为92.45％，95.45％和96.45％，CD34表达阴性，阳性率仅为1.07％。

成骨诱导3周后 ALP 染色胞质内可见黑色颗粒，4周后可见大量矿化结节。

成脂诱导2周后细胞内出现大量脂肪小滴，多数细胞形态变圆，油红“O”染色阳性。

结论脐带来源的间充质干细胞具有成骨、成脂多向分化潜能，为临床干细胞治疗研究的种子细胞来源奠定了基础。

【总页数】4页(P67-70)【作者】谢娜;娄鸣;饶国洲;朱勇;唐成芳;王琳【作者单位】西安医学院口腔医学系，西安 710021;西安医学院口腔医学系，西安 710021;西安交通大学口腔医院，西安 710004;西安医学院口腔医学系，西安710021;西安医学院口腔医学系，西安 710021;西安医学院口腔医学系，西安710021【正文语种】中文【中图分类】R457.7【相关文献】1.脐血间充质干细胞的分离培养鉴定及诱导分化研究 [J], 潘丽杰;陈妍;袁杰2.小鼠骨髓干细胞的分离培养鉴定及诱导分化的研究 [J], 王艳;胡翰青;邢红艳;翁雁鸣;刘彦普;刘斌3.人脂肪干细胞分离培养鉴定及向成骨细胞诱导分化的实验研究 [J], 王栋;鹿均先;熊传芝4.兔脂肪干细胞的分离培养鉴定及成骨诱导分化研究 [J], 郝伟;胡蕴玉;魏义勇;庞龙;白建萍;吕荣;王军;张大伟5.兔脂肪干细胞的分离培养鉴定及诱导分化研究 [J], 李龙;赵建辉;刘斌;令狐大科;刘彦普;谭新颖;吕成鹏;徐小方因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

两种分离脐血间充质干细胞的方法比较高杨;李立;冉江华;陈奕明;蒋益舟【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)019【摘要】背景:目前分离脐血间充质干细胞的方法很多,尚没有确定一种为最有效的方法.目的:寻找一种最为可靠的脐血间充质干细胞分离方法.方法:应用Percoll分离液法和羟乙基淀粉沉降法对脐血进行分离得到单核细胞,在含体积分数15%新生牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养并传代.观察不同分离方法脐血单核细胞的回收率,每次传代的时间和细胞增值速度,培养过程中间充质干细胞形态的变化情况,并用流式细胞仪检测第3代细胞表面标志物CD90、CD44、CD34的表达.结果与结论:与Percoll分离液法相比羟乙基淀粉沉降法获得的单核细胞多,单核细胞回收率高(P < 0.01),第1次传代时间短(P < 0.01).然而两种方法获得的细胞经培养在形态的变化和表面标志物CD90、CD44、CD34的表达上差异并无显著性意义(P > 0.05).所以羟乙基淀粉沉降法的分离效率较高,培养时间短,但是并不能获得质量较高的脐血间充质干细胞.%BACKGROUND: There is no standard method to isolate umbilical cord blood mesenchymal stem cells (MSCs).OBJECTIVE: To discuss an optimized isolation method of human umbilical cord blood MSCs.METHODS: Monocytes were isolated from umbilical cord blood using the Percoll separation medium method and hydroxyethyl starch sedimentation respectively. Cells were cultured in DMEM/F12 containing 15％ newborn calf serum. The main outcome indictors were recovery rate of monocytes, generation time, cell proliferation, morphological change,and the surface markers expressed on umbilical cord blood MSCs measured by flow cytometer.RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the Percoll separation medium method, the recovery rate of monocytes increased and the first passage time reduced using the hydroxyethyl starch sedimentation (P ＜ 0.01). But the morphological change and surface markers CD90, CD44, CD34 expression of two methods have no differences (P ＞ 0.05). Therefore, the hydroxyethyl starch sedimentation has higher isolation efficiency and the shorter culture time than Percoll separation medium method. However, the quality of umbilical cord blood MSCs which are isolated by two methods has no difference.【总页数】4页(P3472-3475)【作者】高杨;李立;冉江华;陈奕明;蒋益舟【作者单位】昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011;昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011;昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011;昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011;昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.小鼠髓源性内皮祖细胞体外培养的两种不同分离方法的比较 [J], 吴瑞影;许建华2.两种人脐带间充质干细胞源外泌体分离方法的比较 [J], 刘高米洋;潘兴华;和法莲;陆容;刘菊芬;何洁;王红阳3.两种不同分离方法的唾液多肽组分析结果比较 [J], 孔祥怡; 杜建时; 徐金玲; 李水明; 王勇; 赵晴4.两种人包皮成纤维细胞分离培养方法的比较 [J], 曹卉;王薇;肖敬川;黄邓高;高元慧;朱丹5.人脐血间充质干细胞两种移植方法在骨折模型中比较研究 [J], 刘宝平;李永乐;郑铁钢;范先东;李铁军;孙义忠;郝珍珍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脐带血间充质干细胞体外分离、纯化及培养陈 镭1,惠国桢2,栾文忠1,苗宗宁3,王 玲3,陆 华3,吴智远2,芦 奕2(1.天津医科大学,天津,300070; 2.江苏省无锡市第三人民医院细胞实验室,江苏无锡,214019;3.苏大学附属第一医院神经外科,江苏苏州,215006)摘 要:目的 研究脐带血(HUCB)中含有的间充质干细胞(M S Cs)体外分离、纯化及培养条件,探究其作为种子细胞应用于实验和临床的可行性。

方法 无菌条件下取正常足月剖腹产的脐带血,经肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,以偏酸性的M esen cult T M 作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞层,用流式细胞仪检测M SCs 表面抗原。

结果 来源于脐血的单个核细胞经体外培养贴壁后出现破骨样及间充质样的细胞,间充质细胞为成纤维样的细胞形态,并表达M SCs 相关的抗原(CD 29、CD 44、CD 166),但不表达造血细胞抗原(CD 34、CD 45),这与源于骨髓的M SCs 一致。

结论 脐带血来源的M SCs 能在体外培养、扩增,而用于满足实验和临床的需要。

关键词:脐带血;间充质干细胞;体外培养中图分类号:R 329 2 文献标识码:A 文章编号:1672 2353(2004)01 0012 03THE ISOLATION PURIFICATION ANDCULTURE OF HUCA MSCsCHEN Lei,HUI Guo zen,RUAN Wen zong,MIAO Zong ning,WANG Ling,LU HUA,W U Zhi yuan,LU Li(1.T ianj in M edical Univer sity ,T ianj in,300070;2.Cell Dep ar tment,T hir d H osp ital of W ux i ,W ux i ,Jiangsu ,2140001;3.Dep ar tment of Neurosur gery ,First A f f iliated H osp ital of Suz houUniversity ,Suz hou,Jiangsu ,215006)ABSTRAC T Objective:To investig ate the isolation,purification and culture of hum an umbilical cord blood(HUCB)mesenchymal stem cells(M SCs)in vitro,and to observe the feasibility of using M SCs as seed cells in experiment and clinic.Methods:HUCB w ere collected from full term deliveries scheduled for cesarean section,all specimens w as obtained sterilely w ith preservative free heparin,the cord blood mononuclear cell w as isolated by lymphocyte separation medium,and puri fied and culture with M esencult T M medium and acidic environment to produce adherent layer,the surface antig en ex pression of MSCs was detected by flow cytometry.Results:The UCB derived mononuclear cells,when set in culture,gave rise to adherent cells,w hich ex hibited either an osteo clast or mesenchym al like phenoty pe,cells w ith the M SCs displayed a fibroblast like morpholog y and ex pressed several MSCs related antigens (CD 29,CD 44,CD 166),but did not ex press haematopoi etic cells antigens(CD 34,CD 45),which w as identical to human bone marrow derived M SCs.C on clusion:M SCs in H UCB can culture and expand in vitro,which could be regarded as an alternative source of MSCs for experimental and clinical needs.KEY WORDS umbilical cord blood;mesenchymal stem cells;culture in v itro脐带血(human umbilical cord blood,HUCB)是胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液,含有丰富的干细胞和祖细胞,其主要包含造血干细胞和间充质干细胞(mesenchy mal stem收稿日期:2003-12-16基金项目:国家自然科学基金资助项目(30271325)、江苏省自然科学基金资助项目(BK2001170)作者简介:陈镭(1965-),男,天津市人,在读博士研究生。

冻存人脐带间充质干细胞的分离培养刘亭;姜翙;刘志华;孙宁;李晓媚;翁锦生【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)029【摘要】背景:目前大多数报道是从新鲜脐带中分离培养脐带间充质干细胞,而从冻存脐带组织中分离培养间充质干细胞鲜有报道.目的:从冻存人脐带中分离培养间充质干细胞,并比较多种培养方法获得的脐带间充质干细胞的生物学特性.方法:采用组织块贴壁法从冻存脐带组织中分离培养脐带间充质干细胞,分别用有血清和无血清培养基培养,观察其形态特征,绘制其生长曲线;流式细胞仪检测第3代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)和第14代脐带间充质干细胞(含血清培养基培养)表面抗原表达;第3代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)分别用成脂、成骨、成软骨诱导培养液诱导其分化,qPCR鉴定分化标记基因表达;检测第7代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)及其培养上清中的细胞因子水平.结果与结论:①从冻存人脐带组织原代培养的脐带间充质干细胞,呈梭形纤维样细胞形态,生长力旺盛,脐带间充质干细胞可用无血清培养基传代培养,但增殖速率还远低于有血清培养基;②流式细胞术分析结果显示为脐带间充质干细胞CD90、CD73、CD105呈强阳性表达,CD45、CD34、CD14/CD11b、CD79a/CD19、HLA-DR呈阴性表达;③经成脂、成骨和成软骨诱导培养14-28 d后,脂肪细胞标记基因PPARγ、骨细胞标记基因Osteonectin、软骨细胞标记基因CollagenⅡ的表达量显著升高;④第 7 代脐带间充质干细胞及其培养上清可检测出粒细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、干扰素α2、趋化因子 IP-10、白细胞介素4、白细胞介素6等细胞因子;⑤结果提示可从冻存人脐带中培养扩增脐带间充质干细胞.【总页数】6页(P4637-4642)【作者】刘亭;姜翙;刘志华;孙宁;李晓媚;翁锦生【作者单位】广州医科大学附属第五医院,广东省广州市 510700;广州医科大学附属第五医院,广东省广州市 510700;广州医科大学附属第五医院,广东省广州市510700;广州医科大学附属第五医院,广东省广州市 510700;广州医科大学附属第五医院,广东省广州市 510700;广州医科大学附属第五医院,广东省广州市 510700【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.人脐带间充质干细胞的快速分离、纯化及冻存 [J], 王跃春;李业霞;段阿林;李佳穗;郑乔丹2.无血清培养体系分离培养人脐带间充质干细胞 [J], 张丽;王文芳;郭芸;邓丹琪;黄雅亮;纪秋琴;张佩莲3.冻存人脐带间充质干细胞的分离培养 [J], 刘亭;姜翙;刘志华;孙宁;李晓媚;翁锦生;;;;;;4.不同分离方法及培养条件对人脐带间充质干细胞生物活性的影响 [J], 徐斌; 刘毅5.人脐带间充质干细胞的分离培养及多向分化潜能研究 [J], 陈凤;杨敏;李彦洁;彭凌;黄华鑫;彭运因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脐带间充质干细胞分离培养和生物学特性的初步研究尹富华;杨晓凤;黄胜男;许忆峰【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2009(024)002【摘要】目的建立从脐带分离间充质干细胞的分离培养方法,探讨研究其基本生物学特征.方法无菌条件下收集健康孕妇剖宫产的新生儿脐带,用酶消化法获取间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),经传代培养、倒置显微镜观察形态、细胞增殖能力观察及流式细胞仪检测脐带间充质干细胞免疫表型.结果经传代培养后,脐带间充质干细胞呈长梭形、旋涡状生长.细胞免疫表型显示,CD34,CD45,CD14阴性;CD90,CD73,CD105阳性.结论脐带间充质干细胞与骨髓来源的间充质干细胞形态无明显变化,且免疫表型类似,是一种新的间充质干细胞来源.【总页数】3页(P75-77)【作者】尹富华;杨晓凤;黄胜男;许忆峰【作者单位】解放军第463医院细胞治疗中心,沈阳,110042;解放军第463医院细胞治疗中心,沈阳,110042;解放军第463医院细胞治疗中心,沈阳,110042;解放军第463医院细胞治疗中心,沈阳,110042【正文语种】中文【中图分类】R392-33【相关文献】1.鸭胚脐带间充质干细胞的分离培养及其生物学特性 [J], 王文杰;关伟军;马月辉;李向臣2.人脐带间充质干细胞体外分离培养及其生物学特性的研究 [J], 韩潇;白海;赵强;杨柯;欧剑锋3.人脐带间充质干细胞体外分离、培养、扩增方法及生物学特性研究 [J], 张颢;龚伟;韩之波;赵辉;张浪辉;陈志哲;刘拥军;韩忠朝4.人脐带间充质干细胞的分离、培养及其肝细胞生物学特性分析 [J], 李丽丽;王巧燕;代克强;丁一;樊晋宇5.马脐带间充质干细胞的分离培养与生物学特性研究 [J], 江文康;王丙云;黄国健;雷彬;王彩莹;罗惠娜;赵明明;樊全宝;阮慧敏;陈胜锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

复旦学报(医学版)Fudan Univ J Med Sci2007Nov ,34(6)人类脐带血间充质干细胞的培养及鉴定马晓生1　姜建元1△　吕飞舟1　李小康2(1复旦大学附属华山医院骨科　上海　200040;2日本国立成育医疗中心研究所移植免疫研究室　日本　东京　157-8535)【摘要】　目的　对人类脐带血中的有核细胞进行分离培养及鉴定,观察能否得到间充质干细胞。

方法　抽取人类脐带静脉血,进行细胞分离和培养,并进行荧光激活细胞分析。

结果　脐带血中间充质干细胞与骨髓中的类似,其外表呈纤维样;流式细胞术鉴定结果表明这种细胞能表达CD29、CD44、CD90、CD95、CD105、CD166以及M HC Ⅰ(组织相容性抗原复合体Ⅰ),但不能表达CD14、CD34、CD40、CD45、CD80、CD86、CD117、CD152以及M HC Ⅱ(组织相容性抗原复合体Ⅱ);并且具有分化成骨细胞和脂肪细胞的潜能。

结论　可以从人类脐带血中成功分离培养得到间充质干细胞。

【关键词】　人脐带血;　间充质干细胞;　成骨细胞;　脂肪细胞【中图分类号】　R392.12 【文献标识码】　B　国家自然科学基金项目(333);上海市卫生局基金项目　△通讯作者　2x 83@Cultiva tion a nd identif ica tion of mesenchyma l stem cells f r omhuman umbilical cor d bloodMA Xiao 2Sheng 1,J IAN G Jia n 2Y uan 1△,L V Fei 2Zhou 1,L I X iao 2Kang 2(1D epa rtment of Or thopaedics ,H uashan H o s pita l ,Fudan Univ e rsit y ,S hanghai 200040,China ;2L abor atory of T ra nsplantation Immunity ,J a pa nese Chengyu Resea rch Institute ,Tokyo 157-8535,J a pa n )【Abstract 】　Purpose To cultivat e and identify mesenchymal st em cells (MSCs)fro m h uman umbilicalcord blood.　Methods Hu man umbilical cord blood was draw n o ut ,t hen MSCs was sep arat ed and cultivated.They were identified by FA C 2Scan.　R esul ts MSCs were fo und in human u mbilical cord bloo d wit h fibro bla st 2li ke ap pearin g.Flow Cyto metry result s showed t hat t hey exp ressed CD29,C D44,CD90,CD95,CD105,CD166and M HC class Ⅰ,but the exp ressio n of CD14,CD34,CD40,C D45,CD80,CD86,CD117,CD152and MH C class Ⅱwas negative.These cell s had t he p otential of differentiatio n i nto o steo blast s and fat cell s.　C onclusion s MSCs can be separat ed and culti vated fro m human umbilical cord bloo d.【Key words 】　hu man umbilical co rd blood ;　mesenchymal st em cell s ;　o st eoblast s ;　fat cell s 在骨髓中存在间充质干细胞和造血干细胞早已是被研究者广泛接受的事实。

人脐带间充质干细胞体外分离、纯化及鉴定王娟;陆琰;何冬梅;张洹【期刊名称】《暨南大学学报（自然科学与医学版）》【年(卷),期】2009(030)004【摘要】目的:从人脐带中分离、培养并鉴定间充质干细胞(MSCs).方法:用胶原酶消化法分离脐带间充质干细胞,差速贴壁法进行纯化;MTT法检测细胞增殖活性,并绘制生长曲线;流式细胞仪检测其表面标志和细胞周期;地塞米松、抗坏血酸、磷酸甘油诱导其向成骨细胞分化,并用碱性磷酸酶染色鉴定;地塞米松、胰岛素、吲哚美辛诱导其向脂肪细胞分化,用油红O染色鉴定;将脐带MSCs注射到BALB/c裸鼠肾被膜下,观察有无致瘤性.结果:从人脐带中分离出的同充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长;细胞表达CD29、CD44,低表达CD106,不表达CD14、CD31、CD34、CD45和HLA-DR;具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的潜能;将脐带MSCs移植到BALB/c裸鼠肾被膜下,未观察到致瘤性.结论:从脐带中成功分离培养的细胞,具有间充质干细胞生物学特性.【总页数】6页(P367-372)【作者】王娟;陆琰;何冬梅;张洹【作者单位】暨南大学医学院血液病研究所,广东,广州,510632;暨南大学医学院血液病研究所,广东,广州,510632;暨南大学医学院血液病研究所,广东,广州,510632;暨南大学医学院血液病研究所,广东,广州,510632【正文语种】中文【中图分类】Q813【相关文献】1.人成纤维细胞的体外分离、纯化培养及细胞鉴定 [J], 王玲玲;马峰;张玉成;杜珍武;张桂珍2.睾丸Leydig干细胞分离、纯化及鉴定的体外研究 [J], 肖斌;王晓云;周广东;周英晋;毕宏达;朱吉;张敬德;邢新3.大鼠雪旺细胞体外分离培养纯化及鉴定 [J], 张春燕;张自强;刘玉梅;邓雯;王玉琴4.猴头菌素分离纯化、结构鉴定及体外活性研究 [J], 何晋浙;樊鹏;孙培龙5.胎猪胰腺导管干细胞的体外分离、纯化、培养及鉴定 [J], 李云龙;郭欣;杨晓波;黄跃南因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人脐带间充质干细胞体外培养、鉴定及其诱导分化的研究王晓辉;惠玲;杨霄鹏;王鲲;杨雯;哈小琴【期刊名称】《解放军医药杂志》【年(卷),期】2013(025)010【摘要】目的通过体外分离、培养及鉴定人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs),探讨其多向分化潜能.方法取正常足月新生儿脐带,采用组织贴壁培养法分离原代hUCMSCs,观察细胞生长形态.采用流式细胞仪技术检测hUCMSCs细胞表型及细胞周期.通过成神经细胞诱导和成脂肪细胞诱导,鉴定hUCMSCs的多向诱导分化能力.结果成功分离和培养hUCMSCs原代细胞,经流式细胞仪鉴定高表达间质细胞标志CD44和CD105,阳性率为96.73%和96.10%,整合素受体CD29阳性率为99.53%;低表达造血系标志CD34和CD45阳性率为0.80%和1.91%,人白细胞抗原HLA-DR阳性率为1.41%.细胞周期检测hUCMSCs主要处于G0/G1期.hUCMSCs成神经细胞诱导,出现神经元样细胞;免疫组化检测神经巢蛋白(Nestin)呈阳性表达.hUCMSCs成脂肪细胞诱导,出现空泡样脂肪滴,油红O染色可见脂质沉积.结论 hUCMSCs具有多向分化潜能,可跨胚层诱导分化为多种组织类型的细胞.【总页数】6页(P11-15,30)【作者】王晓辉;惠玲;杨霄鹏;王鲲;杨雯;哈小琴【作者单位】730050,兰州,兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃省干细胞与基因药物重点实验室;730050,兰州,兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃省干细胞与基因药物重点实验室;730050,兰州,兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃省干细胞与基因药物重点实验室;730050,兰州,兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃省干细胞与基因药物重点实验室;730050,兰州,兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃省干细胞与基因药物重点实验室;730050,兰州,兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃省干细胞与基因药物重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R-33;R329.29【相关文献】1.人脐带间充质干细胞分离培养鉴定及诱导分化实验 [J], 谢娜;娄鸣;饶国洲;朱勇;唐成芳;王琳2.人脂肪间充质干细胞体外培养鉴定与诱导分化的初步研究 [J], 郭常敏;王达利;魏在荣;龙艳3.人脐带间充质干细胞的分离鉴定及多向诱导分化 [J], 李茂;黄文;4.人脐带间充质干细胞的分离鉴定及多向诱导分化 [J], 李茂;黄文5.人脐带问充质干细胞体外培养、鉴定及其诱导分化的研究 [J], 王晓辉;惠玲;杨霄鹏;王鲲;杨雯;哈小琴;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脐带血间充质干细胞的分离培养和鉴定概述脐带血间充质干细胞（Wharton’s jelly mesenchymal stem cells, WJ-MSCs）是一类来源于脐带的干细胞。

WJ-MSCs具有较强的增殖能力、多向分化潜能、免疫调节功能等，是目前研究领域中备受关注的干细胞类型之一。

在该文档中，我们将介绍如何从脐带血样中分离出WJ-MSCs，并进行相关的细胞培养和鉴定。

分离过程脐带血样获取首先需要从人体获得脐带血样。

脐带血样一般可以在婴儿出生后通过脐带穿刺等方式获取。

获取脐带血样需要得到母亲的同意，并通过相关机构进行规范化处理。

分离WJ-MSCs脐带血样获取后，需要将其中的WJ-MSCs进行分离。

具体分离步骤如下： 1.将脐带血样转移至离心管中； 2. 加入相同体积的PBS，并轻轻混合； 3. 通过低速离心分离脐带血样中的血细胞等成分； 4. 取下沉后的WJ组织，加入胶原酶等酶类消化物进行消化，离心分离细胞； 5. 通过细胞培养等方式扩增细胞数量。

细胞培养在分离得到WJ-MSCs之后，需要进行相关的细胞培养。

具体培养步骤如下：1. 将分离得到的WJ-MSCs转移至新的培养皿中； 2. 加入含有10% FBS的DMEM低糖培养基； 3. 定期更换培养基，并记录生长状况。

鉴定方法确定分离的细胞为WJ-MSCs的方法很多，常用的方法如下： #### 形态学鉴定通过显微镜观察细胞形态、吸附能力等，判断细胞是否符合WJ-MSCs的特征。

免疫学鉴定通过使用针对WJ-MSCs标记的分子抗体（如CD73、CD90等）对细胞进行标记，并使用流式细胞仪等方法进行检测。

活力检测通过MTT法、细胞增殖实验等，检测WJ-MSCs是否具备较强的增殖能力。

多向分化鉴定通过对WJ-MSCs进行分化培养，如脂肪细胞培养、软骨细胞培养等，检测WJ-MSCs是否显示多向分化的潜能。

结论通过脐带血样的分离，可以获得WJ-MSCs，并通过相关的培养和鉴定方法，确定其为WJ-MSCs，并进一步应用于生物医学实验中，具有潜在的临床应用前景。

人脐血间充质干细胞体分离、培养及向脂肪细胞分化的实验研究邓寅业;陶艳玲【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2010(039)005【摘要】目的:探讨脐血间充质干细胞(UCB-MSCs) 的分离培养及向脂肪细胞的分化潜能.方法:从足月儿脐血中获得间充质干细胞,体外培养传代,流式细胞检测细胞表面及抗原细胞周期;予10-6M地塞米松、100 μg/ml 1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤(IBMX)、50 μg/ml抗坏血酸的IMDM培养基,对MSCs进行诱导向脂肪细胞分化,油红-O染色染色鉴定.结果:成功建立了脐血间充质干细胞分离及培养扩增的方法;流式细胞仪检测结果显示, 贴壁细胞均表达CD105、CD29和CD44,不表达造血细胞表型CD34、CD45和内皮细胞表型CD31;经脂肪培养液诱导后在细胞胞浆里可见颗粒状红色脂滴形成.结论:脐血间充质干细胞能进行体外分离培养,并能诱导分化为脂肪细胞.【总页数】3页(P541-543)【作者】邓寅业;陶艳玲【作者单位】广西壮族自治区人民医院儿科,南宁,530021;黑龙江省哈尔滨血液病肿瘤研究所【正文语种】中文【中图分类】R720.5【相关文献】1.人脐血间充质干细胞体外分离培养的实验研究 [J], 陈晓岚;黄仁彬;汤银娟;莫艳秀;张建湘2.人脐血间充质干细胞分离、培养及向成骨细胞分化的实验研究 [J], 陶艳玲;张颢3.人脐血间充质干细胞分离培养及向成骨细胞分化的研究 [J], 农丕地;黄海玲;解继胜4.人脐血间充质干细胞的分离培养与向神经元样细胞诱导分化的实验研究 [J], 喻永涛;惠国桢;陈镭;陆华;苗宗宁5.大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及向脂肪细胞分化的实验研究 [J], 赵媛;徐立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脐血间充质干细胞分离、培养与鉴定李启明1程天民1李宁2*粟永萍1冉新泽1(1.第三军医大学全军复合伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室2.第三军医大学新桥医院, 高压氧中心重庆400038)摘要：目的研究脐带血(HUCB)中含有的间允质干细胞(MSCs)体外分离、培养条件，探讨其作为种子细胞用于下一步实验研究的稳定性与实用性。

方法无菌条件下取正常足生产的脐带血，经CPDA-1复合抗凝剂抗凝，然后经过去红细胞处理，再用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞，DMEM/F12培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞层，采用定向诱导分化方法检测鉴定获得的MSCs 结果来源于脐血的单个核细胞经体外培养贴壁后出现形态学上可见间充质样的细胞，问充质样细胞为类似成纤维样的细胞形态，但偏向半月形弯曲状，经过成肌、成脂肪、成神经细胞诱导分化成功后确定为间充质干细胞。

结论脐血来源的间充质干细胞能够在体外分离、培养出有用的进一步实验所需要的种子细胞。

关键词：脐带血；间充质干细胞；细胞培养；诱导分化鉴定中图法分类号：文献标识码：THE ISOLATION CULTURE AND IDENTIFICATION OF HUCA MSCsLI Qi-ming, CHEN Tian-min LI ning, SU Yong-ping, RUAN xin-ze(1.State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, Institute of Combined Injury,2. Hyperbaric oxygen Center Xinqiao Hospital,Third Military Medical University, Chongqing, 400038, China)Abstract: Objective To investigate the isolation，cultivation, differentiation and identification of human umbilical cord blood(HUCB) mesenchymal stem cells(MSCs) in vitro，and to observe the feasibility of using MSCs as seed cells in experimental furthermore．Methods HUCB were collected from full term childbirth scheduled for Cesarean section and vagina deliveries, a11 specimens was obtained sterilely with Preservative-free CPDA-1 compound natrium citricum. After lyse red blood cell, the cord blood mononuclear cell was isolated by human lymphocyte separating medium. culture with dulbecco's modified eagle's medium(DMEM/F12) medium to produce adherent layer and identification with orientation differentiation results. Results The UCB-derived mononuclear cells，when set in culture，gave rise to adherent cells, which exhibited either a fibroblast-1ike but crescent-shaped or bending-shaped morphology or mesenchymal-like phenotype. It can be affirmed as the MSCs which characterized with multi-differentiating potentiality after the myogenic、lipogenic and neurogenic differentiation. Conclusion MSCs in HUCB can be isolated and cultivated in vitro，which could be regarded as an alternative source of MSCs for further experimental tests。

人脐血间充质干细胞的体外分离、培养
罗建蓉;贾永前
【期刊名称】《中国医药导刊》
【年(卷),期】2010(012)012
【摘要】目的:研究脐带血间充质干细胞体外分离、培养条件,探讨脐带血间充质千细胞作为细胞治疗种子细胞的可行性.方法:采用不同的实验方法对36例脐血间充质干细胞分离、培养,并与11份骨髓间充质进行对比,探索脐血间充质干细胞的最适培养条件.结果:采用甲基纤维素分离的间接法显著提高了脐血间充质干细胞分离培养的成功率;增加单个核细胞的接种最和适当的血清浓度促进了脐血间充质干细胞的成功培养.结论:脐血间充质干细胞能在体外分离纯化,但培养成功率明显低于骨髓,受多种因素影响.
【总页数】4页(P2124-2127)
【作者】罗建蓉;贾永前
【作者单位】四川省邛峡市医疗中心医院检验科,邛峡,611530;四川大学华西医院实验医学科,成都,610044
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11+3
【相关文献】
1.人脐血间充质干细胞体外分离培养的实验研究 [J], 陈晓岚;黄仁彬;汤银娟;莫艳秀;张建湘
2.人脐血间充质干细胞体外分离、培养与鉴定 [J], 邓黎;梁志清;李俊男;李宇迪;徐惠成;史常旭
3.成人脂肪源间充质干细胞培养上清对人脐血间充质干细胞体外培养及扩增的支持作用 [J], 赵微;秦俭;董嘉楠
4.人脐血间充质干细胞体外分离培养条件的优化及其鉴定 [J], 赵春生;王更银;李俊峡
5.胰岛干细胞和脐血间充质干细胞体外分离培养的形态学特征观察 [J], 刘素芳;李长生;鄢文海;韩雪飞;邢莹
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脐带间充质干细胞分离、鉴定与神经分化孙洪涛;刘晓智;张赛【期刊名称】《中华神经外科疾病研究杂志》【年(卷),期】2008(7)2【摘要】目的原代分离培养脐带间充质干细胞(UCMSCs),并就其向神经细胞方向分化潜能予以研究,为脑创伤后神经组织再生修复提供理论依据.方法采用原代贴壁培养法分离培养人UCMSCs,取第4代UCMSCs进行流式细胞术检测UCMSCs表面特异标志物表达;经神经诱导后应用细胞免疫荧光技术检测神经胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达和神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白(MAP-2)表达.结果流式细胞术结果显示UCMSCs强表达CD29、CD44、CD105,极低表达CD31、CD34、CD45,检测结果符合人UCMSCs特征.细胞免疫荧光结果显示UCMSCs经诱导后GFAP阳性表达率为56.23%,NSE阳性表达率为22.15%,MAP-2阳性表达率为27.34%.结论采用原代细胞贴壁培养法可成功分离培养人UCMSCs,在适当诱导条件下,UCMSCs可实现向神经细胞方向的成功分化,为脑创伤后神经组织修复、再生提供可能.【总页数】4页(P132-135)【作者】孙洪涛;刘晓智;张赛【作者单位】天津医科大学,天津,300072;武警医学院附属医院神经外科,天津,300162;武警医学院附属医院神经外科,天津,300162【正文语种】中文【中图分类】R729【相关文献】1.人脐带间充质干细胞分离、鉴定方法及其治疗难治性免疫性血小板减少症的有效性及安全性研究 [J], 黄斯勇;梁英民;白喜龙;伍艳兰;胡彬;王刚锋;王颖;张蓉;罗红香;徐静2.树鼩脐带间充质干细胞分离、培养及成骨成脂分化的鉴定 [J], 阮光萍;朱路;刘菊芬;李自安;王金祥;庞荣清;潘兴华;3.树鼩脐带间充质干细胞分离、培养及成骨成脂分化的鉴定 [J], 阮光萍;朱路;刘菊芬;李自安;王金祥;庞荣清;潘兴华4.人脐带间充质干细胞分离鉴定及移植后对肺癌小鼠化疗的影响 [J], 郑天亮;赵松;郭海周;崔广晖;林大维;5.人脐带间充质干细胞分离鉴定及移植后对肺癌小鼠化疗的影响 [J], 郑天亮;赵松;郭海周;崔广晖;林大维因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。