肺炎支原体抗体的标准操作程序

ELISA检测肺炎支原体抗体IgMELISA检测肺炎支原体抗体IgM[检测方法] ELISA[方法学原理] 将微孔表面包被纯化的肺炎支原体抗原，将被稀释过的患者血清加入微孔中，如存在支原体抗体可与微孔上抗原相结合，然后洗去未结合物质，再加入酶标记抗人IgM与抗原抗体复合物结合，洗去未结合的酶标记抗体，最后加入显色液。

在特定时间终止显色反应，通过酶标仪校正和对照相比读出结果。

[标本准备] 取新鲜末梢血或静脉血。

如采血后24h内不能进行试验，分离血清后将其保存于一20℃环境中。

检测时，使样本恢复至室温。

[试剂]1．预包被微孔板2．阳性对照3．弱阳性对照4．阴性对照5．标本稀释液6．浓缩酶联物7．底物A、B8．终止液[仪器] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

[检测步骤]1．配制洗涤液 1瓶浓缩洗涤液加475ml蒸馏水。

配好的洗涤液短期内可置室温环境，长期可存于2—8℃环境中。

2．配制酶联物按1：101倍稀释，即取10tzl浓缩酶联物加酶联物稀释液l 000ul (根据检测标本数量确定稀释量)，未用完的丢弃。

3．待试剂盒平衡至室温后，待测标本用按1：51稀释，取4ul血清与200u1标本稀释液混合。

4．将稀释标本置37℃环境中20min。

5．各加100ul阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待测标本上清液于相应孔中，空白对照孔加100ul标本稀释液，盖好反应板，37℃环境中孵育30min。

6．甩尽板中液体，每孔用200—300ul洗涤液洗5次，每次均需拍干。

7．每孔加酶联物100t~l，盖好反应板，37℃环境中30min。

8．甩尽板中液体，洗5次，每次拍干。

9．加底物A、B各1滴或各50P1，混匀，37℃环境中15min。

10．取出，加终止液1滴，用酶标仪450nm测其OD值。

若肉眼观察，不加终止液判断结果。

[结果判断]1．阴性对照平均OD值须小于0．20。

2．弱阳性对照平均OD值须在0．20～0．65。

3．弱阳性对照和阴性对照的平均OD值之比须≥2。

肺炎支原体IgM抗体检测【预期用途】肺炎支原体( Mycoplasma Pneumoniae,MP)是呼吸道感染性疾病的重要病原体之一,还可引起其他系统的严重并发症,临床表现为头疼、发热、干咳、肌肉疼等症状。

所有年龄组人群都会感染,但中青年和4岁以下儿童感染率较高,所有感染者30%的人群会有全肺感染。

MP分离培养可靠性最高,但费时。

目前MP实验室血清学试验是临床诊断依据之一,抗体检测以其操作简单、快捷、费用低廉而广泛应用于临床。

MP-lgM是机体受肺炎支原体感染后最早产生的特异性抗体,于发病后一周左右可检出,约24周达到高峰,6周左右逐渐下降,2-3个月消失。

检测MPgM抗体可以早期诊断MP感染。

【检验原理】应用重组MPP蛋白和鼠抗人gM单克隆抗体,定性检测人血清/血浆/全血中的MPgM抗体。

当待检标本中含有MP-lgM抗体时,该抗体先与金标单抗形成复合物,并在层析作用下向前移动,再与包被抗原反应,出现一条肉眼可见的检测线T,为阳性结果;未反应的标记物继续向前移动,与羊抗鼠gG抗体结合,形成一条对照线C。

若检测线不出现,结果为阴性。

抗鼠lgG抗体(山羊源性,多克隆抗体)。

样本稀释液:20mM磷酸盐缓冲液。

【样本要求】血清、血浆和全血1.检测用的血清、血浆、全血样本必须收集在一个干净、干燥的容器中,可以采用DTA、枸橼酸钠、肝素或草酸钠作为抗凝剂。

未加抗凝剂的全血样本需立即使用,如全血样本发生凝集现象,则用血清进行检测。

2.样本采集后应马上使用,不可在室温下长时间存放。

血清/血浆样本可在2-8℃冷藏混匀。

反复冻融不超过3次。

发臭、混浊或复温后有明显沉淀等异常样本请勿使用。

3.使用新鲜全血样本。

【检验方法】在进行测试前必须先完整阅读使用说明书,使用前将试剂和样本室温放置30分钟恢复至室温(20℃-30℃)。

在没有准备好之前,不可打开内包装,试剂从内包装取出后应在1小时内使用(湿度:20%-90%,温度;10℃-50℃)。

支原体培养检验操作程序一、接收标本：标本与检验单查对正确，标本质量合格。

二、标本处理：接种Uu、Mh培养药敏一体试剂盒：操作前将所需试剂取出置室温30分钟。

1、A排第一孔加入培养液100μL作为阴性对照；2、将标本拭子直接放入培养液中充分振荡并在瓶壁挤干拭子，若为男性尿液取离心沉淀物150μL或阳性标本取50μL于培养液中混匀。

3、将混有标本的培养液各100μL 加入A排余下及B排各孔中；4、各孔加矿物油覆盖，置于37℃温箱培养。

第24、48小时分别观察记录结果。

结果判断原理：培养基含有相应支原体生长所需的蛋白质、马血清、生长因子、底物及酚红指示剂，当有支原体生长时，底物被分解，使PH值升高，培养基由橙黄色变成红色，且清亮为阳性。

培养基不变色为阴性。

B1孔阳性为解脲支原体阳性；B2孔阳性为人型支原体阳性。

药敏孔A排为高浓度，B排为低浓度，变红则耐药，不变红示敏感而不生长。

当高浓度与低浓度两孔均不生长(不变色)为该药敏感；高浓度不变色低浓度变红为该药物中介；高浓度与低浓度均变红为该药物耐药。

结果一：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B2孔均不变色，示无人型支原体生长或浓度极低，报告培养出解脲支原体，未培养出人型支原体。

结果二：第24小时B1孔不变色示解脲支原体阴性；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断。

报告未培养出解脲支原体，培养出人型支原体附药敏结果。

结果三：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断，报告培养出解脲支原体与人型支原体附药敏结果。

结果四：阳性对照孔由橙黄色变成红色示支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无解脲、人型支原体生长或浓度极低，报告培养出非解脲、人型支原体或嘱病人重留标本复查。

支原体分型检测安全操作及保养规程引言支原体是一种常见的传染病原体，它与许多呼吸系统疾病有关，如肺炎、支气管炎等。

支原体的分型检测是检测这种病原体的有效方法，它可以帮助医生把病人按照支原体的类型进行分类，选择更加合适的治疗方案，提高疗效。

但是，支原体分型检测的操作和维护要求严谨，不当的操作和维护可能会影响检测结果的准确性，也可能会对实验者的健康造成潜在风险。

为了保证支原体分型检测的安全性和准确性，本文将介绍支原体分型检测的安全操作和保养规程。

安全操作规程仪器准备在进行支原体分型检测之前，需要进行仪器的准备工作。

具体步骤如下：1.确认所有检测工具和药品均在使用期限内，没有过期。

2.标记样本及试剂的批号、日期、制造商和有效期。

在操作时要根据标记避免混淆。

3.用无菌纯水清洗仪器的每个部件，并在其上清洁任何残留物。

使用短时间的高温高压灭菌器或化学消毒液消毒。

样本采集样品采集是进行支原体分型检测的重要步骤。

需要注意以下几点：1.样品采集前要细致检查病人的病历、病情、治疗情况和可疑感染源。

确保采集的样本具有代表性，否则可能会影响检测结果的准确性。

2.对于不同的样品类型，采样方法也会有所不同。

比如，对于支气管分泌物或肺组织，可以通过支气管镜或支气管肺泡灌洗等方式采集。

对于痰液或喉咙拭子样本，则需求病人在正确的时间采集样本。

3.在样本采集过程中，需要用无菌手套、口罩等防护物品，避免污染。

DNA提取提取样品中的DNA是支原体分型检测的重要步骤。

具体步骤如下：1.根据不同样品类型，采用不同的DNA提取方案。

常见的方法包括溶解、离心、物理破碎等。

2.在DNA提取前，需要认真阅读提取试剂的说明书，了解试剂用量、反应时间等。

3.在DNA提取时需要用无菌工具、离心管和试剂。

PCR反应PCR反应是支原体分型检测的主要技术手段。

在进行PCR反应时，需要注意以下几点：1.在进入实验室前，需要换上实验室的工作服、手套等防护物品，彻底洗手。

HQBJS/MYXM-9-2015 SOP文件B9.1【检验目的】肺炎支原体是人类原发性支原体肺炎的病原体，经呼吸道感染。

多发生于儿童、青年，发病初期临床症状不明显，隐性感染和轻型感染较多，也可致严重肺炎，出现头痛、发热、咳嗽等，本试验用胶体金法定性检测人血清中的肺炎支原体IgM 抗体。

B9.2【检验原理】用肺炎支原体抗原固相硝酸纤维素膜，应用渗滤式间接法原理，检测血清中肺炎支原体抗体。

B9.3【样本要求】血清样品不能溶血，应为新鲜血清或2℃～8℃条件保存不超过3天。

高脂血症血清不能使用。

B9.4【样本采集】不抗凝血2ml，避免溶血、混浊、或脂血标本B9.5【试剂盒主要组成成份】斑点反应板：40块（或20块）试剂A： 1瓶, 约10ml试剂B: 1瓶,约8ml, 胶体金标记物B9.6【储存条件及有效期】产品应储存在2℃～8℃条件中，不能冷冻；有效期8个月。

HQBJS/MYXM-9-2015 SOP文件B9.7【检验方法】滴入二滴试剂A于反应板中央孔中，待完全渗入；滴入100µl血清于反应板孔中，待完全渗入；滴加三滴试剂B于反应板孔中，待完全渗入；渗入三滴试剂A于反应板孔中，待完全渗入。

B9.8【结果解释】阳性：反应板孔中出现红色圆斑和清晰的红色质控线，为肺炎支原体抗体阳性；阴性：反应板孔中只显现清晰的红色质控线，为肺炎支原体抗体阴性；失效: 反应板孔中未显现红色质控线，为操作失误或试剂失效。

B9.9【检验方法的局限性】本试剂试验仅用于检测肺炎支原体抗体而非直接检测肺炎支原体，因而阳性结果并不能确诊是肺炎支原体感染。

对患者状况的诊断应结合患者临床体征与症状和试验结果的综合分析。

抗体含量低的血清样品，不能被检测出来是可能的。

部份肺炎支原体感染的患者，不产生抗体或产生少量的抗体。

此时，可能显示阴性结果。

试验结果可疑时，应用培养基进行培养确诊。

HQBJS/MYXM-9-2015 SOP文件B9.10【产品性能指标】批内精密度：阳性符合率和阴性符合率均应≥95%，反应斑点颜色深浅程度应接近。

SOP_15-13 支原体与支原体药敏培养鉴定标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：支原体与支原体药敏培养鉴定操作三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 支原体分离鉴别培养1.1标本采集男性：可取尿道分泌物、前列腺液、精液或中段尿培养（中段尿需取尿10ml，经2000r/min 离心10分钟，取沉渣接种）；女性：用扩阴器扩阴后，取宫颈口分泌物培养，也可用羊水培养。

不推荐用尿液。

1.2操作步骤1、从冰柜中取出液体培养基小瓶，复温，登记标本号。

2、打开瓶盖，揭开胶塞，将标本棉签伸入，紧靠培养液上方瓶壁挤压棉签，使标本渗入，丢弃棉签，盖上胶盖，摇匀小瓶；3、将小瓶置35-37℃培养24-48小时，观察结果。

1.3结果判定培养基澄清透明并呈明显得玫瑰红色者为有支原体生长；解脲支原体24小时，人型支原体、混合支原体48小时后培养基无任何变化，可报阴性结果。

培养明显浑浊变红者应判断无支原体生长。

必要时可做支原体固体培养，低倍镜下观察，有油煎蛋样菌落者为支原体阳性。

1.4注意事项1、用后得培养物用高压锅消毒后丢弃；2、本品仅供体外诊断用；3、本品仅供一次性使用。

4、先兆流产、月经期妇女禁用；阴道用药或灌洗后禁用。

2 支原体药敏2.1试剂盒说明本试剂盒集泌尿生殖道支原体UU、MH分离培养，鉴定计数以及10种抗生素的药敏试验于一体。

药敏抗生素：强力霉素（DOX）、美满霉素（MIN）、环丙沙星（CPE）、氧氟沙星（OFL）、司帕沙星（SPA）、罗红霉素（ROX）、阿齐霉素（AZI）、克拉霉素（CLA）、交沙霉素（JOS）、壮观霉素（SPE）、螺旋霉素（AXP）、左旋氧氟（LEV）。

2.2试剂盒组成3.5mlUU-MH 培养液20支，药敏试验板20只，无菌吸咀40个（嵌在试验板底座后面），无菌矿物油2瓶，药敏试验报告签20张，说明书1份。

2.3标本采集男性：可取尿道分泌物、前列腺液、精液或中段尿培养（中段尿需取尿10ml ，经2000r/min离心10分钟，取沉渣接种）；女性：用扩阴器扩阴后，取宫颈口分泌物培养，也可用羊水培养；阳性培养液（普通支原体培养基获得）：用无菌吸咀吸取30ul 。

支原体培养法标准操作规程支原体培养法呀，这可是个很重要的事儿呢！就好像厨师要做出美味佳肴一样，得有一套靠谱的流程。

咱先说说标本的采集吧，这可不能马虎呀！就跟去果园摘果子似的，得挑那成熟又好的果子，不然摘个半生不熟的，能做出啥好味道呀！采集标本的时候可得仔细了，要保证采集到的是“精华”部分。

然后呢，就是培养基的准备啦！这培养基就像是给支原体准备的“小窝”，得舒舒服服的才行。

各种营养成分都得搭配好，不能多了也不能少了，不然支原体住得不舒服，它能好好长吗？接下来就是接种啦！这一步就像是把种子种到地里，得小心翼翼地放进去，可不能太粗鲁了，不然把支原体给弄伤了可咋办。

接种完了，就把培养皿放进合适的环境里，让支原体在里面好好成长。

在培养的过程中，咱可得时刻关注着呀！就跟照顾小孩子似的，一会儿看看有没有啥变化。

要是发现有异常，那可得赶紧想办法解决，不能任由它发展呀！培养一段时间后，就得观察结果啦！这时候就像是开奖一样，紧张又期待。

看看支原体有没有好好长大呀，有没有出现我们期望的现象呀。

要是一切顺利，那可真是让人开心；要是不顺利，也别灰心，找找原因，下次再来嘛。

支原体培养法可不简单呢，每一个环节都很重要。

少了哪一步都不行，就像盖房子，少了一块砖都不牢固。

大家可千万不能小瞧了它呀！这关系到很多诊断和治疗呢。

想想看，如果因为我们在培养的时候不认真，导致结果不准确，那岂不是会给病人带来很大的麻烦？所以呀，我们在做支原体培养的时候，一定要认真仔细，把每一个细节都做好。

支原体培养法虽然有点复杂，但是只要我们掌握了方法，严格按照要求去做，就一定能做好呀！就像我们学骑自行车，一开始可能会摔倒，但只要坚持练习，总会骑得稳稳当当的。

大家说是不是呀？所以呀，不要害怕支原体培养法，勇敢地去尝试吧！让我们一起把支原体培养这件事儿做好，为医学事业贡献自己的一份力量！。

肺炎支原体检测试剂盒胶体金法背景与引言肺炎支原体是一种常见的致病菌，它是导致上呼吸道感染和肺炎的一种主要病原体。

近年来，肺炎支原体感染的发病率逐渐增加，因此早期快速的检测非常重要。

为了满足临床上对肺炎支原体的检测需求，研发出了肺炎支原体检测试剂盒胶体金法。

本文将详细介绍肺炎支原体检测试剂盒胶体金法的原理、操作步骤和优势。

原理肺炎支原体检测试剂盒胶体金法采用了胶体金免疫层析技术。

该技术利用了胶体金颗粒在溶液中的颜色变化特性，通过金标记的抗原与肺炎支原体的特异性抗体结合形成颗粒免疫复合物，从而实现对肺炎支原体的检测。

操作步骤1.样品处理：取适量标本（一般为呼吸道分泌物或咽拭子），按照说明书的要求进行预处理，如离心、加入提取液等。

2.载板处理：将处理后的样品滴加到测试载板上，一般每个孔滴加样品的量为5-10μL。

3.滴加试剂：将胶体金标记的抗原滴加到载板上，与样品中的肺炎支原体结合形成颗粒免疫复合物。

4.反应时间：根据产品说明书的要求，将载板放置在恒温箱或特定的反应时间，一般为10-20分钟。

5.结果读取：观察载板上颗粒免疫复合物的颜色变化，一般采用裸眼观察或光度计测量吸光度来判断结果。

优势1.快速检测：肺炎支原体检测试剂盒胶体金法可以在短时间内完成检测，通常只需要20分钟左右，大大缩短了检测周期。

2.简单易用：操作步骤简单，只需要少量的样品和试剂，无需复杂的实验仪器和设备，使得检测更加便捷。

3.灵敏度高：胶体金免疫层析技术具有较高的灵敏度，可以检测到低浓度的肺炎支原体，提高了检测的准确性和可靠性。

4.成本低廉：与其他检测方法相比，采用胶体金法进行肺炎支原体检测的成本较低，可以降低医疗机构的检测费用。

5.广泛应用：肺炎支原体检测试剂盒胶体金法适用于不同场景的肺炎支原体检测，可以在临床、疫情监测等多个领域得到广泛应用。

结论肺炎支原体检测试剂盒胶体金法作为一种快速、简单、灵敏度高且成本低廉的检测方法，对于肺炎支原体感染的早期诊断和疫情监测具有重要意义。

陕西省人民医院检验科微生物室（SOP）文件撰写人：审核人：批准人：批准日期：2015年7月31日启用日期：2007年8月 1 日二零一五年七月一日制批准页根据《临床检验操作规程》(2006年,第三版)，肺炎支原体6小时快速培养及药敏试剂盒使用说明书；微生物检验有关试剂盒使用操作说明书；《消毒技术规范》以及医院内部有关管理制度、生物安全制度的规定和要求，临床微生物检验操作规程文件NO.1版经实际运行，现予以批准通过，于 2015年 8月 1日起生效并开始实施。

微生物室和检验科有关工作人员必须认真学习，严格遵照执行。

（NO.1版依据检验技术和我科工作发展及管理工作的需求进行的补充完善和改进另行通知）。

任何个人不得更改，实际工作中如发现不妥之处，请按程序以文字形式向审核人汇报；在未经批准人同意/批准新文件之前，仍执行此文。

陕西省人民医院检验科2015年7月31日肺炎支原体6小时快速培养及药敏试剂操作规程1.项目中文名称：肺炎支原体6小时快速培养及药敏试剂盒项目英文名称：Mp 6h Rapid Cultivation and Drug Sensitivity Kit2.实验原理与方法：把培养与生化反应相结合，利用肺炎支原体具有分解葡萄糖产酸的能力，使培养液的pH降低的原理，根据指示剂指示的颜色变化判断结果。

3.标本的要求：严格按照全国临床检验操作规程进行标本采集。

标本为患者咽拭子或痰液标本，采集标本前，用生理盐水漱口，所采集的标本应迅速接种，如不能及时接种，则室温放置不得超过四个小时。

4试剂厂家及名称：郑州安图生物工程股份有限公司5.操作步骤：1.取出培养液，使其在接种标本前接近室温；2.接种咽拭子（或痰）样本于已恢复室温的培养液中，搅拌后弃去拭子（痰样本若粘度比较大需要用无菌拭子蘸取后接种于培养液，若痰样本比较稀可以用无菌拭子蘸取或者用移液器量取50µl加入培养液中进行培养）；3.把培养液加盖后置培养箱中，35～37℃培养24～48小时观察结果；6.样本结果判断培养24～48小时培养液由桔红色（或蓝色）变成黄色（或绿色）,表示有肺炎支原体生长；培养液保持桔红色（或蓝色）不变，表示没有肺炎支原体生长。

支原体检测SOP目的：制左支原体检验标准操作规程，确保检验操作正确。

范羽：本标准适用于本公司主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞、病毒收获液、原液的支原体检验操作。

依据：《中国药典》2010年版三部通则5501支原体检测法。

一、培养法1、检测原理：直接培养支原体于培养基中，观察英生长及菌落生成。

2、适用器材：火菌锅、试管（带盖）、10ml移液管、1ml移液管、57°C培养箱、5、检测步骤：（1）培养基的制备：【外购培养基】（2）检测培养基的灵敏度：将菌种接于适宜的支原体培养基中，经56°C±1°C培养至培养基变色，盲传两代后，将培养物接种至待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10■:〜IO%接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-$〜10-,接种在精氨酸支原体肉汤培养基内。

每个稀释度接种5支试管，宜56°C±1°C培养7〜“天，观察培养基变色结果。

结果判左以接种后培养基笛数的2/5以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。

液体培养基的灵敏度：肺炎支原体（ATCC 15551株）应达到IX, 口腔支原体（ATCC 237H株）应达到10"*。

（S）培养基前处理：检查支原体采用支原体液体培养基和支原体半流体培养基（或支原体琼脂培养基）。

半流体培养基（或琼脂培养基）在使用前应煮沸10〜15分钟，冷却至56°C左右，然后加入火能小牛血淸（培养基：血淸为S ：2）,并可酌情加入适量青霊素，充分摇匀。

液体培养基除无需煮沸外，使用前亦应同样补加上述成分。

（士）接种培养：取每支装量为10ml的支原体液体培养基各寸支、相应的支原体半流体培养基各2支（已冷却至56°C±1°C）,每支培养基接种供试品0.5〜10ml,置S6e C±rC培养21天。

于接种后的第7天从4支支原体液体培养基中各取2支进行代次培养，每支培养基分別转种至相应的支原体半流体培养基及支原体液体培养基各2支，置S6°C±rC培养21天，每隔S天观察1 次。

肺炎支原体的检测方法（详细完整版）肺炎支原体（MP）感染是社区获得性肺炎（CAP）最常见的病因之一，它与很多呼吸道感染性疾病有关，如支气管炎、肺炎，还可诱发哮喘等疾病。

儿童和老人是易感人群，成人肺炎支原体肺炎的发生率为社区获得性细菌性肺炎的4%~8%，MP流行期可增加至20%和70%。

MP感染的总体死亡率较低，但文献报道由MPP导致进入ICU病房的患者死亡率高达30%，尤其是老年人。

MP缺乏具有良好敏感性和特异性的诊断测试，因此在很大程度上仍然未被诊断。

那么，MP的诊断手段有哪些呢？一起来看看吧。

一、培养法肺炎支原体培养较少应用到临床中，但临床仍认为是判断肺炎支原体感染的金标准。

可通过气管吸出物、咽拭子、肺泡关系等方法采取标本，可真实反应肺炎支原体感染情况。

然而此种培养法需要耗费较长时间，一般最少需要1周时间。

二、血清学检测临床常用的血清学检测有冷凝集试验、酶联免疫吸附试验、明胶颗粒凝集试验。

1、冷凝集试验该试验方法是血清学检测的最早方法，操作简便，适用基层医院检测。

若患儿感染肺炎支原体，在感染后的第一周后期及第二周前期，有着较高效价。

然而，若患儿出现流感病毒、腺病毒，该方法则有着较低的特异性及敏感性，容易出现假阳性。

2、酶联免疫吸附试验（ELISA）该检测试验是利用吸附在载体表面的抗原，与血清中的抗体结合形成免疫复合物。

研究表明，ELISA检测支原体肺炎患儿的敏感性达到82.45%，特异性达到95.16%。

但该检测方法容受到病程、年龄的影响，并不能准确的为临床诊断提供依据。

3、明胶颗粒凝集试验（PA）采取患儿血清标本后，稀释血清，再加入到明胶致敏颗粒中混匀，再检测。

该方法操作便捷及方便，且有着较高抗体特异度，较高的负荷率，可将其作为诊断支原体肺炎感染的有效方法之一。

PA操作简单，但不能准确鉴别出IgM抗体。

三、分子生物学检测PCR是目前直接病原体检测的首选方法，具有耗时短、操作简便、定量准确、速度快、较高特异性及敏感性的优点。

肺炎支原体抗体IgM 金标检测试剂盒作业指导书1目的建立肺炎支原体抗体IgM 金标检测试剂盒作业指导书，确保生产过程处于受控状态。

2范围适用于肺炎支原体抗体IgM 金标检测试剂盒相关工序的操作者。

3职责3.1操作人员应严格执行本作业指导书。

3.2生产主管负责监督检查。

3.3质检部质检员负责抽查执行情况。

4工作内容4.1生产工艺流程图※胶体金制备★胶体抗胶体金反单克隆体金应膜抗体检标检测制备进测记★肺炎支原体重组抗原的表达※NC膜处理兔抗鼠IgG 抗体制备抗原检测NC膜检测★NC膜包被抗体检测质装产贴切量卡品分NC 检检板条包反测测应膜检测入库注：※关键过程★特殊过程4.2作业内容4.2.1胶体金制备（柠檬酸三钠还原法）氯金酸（HAuCl4）水溶液放入三角瓶内加热至沸腾→加热柠檬酸三钠溶液→混匀，搅拌煮沸10至15分钟→待胶体金溶液颜色由蓝→紫→红，冷却即可。

4.2.2金标抗体（反应膜）制备以0.1M 碳酸钾溶液调胶体金溶液 pH8.0-9.0→加入抗人 IgM 单抗， 15 分钟后加入聚乙二醇→离心，调532nm测OD值5～10，方阵滴定法选定标记工作浓度→用无纺布浸湿胶体金溶液，干燥、平整，检测。

4.2.3金标抗体反应膜质检将制备好的金标抗体反应膜按5‰比例抽检，与标准反应膜匹配组装成品，同时与标准成品作如下对照检测：a)符合率：样品稀释液、阴性质控血清无假阳性，阳性质控血清均呈阳性；b)反应强度：+/+++（阳性反应线/阴性反应线）；c)反应时间：30s～5min。

确认合格后才能转入下一工序。

4.2.4NC 反应膜制备亲和性高分子硝酸纤维素膜→活化处理12 小时→用水洗 5 次，每次 20 分钟→室温干燥后→取纯化Cpn重组MOPP抗原和兔鼠IgG抗体溶于10%CS中，浓度均为2mg/ml，用Cpn重组肺炎支原体抗原在NC 膜上包被肺炎支原体抗体阳性检测线→用兔抗鼠IgG 抗体在NC膜上包被对照线→干燥后，用BS 液封闭， H2O 清洗后，室温干燥，备用。