实验九显微镜直接计数法实验目的1．明确血细胞计数板计数的原理。
2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
实验内容1．酵母菌细胞数的测定。
2．酵母菌出芽率的测定。
实验原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
图9-1 血球计数板构造（一）图9-2血球计数板构造（二）1 血细胞计数板；2盖玻片；3计数室用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。
血球计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短槽隔成两半，每一边的平台上各自刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大格，中间的大方格即为计数室。
血细胞计数板构造如下图。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。
每一个大方格边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。
计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均数，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。
实验器材酿酒酵母血细胞计数平板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。
实验步骤一、酵母菌细胞数的测定1．菌悬液制备：以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。
2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。
3．加样品：将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。
4．显微镜计数：加样后静止5min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。
血球计数板生物实验用具血球计数板是显微镜上的外挂物件,可用来测量细胞,细菌等一些微小物体的长度,还有就是测量数量,如单位体积细胞的数量.血球计数板的构造和使用血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.血球计数板的使用以计数酵母菌为例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.3.计算公式(1)16格×25格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.实验六微生物的显微直接计数法一、实验目的了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。
血球计数法公式血球计数法是一种常用于生物学和医学领域的细胞计数方法，它可是个相当实用的小技巧呢！咱们先来说说血球计数法的公式到底是啥。
简单来讲，血球计数板的计数室通常被划分成若干个大格，每个大格又被细分成若干个小格。
在进行细胞计数时，常用的公式就是：细胞数 /mL = （N / 4）× 25 ×10^4 ×稀释倍数。
这里的“N”指的是所数的 4 个大格中的细胞总数。
为了让大家更好地理解这个公式，我给大家讲一个我自己的亲身经历。
记得有一次，我带着学生们在实验室里做细胞计数的实验。
那是一群好奇心爆棚的小家伙，一个个都瞪大了眼睛，等着大展身手。
实验开始前，我先给他们详细讲解了血球计数板的结构和使用方法，还有这个重要的血球计数法公式。
可是，看着他们一脸迷茫的样子，我就知道，光靠讲可不行。
当他们真正开始操作的时候，状况百出。
有的同学数格子数得眼花缭乱，有的同学忘记了乘以稀释倍数，还有的同学因为操作不当把细胞液洒得到处都是。
其中有个叫小明的同学，特别认真，但是数来数去，就是算不对结果。
我走过去一看，发现他把数的细胞数记错了位置。
我耐心地给他重新演示了一遍，告诉他要仔细，不能着急。
慢慢地，同学们逐渐掌握了要领，开始得出正确的结果。
看着他们从一开始的手忙脚乱，到最后能够熟练运用血球计数法公式得出准确的细胞数，那种成就感简直无法形容。
回到血球计数法公式本身，咱们来详细拆解一下。
“（N / 4）”这部分，是因为我们只计数了 4 个大格，要取平均值。
“25”是指每个大格包含的小格数，而“10^4”则是因为1mL = 10^4 μL，这样经过一系列的计算，才能得出准确的细胞浓度。
在实际应用中，比如在血液学检查中，医生会用这个方法来计算白细胞、红细胞等的数量，从而判断一个人的健康状况。
对于科研人员来说，血球计数法更是研究细胞生长、分裂等过程的重要工具。
总之，血球计数法公式虽然看起来有点复杂，但只要多练习，多实践，就一定能熟练掌握。
