环氧活化琼脂糖说明书
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谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B (GST 标签纯化树脂)说明书货号:P2020规格:5mL/10mL/25mL/50mL保存:4℃保存,有效期至少一年。
产品简介:pGEX 载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合,因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。
GSTs 是一类以谷胱甘肽(γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸)作为底物,通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。
由于GST 对底物的亲和力是亚毫摩尔级的,因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST 及其融合蛋白的纯化效率很高。
可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST 融合蛋白。
树脂用3mol/L NaCl 的缓冲液再生。
谷胱甘肽琼脂糖对GST 融合蛋白的结合能力很强(每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白)。
特性:粒度:45-165µm流速:75cm/h 工作PH :4-10耐压:0.3Mpa载量:>5mg 谷胱甘肽S-转移酶使用说明:谷胱甘肽树脂的处理:1.轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器,将树脂混成匀浆。
2.取部分匀浆放入15mL 聚丙烯管(每100mL 细菌培养物大约需要2mL 匀浆)。
3.4℃500g 离心5分钟,小心去掉上清。
4.在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS ,颠倒数次混匀,4℃500g 离心5分钟,小心去掉上清。
5.每毫升树脂加入1毫升冷的PBS ,制成50%匀浆,颠倒数次,混合均匀,悬液冰上放置待用。
制备细胞抽提物:6.每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS 缓冲液中。
7.加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
8.用针筒将10mL 浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中,剧烈振动数次混匀。
加入DNase 和RNase 至终浓度5ug/mL,4℃振动温育10分钟,4℃3000g 离心30分钟,去除不溶性细胞碎片,上清转移到一只新管中,加入DTT 至终浓度1mmol/L 。
Version 11302010ProteinG-Sepharose Protein G 琼脂糖凝胶Cat. No. CW0012保存:2-8 ℃组分说明CW0012 CW0012A Cat.No.Volume 1 ml 5 mlose 本产品具有广谱IgG 结合、高Fc 段结合活性、高抗体吸附量和性,可重复多次使用。
左右),以利于维持抗体的生物活性,避免抗脱5-10个柱床体积,可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质,避免使亲和介质的载量下降、干扰亲和介质的应用效果。
产品简介本产品为Protein G 与Sephar 偶联后产物,可从血清,腹水,细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc 片段的基因工程重组蛋白。
Protein G 是链球菌(group C 和G)细胞表面蛋白。
它与Protein A 类似,通过与免疫球蛋白的Fc 区相互作用,可结合大多数哺乳动物的IgG。
但两者结合特异性有所不同。
Protein G 对人IgG3,小鼠IgG1,大鼠IgG2a 等具有高亲和力。
天然Protein G 具有白蛋白和细胞表面结合域。
重组Protein G 去除了白蛋白和细胞表面结合域,以减少非特异性结合。
能稳定等特点注意事项1. 凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温, 装柱, 避免产生气泡影响柱效。
2. 装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1,长径比过大将导致洗脱峰拖尾,洗脱体积增大;长径比过小将导致样品与填料接触时间短,吸附不充分,填料吸附蛋白量小。
3. 若上样液中抗体浓度过高,应使用平衡缓冲液稀释至1-2mg/ml,以免上样浓度过高影响柱效。
4. 可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5. 凝胶用低 pH 缓冲液洗脱时间应尽可能短,洗脱后用中性缓冲液尽快中和至 pH 中性,以延长亲和介质的使用寿命。
6. 洗脱后,应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4体失活。
琼脂糖凝胶回收试剂盒E.Z.N.A Gel Extraction Kit适合于D2501-**,D2500-**&D2502-**准备工作1. 浓缩的SPW Buffer需用乙醇按如下稀释:D2500-00&D2501-00&D2502-00 加入20ml 100%的乙醇;D2500-01/02&D2501-01/02&D2502-01/02 每瓶加入100ml 100%的乙醇;注意:稀释后的DNA Wash Buffer需室温保存;所有步骤必须在室温下进行.操作方案配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段.任何类型或等级的琼脂糖都可以使用.我们强烈的推荐使用新鲜的TAE/TBE电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,旧的电泳缓冲液PH会增加而降低DNA的回收产量;2. 电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA片段切下来.并尽量去除多余的凝胶.注意:DNA在紫外灯下的曝光的时间不要超过30秒,同时在紫外灯下操作的时候一定要戴保护眼镜.3.称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积.一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的Binding Buffer,把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次;重要提醒:在凝胶完全溶解之后,注意凝胶-Binding Buffer混合物的pH值.如果其pH值大于8的话,DNA的产量将大大减少.观察混合物的颜色,如果是橙色或红色,则要加入5μl 浓度为5 M,pH为5.2的醋酸钠,以调低其pH值.经过这一调节,该混合物的颜色将恢复为正常的浅黄色.一般情况下,使用新鲜的电泳缓冲液,凝胶-Binding buffer混合物的PH值的不会升高;4.转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下,10,000×g离心1min,弃去液体.一个HiBind DNA柱子最多可容纳700μl的溶液,如果DNA-琼脂糖混合物的体积大于700μl,可先转移700μl溶液至柱子,离心完后,将余下的溶液继续加上柱子上.但是每一个HiBindTM柱子最多可以结合25~30μg DNA.如果预期产量较大,则把样品分别加到合适数目的柱中.5. 将柱子重新套回收集管中,加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中;室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;这一步相当关键,不要忽略此步.6.将柱子重新套回收集管中,加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;注:SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释.7. 将柱子重新套回收集管中,重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟, 弃去滤出液;,将空柱子重新套回收集管中,10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体.这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的.8. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,10,000×g离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度.如果再洗脱一次的话可以把残余的DNA洗脱出来,不过那样的浓度就会较低.DNA的产量及质量:把纯化产物的样品稀释一定的倍数后,分别在260nm和280nm下测其光吸收值,回收得到的DNA的浓度可按以下公式来计算: DNA浓度=光吸收260×50×稀释倍数μg/ml长度大于500bp的片段通常能纯化得到80%的产量. 而50bp~500bp的带则可达到55%~80%的回收率.(光吸收260/光吸收280)的比率是核酸纯度的一个标记.如果此值1.8,则意味着核酸的纯度>90%.另一方面,如果纯化产物的产量较低时,可以用琼脂糖EB电泳估算产物的浓度.载体。
英芮诚生化科技✧羧基琼脂糖磁珠✧羧基琼脂糖微球使用说明书苏州英芮诚生化科技有限公司目录羧基琼脂糖磁珠使用说明书 (1)羧基琼脂糖磁珠使用注意事项 (3)羧基琼脂糖微球使用说明书 (4)羧基琼脂糖微球使用注意事项 (6)附1:标签蛋白纯化磁珠部分产品一览表 (7)附2:抗体偶联纯化磁珠部分产品一览表 (8)附3:标签蛋白纯化微球部分产品一览表 (9)附4:抗体偶联纯化微球部分产品一览表 (10)羧基琼脂糖磁珠使用说明书【产品名称】羧基琼脂糖磁珠【产品型号】MAgr25K/COOH;MAgr100K/COOH【产品介绍】英芮诚羧基琼脂糖磁珠以高度交联琼脂糖为基质,拥有良好的刚性、磁响应性和单分散性,表面修饰有丰富的羧基(-COOH),能够与含伯胺基的生物配体,如:蛋白质、抗体、寡聚核苷酸和药物分子等通过共价偶联的方法实现结合,是一种分子生物学和医学研究的重要载体工具。
【产品规格】备注:表中科研用与工业用仅为推荐,可以互通,不同粒径的产品均可科研或者工业用。
【产品特点】✧良好的磁响应性;✧生物样品中良好的分散性;✧良好的物理、化学稳定性;✧丰富的配体特异性结合位点;✧高结合载量;✧低非特异性吸附。
【作用对象】适用于偶联含伯氨基的蛋白、多肽、核酸、药物等生物配体。
【有效期】两年(2~8 ℃保存)。
【备注信息】1.羧基磁珠与含有伯氨基生物配体的共价偶联,与偶联环境(比如pH)、待偶联生物配体浓度均有关,表中的结合量为实际验证时磁珠对BSA蛋白的常规结合量,此处仅作参考值;2.固形物浓度10% (v/v) 是指每1 mL磁珠悬浮液中包含100 µL体积的磁珠,固形物浓度50% (v/v) 是指每1 mL磁珠悬浮液中包含500 µL体积的磁珠;3.磁珠产品可配合英芮诚磁珠法蛋白纯化仪实现高通量或者大体积的自动化工作;4.磁珠使用和保存过程中应避免反复冻融,且不可以干燥;如果不慎干燥,请用20%乙醇的水溶液浸泡,且超声处理10-20 min,确保交联琼脂糖微孔中的空气被充分去除干净,即可继续使用。
CNBr活化柱说明书溴化氰活化琼脂糖™-4B是一种预活化并固定配体来结合氨基的介质。
它提供了一个非常方便的固定溴化氰配体的方法。
这个偶联反应是自发的、快速和容易实现的。
它的应用领域涵盖了固定化蛋白质、多肽和核酸等。
注:线性流速=体积流速(L/h)/ 层析柱横截面积(cm2)这里所给出的范围是基于我们的立论知识和经验估计的。
请注意以下几点:pH值稳定、长期保存的pH值区间指的是凝胶在很长一段时间内可以保持稳定,没有在其随后的层析分离时出现不利的影响。
pH值稳定、短期保存的pH值区间是相对于再生、在线清洗和维护程序来说的。
准备阶段溴化氰活化琼脂糖™-4 B是以添加剂的形式冻干处理得到的。
这些添加剂在填料螯合所需的配体前必须在低pH(pH 2 – 3)条件下进行清洗。
活化后的活性基团也应该使用低pH 值(pH值2 – 3)保存,而在高pH值则会出现降解。
称取所需量的冻干粉(1 g冻干粉可获得3.5ml终体积的介质),使用1mM HCl悬浮。
介质会立刻膨胀,再用1mM HCl在玻璃过滤器中进行清洗15min。
每克冻干粉添加约200ml 1mM 的HCl溶胀,实际按几等分的量来添加。
螯合配体常规的配体螯合过程1.在螯合前,使用0.1 M NaHCO3、0.5 M NaCl pH 8.3的螯合缓冲液来溶解配体,每克冻干粉使用5ml螯合缓冲液溶解。
一般,每毫升的填料介质可以结合5-10mg的蛋白配体。
对于较小的配体,一般每毫升填料介质添加1-10μM的配体。
2.称出所需量的溴化氰活化琼脂糖-4B填料。
如上所述,用1mM HCl来溶胀和清洗冻干粉。
3. 在一个密封的容器里,将溶解的配体与待螯合的介质混合。
在室温下反复旋转混合约1 h或在4℃下过夜混合,其他温和的搅拌方法也可以使用的。
4.使用至少5倍填料体积的螯合缓冲液来洗去多余的配体。
5.排除任何剩余的活性配体,将填料转移到0.1M Tris-HCl缓冲液pH 8.0或1M 乙醇胺,pH值8.0溶液中,保持2h。
蓝色琼脂糖凝胶6FF使用说明1简介本产品将蓝色染料偶联到交联及活化的琼脂糖凝胶上,该填料具有很高的化学稳定性。
蓝色琼脂糖凝胶与目标蛋白的结合主要是配基提供的电子对作用与疏水作用的综合结果。
该亲和色谱填料应用范围很广泛,可适用于白蛋白、干扰素、α2巨球蛋白、凝血因子及各种需要NAD+和NADP+的酶的分离纯化。
本产品稳定性好,基团脱落少,使用寿命长,使用方便,应用广泛。
2亲和填料特性特点基团脱落少,结合特异性强基质6%的交联琼脂糖凝胶配基蓝色染料配基密度≈7μmol/ml吸附载量18mg BSA/ml亲和填料的颗粒大小45-165μm最大流速300cm/hpH范围3-10,在位清洗时pH范围可到2-13使用温度4℃~常温保存温度+4~8℃保存液体20%乙醇3适用范围蓝色琼脂糖凝胶适用可适用于白蛋白、干扰素、α2巨球蛋白、凝血因子及各种需要NAD和NADP 的酶的分离纯化。
4应用实例实验名称:从发酵液中去除牛血清白蛋白实验步骤:(1)蓝色琼脂糖凝胶6FF装柱,1.6×20cm,柱床体积为15ml;(2)用缓冲液1平衡5-10个床体积,流速为4ml/min;(3)含牛血清白蛋白的样品离心,用缓冲液1进行1:1稀释,0.45μm滤膜过滤,上样。
流速为2ml/min;(4)用缓冲液1再洗5-10个床体积,流速为2ml/min;(5)用缓冲液2洗脱,流速为2ml/min,收集洗脱峰;(6)用纯水流洗5个柱床体积,再用20%的乙醇流洗5个柱床体积,流速为4ml/min,柱子置于4~8℃环境中保存;(7)将分离纯化的BSA进行SDS-PAGE电泳分析。
缓冲液组成:缓冲液1:50mM KH 2PO 4,pH7.0。
缓冲液2:50mM KH 2PO 4,1.5M KCl,pH7.0。
注:以上缓冲液须经0.22μm滤膜过滤。
所得结果如下图:5亲和填料应用的注意事项(1)该凝胶从冷室或冰箱中取出后最好在室温下缓慢振摇恢复到室温,然后再装柱,以免产生气泡影响柱效。
活化偶联介质()产品说明书. 产品简介活化偶联介质可用于各种含有氨基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联,广泛十分广泛。
活化偶联介质以自制的琼脂糖凝胶为基质,经过一系列的活化、偶联步骤,最终形成活化酯,在温和的条件下就可以偶联各种带氨基的配基。
活化偶联介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。
. 产品特性表*:除基质外,也可以提供、和基质的活化介质。
. 应用活化偶联介质广泛用于各种含有氨基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联。
具体的操作步骤如下(以活化胶偶联为例):清洗液:, ,度预冷;偶联缓冲液:, , 。
()准确称取溶于,缓冲液,溶解完全后备用。
()将约活化胶用度预冷的洗次后抽干,再用, 清洗次,抽干后将活化胶(约)加入到的反应器(磨口三角瓶或离心管)中(注意:清洗后应立即使用)。
()将溶液加入到活化胶中,反应温度恒定在℃(或室温℃),摇床中振荡混合(离心管水平放置),转速,反应过夜(或)。
()反应停止后,静置,取上清离心(,,室温),收集上清液用于未偶联的浓度分析(可采用、、法,在有强吸收,不能采用测定蛋白浓度),计算偶联的的配基密度;将其余料液转移到砂芯漏斗中用去离子水清洗、抽干。
()封闭未反应的:将抽干的亲和胶加入到磨口三角瓶中,加入乙醇胺,溶液(或,)。
反应温度恒定在℃(或室温℃),搅拌速度,反应过夜(或)。
反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干,用去离子水清洗。
()清洗将制得的琼脂糖凝胶依次用倍的去离子水、含的乙酸乙酸钠缓冲液()、去离子水、含的硼酸四硼酸钠缓冲液()和去离子水充分洗涤(重复交替清洗次),抽干,去除未反应的配基。
()保存制得的亲和介质保存于℃、乙醇溶液中。
备注:其他配基的偶联方法与类似,但反应条件(、温度、时间、配基加入量)需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。
注意事项:偶联缓冲液可用碳酸盐和磷酸盐等缓冲液,但绝对不能使用含有氨基的等缓冲液。
Q-琼脂糖凝胶FF使用说明货号:S8851规格:100ml保存:4℃~25℃,有效期5年。
一、简介Q-琼脂糖凝胶FF是将三甲胺基烷基季铵基团键合在高流速琼脂糖微球上形成的一种强阴离子交换介质。
广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
二、亲和填料特性项目指标离子交换基团-CH2N+(CH3)3离子交换类型强阴离子,可交换离子Cl-基质6%交联琼脂糖蛋白质吸附容量120mgHSA/ml介质总离子交换量0.18-0.25mmol/ml介质形状球形粒径45~165µm流速400~700cm/h*最大流速750cm/h 工作温度4~40℃耐热pH7水中120℃30min耐压0.3MPapH值稳定性1~14(短时间,在位清洗);2~12(长时间) pH工作范围2~12化学稳定性在以下液体中稳定:所有常用的水相缓冲液;1mol/L 氢氧化钠;8mol/L尿素;6mol/L盐酸胍;70%乙醇*检测条件:层析柱10mm×300mm*柱床高15cm,25℃,流动相为0.1mol/LNaCl。
.三、适用范围Q-琼脂糖凝胶FF具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点,非特异性吸附低,回收率高,适用于工业规模生产,适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
四、操作说明1装柱(1)让所有的材料和试剂达到室温。
配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。
(2)根据柱子大小取所需量的凝胶,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。
(3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
(4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。
打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
羧基-琼脂糖凝胶4B的使用方法产品简介羧基-琼脂糖凝胶4B是用由环氧树脂耦合方法将6-氨基已酸共价键偶联到琼脂糖4B上。
羧基-琼脂糖凝胶4B含有一个10个碳原子连接臂自由羧基,耦合氨基基团的配体。
长长的间隔臂使它特别适合固定的小分子。
产品参数产品名称:羧基-琼脂糖凝胶4B(ECH Sepharose4B)货号:S9410基质:4%琼脂糖凝胶耦合基团:氨基颗粒大小:90μm最大流速:75cm/h工作pH:3-14操作温度:室温保存条件:贮存于4°C-8°C(保存溶液为20%乙醇)使用方法1.乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;2.无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后;3.盐酸浸泡:在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性;4.将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。
难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可;7.洗脱方法:可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;8.在位清洗(CIP)凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。
方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
肝素-琼脂糖凝胶HP使用说明货号:S9350规格:25ml产品说明:肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖,将它偶联到活化的琼脂糖凝胶上,该填料具有很高的物理化学稳定性。
肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合,所以肝素琼脂糖凝胶可以用于这类物质的纯化。
产品特性:特点基团脱落少,结合特异性强基质6%的琼脂糖凝胶配基肝素吸附载量2-3mg抗凝血因子Ⅲ(ATⅢ)/ml亲和填料的颗粒大小10-45μm最大流速150cm/hpH范围4-10,在位清洗时pH范围可到3-13使用温度4℃~常温保存温度4~8℃保存液体20%乙醇适用范围肝素琼脂糖凝胶用于抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子的分离纯化。
注意事项:1、该凝胶从冷室或冰箱中取出后最好在室温下缓慢振摇恢复到室温,然后再装柱,以免产生气泡影响柱效。
2、吸附:20-50mM,pH7.4-8.0的缓冲液,为避免离子交换的干扰,缓冲液中可以适当加50mM-100mM的NaCl,,最常用的为Tris-HCl缓冲液。
3、洗脱:可以用pH7.4-8.0的缓冲液加0.2-2M进行阶段或者线性洗脱。
4、上样样品必须与平衡柱子的缓冲液的pH、电导相同。
5、不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。
6、肝素琼脂糖凝胶亲和填料的再生处理方法:先用0.1M Tris-HClpH7.0缓冲液洗3个柱床体积,然后用0.1M NaOH含2MNaCl流洗3个床体积,最后用20%乙醇洗3个床体积即可。
长时间用酸碱洗填料会是填料的吸附能力下降,所以清洗要尽量缩短时间。
7、该亲和填料保存条件为20%乙醇,4-8℃。
特别注意:上样之前,样品必须去除色素,否则色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。
环氧活化琼脂糖凝胶介质产品说明书
1. 产品简介
环氧活化琼脂糖凝胶介质可用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基(蛋白质、多肽、氨基酸或糖等)的偶联,应用十分广泛。
该活化偶联介质以琼脂糖凝胶为基质,采用环氧活化的方法激活琼脂糖上的羟基,活化后即可直接用于各种配基的偶联。
本中心开发的环氧活化偶联介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广(可偶联氨基、巯基和羟基)的特点。
2. 产品特性
3. 应用
环氧活化琼脂糖凝胶介质可用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联。
具体的操作步骤如下(以10 ml活化胶偶联BSA为例):
清洗:用10-20倍胶体积的去离子水冲洗保存于50%DMSO的环氧活化胶,除去DMSO,抽干;
偶联:称取200mg BSA,溶解于10ml 0.1M碳酸钠缓冲液(pH 9.0),加入到抽干的活化胶中,在摇床上振荡,37℃偶联12-24h(反应完毕后将料液转移到砂芯漏斗中抽干,收集料液用于未偶联BSA的分析和偶联配基密度的计算,活化胶水洗后抽干);
封闭:将10ml抽干的偶联BSA的胶加入到100 ml三角瓶中,加入30 ml 1 mol/L 乙醇胺溶液。
反应温度恒定在37 ℃,搅拌速度120 rpm,反应时间4h。
反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干,用去离子水清洗。
清洗:偶联BSA的介质依次用5倍的去离子水、0.1 M含0.5 MNaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)、去离子水、0.1M含0.5 MNaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液(pH 8.0)和去离子水充分洗涤后,抽干。
保存:保存于4℃、20%乙醇溶液中。
备注:其他配基的偶联方法与BSA类似,但反应条件(pH、温度、时间、配基加入量)需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。
注意事项:偶联缓冲液可用碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液,但绝对不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸缓冲液。
4. 其他服务
(1)提供介质筛选及工艺开发的咨询。
(2)接受客户委托开发各种分离介质(包括CNBr和NHS活化偶联介质)。
(3)接受客户委托开发各种分离工艺。
(4)按客户要求提供各种介质(疏水、离子交换、亲和)及相应规格的预装柱。
(5)为客户提供专业的售前和售后服务。