大鼠视网膜神经节细胞培养

大鼠视网膜Müller细胞体外培养特性李春花;郑玉萍;周婷洁;雷晓琴;王润生;宋虎平;马为梅【期刊名称】《临床眼科杂志》【年(卷),期】2018(26)5【摘要】目的探讨视网膜Müller细胞(RMCs)体外培养方法,研究其增殖、凋亡特性.方法将出生7 d的SD大乳鼠处死,分离出视网膜组织并收集于培养皿中,分别加入木瓜蛋白酶(27 U/ml)和0.25％的胰蛋白酶37℃进行消化30 min,使用20％FBS的DMEM/F12培养基终止消化.用移液枪轻轻吹打,接种于6孔培养板,放入37℃、体积分数为5％的CO2培养箱培养.定时观察细胞的生长情况,2～3 d换液1次.当细胞长满培养板的80％～90％时进行消化终止,按1:3传代,移入放有细胞爬片的6孔培养板,置于5％CO2恒温培养箱中培养.在倒置显微镜下观察细胞形态变化.在原代培养5 d时,将细胞爬片取出,进行谷氨酰胺合成酶(GS)、波型蛋白(Vimen-tin)免疫荧光染色.结果原代培养的RMCs与神经元细胞共同生长,随接种时间延长,逐渐自接种块周边爬行生长,呈扁平的多边形融合状生长,并有较长的突起,传2代时细胞纯化率高,传3～4代时细胞失去原有秩序,体积约有原代的3～4倍,胞质内见明显束状纤维增生.GS主要在Müller细胞胞核和胞质中表达,胞膜不表达,其阳性表达率达80％以上.Vimentin主要在Müller细胞胞质中表达,其阳性表达率达90％以上.结论本试验通过酶分步消化法以及机械吹打法在体外成功培养并纯化了视网膜Müller细胞,GS和Vimentin均可鉴别视网膜Müller细胞,将二者一起使用可提高Müller细胞鉴别率;随着体外传代培养时间延长,Müller细胞逐渐分化为带有收缩功能的纤维细胞,这可能参与了增生性视网膜病变的发病机制.【总页数】5页(P460-464)【作者】李春花;郑玉萍;周婷洁;雷晓琴;王润生;宋虎平;马为梅【作者单位】710004 西安市第四医院;710002 西安交通大学附属第二医院;710054 西安市疾病预防控制中心;710004 西安市第四医院;710004 西安市第四医院;710004 西安市第四医院;710004 西安市第四医院【正文语种】中文【相关文献】1.大鼠视网膜Müller细胞受刺激后具有神经干细胞的特性 [J], 董晓飞;柳林2.视网膜Müller细胞体外培养研究 [J], 张海涛;李燕;唐志萍3.葛花总黄酮对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜Müller细胞的保护作用 [J], 罗影;左中夫;张俏;薛坤;刘畅;闵连秋4.红景天苷抑制高糖诱导大鼠视网膜Müller细胞的凋亡 [J], 赵宁;于洪丹;冯珍;丁佳媛;刘学政5.α1-抗胰蛋白酶抑制高糖诱导大鼠视网膜Müller细胞凋亡实验研究 [J], 田蕴霖;白淑玮;邵娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠视网膜神经细胞的原代培养摘要目的:在前人建立的方法上优化SD 大鼠视网膜神经细胞体外培养的技术和方法，为后续研究提供实验基础。

方法:使用胰酶消化法分离新生1 ～ 3d SD 大鼠视网膜神经细胞，以DMEM/F12 为培养基体外培养，免疫组织化学染色的方法进行鉴定。

结果:观察光镜下培养的细胞贴壁生长，部分细胞伸出突起，且有些突起相互连接。

免疫细胞化学染色显示，培养的细胞大多数抗神经元特异性烯醇化酶(NSE) 抗体反应阳性。

结论:视网膜神经细胞体外培养成功为进一步进行视网膜疾病的研究创造了条件。

关键词:细胞培养; 视网膜神经元; 胰蛋白酶消化法; 神经元特异性烯醇化酶引言一个世纪前，从青蛙身上剥离的神经管片段仍能在生理液中维持几天的活性，使得越来越多的神经纤维得到的实时观测以来，体外培养技术已经广泛的应用于生物技术领域。

【1】在没有了完整动物的复杂性，体外培养的方法可以大大提高对视网膜的基本属性和环境的适应性的了解。

在体外系统中，这个界定的实验条件可以很容易设定和维持。

这提供了一个稳定的辅助药理学和分子操纵的平衡，同时保持了完整的组织复杂表型特征。

在这里我们根据一些成功方法报告探讨一下大鼠视网膜神经细胞的原代培养技术。

【2-3】材料与方法动物：实验中使用的所有SD大鼠幼崽均是从青岛实验动物中心根据眼科和视觉研究中动物的ARVO声明，同时保留了出生后1-3SD大鼠的相对温度和湿度条件下获得的SD大鼠幼崽材料：DMEM/F12培养液和胎牛血清购自Gibco公司（美国），兔抗大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）单克隆抗体，兔抗大鼠神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）多克隆抗体，羊抗兔IgG 和HRP-链霉亲和素购自中山Goldbridge生物技术有限公司（北京，中国）。

所有其他试剂均为Sigma公司（圣路易斯，密苏里州，美国）。

方法：预涂层的聚-D-赖氨酸组织培养皿为了使视网膜神经细胞，紧贴组织培养皿，聚-D-赖氨酸添加到被预先放置盖玻片的24孔板的孔中。

LEDGFp52对大鼠视网膜神经节细胞作用研究的开题报告
概述：
本研究旨在探究LEDGFp52在大鼠视网膜神经节细胞中的作用，与疾病发展的关联以及治疗方法的研究。

视网膜神经节细胞是视网膜中负责传递视觉信息到脑部的重
要细胞。

众所周知，视网膜神经节细胞的损失是引起眼疾的主要原因之一。

LEDGFp52是一种与基因转录和DNA修复有关的蛋白质。

越来越多的研究表明，LEDGFp52在视网膜神经节细胞中的表达与细胞凋亡、炎症、视网膜神经节细胞的死
亡等病理过程密切相关，可能是治疗眼疾的潜在靶点之一。

研究方法：
本实验将使用体外细胞培养的方法，在大鼠视网膜神经节细胞中转染LEDGFp52，观察LEDGFp52的表达情况，以及其对视网膜神经节细胞的影响。

同时，使用Western Blot和实时荧光定量PCR等方法，检测LEDGFp52参与了哪些信号通路以及
对关键基因表达的调控。

预期结果：
- 确定LEDGFp52在大鼠视网膜神经节细胞中的表达情况及变化规律；
- 探索LEDGFp52参与了哪些信号通路，并比较其在疾病状态下的变化；
- 研究LEDGFp52对视网膜神经节细胞的影响，以及其对细胞的生存、凋亡、炎
症等过程的影响；
- 探究LEDGFp52在治疗眼疾中的应用潜力，为开发治疗眼疾的新药物提供新的
思路。

视网膜神经节细胞多种培养方法的实验研究
胡竹林;杜蜀华
【期刊名称】《中华实验眼科杂志》
【年(卷),期】2002(020)001
【摘要】目的探讨视网膜神经节细胞(RGCs)的多种培养方法. 方法 (1)在涂有鼠尾胶原的器皿上通过调整培养液培养:①乳鼠混合及纯化的RGCs;②单层星型胶质细胞上种植纯化的乳鼠RGCs;③引产胎儿混合RGCs.(2)检验鼠尾胶原及中脑顶盖提取液(Te)对培养的乳鼠RGCs的影响. 结果 (1)混合培养的乳鼠及引产胎儿RGCs大多能存活2周以上;(2)纯化的乳鼠RGCs大多能存活48h;(3)单层星型胶质细胞上种植的纯化乳鼠RGCs能存活4周以上;(4)鼠尾胶原及Te对培养的乳鼠RGCs的贴壁及生长有明显的促进作用. 结论通过调整培养液及改善微环境能用多种方法培养RGCs.
【总页数】5页(P30-34)
【作者】胡竹林;杜蜀华
【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科,武汉,430030
【正文语种】中文
【中图分类】R774
【相关文献】
1.合用多种草药提取液促进轴突切断的视网膜神经节细胞的存活和再生 [J], CheungZH;武明媚
2.左卡尼汀对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞保护作用的实验研究 [J], 于常红;韩彦弢;曹玉;安明;时肖;杨军廷;焦俊;李胜;王春波
3.天麻钩藤饮抗大鼠视网膜神经节细胞凋亡机制的实验研究 [J], 吕繁涛;李玉洁;马科;王海燕
4.Brn-3a标记大鼠视网膜神经节细胞的实验研究 [J], 林俊;朱益华
5.荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞的实验研究 [J], 李静波;徐尤学;方家华;张祖海
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

０．２５
０．２
０．１５—Ｒ
蜒
罂０．ｉ碌
０．０５
０
罾
静
Ｕ
露
不同浓度ＴＮＦ—ｄ对视网膜神经细胞活
力的影响
ｃｏｎｔｉ．ｏ［Ｏ０５０１０．２Ｉ１０１００
ＴＮＦ－ａ浓度（ｎｇＪｍｌ）
图２不同浓度ＴＮＦ—Ｑ对视网膜神经细胞凋
亡的诱导
ｃｏｎｔｉ＇ｏｌ０．０５０．１０．２
ＴＮＦ．ｄ浓度
８１００
∞如∞∞加
０
附图
幽１原代培养接种即刻的视网膜神经细胞，少数神经元仍保留轴突或树突，相差显微镜ｘ２００
幽２原代培养２４小时，细胞基本贴壁．基单层排列，细胞聚集成团，人部分细胞Ｋｍ短的突
图３原代培养第２ｄ，细胞体积较前增人，视网膜神经元再生出较长的轴突和树突，相差显微镜ｘ２００
浏５原代培养第４ｄ．视网膜神经元的突起数倍丁胞体直径，相著显微镜ｘ２００
附图
图７原代培养２ｄ的视网膜神经元，ＨＥｘｌ０００
图８原代培养３ｄ的视网膜神经元，突起之间相互连接形成突触，ＨＥｘ２００
９
附幽
图９原代培养４ｄ的视网膜神经元，个别细胞轴突数倍于胞体直径，ＨＥｘ２００。

B族维生素对体外培养大鼠视网膜神经细胞及节细胞的神经营养作用白海青;王竫华;李树宁【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2004(022)001【摘要】目的评价维生素B1、B6、B12及其衍生物甲钴胺对视网膜神经细胞及神经节细胞(RGCs)的生存和轴突再生伸长的影响.方法采用新生大鼠视网膜神经细胞体外原代培养技术,与不同浓度的B族维生素共同培养,MTT比色法检测细胞活力,进行HE染色和抗Thy1免疫细胞化学染色,测量视网膜神经细胞和RGCs轴突长度,比较各种维生素对细胞轴突伸长的影响.结果维生素B1、B1、B12和甲钴胺的最有效作用浓度分别为100、100、1.0、1.0μmol/L;高密度培养该营养作用更明显.用该浓度作用于细胞,维生素B6、B12和甲钴胺可促进视网膜神经细胞和RGCs轴突伸长.结论B族维生素在体外短期内能够显著提高视网膜神经细胞和RGCs的活力,促进上述细胞轴突再生伸长.【总页数】4页(P73-76)【作者】白海青;王竫华;李树宁【作者单位】266003,青岛大学医学院附属医院眼科;266003,青岛大学医学院附属医院眼科;266003,青岛大学医学院附属医院眼科【正文语种】中文【中图分类】R774【相关文献】1.睫状神经营养因子对大鼠急性高眼压眼视网膜神经节细胞的保护作用 [J], 武劲圆;孙丰源;唐东润;张蕊2.睫状神经营养因子对大鼠急性高眼压眼视网膜神经节细胞的保护作用 [J], 武劲圆;孙丰源;唐东润;张蕊3.脑源性神经营养因子对大鼠视网膜节细胞损伤的保护作用 [J], 黄蔚;王琳;惠延年;张淼丽4.不同生长期晶状体蛋白对体外培养的大鼠视网膜神经节细胞存活的促进作用 [J], 王文军;唐罗生;杨新光5.睫状神经营养因子对大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞的保护作用 [J], 王山丹;钱志敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

《不同鼠龄视网膜干细胞培养及生物学特性》一、引言视网膜干细胞的研究在眼科医学和神经生物学领域具有深远的意义。

干细胞的培养及生物学特性的研究，尤其是针对不同鼠龄的视网膜干细胞，对于理解其发育过程、疾病发生机制以及潜在的治疗应用都具有重要的价值。

本文将探讨不同鼠龄视网膜干细胞的培养方法及其生物学特性。

二、材料与方法1. 实验材料本实验采用不同鼠龄（如：新生鼠、青年鼠、成年鼠）的视网膜组织作为实验材料。

所有实验操作均符合伦理标准。

2. 视网膜干细胞培养使用标准的组织培养技术，对不同鼠龄的视网膜组织进行干细胞培养。

在无菌条件下，将视网膜组织进行消化处理，分离出干细胞并进行培养。

3. 生物学特性分析通过显微镜观察、免疫荧光染色、PCR等技术手段，分析不同鼠龄视网膜干细胞的形态、增殖能力、分化能力等生物学特性。

三、实验结果1. 不同鼠龄视网膜干细胞的形态特征通过显微镜观察，我们发现不同鼠龄的视网膜干细胞在形态上存在差异。

新生鼠的视网膜干细胞呈现较为原始的形态，细胞体积较大，核质比例较高；随着鼠龄的增加，细胞形态逐渐趋于成熟，细胞体积减小，核质比例降低。

2. 不同鼠龄视网膜干细胞的增殖能力通过细胞计数和增殖实验，我们发现随着鼠龄的增加，视网膜干细胞的增殖能力逐渐降低。

青年鼠和成年鼠的视网膜干细胞增殖速度较慢，而新生鼠的视网膜干细胞具有较高的增殖能力。

3. 不同鼠龄视网膜干细胞的分化能力通过免疫荧光染色和PCR等技术手段，我们发现不同鼠龄的视网膜干细胞具有不同的分化能力。

新生鼠的视网膜干细胞具有较高的分化潜力，可以分化为多种类型的神经细胞；随着鼠龄的增加，干细胞的分化能力逐渐降低，特定类型的神经细胞生成减少。

四、讨论本研究表明，不同鼠龄的视网膜干细胞在形态、增殖能力和分化能力等方面存在差异。

这些差异可能与干细胞的发育过程、基因表达、细胞外环境等因素有关。

了解这些差异有助于我们更好地理解视网膜干细胞的生物学特性和其在眼科疾病治疗中的应用。

3广西教育厅博士研究生科研创新项目资助(2006105981001D13),广西自然科学基金项目资助(桂科自0640090)1广西医科大学组织胚胎学教研室△通讯作者收稿日期:2006206218大鼠视网膜M üller 细胞的培养与鉴定3黄敏丽　陈维平1　何少健1　陈　芳1　罗国容1△(广西医科大学第一附属医院眼科　南宁　530021)摘要　目的:仿照前人建立的方法,优化SD 大鼠视网膜M üller 细胞体外培养的技术和方法,为后续相关研究建立实验室条件。

方法:使用胰蛋白酶消化的方法分离新生SD 大鼠视网膜M üller 细胞,以DM EM 为培养基体外培养,光镜观察。

采用电镜观察及荧光免疫组织化学染色的方法进行鉴定。

结果:培养的细胞贴壁生长,原代细胞胞体狭长,细胞质丰富,折光性好。

电镜下可见特征性的中间丝(直径8～10nm ),细胞器丰富;荧光免疫组织化学显示细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP )和谷氨酰胺合成酶(GS )阳性。

结论:酶消化法培养SD 大鼠视网膜M üller 细胞是一种稳定、可靠的方法。

关键词　视网膜;M üller 细胞;细胞培养中国图书资料分类法分类号　R77411 视网膜M üller 细胞是一种特化的神经胶质细胞,也是视网膜内最主要的胶质细胞,它贯穿整个视网膜,同时具有星形胶质细胞和少突胶质细胞的功能。

它不仅具有维持视网膜的正常结构和功能、调节视网膜神经元活动的作用,还可能参与多种病理过程如增殖性玻璃体视网膜病变、增殖性糖尿病视网膜病变,在视网膜的病理、生理过程中起着重要的作用[1]。

M üller 细胞的体外培养技术可为视网膜病变的细胞生物学、发育学和电生理学的研究提供一个重要的平台。

在本研究中,我们参考国内外有关文献,在本实验室探索、优化体外培养M üller 细胞的技术和方法,为后续研究建立实验室条件,现报告如下。

两种大鼠视网膜Müller细胞培养方法比较叶尚尚;孟岩;李艳【期刊名称】《青岛大学医学院学报》【年(卷),期】2013()4【摘要】目的比较酶消化法与组织块法培养大鼠视网膜Müller细胞的效果。

方法将新生3d的SD大鼠视网膜分离为小组织块,分别采用酶消化法与组织块法进行体外培养,采用换液时机械震荡等方法获得纯化的Müller细胞。

从细胞形态学、细胞增殖及免疫细胞化学染色阳性率方面比较两种细胞培养方法的效果。

结果酶消化法获得的Müller细胞数量多于组织块法(t=2.264,P<0.05),且用时短。

两种方法培养的纯化Müller细胞增殖速度及免疫细胞化学染色阳性率比较差异无显著意义(P>0.05)。

结论酶消化法是一种高效的大鼠视网膜Müller细胞培养方法。

【总页数】4页(P371-373)【关键词】Müller细胞;视网膜;细胞培养技术;大鼠,Sprague-Dawley【作者】叶尚尚;孟岩;李艳【作者单位】青岛大学医学院附属医院眼科【正文语种】中文【中图分类】R-332;R392.12【相关文献】1.新生大鼠视网膜Müller细胞原代培养方法的改良 [J], 杨琨;董方田2.脂质体法和电穿孔法体外转染SD大鼠视网膜Müller细胞的比较 [J], 刘曾琦;夏晓波3.大鼠小团样视网膜神经细胞培养的方法 [J], 冯朝晖;李春花;郑玉萍;王肖华;熊全臣4.一种改良的Sprague Dawley新生大鼠视网膜Müller细胞培养方法 [J], 杨梅; 范围; 黄瑶; 袁容娣5.葛花总黄酮对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜Müller细胞的保护作用 [J], 罗影;左中夫;张俏;薛坤;刘畅;闵连秋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

沈阳医学院学报第１１卷３０ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗，过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，ＰＢＳ冲洗，非免疫动物血清封闭１０ｒａｉｎ，滴加谷胺酰胺合成酶（ＧＳ，１：１００）（上海优宁维公司），４℃孵育过夜，ＳＰ二步法显色试剂盒（福建迈新公司），ＡＥＣ显色。

１．３形态学观察将不同生长时期的的Ｍｕｌｌｅｒ细胞置于荧光显微镜下，观察其贴壁状况和融合时间。

２结果接种４８ｈ内即有细胞贴壁，贴壁细胞长出突起，换液后细胞分裂旺盛，３天后细胞融合。

反复胰蛋白酶消化并弃去悬浮的细胞后，绝大多数细胞形态较一致，呈典型的扇状细胞形态。

传代３次后，胞体呈扁平不规则状，胞体较大胞浆丰富。

２．１免疫组织化学染色结果细胞传３代后，９０％的细胞谷胺酰胺合成酶染色阳性（图１）。

图１原代培养的Ｍｕｌｌｅｒ细胞荧光显微镜下的形态（ｘ２０）２．２形态学观察结果荧光显微镜下可见Ｍｕｌｌｅｒ细胞的胞体和突起逐渐在培养瓶壁上伸展，呈现出胞体较大、突起明显的细胞形态（图２）。

图２原代培养的Ｍｕｌｌｅｒ细胞谷氨酰胺合成酶的阳性表达（×加）３讨论３．１实验动物的选择ＳＤ大鼠作为研究Ｍｕｌｌｅｒ细胞的实验动物有其自身特点，虽然其视网膜上Ｍｕｌｌｅｒ细胞的表达水平较低，但由于其相对经济、取材容易，我们又对以往的取材方法加以改进，仍能得到较满意的Ｍｕｌｌｅｒ细胞。

３．２培养方法的改进常规的Ｍｕｌｌｅｒ细胞培养方法主要有组织块培养法和蛋白酶消化法两种。

在细胞的纯化方面主要是利用Ｍｕｌｌｅｒ细胞较其他细胞紧贴这一特点，采用机械的吹打方法：即在细胞贴壁后，用吸管反复吹打，使贴壁不紧的细胞和组织块悬浮，从而达到纯化的目的旧’３ｊ。

国内有用恒温摇床的方法纯化细胞，其原理基本一致Ｈ－。

我们考虑到Ｍｕｌｌｅｒ细胞在ＳＤ大鼠视网膜表达数量较低的特点，略去了机械吹打的中间步骤，并适当延长其贴壁时间，目的是首先获取数量较多的贴壁细胞，再在此基础上加以反复的胰蛋白酶消化，因为神经元等细胞相对脆弱，而Ｍｕｌｌｅｒ细胞对胰酶的耐受力较强，从而获得较多量稳定的Ｍｕｌｌｅｒ细胞。

《不同鼠龄视网膜干细胞培养及生物学特性》一、引言视网膜干细胞研究在眼科医学和神经科学领域具有重要价值。

通过了解不同鼠龄视网膜干细胞的生长特性、分化能力及生物行为，可以更深入地探索其在视神经保护和视力恢复等方面的应用潜力。

本文将重点阐述不同鼠龄视网膜干细胞的体外培养技术及对其生物学特性的研究进展。

二、材料与方法1. 实验动物：本实验采用不同年龄的野生型小鼠，如新生儿期、青年期和老年期小鼠。

2. 视网膜干细胞培养：取小鼠视网膜组织，进行组织块培养法，将视网膜干细胞分离并接种于适宜的培养基中。

3. 细胞生长监测：采用显微镜观察细胞生长情况，并定期记录细胞增殖、迁移等数据。

4. 生物学特性分析：通过实时PCR、免疫荧光等技术，分析视网膜干细胞的基因表达、分化能力等生物学特性。

三、实验结果1. 视网膜干细胞培养：成功分离并培养了不同鼠龄小鼠的视网膜干细胞。

在适宜的培养条件下，这些细胞呈现出典型的干细胞形态，具有较高的增殖能力和迁移能力。

2. 细胞生长曲线：通过定期观察和记录，发现不同鼠龄小鼠的视网膜干细胞在生长速度和生长周期方面存在差异。

其中，新生儿期小鼠的视网膜干细胞生长速度较快，而老年期小鼠的视网膜干细胞生长速度较慢。

3. 基因表达分析：实时PCR结果显示，不同鼠龄小鼠的视网膜干细胞在基因表达上存在差异。

新生儿期小鼠的视网膜干细胞具有较高的增殖潜能和分化能力，而老年期小鼠的视网膜干细胞则表现出较低的增殖潜能和较高的抗凋亡能力。

4. 分化能力分析：通过免疫荧光等技术，我们发现不同鼠龄小鼠的视网膜干细胞在分化能力上也存在差异。

例如，在向视神经元方向分化的过程中，新生儿期小鼠的视网膜干细胞表现出较高的分化效率；而老年期小鼠的视网膜干细胞则更容易向神经胶质细胞方向分化。

四、讨论本研究通过体外培养不同鼠龄小鼠的视网膜干细胞，对其生物学特性进行了深入研究。

结果表明，不同年龄小鼠的视网膜干细胞的生长速度、基因表达和分化能力等方面存在差异。

巨噬细胞培养液对离体培养的大鼠视网膜神经节细胞的作用研究王艳华;王一;曾玉晓;王东武【期刊名称】《眼科新进展》【年(卷),期】2006(26)10【摘要】目的研究巨噬细胞培养液对离体培养的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)存活和生长的作用,探讨损伤晶状体促进RGCs存活和轴突再生的作用物质,为视神经损伤和再生的基础研究提供理论依据.方法制备大鼠巨噬细胞培养液,分别用巨噬细胞培养液及DMEM对RGCs进行离体培养,观察RGCs在体外存活的时间,测量培养1 d、3 d和5 d有突起的RGCs数目及最长突起长度,进行组间比较.结果 (1)对照组离体培养的细胞于培养5～6 d崩解死亡,而巨噬细胞培养液组细胞能存活6～8 d;(2)培养1 d、3 d和5 d,巨噬细胞培养液组有突起的RGCs数目分别为(59.74±2.04)个·mm-2、(96.78±4.11)个·mm-2和(99.26±3.04)个·mm-2,均明显多于同期对照组,差异非常显著(P＜0.01);(3)培养1 d和3 d,巨噬细胞培养液组RGCs最长突起长度分别为(39.70±0.71)μm和(76.19±1.56)μm,较对照组延长,差异非常显著(P＜0.01).培养5 d,RGCs最长突起长度与对照组比较差异显著(P＜0.05).结论巨噬细胞培养液可促进离体培养的RGCs存活和生长.【总页数】4页(P740-743)【作者】王艳华;王一;曾玉晓;王东武【作者单位】400038,重庆市,第三军医大学西南医院眼科;400038,重庆市,第三军医大学西南医院眼科;400038,重庆市,第三军医大学西南医院眼科;030600,山西省晋中市武警8650部队医院【正文语种】中文【中图分类】R774.1;Q959.836【相关文献】1.活化的巨噬细胞在体内对成年大鼠视神经夹伤后视网膜神经节细胞的保护作用[J], 苏颖;王继群;王峰;山艳春;徐锦堂;陈剑2.视网膜神经节细胞无血清上清培养液诱导大鼠视网膜干细胞的分化 [J], 戴敏;张青;郑志坤;沈蔚3.沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)调控p38MARK信号通路对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制 [J], 钱道卫;廖燕秋;李远存;郭海科;伍岚4.RU486通过Notch1/Hes-1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制研究 [J], 刘文强; 刘学政; 左中夫5.黄芪对保护高眼压大鼠视网膜神经节细胞的作用研究 [J], 张曙光;项杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

体外无血清培养新生SD大鼠视网膜神经细胞马伟;罗燕;李涛;李士清;唐仕波【期刊名称】《眼科新进展》【年(卷),期】2011(31)12【摘要】目的采用无血清培养建立新生SD大鼠视网膜神经细胞的体外培养方法,为视网膜神经细胞的体外实验研究奠定基础.方法取出生后3～5d的SD大鼠视网膜,用胰蛋白酶消化分离获取细胞悬液,使用无血清神经原培养基(Neurobasal TM-A Medium)和添加剂B-27 Supplement Minus AO进行培养.倒置相差显微镜观察细胞形态及轴突生长情况.培养至第5天,用抗微管相关蛋白2抗体、抗视紫红质蛋白抗体及抗胶质纤维酸性蛋白抗体,行免疫细胞化学鉴定并计算视网膜视杆细胞的纯度.结果采用无血清法培养的视网膜神经细胞生长良好,细胞伸出突起,部分神经元的突起交织呈网状.生长至第5天经免疫细胞化学证实其中神经元细胞占95.6％,而38.6％为视网膜视杆细胞,同时神经胶质细胞的生长得到了很好地抑制.结论无血清培养法可以获取纯度较高的视网膜神经细胞,为研究视网膜光感受器细胞提供了理想的体外实验模型.【总页数】4页(P1111-1114)【作者】马伟;罗燕;李涛;李士清;唐仕波【作者单位】510060广东省广州市,中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室;510060广东省广州市,中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室;510060广东省广州市,中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室;510060广东省广州市,中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室;510060广东省广州市,中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R774.1【相关文献】1.重组腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对SD大鼠视网膜神经细胞及血管内皮细胞的影响 [J], 宋哲;黎晓新;于文贞;董建强;闫征2.新生SD大鼠视网膜神经节细胞体外原代培养 [J], 尹小磊;叶剑;陈春林3.新生大鼠大脑皮层神经细胞的原代无血清培养 [J], 肖移生;李扣华;聂荣庆;张进;文珠;胡国柱4.酸性肽对硝普钠诱导体外培养SD大鼠海马神经细胞凋亡的保护作用 [J], 毛红丽;安玉会;张善锋;岳保红5.SD大鼠视网膜神经节细胞体外分离培养及高糖模型建立 [J], 杨曼;谭薇;刘畅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

新生SD大鼠视网膜神经节细胞体外原代培养尹小磊;叶剑;陈春林【期刊名称】《国际眼科杂志》【年(卷),期】2006(6)5【摘要】目的:建立简便易行的新生SD大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)体外原代培养方法.方法:取出生后24h的SD大鼠视网膜,胰蛋白酶消化制成单细胞悬液,接种于多聚赖氨酸包被的预先置入盖玻片的24孔培养板中培养,倒置相差显微镜观察细胞生长规律,使用Thy-1mAb免疫细胞化学法鉴定RGCs.结果:该方法培养的RGCs 体外存活时间可达5d,免疫细胞化学法显示RGCs的纯度约为80%.结论:使用不添加附加成分的普通培养液SD大鼠RGCs体外培养成功,且RGCs较纯化,是一种较理想的细胞培养实验模型.【总页数】3页(P1008-1010)【作者】尹小磊;叶剑;陈春林【作者单位】400042,中国重庆市,第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科;400042,中国重庆市,第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科;400042,中国重庆市,第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.高糖对原代培养的视网膜神经节细胞中Toll样受体4表达的上调作用及其意义[J], 胡丽丽;艾明;杨红霞;江双红2.体外无血清培养新生SD大鼠视网膜神经细胞 [J], 马伟;罗燕;李涛;李士清;唐仕波3.优化组织块法体外培养新生SD大鼠原代成骨细胞与鉴定 [J], 陈强;夏天;叶哲伟;宋谋珂4.SD大鼠视网膜神经节细胞体外分离培养及高糖模型建立 [J], 杨曼;谭薇;刘畅5.新生SD大鼠三叉神经元细胞的体外原代培养及鉴定 [J], 邓超;张鹤;薛进朗;王丽婵;郭家奕;程慧欣;陈传俊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

视神经节细胞的体外培养与纯化袁晓燕;谌立巍;陈思敏【期刊名称】《内蒙古中医药》【年(卷),期】2008(027)005【摘要】进行大鼠视网膜神经节细胞体外培养及纯化的方法学研究.取出生72h内的SD大鼠乳鼠视网膜制成细胞悬液,放于已包被多聚鸟氨酸和层粘连蛋白(laminin,LN)的培养皿中,加20%EMDM血清培养液、于37℃、5%二氧化碳孵箱中培养,同时分别在混合培养的视网膜神经细胞中加入5′-溴-2′-脱氧脲苷(Brdu)和羊抗鼠IgG、小鼠抗大鼠Thy1.1抗体,于4小时,24小时,48小时,72小时观测细胞存活情况;并采用MTT法测定不同方法培养的视网膜细胞在不同时间的存活率,绘制细胞生长曲线.通过对不同方法培养的细胞观察可见,视网膜混合培养细胞和加入Brdu培养的细胞,于3～4小时开始贴壁,48小时开始伸出粗细长短不等的突起,72小时后突起增多,并伸长;加入羊抗鼠IgG、小鼠抗大鼠Thy1.1抗体的细胞,其呈多边形,大多数细胞质折光强,72小时后很少见到活细胞;混合培养细胞数量在48小时后增加约70%,加入Brdu后,混合培养的细胞数量在48小时无明显减少,纯化的视网膜神经细胞在48小时后明显减少.本实验通过用两种方法培养视网膜神经细胞发现,Brdu可抑制视网膜非神经细胞的增长,RGCs纯度为60-70%,采用羊抗鼠IGg 和小鼠抗大鼠TIhy1.1抗体可起到纯化RGCs的目的,RGC纯度≥90%.【总页数】5页(P56-60)【作者】袁晓燕;谌立巍;陈思敏【作者单位】攀枝花市中心医院,617067;成都中医药大学药学院,610075;成都中医药大学药学院,610075【正文语种】中文【中图分类】R774.6【相关文献】1.新生大鼠视神经少突胶质细胞体外培养纯化及鉴定2.银杏叶提取物对兔视神经夹伤后视网膜视神经节细胞的保护作用3.中药及有效成分对视神经损伤后视神经节细胞的保护作用4.外伤性视神经病变视盘视神经纤维层厚度及黄斑区节细胞复合体厚度分析5.转化生长因子-β1对成年大鼠视神经夹伤后视网膜节细胞及视神经功能影响的实验研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠视网膜神经细胞体外培养姚进;黎晓新【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2004(022)004【摘要】目的建立视网膜神经层分散细胞的培养方法,以进一步对视网膜神经元细胞(尤其是视网膜神经节细胞)和神经胶质细胞进行体外实验研究.方法取出生后1～3d的SD乳鼠的视网膜,用胰酶消化法制备分散细胞悬液后,接种于置有包被poly-D-lysine玻片的24孔培养板中培养,倒置相差显微镜观察细胞生长规律.培养第7d,用抗神经元特异性核(NeuN)抗体和抗神经丝(Neurofilament-200,NF-200)抗体分别标记视网膜神经元细胞和神经节细胞(RGCs),并计算每10个高倍镜下的细胞数以及RGCs所占百分数.结果体外培养的视网膜神经元细胞经历了贴壁、重聚、迁移和相互接触的过程,有突起样生长,其中RGCs占神经元的55%左右.结论视网膜神经层分散细胞体外培养成功,并有较好的RGCs生长率,为进一步进行视网膜疾病的研究创造了条件.【总页数】4页(P340-343)【作者】姚进;黎晓新【作者单位】100044,北京大学人民医院眼科;100044,北京大学人民医院眼科【正文语种】中文【中图分类】R774【相关文献】1.天然麝香对体外培养大鼠视网膜神经细胞的影响 [J], 张硕;周华祥;谢学军;顾健;张盈娇;龙绍疆2.麝香酮对体外培养大鼠视网膜神经细胞的影响 [J], 张硕;周华祥;谢学军;顾健;张盈娇;龙绍疆3.银杏内酯B对体外培养的大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响 [J], 孟晶;唐仕波;林少芬;陈剑;朱晓波;李涛4.促红细胞生成素抗高糖体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的NF-κB机制 [J], 李明;孟岩;陈召利;刘桂波5.灯盏花中单体成分对体外培养大鼠视网膜神经细胞的影响 [J], 张艺;盛艳梅;孟宪丽;龙怡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。