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牛磺酸对大鼠视网膜光损伤的保护作用
雷博;张效房
【期刊名称】《中华眼外伤职业眼病杂志》
【年(卷),期】1990(0)S1
【摘要】视网膜光损伤是当前眼科临床工作中出现的—个新问题,它与老年性黄斑变性及drusen形成都有着密切关系。
近来的研究表明,视网膜光损伤是由光照引起氧自由基产生而导致光化学反应,通过脂质过氧化反应造成膜系统的损伤。
体外实验表明,牛磺酸可抑制蛙视杆细胞外段的脂质过氧化反应,减轻光对杆细胞外段的损伤。
本文给大鼠腹腔注射牛磺酸,通过对视网膜电流图b波振幅变化的观察及组织学观察,试图验证牛磺酸对视网膜光损伤具有保护作用。
【总页数】3页(P317-319)
【关键词】光损伤;牛磺酸;大鼠;脂质过氧化反应;氧自由基;视杆细胞;波振幅;光感受器细胞;外核层;老年性黄斑变性
【作者】雷博;张效房
【作者单位】河南医科大学一附院眼科;河南眼外伤研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R77，R135.92
【相关文献】
1.670 nm近红外光对大鼠视网膜光损伤的保护作用 [J], 曲超;乔利峰;曹伟;樊映川
2.牛磺酸对大鼠视网膜光损伤保护作用的实验研究 [J], 张剑利;苏小枚;毕力夫
3.牛磺酸对大鼠视网膜超微结构损伤保护作用 [J], 黄国荣;糜漫天;许红霞
4.牛磺酸对大鼠视网膜光损伤导致的细胞凋亡及bcl-2表达量的影响 [J], 张剑利
5.牛磺酸对大鼠视网膜光化学损伤的保护作用研究 [J], 陈卡;糜漫天;余小平
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40手术范围要充分，切除病灶应同时切除周围纤维组织及周边至少0．5—1．0cm的正常组织以保证无残留异位病灶旧1；病灶界限不清者术前口服孕三烯酮2．5m g，2次／周，连服3个月，可缩小病灶，清晰界限；部分病变与腹直肌筋膜、肌层甚至腹膜广泛粘连，需切除部分筋膜或腹膜，腹壁和筋膜缺损较大者可采用补片或皮瓣移植以防复发。
病灶边缘切除不满意者术后可口服药物行假绝经疗法，规范应用3～6个月，具体疗效尚未见大宗报道。
本组患者术后未使用药物治疗，出院随访O．5—5年，未见复发和恶变。
参考文献[1]W i vedi A J，A gr aw al SN，Si l vaY J．A bdom i nal w al l end om et r iom as[J]．D i g D i s Sci，2002，47(2)：456461．[2]K h a m m a sh M R，O m an A K，G asa i m e h G R，et a1．A bdom i nal w a l lend o—m etr i os is．A n ove dooked di ag nos i s[J3．Saudi M ed J。
2003，24(5)：523-525．[3]赵学英，郎景和．腹壁子宫内膜翼位症的临床特点及相关因素分析[J]．中华妇产科杂志。
2004，39(2)：97-99．[4]成宁海，朱兰，郎景和，等．10l例腹壁子宫内膜异位症临床分析[J]．生殖医学杂志．2007，16(2)：282-284．[5]B at s A S，Za fr a n i Y，P a u t i er P，et a1．M al i91m nt t m ndor m at i on0f abd om i n alw a l l aM lon-鲥06is t o cl e ar eeU caIcir如嘲：c船e r el x时and r ev i e w0f t he Ute舳[J]．Fertil St eri l，2008，90(4)：1197，e13．1197。
维生素A对光损伤小鼠视网膜功能和结构的保护作用陈子畅;樊芯;李晓燕;祝露露【摘要】目的探索维生素A对光损伤后小鼠视网膜结构和功能的保护作用.方法将12只清洁级雄性成年C57小鼠随机分为生理盐水组和维生素A组.2组小鼠于实验前行双眼视网膜电图(ERG)标准五项反应检测视网膜功能,2组小鼠分别接受1mL·kg-生理盐水或维生素A(0.1％)腹腔内注射,连续5d.2组小鼠按照动物光损伤模型标准制作右眼单眼光损伤模型,左眼遮盖,造模成功后继续饲养5d,重复检测ERG.功能检测后立即取小鼠双侧眼球做视网膜组织切片,比较2组小鼠视网膜结构的变化.结果实验前2组小鼠双眼暗适应0.01ERG b波、暗适应3.0ERG a和b波、暗适应3.0震荡电位的总幅值、明适应3.0ERG b波及3.0闪烁光反应P1波总幅值的差异均无统计学意义(P均＞0.05).光损伤造模后,两组小鼠右眼与自身对照左眼相比,上述ERG 5项检测的波幅值均出现明显下降(P均＜0.05);维生素A组小鼠右眼暗适应0.01ERG的b波、暗适应3.0ERG的a波和b波、暗适应3.0震荡电位的总幅值均高于生理盐水组(t=3.544,P=0.019;t =4.574,P=0.011;t=9.563,P=0.002;t =6.156,P=0.002),而明适应3.0 ERG的b波以及闪烁光反应P1波总幅值的差异无统计学意义(t=4.678,P=0.469;t =4.883,P=0.342);2组小鼠右眼的视网膜外核层(ONL)细胞层数较自身对照左眼均有所减少(P＜0.05),在生理盐水组小鼠右眼的视网膜外核层(ONL)细胞层数(6.5±1.05)少于维生素A组(11.5±1.03)(t=2.301,P=0.003).结论维生素A对光照引起的小鼠视网膜结构和功能损伤有一定的保护作用.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2016(038)007【总页数】6页(P750-754,封4)【关键词】维生素A;视网膜光损伤;视网膜电图;组织病理学检查【作者】陈子畅;樊芯;李晓燕;祝露露【作者单位】宁夏医科大学总医院眼科,银川750004;宁夏医科大学总医院眼科,银川750004;宁夏医科大学总医院眼科,银川750004;第四军医大学航空医学系视觉电生理学教研室,西安710032【正文语种】中文【中图分类】R758.1研究显示过量的光照会引起视网膜组织的损伤[1]，其机制可能是由于视网膜在代谢过程中产生过量的活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)，引起光感受器细胞的氧化应激损伤，导致视网膜结构和视觉功能出现异常[2-3]。
黄斑明目胶囊对MNU诱导大鼠视网膜光感受器细胞操作的防护作用王延东;王炜【期刊名称】《现代食品科技》【年(卷),期】2011(027)001【摘要】本文探讨了黄斑明目胶囊(含桑椹、菊花、酵母、胡萝卜素、党参、白术、苦茯苓、薏苡仁、丹参,中山眼科中心制)对MNU诱导的大鼠视网膜光感受器细胞变性动物模型的防护作用.将鼠龄为43 d的♀性SD大鼠33只随机分为3组.黄斑明目胶囊组(n=10)以黄斑明目胶囊溶解后灌胃,正常对照组(n=10)和模型对照组(n=10)以等量蒸馏水灌胃,bid,连续7d.给药7 d后,黄斑明目胶囊组和模型对照组大鼠予MNU40mg·kg-1,ip;正常对照组注射等量生理盐水.观察MNU处理后12、24、48、72h各组大鼠视网膜电图a波及b波的变化,并于MNU作用后7d处死大鼠,取眼球测定视网膜全层及外核层厚度.结果表明正常对照组大鼠不同时间点视网膜电图(ERG)a波及b波的振幅差异无统计学意义(P＞0.05);模型对照组在MNU 处理后ERG a波及b波的振幅均呈持续性、进行性下降,黄斑明目胶囊可明显抑制ERG a波及b波振幅的降低(P＜0.05).眼病理结果,黄斑明目胶囊组与模型对照组对照组比较,MNU诱导的大鼠视网膜光感受器细胞损伤明显减轻(P＜0.05).【总页数】4页(P22-25)【作者】王延东;王炜【作者单位】中山大学中山眼科中心广东广州 510060;华南理工大学轻工与食品学院广东广州 510641【正文语种】中文【相关文献】1.双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜组织低氧诱导因子-1α和核因子-κB表达的影响 [J], 符超君;凌艳君;颜家朝;赵洪庆;吕炎;何文龙;秦裕辉2.大鼠脂肪干细胞体外诱导为光感受器细胞和视网膜色素上皮细胞 [J], 许卓再;董方田;陈连凤;吴婵;戴荣平;于伟泓3.黑视素基因转染给光双极细胞部分恢复MNU诱导的视网膜感光细胞变性小鼠的视觉 [J], 熊国吟;罗小鹏;杨昇炎;徐颖;董军4.MNU诱导的视网膜光感受器细胞损伤过程中视网膜VEGF表达的变化 [J], 邓新国;高杨;何梅凤;孙倩娜;钟志强5.不同MNU剂量诱导大鼠视网膜光感受器细胞损伤的视网膜电图和病理形态改变[J], 邓新国;葛坚;何梅凤;高杨;钟志强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组人促红细胞生成素对慢性高眼压致大鼠视网膜神经元损伤的保护作用高莉茉;段宣初;胡妙妙【期刊名称】《国际眼科杂志》【年(卷),期】2009(9)4【摘要】目的:探讨玻璃体内注射重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对慢性高眼压所致的大鼠视网膜神经元损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法:健康SD大鼠30只随机分为5组,每组6只,分别为损伤组I,损伤组II、DMSO组、rHuEPO组和rHuEPO+ Wortmannin(WM)组.各组均以右眼为实验眼,损伤组II大鼠激光处理1d后处死,其余各组激光处理8wk后处死.损伤组用532nm激光烧灼大鼠角巩膜缘浅层静脉,阻断房水回流的方法建立大鼠慢性高眼压模型,采用Tono-pen眼压计测量眼压.DMSO组、rHuEPO组和rHuEPO+ WM组大鼠均在激光处理后1d开始分别向玻璃体内注射DMSO、rHuEPO和rHuEPO+ WM,1次/wk.正常对照组选取损伤组左眼作为对照眼.用免疫组织化学法和TUNEL染色检测观察各组实验结果.结果:与正常对照组比较,各组视网膜神经节细胞层(retinal ganglion cell layer,RGCL)中促红细胞生成素受体(erythropoirtin receptor,EPOR)表达增加,差异具有统计学意义(P<0.05).与正常对照组比较,各组RGCL中蛋白激酶B(AKT)表达无明显改变,差异无统计学意义,损伤组I和DMSO组RGCL中磷酸化蛋白激酶B(PAKT)表达也无明显改变,但rHuEPO组RGCL中PAKT表达增加(P<0.05).与损伤组I和DMSO组比较,rHuEPO组RGCL中凋亡神经细胞数目减少(P<0.05).与rHuEPO组比较,rHuEPO +WM组RGCL中AKT表达无明显变化,但PAKT表达减少(P<0.05),凋亡神经细胞数目增加(P<0.05).结论:rHuEPO对慢性高眼压所致的大鼠视网膜神经元损伤有保护作用,且rHuEPO通过PI-3K/AKT信号途径抑制神经细胞凋亡而发挥其视神经保护作用.【总页数】4页(P680-683)【作者】高莉茉;段宣初;胡妙妙【作者单位】410013,中国湖南省长沙市,中南大学湘雅三医院眼科;410011,中国湖南省长沙市,中南大学湘雅二医院眼科;410011,中国湖南省长沙市,中南大学湘雅二医院眼科【正文语种】中文【中图分类】R77【相关文献】1.促红细胞生成素对慢性高眼压下大鼠视网膜Caspase-9表达的影响 [J], 归东梅;石磊;杨颺;李迅;高殿文2.重组人促红细胞生成素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用 [J], 李丹;段宣初3.重组人促红细胞生成素对兔缺血再灌注损伤视网膜结构的保护作用 [J], 王建明;宋艳萍;孙乃学;冯海晓;惠娜;范雅稚;胡凯4.促红细胞生成素对兔慢性高眼压模型视网膜神经节细胞的保护作用 [J], 刘冠禹;杨炜5.重组人促红细胞生成素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 梁淑欣;谢汉平;曾玉晓;翁传煌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三、重要科学发现和主要技术发明、科技创新1.重要科学发现、主要技术发明、主要科技创新重要科学发现（1）房水抽吸联合激光房角光凝法建立青光眼大鼠模型，重点观察其眼压改变特征和病理改变特点,探讨其科研应用的可行性。
研究结果如下表（图）：Figure 1.The photograph of the anterior chamber after photocoagulation of angle under the slit-lamp microscope:The edema of cornea and congestion of conjunctiva were displayed.Anterior chamber formed in the first day after operation;Cornea and lens were clear,and vascular network on iris was visible on 3d postoperation.Table 1IOP of rat eyes after photocoagulation （x ±s ,mmHg,n =75）EyesPre-op IOP in post-op 1d 3d 7d 14d 21d 28d 35d 42d Right16.56±1.8421.33±2.64cb 25.56±2.35cb 30.31±3.22cb 25.67±2.32cb 21.19±2.18cb 17.08±1.36c 16.14±1.5216.28±1.58Left 16.70±1.9317.55±1.58b 16.83±1.3417.45±1.3716.97±1.1517.67±0.9416.36±1.6016.23±1.5516.34±1.57F group =122.952,P =0.000;F time =278.146,P =0.000；c P <0.01vs respective left eyes,b P <0.05vs respective pre-op valueFig.2(A)Line graph:Representative IOP in each group within each week.**P<0.01indicatedsignificantly differed from the IOP baseline by ANOVA.(B)Bar graph:Representative Variation in intraocular pressure (IOP)at different time points before and after treatments.*P<0.05and**P<0.01indicated significantly difference before and after treatment by ANOVA.Fig.3H&E stain of rat eye at different time （×400）A-E:The angle of the anterior chamber gradually narrow,and trabecular meshwork space compressed even disappear.The edema and curl were in 1,2,4,6,8weeks after operation in the right eyes F-H:No obvious changes in the chamber angle,trabecular meshwork space and iris in 4,6and 8weeks after operation in the left Fig.3Nissl staining of rat retinal （×1000）A:A lots of RGCs were seen in the right eye before photocoagulation B-E:The numbers of RGCs in the right eye were gradually decreased with increase of time after operation F-J:No obvious change was seen in the numbers of retinal ganglion cells left eye before and after operationA BFig.4(A)Nissl Staining of RGCs in rats (×1000)lots A C D EB F G HA B C D F E GH I Jphotocoagulation.The numbers of RGCs in the right eyes were gradually decreased with time extension after operation.No obvious change was seen in the numbers of retinal ganglion cells in the left eye before and after operation.(B)Bar graph:Representative variation in numbers of retinal ganglion cells at different time points.The data were expressed as the mean±SD of independent experiment.Statistical analysis was performed using a one-way ANOVA(*indicates p<0.05and**indicates p<0.01).ABFig.5Retrograde labeling fluorescent gold of Rat RGCs（×1000）RGC labeled by FG：RGCs were labeled with FG in cytoplasm and the boundary was clear.Some cells could be seen in the cell apoptosis processes,and there was no fluorescent dye leakage.(B)Bar graph:The number of retinal ganglion cells （RGCs）decreased with time,*P<0.05and**P<0.01indicated significantly difference before and after treatment上述研究结果发现实验眼激光术后6次眼压均值较术前明显升高,差异有统计学意义(P< 0.01);对照眼眼压较术前无明显变化(表1)，实验组可见少数RGCs内灰蓝色Nissl小体减少,甚至消失,而整个细胞染色均匀。
非奈利酮通过抑制小胶质细胞炎症反应减轻大鼠糖尿病视网膜病变*周婧1，韩梅2△（1天津医科大学眼科临床学院，天津 300278；2天津市眼科医院，天津 300020）［摘要］目的：探究非奈利酮（finerenone， FIN）对糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy， DR）大鼠的治疗作用及其可能的作用机制。
方法：（1）取30只清洁级雄性SD大鼠，随机选取10只作为对照（control）组，其余大鼠构建DR模型，建模成功后随机分为DR组和DR+FIN组，每组10只。
DR+FIN组大鼠每天灌胃给予10 mg/kg的FIN，DR组大鼠灌胃给予等体积的生理盐水，连续干预3个月。
采用双免疫荧光细胞化学法检测视网膜深层小胶质细胞的激活情况；采用CellF系统分析视网膜周细胞和无细胞型毛细血管（acellular capillaries， AC）数量；使用多焦视网膜成像系统检测大鼠神经视网膜功能；采用RT-qPCR和Western blot法检测各组大鼠视网膜组织中相关因子的mRNA和蛋白表达水平。
（2）体外培养HAPI大鼠小胶质细胞，并随机分为正常葡萄糖（normal glucose， NG）组、高葡萄糖（high glucose， HG）组和HG+FIN组。
NG组细胞在NG培养液（含1 g/L葡萄糖）中培养，HG组细胞在HG培养液（含4.5 g/L葡萄糖）中培养，HG+FIN组细胞在HG培养液中培养24 h后使用10 mmol/L的FIN处理。
采用划痕实验检测各组细胞迁移能力。
结果：（1）与control组比较，DR组大鼠视网膜周细胞数量显著减少（P<0.05），a波和b波振幅均显著降低（P<0.05），AC数量和深血管层的离子钙结合衔接分子1（ionized calcium-binding adaptor molecule 1， Iba1）表达显著增加（P<0.05），空腹血糖（fasting blood glucose， FBG）水平显著升高（P<0.05），视网膜组织中白细胞介素1β（interleukin-1β， IL-1β）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、IL-8、血管细胞黏附分子1（vas‑cular cell adhesion molecule 1， Vcam1）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1， TGF-β1）、C-C基序趋化因子配体2（C-C motif chemokine ligand 2， Ccl-2）和盐皮质激素受体（mineralocorticoid receptor， MR）表达水平均显著升高（P<0.05）；与DR组比较，DR+FIN组大鼠视网膜周细胞数量显著增加（P<0.05），a波和b波振幅均显著升高（P<0.05），AC数量和深血管层的Iba1表达均显著减少（P<0.05），FBG水平显著降低（P<0.05），视网膜组织中IL-1β、TNF-α、IL-8、Vcam1、TGF-β1、Ccl-2和MR表达水平均显著降低（P<0.05）。
灵杞黄斑颗粒对视网膜光损伤的保护作用及机制的开题报告一、研究背景灵杞黄斑颗粒是一种中药制剂，主要成分为枸杞子、黄芪、首乌等多种植物提取物，具有抗氧化、抗炎、免疫调节等多种生物活性。
近年来，研究表明，灵杞黄斑颗粒对于视网膜损伤具有一定的保护作用。
视网膜是眼睛内的一个感光组织，负责将进入眼睛的光信号转化为神经信号，并通过视神经传递至大脑，形成视觉感知。
然而，视网膜易受到各种因素的损伤，如紫外线照射、氧化应激、炎症反应等，导致视网膜细胞的损伤和凋亡。
严重的视网膜损伤可导致失明，严重影响生活质量。
因此，探究灵杞黄斑颗粒对视网膜光损伤的保护作用及其机制，对于预防和治疗视网膜疾病具有重要的理论和实际意义。
二、研究目的本研究旨在探究灵杞黄斑颗粒对视网膜光损伤的保护作用及其机制。
三、研究内容（一）建立视网膜光损伤模型，观察灵杞黄斑颗粒对视网膜光损伤的保护作用。
（二）测定灵杞黄斑颗粒对视网膜细胞的保护作用，通过细胞活性、凋亡率、氧化应激等指标评价其对视网膜细胞的影响。
（三）研究灵杞黄斑颗粒对视网膜光损伤相关通路的影响，包括抗氧化、抗炎、免疫调节等通路。
四、研究方法（一）建立视网膜光损伤模型：饲养大鼠，深度麻醉后用冰冷荧光灯照射视网膜5min，制备视网膜光损伤模型。
（二）灵杞黄斑颗粒的制备：灵杞、黄芪、首乌等多种中草药提取物制备灵杞黄斑颗粒。
（三）视网膜细胞的培养和处理：培养视网膜细胞，添加不同浓度的灵杞黄斑颗粒进行处理，观察对视网膜细胞的影响。
（四）测定各项指标：观察视网膜光损伤模型和视网膜细胞处理后的细胞活性、凋亡率、氧化应激等指标及其变化。
五、研究意义本研究将为探究中药制剂对视网膜保护作用提供理论和实践基础，同时为中药制剂在视网膜疾病治疗中的应用提供新方向，具有重要的研究和应用价值。
TNF-α诱导SD大鼠胰岛细胞凋亡的研究王功玲【摘要】目的体外观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对SD大鼠胰岛细胞凋亡的影响.方法体外获得的SD大鼠胰岛细胞,用不同浓度TNF-α(分别为0、10、30、50 ng/ml)处理24小时.应用脱氧核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测胰岛细胞凋亡率;应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰岛细胞Bcl-2和Bax mRNA表达水平的变化.结果 10 ng/ml TNF-α组胰岛细胞凋亡数与对照组比较无显著差异(P＞0.05),30 ng/ml和50 ng/ml TNF-α组胰岛细胞凋亡数与对照组比较显著增加(P均＜0.05).10 ng/ml TNF-α能增加Bcl-2 mRNA表达水平,而30 ng/ml和50 ng/ml TNF-α能显著降低Bcl-2 mRNA表达水平.10ng/ml、30 ng/ml及50 ng/ml TNF-α均能使Bax mRNA表达水平增加.结论TNF-α可呈浓度依赖性诱导体外培养的胰岛细胞凋亡,其机制可能与诱导Bax、抑制Bcl-2有关.【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2013(034)010【总页数】4页(P744-747)【关键词】肿瘤坏死因子-α;胰岛细胞;凋亡;Bcl-2;Bax【作者】王功玲【作者单位】泰山医学院附属泰山医院内分泌二科,山东泰安271000【正文语种】中文【中图分类】R587糖尿病(DM)是以慢性血糖升高为特点的代谢性疾病，伴有蛋白质及脂肪的代谢紊乱，久之可引起肾脏、眼、神经等组织严重的并发症。
临床类型主要分为1型糖尿病(T1DM)和2型糖尿病(T2DM)，T2DM以外周胰岛素抵抗、胰岛β细胞功能失调及其数量的减少为特征[1]，而T1DM中，由于自身免疫导致巨噬细胞和T细胞浸润胰岛组织并分泌一些细胞因子，如IL-1β、TNF-α和IFN-γ等，可诱导β细胞凋亡，从而导致β细胞进行性减少[2]。
光损伤大鼠视网膜TNF【摘要】目的：观察光损伤大鼠视网膜肿瘤坏死因子（tnf）-α表达变化的规律，及预先使用米诺环素（minocycline，mc）对其分泌表达的影响，探讨视网膜光损伤的损伤机制和防治措施。
方法：54只sd大鼠，随机分为光照对照组、光照实验组、正常对照组，前两组再各分为光照后6h、3d、7d、14d组，每组各6只大鼠（12只眼）。
光照前90min，光照实验组大鼠mc灌胃（45mg/kg），光照对照组大鼠等量pbs液灌胃。
分别于预定时间点取眼球，左眼石蜡包埋、he染色、tnf-α免疫组化染色，计算机图像分析软件（image-pro plus，ipp）测量视网膜外核层（outer nuclear layer，onl）厚度。
右眼球摘除后即刻完整取出视网膜，匀浆后取上清液，elisa法测定tnf-α的吸光度（o.d）值并计算出tnf-α浓度。
spss 行统计分析。
结果：1，正常对照大鼠视网膜形态正常，tnf-α未见阳性染色，elisa定量仅含微量。
2，光照对照组视网膜6h即出现病理改变，3d和7d进行性加重，14d略有减轻。
视网膜tnf-a阳性表达6h开始增加，3d显著增加，7d减少，14d进一步减少，elisa定量结果和免疫组化结果相平行。
各时间点onl厚度、tnf-a 表达量和正常对照组相比，p值均0.05。
tnf-a表达量均较光照对照组同一时间点为少，两两比较p值均p0.05。
结论：本实验首次研究了光损伤大鼠视网膜tnf-α定位和定量的表达变化，及预先使用米诺环素对tnf-α表达变化和视网膜病理损伤的影响，结论如下：1.光损伤时过度表达的tnf-α参与并加重了视网膜光损伤。
2.mc能减少光损伤大鼠视网膜感光细胞的丢失，对视网膜有保护作用，该作用主要通过抑制tnf-α分泌细胞的活性、减少tnf-α的过度分泌实现。
3.分泌tnf-α的小胶质细胞参与了视网膜光损伤的病理生理过程。
【关键词】视网膜光损伤；米诺环素；免疫组织化学视网膜光损伤发病机制和药物防治的研究是最近几十年来眼科领域一个基础结合临床的重要课题，其中光化学损伤最常见。
特别是近年来，各种眼科光学诊疗器械光源所致视网膜损伤等问题已越来越引起人们的注意，视网膜光化学损伤还是视网膜变性类疾病的良好动物模型，其病理过程与年龄相关性黄斑变性及视网膜色素变性有许多相似之处[1]，而这两种疾病到目前为止尚无有效的防治方法。
所以对视网膜光化学损伤的继续深入研究有着重要的理论和临床实用价值。
本实验意在探讨视网膜光损伤的发病机制，及为其有效防治提供实验依据。
1材料和方法1.1实验动物及分组健康雌性sd大鼠54只（8～10周），体重200±20g，检查无眼疾。
随机分为光照对照组（pbs灌胃）、光照实验组（mc灌胃）和正常对照组，前两组再分别分为光照后6h、3d、7d、14d组，每组分别6只大鼠（12只眼）。
1.2光损伤建模采用自制光损伤装置（1m×1m×1m）（图1，图2）。
所有实验用大鼠（包括正常对照组）均于光照前暗适应24小时。
光照前90分钟，光照实验组大鼠0.5%mc溶液灌胃（9ml/kg/只），光照对照组大鼠等量pbs溶液灌胃。
正常对照组大鼠未予任何处理。
用光照强度为1737.9±393.0lux的绿色荧光灯作为致伤光源，连续照射36小时。
光照结束后送回暗环境饲养。
1.3组织标本的获取预定时间点，3%戊巴比妥钠按1ml/kg腹腔内注射麻醉，迅速摘除双侧眼球（包括球后视神经约3mm）。
追加3%戊巴比妥钠过量麻醉处死大鼠。
右眼球立即放入盛有pbs液的玻璃皿中，双目立体显微镜下完整取出视网膜并用pbs液再次冲洗，立即称取湿重后，按重量体积比1：2加入样品稀释液，低温下研磨匀浆视网膜后，移入离心管中，低温离心机， 10000rpm、4℃下离心20min。
收集全部上清液，-20℃备用做elisa检测。
左眼球立即放入4%多聚甲醛溶液中，固定48小时后，去除眼前节和玻璃体，逐级酒精脱水，常规石蜡包埋，经视乳头颞侧旁1mm纵向做切片。
1.4检测指标及方法⑴视网膜tnf-αelisa检测；⑵常规he染色；⑶tnf-α免疫组化。
1.5结构改变，并测量光照对照组、光照实验组各时间点和正常对照组onl厚度，求其均值代表这张图片onl的厚度，并以此作为视网膜光感受器最终丧失的判断指标。
各指标以均数±标准差（x ±sd）表示）。
光镜下比较、分析tnf-α免疫组化切片的染色动态变化及定性、定位变化。
用spss 15.0 for windowss进行统计分析。
统计方法：各组各时间点的比较用单因素方差分析，光照组和正常对照组之间的两两比较及两组同一时间点比较采用配对t检验，p2.1.2 光照前后视网膜onl厚度改变的统计学分析：如表1和图6示，光照对照组各时间点onl厚度和正常对照组相比，差别均有统计学意义，p0.05）。
光照对照组和光照实验组各相同时间点两两比较，差别都有统计学意义（p0.05）。
说明光照前全身预防性应用米诺环素，视网膜组织损伤轻、恢复快，明显减少了感光细胞的丢失，对大鼠视网膜光损伤发挥了有效的神经保护作用。
这也证明了米诺环素可以通过血视网膜屏障。
tnf-α是主要由巨噬细胞和活化的单核细胞分泌的前炎性细胞因子，对机体发挥“双刃剑”作用，低水平时参与机体的免疫防御，高水平时会给机体造成严重损害，在诸多眼病的发生发展中起着重要介质作用。
本实验观察了各组大鼠视网膜中tnf-α的动态表达变化，取材分别来自同一大鼠的左右眼，采用免疫组织化学定位、定性和elisa定量观察相结合的方法。
实验中观察到，正常对照组大鼠视网膜形态、结构均未发现异常，elisa定量检测发现含微量tnf-α，说明其是视网膜实现正常的生理功能所必需，对维持视网膜组织的稳定状态和抵制各种致病因子具有重要意义。
光照后6h 迅速增多，3d达最大值，为896.65±19.21pg/ml，而he染色光镜下观察视网膜损伤最重是在光照后7d，出现在视网膜tnf-α表达达峰值之后，这提示tnf-α参与并加重了视网膜光损伤。
视网膜tnf-α含量7d和14d逐渐减少，但仍维持在一个较高的水平，14d 时下降为120.40±9.35pg/ml。
上述光照对照组光照后各时间点视网膜tnf-α含量和正常对照组比较，差别均有统计学意义。
而光照实验组光照后各时间点视网膜tnf-α含量也呈相似的动态变化，但表达量均较相同时间点光照对照组低得多，同一时间点两两比较，差别均有统计学意义。
说明预防性使用mc明显抑制了光损伤后视网膜tnf-α的表达。
光照后14d，光照实验组视网膜tnf-α含量已下降到接近正常对照组水平，两者差别无统计学意义，同时反映视网膜组织损伤程度的onl厚度也无明显差别，这就进一步说明tnf-α参与了视网膜光损伤的病理过程，视网膜tnf-α含量和视网膜光损伤程度密切相关，含量的多少直接影响到视网膜损伤程度的大小，当tnf-α含量下降到接近正常水平时，视网膜损伤停止，并以较快的速度完成形态学的修复。
所以笔者认为，视网膜光损伤时tnf-α过度分泌，通过诱导感光细胞的凋亡参与并加重了视网膜光损伤的病理过程。
而预防性使用米诺环素，视网膜损伤减轻而且修复较快，同时tnf-α在视网膜表达明显减少，看来抑制tnf-α的过度分泌是米诺环素发挥神经保护作用的重要机制之一。
tnf-α主要来自单核巨噬细胞系统，而cns和视网膜中固有的巨噬细胞是神经胶质细胞中的小胶质细胞[6]，故cns和视网膜病理损伤时表达增加的tnf-α主要由小胶质细胞分泌， tnf-α被称为“小胶质细胞源性毒性细胞因子”之一。
已有多项研究发现，米诺环素是中枢神经系统小胶质细胞的抑制剂[7]，但尚未发现对其他细胞有抑制作用。
所以本实验条件下，小胶质细胞是光损伤后视网膜tnf-α的主要分泌细胞。
视网膜光损伤中米诺环素通过抑制小胶质细胞的过度活化，减少了tnf-α的过多分泌表达，从而发挥了抗凋亡活性。
米诺环素还有无其他可能发挥保护作用的机制还有待进一步的研究。
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