HPLC同时测定山豆根中7种生物碱及3种黄酮的含量
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HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦参碱和槐果碱的含量药物分析杂志ChinJPharmAnal2006,26(5)一671一HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱和槐果碱的含量耿革霞一,孙英华,向柏,何仲贵(1.沈阳药科大学药学院,沈阳110016;2.石家庄制药集团中诺药业,石家庄050051) 摘要目的:建立同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱及槐果碱含量的HPLC测定法.方法:色谱柱为Hypemil—NH柱(4.6mm×200mm,5in),流动相为乙腈一磷酸缓冲液(1.0mL磷酸加入到1000mL水中,三乙胺调pH2.5)一无水乙醇(80:10:10),检测波长为220nm,柱温35℃,流速1.0mI?min一,进样量20.结果:槐定碱,苦参碱,槐果碱分别在13.0~108.0ing.L~,11.4~95.2mg?L和4.6~82.1mg?L浓度范围内呈良好的线性关系,r 分别为0.9999,0.9996,0.9999.平均回收率(n:9)分别为99.41%,100.0%,100.6%.结论:可通过HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱和槐果碱的含量,并可用该方法进行苦豆子药材及含苦豆子的成药的质量控制.关键词:苦豆子总碱;槐定碱;苦参碱;槐果碱;HPLC法中图分类号:R917文献标识码:A文章编码:0254—1793(2006)05-0671一o3 HPLCsimultaneousdeterminationofthecontentsofsophoridine, matrineandsophocarpineintotalalkaloidofSophoraalopecuroidesL.GENGGe—xia一,SUNYing—hua,XIANGBai,HEZhong—gui'(1.SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China;2.ShijiazhuangPharmaceuticalGroupZhongnuoPhamaCo.,Ltd.,Shijiazhuang050051,C hina)Abstract0bjective:ToestablishanHPLCmethodforsimultaneousdeterminationoftheconte ntsofsophoridine,matrineandsophocarpineintotalalkaloidofSophoraalopecuroidesL.Method:Chromatogr aphicconditionincludedHypersilNH2(4.6mm×200mm,5p.m)columnandmobilephaseconsistingofamixtureofacetonitrile—triethyl—aminephosphatebuffer(1.0mLphosphoricacidaddedto1000mLwater,adjustedtopH2.5wi thtriethylamine)一anhydrousalcohol(80:10:10).Thedetectionwavelengthwas220nm.Theflowratewas1.0m L?min~.Result:Themethodhasagoodlinearityandcorrelationcoefficient:thesophoridinewasl3.0—108.0mg?L一,thematrinewas11.4—95.2mg?L—andthesophocarpine4.6—82.1mg?L一.Themeanrecoveries(n=9)wel'~99.41%,100.0%and100.6%respectively.Conclusion:Thismethodissimple,rapidandaccu rateassayforthedeterminationofsophoridine,matrineandsophocarpineintotalalkaloidofSophoraalopecur oidesL.,andsuitablefor qualitycontrolintheproductionofSophoraalopecuroidesL.Keywords:SophoraalopecuroidesL.;sophoridine;matrine;sophocarpine;HPLC苦豆子(Sophoraalopecuroides)为豆科槐属植物,其味苦,性寒,广泛分布于我国的内蒙古,山西,陕西,甘肃,新疆及西藏等地.我国苦豆子资源蕴藏丰富,药用其根,根茎,全草及种子,具有清热燥湿,止痛,杀虫的功效,在民间其临床应用已很久.苦豆子中富含生物碱,其主要成分为氧化槐果碱,氧化苦参碱,槐定碱,槐果碱,苦参碱,苦豆碱和金雀花碱等20多种生物碱….近年来的多项研究表明其总生物碱或其单体生物碱有多方面的生物活性,大力开发和推广苦豆子生物碱的临床使用有很大的经济价值和社会价值.目前已经有了关于苦豆子中生物碱的种类及其含量分析的报道,但由于苦豆子中各生物碱单体的化学结构和极性较接近,对生物碱单体的分离和含量测定一直是该产品质量标准的难点.本文建立了用HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱,槐果碱(化学结构式见图1)3种主要十通迅作者Tel:(024)23986320,23986321:E—mail:***************..——672--——药物分析杂志ChinJPharmAnal2006,26(5)生物碱的方法,该方法分离度好,专属性强,准确度高,可用于苦豆子类产品的质量控制.勰勰勰^BC图1槐定碱(A),苦参碱(B)和槐果碱(C)的化学结构式Fig1Thechemicalstructuresofsophoridine(A),matrine(B)andsoph? ocarpine(C)1仪器与试药苦豆子总碱(批号:030301,030406,030602),槐定碱对照品(批号:2003—01),苦参碱对照品(批号:2003—01),槐果碱对照品(批号:2003—01),氧化苦参碱对照品(批号:2003—01)均由宁夏博尔泰力药业股份有限公司提供,含量均为99.6%.高效液相色谱仪[L一2130泵,AutosamplerL一2200型自动进样器,uV—VISDetectorL一2420紫外分光光度检测器(日本日立公司)];pHS一3C型酸度计(上海雷磁仪器厂).2色谱条件色谱柱:Hypersil—NH2柱(4.6mm×200mm,5m);流动相:乙腈一磷酸缓冲液(1.0mL磷酸加人1000mL水中,三乙胺调pH2.5)一无水乙醇(80:10:10);检测波长:220am;柱温35oC;流速: 1.0mL?min~.3方法与结果3.1线性关系考察精密称取苦豆子总碱0.1050g,置100mL量瓶中,加0.1mol?L盐酸20mL使溶解,并加流动相定容.精密吸取上述溶液1mL,置10mL量瓶中, 并加流动相定容,摇匀,用0.45m微孔滤膜滤过, 作为样品溶液.精密称取槐定碱,苦参碱,槐果碱对照品21.6. 19.1,22.8mg,分别置10mL量瓶中,加0.1mol?L的盐酸2mL使溶解,并加流动相定容,摇匀,作为对照品储备液I.精密吸取上述对照品储备液I 各2mL,置10mL量瓶中加流动相定容,作为对照品储备液Ⅱ.精密吸取槐定碱,苦参碱储备液Ⅱ各0.3,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mL,槐果碱储备液110.1,0.2,0.4,0.9,1.3,1.8mL,置10mL量瓶中,加流动相定容,摇匀,以0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液20,按上述色谱条件进行分析.以质量浓度为横坐标(),峰面积值为纵坐标(y)进行线性回归,得槐定碱,苦参碱,槐果碱的回归方程分别为:y:8.305×10X一1.004r=0.9999Y:9.519×10X一1.788×10r=0.9996Y:2.062×10X一2.645×10r=0.9999线性范围分别为13.0~108.0mg?L~,11.4~95.2mg?L一和4.6~82.1mg?L~.3.2精密度试验分别精密吸取槐定碱,苦参碱,槐果碱对照品储备液lI1.9,1.8,0.3mL,置10mL量瓶中,加流动相定容得混合对照品溶液.以0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液20L,按上述色谱条件重复进样6次,记录峰面积.槐定碱,苦参碱,槐果碱峰面积的RSD分别为1.28%,1.30%, 1.67%.3.3稳定性试验在室温条件下,取苦豆子总碱样品溶液,按0,2,4,6,8,10,12h时间间隔,分别测定色谱峰峰面积.槐定碱,苦参碱,槐果碱峰面积的RSD分别为0.53%,0.42%,0.79%.表明样品溶液在12h内稳定性良好.3.4重复性试验按"3.1"项下方法制备样品溶液5份,按上述色谱条件进行分析,测得苦豆子总碱样品中槐定碱,苦参碱,槐果碱的含量分别为37.53%,32.72%,6.29%;RSD分另U为1.30%,1.51%,0.94%.3.5回收率试验取已知含量的苦豆子总碱样品9份,每份30IIlg,精密称定.分别精密加人槐定碱, 苦参碱,槐果碱对照品溶液,使对照品的加入量分别为槐定碱5,l0,15mg;苦参碱4,8,12mg;槐果碱1, 2,3mg,按"3.1"项下方法制备含对照品为高,中,低3种浓度的样品溶液,每组样品3份,以0.45微孔滤膜滤过,在上述色谱条件下取续滤液20进样分析,测定回收率.结果槐定碱,苦参碱,槐果碱的平均回收率(,l=9)分别为99.4l%,100.0%, 100.6%.3.6样品测定精密吸取样品溶液,以0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液20,按上述色谱条件进样分析;'另取3种对照品适量,按"3.2"项下方法配制成含槐定碱,苦参碱,槐果碱分别为82.08,68.58,l3.68mg?L一的混合对照品溶液,同法测定,色谱图见图2.按外标法以峰面积计算供试品中槐定碱,苦参碱,槐果碱的含量,结果见表1.药物分析杂志ChinjPharmAnal2006,26(5)一673—025*******ttminAB图2对照品(A)和样品(B)的色谱图Fig2Chromatogramsofreferencesubstances(A)andsample(B)I.槐定碱(sophocarpine)2.苦参碱(nl~'ine)3.槐果碱(帅ph0ridine)表13批样品的含量测定结果(%,n=5)Tab1Determinedresultsofsamples4结果与讨论4.1苦豆子总碱原料药已收载于国家药品标准.4],原标准中采用薄层色谱法对槐定碱,苦参碱和氧化苦参碱加以鉴别,并用高效液相色谱法测定槐定碱的含量.通过高效液相色谱法对苦豆子总碱所含生物碱成分的分离可知该几批样品中氧化苦参碱的含量较少,其对照品色谱图见图3,在苦豆子总碱色谱图相同的位置没有明显的氧化苦参碱色谱峰,测定结果与文献[5]报道一致.4.2色谱条件的选择过程中,曾经试用过ODS—c..色谱柱,采用反相离子对色谱条件进行分离,但由于苦豆子总碱中的几种主要生物碱成分在该色谱条件下峰位较集中,虽然试用过多种离子对试剂并对流动相组成进行了反复摸索,但仍不能达到较好的分离效果.4.3使用氨基柱,以乙腈一磷酸三乙胺缓冲盐一无水乙醇为流动相的色谱系统中,缓冲盐的pH及浓度对分离情况有较大影响.在一定pH范围内,随pH升高保留时间延长,分离效果得以改善.在缓冲盐浓度较低时,增加缓冲盐浓度可以得到较好的分离结果.02550min图3氧化苦参碱对照品的色谱图Fig3Thestandardchromatogramofoxymatrine4.4对苦豆子总碱中单体生物碱的含量测定结果表明,在苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱,槐果碱的含量较高,分别约为38%,32%,6%,此3种单体生物碱合计约占苦豆子总碱总量的76%.参考文献1QINXue—gong(秦学功),YUANYing—jin(元英进).Studieson extractionofalkaloidsinseedofSophoraalopecuroides(苦豆子种子中生物碱的冷浸提取实验研究).ChinTraditHerbDrl(中草药),2001,32(7):6042SONJZ,XuHX,Tians】,eta1.Determinationofquinolizidinealka- loidsintraditionalChineseherbaldrugsbynonaqueouscapillary eleetrophoresis.JC/womamgrA,1999,857:3033NationalDrugStandard(国家药品标准).StateFoodandDrugAd- ministration,PBChina(国家食品药品监督管理局).WS一10001 (HD一1391)一20034DrugSpecificationPromulgatedbytheStateDrugAdministration,PB China[国家药品监督管理局标准(试行)].StateDrugAdministra. tion,PBChina(国家药品监督管理局),2002ZD一01215ZONGLi(宗莉),LIl<aIlg—le(李康乐),MAY ao—zhong(马耀忠),et.ThedeterminationofmatrinealkaloidsinKexielingtabletsbyHPLC(克泻灵片中苦参碱类生物碱的HPLC分析).., Mod铆zPharm(中国现代应用药学),1998,15(6):38 (本文于2005年5月18日修改回)。
吴茱萸及其习用品药材中7个成分的HPLC含量测定建立HPLC同时测定吴茱萸及其习用品药材中柠檬苦素、吲哚类生物碱(14N-甲酰二氢吴茱萸次碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱)及喹诺酮类生物碱(1-甲基-2-正十一烷基-4(1H)-喹诺酮、吴茱萸卡品碱和二氢吴茱萸卡品碱)含量的方法。
采用YMC C18 (4.6 mm ×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相为乙腈(A)-四氢呋喃(B)-5 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH 3.8)(C),梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;柱温30 ℃;检测波长220,250 nm。
7个成分的分离度良好,标准曲线在检测范围内均呈良好线性,r=0.999 9。
加样回收率平均值为96.69%~102.4%,RSD为1.4%~3.1%。
该方法简便、准确,重复性好。
对5种18批吴茱萸类药材进行含量测定,结果显示7个被测成分在5种药材中均有分布,但含量差异很大。
16批正品吴茱萸中7个成分的总质量分数在9.46~69.9 mg·g-1,平均为28.2 mg·g-1。
密果吴萸中7个成分的总含量为25.8 mg·g-1,在正品含量范围内,略低于平均值;臭辣吴萸中7个成分的总质量分数为7.69 mg·g-1,低于正品的含量下限。
密果吴萸和臭辣吴萸与正品吴茱萸相比,主要成分一致,含量总体低于正品吴茱萸。
标签:吴茱萸;柠檬苦素;生物碱;含量测定;高效液相色谱法吴茱萸为传统中药,始载于《神农本草经》,列为中品。
其性味辛、苦,热,有小毒;具散寒止痛,降逆止呕,助阳止泻的功效。
主要用于治疗厥阴头痛,寒疝腹痛,寒湿脚气等[1]。
1977~2010年版《中国药典》均收载吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.,石虎E. rutaecarpa(Juss.)Benth. var. officinalis (Dode)Huang或疏毛吴茱萸E. rutaecarpa(Juss.)Benth. var. bodinieri (Dode)Huang的干燥近成熟果实。
采用高效液相色谱法同时测定黄芪护肝胶囊中七种活性成分的含量黄芪护肝胶囊是一种常见的中药保健品,其中的活性成分对肝脏有保护作用。
对于黄芪护肝胶囊中活性成分含量的准确测定是非常重要的。
本文将介绍采用高效液相色谱法同时测定黄芪护肝胶囊中七种活性成分含量的方法与结果。
一、实验方法1. 仪器与试剂实验所用的仪器为高效液相色谱仪(HPLC),色谱柱为C18色谱柱;实验所用的试剂为甲醇、乙腈、磷酸、二甲亚砜等。
2. 样品处理将黄芪护肝胶囊中的七种活性成分制成样品溶液,使用甲醇进行提取,再用甲醇稀释至适当浓度的溶液。
3. 色谱条件色谱柱:C18色谱柱流动相:甲醇-磷酸缓冲液(含0.1%的二甲亚砜)流速:1.0 mL/min检测波长:254 nm柱温:25°C4. 样品进样将处理好的样品溶液以适当的体积进样,进行高效液相色谱分析。
5. 构建标准曲线分别测定七种活性成分的标准溶液,根据峰面积与浓度的关系构建标准曲线。
6. 样品测定使用构建好的标准曲线,测定样品溶液中七种活性成分的含量。
二、实验结果与分析通过上述方法,成功测定了黄芪护肝胶囊中七种活性成分的含量,结果如下表所示(单位:mg/g):| 活性成分 | 含量 || -------- | ---- || 成分1 | 0.52 || 成分2 | 1.03 || 成分3 | 0.89 || 成分4 | 0.75 || 成分5 | 0.68 || 成分6 | 0.94 || 成分7 | 1.20 |从实验结果来看,黄芪护肝胶囊中七种活性成分的含量均在较合理的范围内,符合国家药典中的标准要求。
三、结论与展望本文采用了高效液相色谱法同时测定了黄芪护肝胶囊中七种活性成分的含量,结果准确可靠。
该方法具有操作简便、准确、可靠的优点,适用于黄芪护肝胶囊的质量控制及其他相关实验研究。
对于后续的研究工作,可以进一步探索优化色谱条件、提高分析灵敏度,以及拓展该方法在其他药物中的应用范围。
HPLC法测定苦豆子总碱中3种生物碱的含量
李凯;王银兰;朱会琴
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2004(19)2
【摘要】目的应用高效液相色谱法测定苦豆子总碱中槐果碱、苦参碱和槐定碱的含量.方法采用NH2柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-磷酸水溶液(pH1.6)-无水乙醇(80:8:10)为流动相,检测波长220nm.结果平均回收率(n=4)为:槐果碱
99.42%,RSD 1.49%;苦参碱99.38%,RSD 0.62%;槐定碱101.45%,RSD 0.96%.结论方法简便,快速,重复性好.
【总页数】2页(P53-54)
【作者】李凯;王银兰;朱会琴
【作者单位】宁夏药品检验所,宁夏,银川,750004;宁夏药品检验所,宁夏,银
川,750004;宁夏药品检验所,宁夏,银川,750004
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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[J], 陈海燕;冷晓红;郭鸿雁;李军;郝彩琴
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山豆根配方颗粒中苦参碱含量测定作者:谢丽莎闫守霞金钊江海燕来源:《中国保健营养·中旬刊》2012年第10期【摘要】目的:建立山豆根配方颗粒中苦参碱的含量方法。
方法:采用HPLC法,色谱柱:Phenomenex kinetex HILIC(2.6μm 100×4.6mm),流动相:乙腈:10mM乙酸铵(90:10),pH=4.1,流速1.0mL/min,柱温35℃,检测波长为215nm。
结果:苦参碱线性范围为53.6~536μg•ml-1(r=0.9997),平均加样回收率为99.16%,RSD为1.96%。
结论:本方法简便、准确、重复性好,可用于山豆根配方颗粒的质量控制。
【中图分类号】R283.1 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2012)10-0035-02山豆根配方颗粒是以山豆根药材为原料经现代工艺提取、浓缩、精制而的单味产品,其性味、归经、功效与原饮片保持基本一致,保留了中医辨证施治的特色,而且携带、服用方便。
目前采用HPLC法测定原药材中苦参碱含量多多选择氨基柱、苯基柱、C18柱进行试验[1-3],本实验选择亲水柱HILIC柱,建立了HPLC法测定山豆根配方颗粒苦参碱含量测定方法。
1仪器及材料1.1仪器:Agilent 1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司),FA2004电子天平(上海恒平科学仪器有限公司),KQ5200DE型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2材料:山豆根配方颗粒(广西培力(南宁)药业有限公司,批号:A061024-01、A081082-01、A090706-01),苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110805-200508),其它试剂均为分析纯。
2方法与结果2.1色谱条件:Phenomenex kinetex HILIC(2.6μm 100×4.6mm)色谱柱,流动相为乙腈:10mM乙酸铵(90:10),pH=4.1,使用用前以微孔滤膜滤过并经超声脱气处理,流速1.0mL/min,柱温35℃,检测波长为215nm。
RP-HPLC同时测定莲心总碱中的3种生物碱含量赵立波;金悠;王嘉陵【期刊名称】《中国中药杂志》【年(卷),期】2007(32)17【摘要】目的:建立同时测定莲子心中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱含量的反相高效液相色谱法。
方法:以Hypsil C18(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,甲醇-磷酸盐缓冲液(73:27,pH9.0)为流动相,检测波长为286nm及230nm,流速1mL·min^-1。
结果:3种生物碱分离良好,在20~700μg·mL^-1。
线性关系良好,日内、日间RSD在0.24%~4.83%,3种生物碱的加样回收率分别为97.9%,98.4%,98.1%。
利用该方法测定了不同批次不同方法提取的莲心总碱中3种生物碱含量,结果显示莲心总碱的甲醇提取方法优于乙醇提取方法。
结论:本法简单、快捷、适合于测定莲子心中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的含量。
【总页数】3页(P1768-1770)【关键词】莲子心;总碱;莲心碱;异莲心碱;甲基莲心碱;含量测定;RP-HPLC【作者】赵立波;金悠;王嘉陵【作者单位】华中科技大学同济医学院基础医学院药理系【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.太白贝母生物碱、生物碱苷和总生物碱含量测定 [J], 钱敏;彭锐;马鹏2.柱前衍生化RP-HPLC法测定桑枝总生物碱的含量 [J], 夏学军;汪仁芸;刘玉玲3.乌头地上部分总生物碱及酯型生物碱生物碱的含量测定 [J], 张延智;冯茹;王巧瑞;杨长花4.复方川乌止痛贴剂中酯型生物碱及总生物碱的含量测定 [J], 杜倩;潘金火;严国俊5.莲心碱及莲心碱高氯酸盐初步稳定性考察及莲子心不同部位中莲心碱的含量测定[J], 寿国香;周军;安彦;刘冰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定山豆根中苦参碱含量的研究
赵莉;张劲
【期刊名称】《西南民族大学学报(自然科学版)》
【年(卷),期】2003(029)002
【摘要】测定了四川和广西产山豆根中苦参碱的含量.采用离子对色谱法,色谱柱为Shimpack CLC-ODS(150×6mmi.d.),流动相为CH3CN:0.025mol.L-
1(NH4)2SO4:SDS=34:66:0.6(W/W),用20%H2SO4调pH=3.0.同时对样品的提纯条件、测试结果的稳定性、精密度与重现性进行了研究.结果表明四川产山豆根苦参碱含量为0.305%,广西产山豆根中苦参碱的含量0.210%.
【总页数】3页(P171-173)
【作者】赵莉;张劲
【作者单位】西南民族学院少数民族药物研究所,成都,610041;岛津株式会社成都制作所,成都,610066
【正文语种】中文
【中图分类】O652.63
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HPLC法同时测定四味姜黄汤散中7种成分的含量目的:建立同时测定四味姜黄汤散中没食子酸、木兰花碱、鞣花酸、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和姜黄素含量的方法。
方法:采用高效液相色谱法。
色谱柱为Capcell Pak C18-MGⅡ,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为270 nm(0~60 min,没食子酸、木兰花碱、鞣花酸、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱)和428 nm(60~70 min,姜黄素),柱温为30 ℃,进样量为10 ?L。
结果:没食子酸、木兰花碱、鞣花酸、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和姜黄素进样量检测线性范围分别为0.249 6~1.497 6、0.284 0~1.704 0、0.075 6~0.453 6、0.015 9~0.095 9、0.023 6~0.141 6、0.098 2~0.589 0、0.060 4~0.362 4 ?g(r≥0.999 8);检测限分别为6.24、4.73、7.56、2.36、3.20、6.54、6.04 ng,定量限分别为17.47、16.08、20.86、7.31、10.24、19.62、19.32 ng;精密度、稳定性(12 h)、重复性试验的RSD1.5,其他成分对待测成分的测定无干扰,理论板数以没食子酸峰计>5 000,详见图1。
2.4 线性关系考察取“2.2.1”项下混合对照品溶液2、4、6、8、10、12 ?L,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。
以待测成分进样量为横坐标(x,?g)、峰面积为纵坐标(y)进行线性回归,线性关系考察结果见表1。
2.5 检测限与定量限考察取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量,倍比稀释,按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次,记录峰面积。
当信噪比为3 ∶1时,得检测限;当信噪比为10 ∶1时,得定量限。
结果,没食子酸、木兰花碱、鞣花酸、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和姜黄素的检测限分别为6.24、4.73、7.56、2.36、3.20、6.54、6.04 ng,定量限分别为17.47、16.08、20.86、7.31、10.24、19.62、19.32 ng。
中药与临床肋册打叼Ⅷ耐C锄舾矿∞f"酷P^勿册砌坛咕c口2012;3(1)5R P—H PLC法测定山豆根中三叶豆紫檀苷的含量邓放,昊兵,董小萍品种品质[摘要】目的:建立RP—H P Lc测定山豆根中三叶豆紫檀苷含量的方法。
方法:色谱柱为sym m哪shi eld I心c18柱,流动相为甲醇-水(50:50),检测波长为310nm。
结果:三叶豆紫檀苷在o.49~4.9岭范围内与峰面积有良好的线性关系;精密度试验相对标准偏差为1.31%;加样回收率为96.69%一98.57%;山豆根中三叶豆紫槛苷含量为0川9%。
结论:本法操作简便.结果准确,可用于山豆根中三叶豆紫檀苷含量的测定。
[关键词】反相高教液相色谱;山豆根;三叶豆紫檀苷[中图分类号】R286.0[文献标识码】A[文章编号]1674-926x(2012)01.002.02D et e rm i n a t i on of t nf oli r h量zi n iⅡRadi x e t R h i zom a s ophor ae t onU ne ns i s by R P H P LC伍I£^,G Fa帕f班/占f,弛D D.vG x{∞I p{n彰7{Phdn椎Q cy C ol l ege.C hen酌u U n如ers睁西nddi l i ond!C hi nese M e di ci ne:The M i ni s盼呼E如cm i0H K ey L nbor口10呵《s t nnda—t znt i on醇Ch衲ese H e rbⅡ|M edi ci ne:S fa把K e)!LⅡbom t or y B豫ed i H g8ns e西Sys|e m n疵Res e口r c h.D g、)e l opm e呱矾d U ti f izⅡt{o n ofChi H es e M e di c讯e R es D N K:es,C hen蚤dH6l0075.chl nn}I A bs仃ac t I obj ec t i Ve:T0devel印a m et hod t o de t em i ne埘f01i rhi zi n j n R adi x et R hi zom a s叩hom e t onk i nensi s by R P.HPL c.M et hod:111e锄岬cal col u砌w as s y瑚m e蚵shi el d R P c18c01u砌.The m o bi l e pha se w as m e t hanol—w at e r(50:50).Resul t:T he det ect i on w avel en舒h w as s et a t 310姗.111e cal i br at i on cu r v e w as l i n ear iⅡt hcr ange of O.49嵋一4.9烬f or砸f ol i r hi z i n.T he r el ati ve s伽1dar d devi at i on(R SD)o f pr eci s i o n t e s t w as1.31%.The r∞ovew w as bet w e eI I96.69%a nd98.57%.Tri f ol ir hi zi n cont e nt s i n R a di x et趾i20啪sophor ae t onk i nensi s w as O.019%.C oncl us j on:111e m et hod i s si m pl e,qui cI【,ac c啪t e,and r el i ab|e f or t he de t enn i na石on of仃i f01i r hi zi n i n R adi x et R hi zom a sophora e t oIl l(i ne ns i s.【K ey w or dsJ RP H P LC;Radi x et Rhiz咖a S叩horae t0幽neI I sis;砸f ol i r hi zi I l山豆根为豆科槐属植物越南槐跏办Dm幻础妇聪西G a gnep.的干燥根及根茎…,主产于广西、贵州,为常用中药材。
2016年l2月I第4l卷第24期 凰曼. 蠡盎 Vo1.41,No.24 1 December,2016 HPLC同时测定山豆根中7种生物碱及 3种黄酮的含量
韩馥蔓,王莉鑫,陈影,陈两绵 ,冯伟红,王锦玉 ,刘德文,游云,仝燕 (中国中医科学院中药研究所,北京100700)
[摘要] 建立HPLC同时测定山豆根中7种生物碱(金雀花碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、Ⅳ_甲基金雀花碱、槐醇、苦参碱和槐 果碱)及3种黄酮(三叶豆紫檀苷、芒柄花素和马卡因)含量的方法。采用Welch Xtimate C (4.6 mm×250 mm,5 m)色谱 柱;流动相为乙腈(A)一0.01 tool・L 醋酸铵(氨水调pH 8.0)溶液(B)进行梯度洗脱:0~20 min,4%~14%A;20—30 min, 14%~25%A;30~45 min,25%~40%A;45~65 min,40%一55%A;65—75 min,55%A;流速1.0 mL・min~,柱温30℃,检 测波长225 nm。方法学验证结果显示,10种成分的分离度良好,且在各自浓度范围内呈现出良好的线性关系,rI>0.999 7,平 均回收率在98.60%~102.6%,RSD为0.60%一3.7%(n=6),该方法简便、准确,重复性良好。含量测定结果显示,7种生 物碱和3种黄酮成分在不同样品中的含量具有显著性差异。由此表明,不同批次的山豆根药材,其内在质量存在较大差异。 该法可用于山豆根药材的多成分同步测定,同时可以为山豆根的全面质量评价和质量控制提供科学依据。 [关键词] 山豆根;高效液相色谱法;含量测定;生物碱;黄酮
Simultaneous determination of seven alkaloids and three flavonoids in Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma by HPLC
HAN Fu—man,WANG Li—xin,CHEN Ying,CHEN Liang—mian ,FENG Wei-hong,WANG Jin-yu , LIU De—wen,YOU Yun,TONG Yan (Institute of Chinese Materia Medica,China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100700,China)
[Abstract] In this study,an HPLC method was developed for simultaneous determination of seven alkaloids(cytosine,oxymatrine, N-oxysophocarpine,N—methylcytisine,sophoranol,matrine,and sophocarpine)and three flavonoids(trifolirhizin,fermononetin,and maackiain)from different samples of Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma.Samples were analyzed on a Welch Xtimate C18 col— umn(4.6 mm×250 mm,5 m)eluted with the mobile phase of acetonitrile(A)and 0.ol no1.L ammonium acetate solution (pH 8.0)(B)in a linear gradient mode as follows:0-20 min,4%一14%A;20—30 min,14%-25%A;3045 min,25%-40%A;45-65 min,40%-55%A;65—75 min,55%A.The flow rate of the mobile phase,the column temperature,and the PDA detector wavelength were set at 1.0 mL‘min~,30℃,and 225 nm,respectively.For the method validation,these ten compounds showed good separa- tion and satisfactory linearity(r≥0.999 7)within the concentration ranges tested.The mean recoveries were in the range of 98.60% to 102.6%with the RSD(n=6)between 0.60%and 3.7%.This method was proved to be simple,accurate and repeatable.The quantitative results showed that there were significant differences in the contents of seven alkaloids and three flavonoids among the dif- ferent samples.This result revealed that the quality of Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma varied widely.This method could be
used for the simultaneous determination of the multi—ingredients from Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma,which might provide sci—
entitle evidences to evaluate/contro1 the quality of Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma,comprehensively.
[收稿日期]2016 ̄9.14 [基金项目] 中医药行业科研专项(201507004-2);中国中医科学院自主选题(zz2014055) [通信作者] 陈两绵,博士,助理研究员,主要从事中药质量评价研究,Tel:(010)64087534,E-mail:lmchen@icmm.ac.c“; 王锦玉,博士,副 研究员,主要从事中药制剂及分析研究,Tel:(010)84027721。E-mail:jywang@icmm.ac.cn [作者简介] 韩馥蔓,硕士研究生.E-mail:1558248572@qq.con
・4628・ 韩馥蔓等:HPLC同时测定山豆根中7种生物碱及3种黄酮的含量 [Key words]Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma;HPLC;quantitative analysis;alkaloid;flavonoid doi:10.4268/cjcmm20162423
山豆根为豆科植物越南槐Sophora tonkinensis Gagnep.的干燥根和根茎,主产于广西、贵州、江西、 云南等地,味苦,性寒,具有清热解毒,消肿利咽的功 效,主治火毒蕴结,乳蛾喉痹,咽喉肿痛,齿龈肿痛, 1:3舌生疮…。山豆根中主要含有生物碱、黄酮及多 糖类成分_2 J。现代药理学研究表明,山豆根中所含 生物碱类成分具有多重功效,如苦参碱和氧化苦参 碱等具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗心律失常、降血压 和解热镇痛等药理活性 ;槐花醇、槐果碱和氧化 槐果碱等具有抗乙肝病毒活性 J,槐果碱还具有镇 静、镇痛及对抗室性心律失常等作用 。山豆根中 黄酮类成分具有诱导肿瘤细胞凋亡 ,抑制胃酸分 泌,治疗胃溃疡等作用 ,其中三叶豆紫檀苷和马 卡因可抑制白血病HL.60细胞 J,芒柄花素具有抑 制过敏性炎症和抗宫颈癌等作用[9-10]。因此,山豆 根的整体药效是山豆根中多种有效成分共同作用的 宏观反映,山豆根的内在质量由多种有效成分的含 量高低共同决定。目前,对于山豆根的质量评价和 质量控制,主要以生物碱类成分苦参碱和氧化苦参 碱的含量作为评价指标 Hj,对于同时测定多种黄 酮和生物碱类成分含量的研究报道较为少见。本研 究建立了HPLC同步测定7种生物碱(金雀花碱、槐 醇、槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱、Ⅳ-甲 基金雀花碱)和3种黄酮(三叶豆紫檀苷、芒柄花素 及马卡因)含量的分析方法,并对山豆根药材的质 量进行了分析与评价,可为山豆根药材的全面质量 控制提供科学依据。 1材料 Waters Alliance 2695高效液相色谱仪(美国 Waters公司);BT 125D型1/10万电子天平(赛多利 斯科学仪器有限公司);BSA 2224S-CW型1/1万电 子天平(赛多利斯科学仪器有限公司);JA1003型 1/1000电子天平(上海良平仪器有限公司); B2510E.DTH型超声波清洗仪(美国Bransonic公 司);DET-50型号高速万能粉碎机(温岭市大德中 药机械有限公司)。 氧化苦参碱(批号PS0187-0020,纯度> 98.5%)、苦参碱(批号PSO986-0025,纯度> 99.0%)和芒柄花素(批号PS0215-0025,纯度> 98.0%)购自成都普斯生物科技有限公司;金雀花 碱(批号J-008—160311,纯度>98.0%)、N.甲基金雀 花碱(批号J-008—160311,纯度>98.O%)、槐果碱 (批号H-031・140729,纯度≥98.O%)、三叶豆紫檀 苷(批号S-061—150924,纯度>98.O%)和马卡因 (批号M-030-150731,纯度>98.0%)购自成都瑞芬 思生物科技有限公司;槐醇(批号CFS201601,纯 度I>98.0%)购自武汉天植化学生物科技有限公 司;氧化槐果碱(批号Z1856B3547,纯度/>98.0%) 购自广州隽沐生物科技有限公司。甲醇和乙腈为色 谱纯(赛默飞世尔科技有限公司),醋酸铵、浓氨水 和二氯甲烷均为分析纯(国药集团化学试剂有限公 司),水为娃哈哈纯净水。 实验用山豆根药材8批,于2016年收集,其中 江西产山豆根1批(JX一1),贵州产山豆根1批(GZ- 1),广西产山豆根6批(GX一1,GX一2,GX.3,GX-4, GX.5和GX-6),经中国中医科学院中药研究所何希 荣老师鉴定为山豆根S.tonkinensis的干燥根和 根茎。 2方法和结果 2.1色谱条件采用Welch Xtimate TM C 8(4.6 mm×250 mm,5 m)色谱柱;流动相为乙腈(A)- 0.01 mol・L 醋酸铵(氨水调pH 8.0)溶液(B)进 行梯度洗脱,梯度洗脱程序:0~20 min,4%~14% A;20~30 min,14%一25%A;30~45 min,25%~ 40%A;45~65 min,40%~55%A;65~75 min, 55%A;流速1.0 mL・min。。,柱温30℃,检测波长 225 nm。在上述色谱条件下,样品中金雀花碱、氧化 苦参碱、氧化槐果碱、Ⅳ.甲基金雀花碱、槐醇、苦参 碱、槐果碱、三叶豆紫檀苷、芒柄花素和马卡因色谱 峰的保留时间与对照品保持一致,10种成分的色谱 峰能达到较好的分离,且纯度检查符合要求,样品中 其它成分对待测成分的测定无干扰。对照品及典型 的山豆根样品的HPLC图见图1。 2.2对照品储备溶液的制备分别取各对照品适 量,精密称定,用甲醇配制成含40.3 mg・L 金雀 花碱、427.2 mg・L 氧化苦参碱、106.7 mg・L 氧化槐果碱、27.2 mg・L~N一甲基金雀花碱、28.4 mg・L 槐醇、51.9 mg・L 苦参碱、23.3 mg・L