LightScanner 高分辨溶解曲线分析系统参数

一种快速有效的基因分型斑马鱼的方法为了促进斑马鱼的高通量的基因分型，我们开发了一种新的技术——用高通量熔解分析（HRMA）区分野生、杂合、纯合突变。

这种耗时一个小时的技术不需要进行限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳的操作。

此技术生成的熔解图的敏感性高，可以检测不明确的PCR产物。

我们可以对斑马鱼的三种类型的突变进行可靠的基因分型，包括apc hu745（apc mcr）和p53zy7（p531166T ），小的缺失突变（bap28y75）及逆转录病毒的插入突变（wdr43hi821a）。

这种技术可对单个斑马鱼胚胎及个体进行基因分型并适用于其它类型的生物体。

Developmental Dynamics 238:3168-3174，2009©2009 Wiley-Liss，Inc。

关键词：熔解曲线斑马鱼基因分型 SNP 点突变插入突变简介斑马鱼作为有机体遗传模型正在成熟。

考虑到比较容易维持大量的突变线，且大量的鱼位于每个突变线，大规模的基因分型需要有效的高通量的基因分型技术。

突变的多种类型导致斑马鱼突变，增加了基因分型的复杂性。

ENU诱变剂——诱导斑马鱼突变的主要物质，经常导致单个碱基的突变，小的缺失插入也会发生。

第二种比较普遍的方式是插入诱变，用逆转录病毒插入或转座因子插入破坏基因。

因此，有效的基因分型这些突变类型的方法是必须的。

提供一种更快、有效、令人满意的基因分型方法，有100%的精确度。

寻找高通量的技术/方法，去除掉比较浪费时间的步骤。

随着扩增基因组DNA 的PCR技术的出现，典型的基因分型技术包括Southern印迹法和放射性方法（RFLP和SSCP）已经逐渐被淘汰。

一些基于PCR 的方法用于偶然产生或消除限制性内切点的突变。

大多数方法，除了测序方法之外，需要用PCR产物跑琼脂糖凝胶电泳。

当数百个或成千上万个样品需要基因分型时，这项工作就变得浪费时间且费用较高。

对于产生或消除一个特殊的限制性位点的突变而言，以PCR为基础的限制性片段长度多态性（RFLP）是一种有用的技术。

高分辨率溶解曲线简介(2011-09-01 11:30:50)转载▼标签：杂谈高分辨率熔解曲线分析技术（ High Resolution Melting ），简称 HRM ，是近年来兴起的一种检测基因突变、进行基因分型和SNP检测的新工具，可以迅速的检测出核酸片段中单碱基的突变。

HRM 技术因其速度快，操作简便，高通量，灵敏性特异性高，对样品无污染等优点而被迅速的应用在生命科学、医学、农学、畜牧业等领域的研究工作中。

其中，主要的研究方向集中在： 1 、基因未知突变以及 SNP 的扫描； 2、已知突变及 SNP 的基因分型； 3、动植物、微生物等物种的物种鉴定以及品种鉴定； 4 、法医鉴定、亲子鉴定； 5 、HLA 的配型； 6 、甲基化的研究等。

一、HRM技术的基本原理：HRM 技术主要是基于核酸分子物理性质的不同。

不同核酸分子的片段长短、 GC 含量、 GC 分布等是不同的，因此任何双链 DNA 分子在加热变性时都会有自己熔解曲线的形状和位置。

HRM 技术的基本原理就是根据熔解曲线的不同来对样品来进行区分。

以二倍体细胞为例，当纯和子样品通过 PCR 扩增，经过变性复性后，仍然是纯合子，如图一 A 。

而杂合子 PCR 扩增完，经过变性复性后，样品中会形成部分的含有非沃森 - 克里克配对的双链分子存在。

图一： A ：纯合子样品 B ：杂合子样品如图一 B 所示，杂合子样品扩增后，经变性复性，会有非配对碱基的形成，而纯合子样品没有。

这样，杂合子样品相对纯合子样品来说，双链不够稳定，表现在解链温度上就会有微小的差别。

如果采用高分辨率的仪器进行检测，并用专门的软件进行分析，微小的差别就会被检测出来，从而成功的筛选出纯合子与杂合子。

下图是杂合子样品熔解曲线的的示意图：图二：杂合子样品的熔解曲线为四种不同双链的熔解曲线的叠加的结果。

以二倍体细胞为例，杂合子扩增后通过变性复性会形成二种同源双链和两种异源双链的混合物，在熔解过程中四种链会形成一条独特的溶解曲线，从而与纯合子的熔解曲线区分出来。

高分辨气质联用仪招标技术参数一、总则高分辨气质联用仪是一种新型的分析仪器，它结合了气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和质谱检测（MS）的功能，可以对复杂的混合物进行快速、高效的分析。

在化学、生物、环境等领域具有广泛的应用前景。

为了满足不同领域的需求，我们现在对高分辨气质联用仪进行招标，希望能够找到性能优异、价格合理的产品，为广大用户提供更好的分析工具。

二、技术要求1.分辨率：气相色谱和液相色谱的分辨率分别要求不低于5000和10000。

2.灵敏度：对于目标物质的检测灵敏度要求高，可以检测到ppb 级别的物质。

3.质谱检测范围：要求覆盖从50到1000 m/z的质谱检测范围。

4.色谱柱温控范围：气相色谱和液相色谱的色谱柱温控范围均要求在室温至400℃之间可调。

5.质谱解析力：要求不低于10000。

6.数据处理系统：配备先进的数据处理系统，能够对数据进行快速高效的处理和分析。

三、设备参数1.气相色谱部分（1）色谱柱：采用国际知名品牌，长度30m，直径0.25mm，膜厚0.25μm。

（2）色谱炉：能够在室温至400℃范围内稳定控制。

（3）检测器：具有高灵敏度、高分辨率和低噪声的质谱检测器。

（4）进样系统：自动进样，能够进行微量样品的进样。

2.液相色谱部分（1）采用双螺纹高压适配器，能够提供高压稳定的液相色谱系统。

（2）采用高灵敏度和高分辨率的质谱检测器。

（3）采用双波长紫外检测器，能够实现多组分定量检测。

3.质谱部分（1）质谱分辨率：要求不低于10000。

（2）检测范围：要求覆盖从50到1000 m/z的质谱检测范围。

（3）离子源：采用高效率和稳定性的离子源，能够提供高质量的质谱图谱。

四、其他要求1.设备应具有良好的稳定性和可靠性，能够实现长时间连续运行。

2.设备应具有良好的兼容性，能够与其他分析仪器和数据系统进行无缝连接。

3.设备应具有良好的用户界面和操作体验，能够方便用户进行操作和维护。

五、结束语以上是我们对高分辨气质联用仪招标的技术参数要求，希望能够吸引到优秀的产品和厂家。

拉曼光谱仪的工作参数介绍概述拉曼光谱仪是一种利用拉曼散射效应分析样品的仪器。

拉曼散射现象是指，当激光照射样品时，样品中的分子或晶体因振动而引起散射光，且散射光的频率比激光光源的频率稍微降低，这种现象被称为拉曼散射效应。

拉曼光谱可以用于物质的分析、组成分析、结构分析等。

拉曼光谱仪是一种非常重要的分析仪器，可以用于化学、材料、地质、生物等领域。

本文将对拉曼光谱仪的工作参数进行介绍。

光源拉曼光谱仪的光源通常是激光，激光的波长是固定的。

常见的激光波长有532nm、785nm、1064nm等。

不同波长的激光适用于不同类型的样品。

特别地，可见激光主要适用于有机物和有机高分子的分析。

而近红外激光则适用于无机化合物和矿物质的分析。

红光、绿光和蓝光的激光波长分别为650nm、532nm、488nm。

分光镜拉曼光谱仪利用分光镜分离散射光和激光，并将散射光投射到探测器上。

拉曼光谱分光镜一般有两种，低通滤光片和金属滤光片。

低通滤光片的作用是将激光衰减，以避免光谱的偏移和饱和。

金属滤光片通常用于在样品被激光照射之前消除自发荧光信号。

反射镜反射镜是拉曼光谱仪的重要组成部分，可将激光引导到样品上，使激光与样品产生相互作用，然后将样品的信号收集到探测器上。

反射镜分为两种：倾斜反射镜和平面反射镜。

平面反射镜是将激光与样品垂直以实现散射，而倾斜反射镜则在一定角度下将激光引向样品。

探测器探测器是测量拉曼光谱的关键组件。

常见的探测器有CCD探测器和光电倍增管探测器。

CCD探测器具有高分辨率、低背景噪声等优点，适用于高精度的测量。

而光电倍增管探测器则具有高速度、高灵敏度等优点，适用于大量样品快速测量。

其他参数除了上述参数外，拉曼光谱仪还有一些其他的参数需要注意：•分辨率：分辨率是指一个光谱测量中重心波数和半高峰宽度的示例差异。

分辨能力越好，就可以得到更加精确的光谱数据。

•精度：精度是指测量结果与真实值的偏差，精度越高，测量结果越可靠。

•灵敏度：灵敏度是指在低样品浓度下，还能够检测到样品中的信号强度。

利用Lightcanner 进行高分辨率溶解曲线分析时一种转板器的制作及其使用方法声明：，本方法由Along 独立创制，如有雷同纯属巧合 导言出于节省试验成本需要对lightscanner 匹配的全裙边PCR 板进行反复利用时或者实验室缺乏匹配全裙边PCR 板PCR 仪的情况下，需要在PCR 扩增完后把普通PCR 板（或8/12连管）PCR 产物转移到全裙边板子上，如果用排枪（或单枪）吸取，如果是大规模筛选，个人觉得比较麻烦，而且会存在少量残留，如何快速高效转移呢？笔者找到了一个比较简便的方法，下面进行简单介绍。

配套材料要求普通PCR 板：管口要凸出，与板子齐平的不行。

匹配Lightscanner 的全裙边板：这种管口的可以这种管口的不行转板器制作及使用96孔微孔板的选择（微孔板也叫细胞培养板、酶标板等）选择特定类型的V底（U底也可接受）96孔微孔板（不是每种品牌都可以使用，不同品牌间在构造上略存差异，这些差异有可能导致不能改造成转板器），材料最好是PP(聚丙烯，就是普通PCR管的那种材质)，因为其比较柔软一些，易于打孔而不破裂（市面上的微孔板多是PS即聚苯乙烯材料的，本人没有试过，因其比较脆，恐不好打孔）。

本人验证Eppendorf的V底（U底也可接受）96孔微孔板（Eppendorf货号0030 601.300）与全裙边板非常匹配，只要微修打孔即可使用，下面就以此种微孔板为例介绍制作转板器的方法。

工具制作方法1、修支脚（目的是使管底直接搭在全裙边板上，而不是悬空）2、打孔（烫孔）用夹钳夹住尖底螺丝钉（越尖越好）在酒精灯上烧热后，从微孔板底部，对准管底中央尖端烫开一小孔，一次烧热可以烫三四个孔，所有孔烫完后用手抠掉那些粗糙的塑料结痂（不需要抠得多彻底）。

下图是修支脚及打孔之后的效果3、检验效果用小刀把图示部位的所有支撑横挡支脚全部去除，修到突出的平面齐平即可，不需要修到底部有可能由于孔不平滑使离心后液体有少部分残留，因此必须检查是否存在液体残留现象，按下面的使用方法，用少量纯水试验。

汉森溶解度参数
汉森溶解度参数是一种用于测量溶剂在一定条件下溶解物质的能力的参数。

它可以帮助我们评估溶剂的溶解性，并且可以在溶液系统中比较不同溶剂的溶解性。

汉森溶解度参数是由瑞士化学家廉·汉森创立的，它可以
用来衡量溶液中溶解物的溶解度，也可以用来衡量溶液的溶解度。

它是一种客观的参数，可以用来衡量溶解物的溶解度，从而使我们能够准确地评估溶解度，从而更好地控制溶液的性质。

汉森溶解度参数的计算公式为：溶解度参数=溶解物的溶
解量/溶剂的体积。

其中，溶解物的溶解量是指溶解物在某种
温度、压力和溶剂组成下，在单位体积溶剂中溶解的质量。

溶剂的体积就是指溶剂的容积。

汉森溶解度参数可以用来比较不同溶剂的溶解性，它可以帮助研究人员更好地控制溶液系统中的溶解物，有助于实现更高效的溶解性。

此外，汉森溶解度参数还可以用来比较不同温度、压力和溶剂组成下的溶解度，可以有效地控制溶液的溶解性，并且可以有效地改变溶液的物理性质，有利于改善溶液的性能，从而达到最佳的效果。

总之，汉森溶解度参数是一种重要的工具，它可以帮助我们更准确地评估溶解度，从而更好地控制溶液的性质。

此外，
它还可以用来比较不同温度、压力和溶剂组成下的溶解度，有助于改善溶液的性能，从而提高效率。

熔解曲线检测参数熔解曲线检测是一种高效、准确的检测方法，可以用于检测蛋白质、DNA、RNA等生物大分子的特异性检测和定量分析。

在进行熔解曲线检测时，需要设置一些参数，以确保测试的准确性和可靠性。

下面将介绍一些常见的熔解曲线检测参数及其作用。

1. 温度梯度温度梯度是熔解曲线检测中最重要的参数之一。

温度梯度是指在样品中加热的最高温度与最低温度之间的差异。

通常情况下，温度梯度越宽，引物杂交的温度越宽，因此，在熔解曲线检测时，通常要根据待检测分子的性质和处理的样品数量确定温度梯度的大小。

过大的梯度会造成检测灵敏度下降，过小的梯度则容易造成检测精度下降。

因此，温度梯度的选择应该根据具体实验情况进行调整。

2. 稳定时间稳定时间是指在样品中加热后，在各个温度点上停留的时间。

在进行熔解曲线检测时，稳定时间的选择对检测结果也很关键。

如果稳定时间过短，会导致检测结果不准确，而稳定时间过长，则会浪费时间和资源。

因此，稳定时间的选择应该根据具体实验情况和样品的稳定性进行选择。

3. 数据采集速率数据采集速率是指在进行熔解曲线检测时，采集数据的速度。

这个参数对于检测结果的精度和准确性非常重要。

通常情况下，数据采集速率应该越快越好，因为这可以有效地减少温度间的延迟时间，从而更好地保持样品的温度均匀性。

然而，由于计算机系统的反应时间限制，数据采集速率也不能太快，否则会对数据分析和处理造成困难。

4. 熔解曲线分析软件熔解曲线分析软件是进行熔解曲线检测所必须的设备之一。

这个软件可以用于数据处理、分析和呈现，可以大大提高实验效率和准确性。

在选择熔解曲线分析软件时，应该考虑软件的稳定性、灵敏度、分析速度和易用性等因素，并根据实验需要选择。

综上所述，熔解曲线检测的参数设置是影响实验结果、精度和准确性的关键因素。

在进行实验时，应该根据实验需要和样品规模等情况，综合考虑各个参数的影响，并进行适当的调整和控制，以保证实验的稳定性和准确性。

高分辨熔解曲线突变检测高分辨熔解曲线（High Resolution Melting）技术是近年来兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。

HRM不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品的分析。

该方法与其他遗传分型技术相比具有灵敏度高、特异性好、成本低廉、高通量检测的优点，是进行突变检测的迅速、廉价而有效的方法。

HRM原理HRM是在PCR基础上通过测定DNA双链熔解曲线变化来检测突变的方法，溶解曲线的变化取决于DNA序列、长度、GC含量，因此，可以通过饱和燃料监控熔解曲线的变化来反映核酸性质的差异，从而对样品进行分析。

在双链体的溶解曲线检测时需要添加合适的染料，饱和染料例如SYBR Green 在双链解链过程中会发生重排，无法真实反映DNA熔解情况。

不适用于需低温解链的样品而且不能检测异源双链体。

因此不能用于熔解曲线的检测。

而LC Green (Idaho)是一种与DNA有更强的结合位点，对PCR抑制作用很小的饱和染料，已成功的用于HRM检测中。

HRM操作简便，在PCR结束后添加合适的染料，通过监测升温过程中荧光染料与PCR扩增产物的结合情况来实现的，在Lightscanner仪器（Idaho）升温过程中，双链解开，荧光染料从解链的分子上释放，同时荧光强度降低，所以通过荧光强度和曲线的变化上就可以判断是否存在突变。

HRM的特点和应用HRM应用：•检测人类疾病相关基因中常染色体的显隐性和X-连锁•鉴定人类肿瘤的体细胞突变，肿瘤样品中筛选体细胞突变•基因突变扫描：单碱基的改变、插入或缺失•特定突变、多态性位点的筛选•外显子和短扩增子基因型扫描HRM特点：•灵敏度高：杂合子突变体的检测的灵敏度可以达到100%，原则上数据分析时温度升高后纯合子或半合子的突变时检测不到的，但实际上，许多纯合子突变是可以检测到的。

如基因突变正好与x连锁，可以在PCR之前加入已知野生型样本来检测半合子或纯合子的突变。