呕吐毒素检测卡说明书(完整版)

呕吐毒素标准操作规程1、目的为了规亲和柱净化样本中呕吐毒素的操作流程，特制订本操作规程。

2、围本标准适用于粮食、饲料、食品中呕吐毒素的检测。

3、检出限和定量限5.1 原理测定的根底是抗原、抗体反响，抗体连接在柱体，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过呕吐毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。

用甲醇洗脱呕吐毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。

5.2 溶液配制5.3 样品前处理----将样品粉碎，称取25g样品，参加5g聚乙二醇，参加125mL蒸馏水；----高速均质〔≥10,000r/min〕1min〔或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min〕；----用快速定性滤纸过滤，收集滤液；----滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；----取2.5mL上样液过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：2----称取10g样品，参加100mL蒸馏水；----高速均质〔≥10,000r/min〕1min〔或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min〕；----用快速定性滤纸过滤，收集滤液；----滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；----取5mL上样液过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：2----取脱气的酒类样品〔含二氧化碳的酒类样品，使用前先搅拌或超声脱气〕或不含二氧化碳的酒类样品25g，用PBS缓冲液定容至100mL；----高速均质〔≥10,000r/min〕1min〔或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min〕；----用快速定性滤纸过滤，收集滤液；----滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；----取2mL上样液过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：2----取样品25g，用PBS缓冲液定容至100mL；----高速均质〔≥10,000r/min〕1min〔或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min〕；----用快速定性滤纸过滤，收集滤液；----滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；----取2mL上样液过免疫亲和柱净化。

呕吐毒素PriboFast ○R霉菌毒素免疫亲和柱PriboFast ○R霉菌毒素多功能净化柱产品名称产品描述产品编号规格PriboFast ○R净化柱（推杆型） PriboFast ○R 200 多功能净化柱 呕吐毒素 雪腐镰刀菌烯醇 M2000 25T PriboFast ○R 200 多功能净化柱呕吐毒素 雪腐镰刀菌烯醇M200050TPriboSpin TM 净化小柱PriboSpin TM 呕吐毒素 PS-03025T PriboSpin TM 呕吐毒素PS-03050TPriboFast ○R酶联免疫试剂盒产品名称 产品描述 产品编号 规格 呕吐毒素试剂盒 检测范围:0-72ppb EKT-030 48T 呕吐毒素试剂盒检测范围:0-72ppbEKT-03096T产品名称 产品描述产品编号 规格呕吐毒素免疫亲和柱(3ml)适用于玉米、谷物、饲料、植物油、辣椒等作物,定量检测呕吐毒素含量符合国标:GBT 23503-2009；GBT5009.111-2003IAC-030-325T呕吐毒素免疫亲和柱(3ml)适用于玉米、谷物、饲料、植物油、辣椒等作物,定量检测呕吐毒素含量 符合国标:GBT 23503-2009；GBT5009.111-2003IAC-030-3 50TPriboFast○R霉菌毒素检测卡产品名称技术参数适用样品产品编号规格呕吐毒素检测卡检测限50ppb 饲料谷物PR-03025TPriboFast○R霉菌毒素标准品产品名称产品描述产品编号规格PriboFast○R固体标准品呕吐毒素/脱氧雪腐镰刀菌烯醇Deoxynivalenol/Vomintoxin MMS10111mg/5mg/10mg PriboFast○R液体标准品呕吐毒素/脱氧雪腐镰刀菌烯醇50µg/ml,溶于甲醇STD#31011ml/2ml/5ml呕吐毒素/脱氧雪腐镰刀菌烯醇100µg/ml,溶于甲醇STD#31021ml/2ml/5mlPriboFast○R质控样品产品名称产品描述产品编号规格小麦中呕吐毒素 2.1 ppm(±0.2ppm)MRM-DW-15350g/100g/500g/100g 玉米中呕吐毒素 2.7±0.2ppm MRM-DC-61450g/100g/500g/100g 玉米中呕吐毒素 1.9±0.1ppm MRM-DC-61050g/100g/500g/100g 小麦中呕吐毒素1137ug/kg (780-1494ug/kg)MRM-DC-36050g/100g/500g/100g 小麦中呕吐毒素188ug/kg (110-264ug/kg)MRM-DC-51150g/100g/500g/100g。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)实用新型专利(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201821658216.7(22)申请日 2018.10.12(73)专利权人 深圳市赛泰诺生物技术有限公司地址 518000 广东省深圳市宝安区石岩街道塘头一号路创维创新谷C栋602(72)发明人 马志　(74)专利代理机构 深圳市兰锋知识产权代理事务所(普通合伙) 44419代理人 曹明兰(51)Int.Cl.G01N 33/558(2006.01)(54)实用新型名称一种呕吐毒素检测卡(57)摘要本实用新型公开了一种呕吐毒素检测卡，属于呕吐毒素免疫荧光检测技术领域，该检测卡包括支架和检测卡条，所述支架上并排设置有多个盒体，所述盒体上开设有加样孔和显示口，所述支架上固定立柱，所述盒体通过立柱固定在所述支架上，所述盒体一端开设有开口，所述检测卡条通过所述开口插设在所述盒体内，所述盒体在开口一端设置有盖体，所述盖体上固定有磁石片，所述盒体上设置有铁片，所述铁片与所述磁石片磁性连接，解决了检测多组样品过程中，将多组样品的检测结果并排比较十分麻烦的问题。

权利要求书1页 说明书5页 附图3页CN 208872759 U 2019.05.17C N 208872759U1.一种呕吐毒素检测卡，其特征是：包括支架(1)和检测卡条(2)，所述支架(1)上并排设置有多个盒体(3)，所述盒体(3)上开设有加样孔(14)和显示口(15)，所述支架(1)上固定立柱(4)，所述盒体(3)通过立柱(4)固定在所述支架(1)上，所述盒体(3)一端开设有开口，所述检测卡条(2)通过所述开口插设在所述盒体(3)内，所述盒体(3)在开口一端设置有盖体(6)，所述盖体(6)上固定有磁石片(7)，所述盒体(3)上设置有铁片(8)，所述铁片(8)与所述磁石片(7)磁性连接。

2.根据权利要求1所述的一种呕吐毒素检测卡，其特征是：所述立柱(4)上固定有支撑板(12)，所述盒体(3)位于所述支撑板(12)上，相邻所述立柱(4)之间固定有定位板(9)，所述定位板(9)上固定有吸铁石(11)，所述盒体(3)在相对所述盖体(6)一端固定有铁片(8)，所述铁片(8)与所述吸铁石(11)磁性连接。

ROMER 国际贸易北京有限公司编号：COKAQ4000_N O V 09呕吐毒素是B 型单端孢霉烯族化合物，由镰刀菌产生，特别是Fusarium graminearum. 这种霉菌毒素主要产生在谷物中，例如小麦，大麦，燕麦，黑麦和玉米中。

呕吐毒素具有非常高的毒性，1ppm 以上对猪有潜在的危害。

由受呕吐毒素污染的小麦做成的宠物食品具有急性毒性。

呕吐毒素是一种免疫抑制剂，可以引起肾的疾病。

当人类食用了受呕吐毒素污染的谷物后也同样会产生呕吐症状。

美国食品药品监督管理局(FDA)对呕吐毒素限量的法案规定如下： （1）人类食用的成品小麦产品：1ppm ； （2）猪和其他动物饲料中原料的谷物及谷类副产品：5ppm ； 猪饲料：1ppm ； 其他动物饲料：2ppm ； （3）食用牛、4个月以上的饲育牛及肉鸡的饲料原料中的谷物及谷类副产品：10ppm ；食用牛、4个月以上的饲育牛及肉鸡的饲料：5ppm 。

AgraQuant ®呕吐毒素检测试剂盒应用固相直接竞争酶联免疫吸附原理，用去离子水或蒸馏水从研磨样品中提取呕吐毒素。

样品提取液或呕吐毒素标准品与酶-呕吐毒素偶合物混匀后加入到抗体包被的微孔中，样品中的呕吐毒素或呕吐毒素标准品与酶-呕吐毒素偶合物中的呕吐毒素竞争结合微孔中的特异抗体。

经过洗板去除未参加抗原-抗体反应的的呕吐毒素，当酶的底物被加入到微孔中，颜色变为蓝色，且颜色深浅与样品中或标准品中呕吐毒素含量成反比。

加入反应终止液终止反应后，反应液颜色应由蓝色转为黄色。

在450nm(OD450)滤镜及630 nm 示差滤镜下使用酶标仪对微孔板进行吸光度值测量。

利用标准品的吸光度值对标准品浓度制作标准曲线，将样品的吸光度值与标准品的吸光度值进行比较以进行结果的判读。

AgraQuant ® 呕吐毒素检测试剂盒操作方法0.25/5 ppmDeoxynivalenol （Vomixin ）呕吐毒素 Assay Principles 检测原理1.试剂盒在不使用时，需放置在2-8℃(35-46℉)保存，并确保在有效期之前使用。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)实用新型专利(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201720063959.9(22)申请日 2017.01.19(73)专利权人 北京亿森宝生物科技有限公司地址 101100 北京市通州区科创东五街2号14幢F2C(72)发明人 王新杰　付婷婷　高姗姗　孙晓明　胡祥钰　(51)Int.Cl.G01N 33/558(2006.01)G01N 33/543(2006.01)(54)实用新型名称检测黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的检测卡(57)摘要本实用新型公开了一种检测黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的检测卡，包括：底座，底座上设有三个检测条和一个上样垫，每个检测条分别与上样垫相连，每个检测条上分别包括检测垫和设在检测垫上的质控线和检测线，质控线上包被有磷酸盐稀释的羊抗鼠的多抗，检测线上分别包被有磷酸盐稀释的黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的抗原；面盖，面盖设在底座上，面盖上设有点样孔和可视窗，点样孔与上样垫的位置相对应，可视窗的位置与检测垫的位置相对应。

根据本实用新型实施例的检测卡，在检测同一样品时，仅处理一个样本，滴加一次处理液，就可以测试出对应的黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素，大大减少了使用人员的操作时间和检测成本。

权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 206420883 U 2017.08.18C N 206420883U1.一种检测黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的检测卡，其特征在于，包括：底座，所述底座上设有三个检测条和一个上样垫，每个所述检测条分别与所述上样垫相连，每个所述检测条上分别包括检测垫和设在所述检测垫上的质控线和检测线，所述质控线上包被有磷酸盐稀释的羊抗鼠的多抗，所述检测线上分别包被有磷酸盐稀释的黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的抗原；面盖，所述面盖设在所述底座上，所述面盖上设有点样孔和可视窗，所述点样孔与所述上样垫的位置相对应，所述可视窗的位置与所述检测垫的位置相对应。

呕吐毒素(DON)的检测ELISA法测试前请仔细阅读本说明在2—8℃冷藏—不要冻结1.简介 DON毒素脱氧瓜萎镰菌醇（DON，）是单端孢菌素烯烃中的一种，它通常是由生长在谷类物品（如小麦、玉米、大麦和秣草）霉菌镰红菌素生成的。

脱氧瓜萎镰菌醇的毒性效应包括：呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病。

研究表明猪对脱氧瓜萎镰菌醇很敏感。

当脱氧瓜萎镰菌醇含量≥1ppm时，它们就拒绝进食。

其毒性也会对其他物种产生毒性效应，各种物种对脱氧瓜萎镰菌醇的敏感性各不相同。

研究表明脱氧瓜萎镰菌醇会使已加工食物发生问题，包括使可吃的谷类制品产生臭味、对生面团质量产生负面影响。

因此，精确测定可能含有脱氧瓜萎镰菌醇的食物和食品就现得十分重要。

FDA（美国食品和药品管理局）已经制定了脱氧瓜萎镰菌醇含量的强制标准。

2.方法原理本测试盒的测试原理是一种竞争性的直接酶联免疫吸附剂测试方法（ELISA），可准确检测出样品中ppm级的DON毒素。

样品和标准控制液中游离的DON毒素与轭合物中的DON 毒素竞争抗体结合位置。

清洗后，加入底物，底物与轭合物反应出现兰色，兰色越深表明DON毒素越少。

将其置于微型孔阅读器中可读出透光度，以控制标准液的透光度作标准曲线，将样品的透光度与标准曲线比较计算出样品中DON毒素的准确浓度。

3.贮存要求本试剂盒存放在2～8℃时，可以一直使用到标签上注明的到期日期。

4.试剂与仪器4.1已提供的材料48个包被了抗体的孔；48个红色标记的混合孔；5瓶2ml 浓度为0、0.25、0.5、1、3 ppmDON毒素控制标准液(黄色标签)；1瓶DON毒素-HRP轭合物溶液(兰色标签)；1瓶24ml 底物溶液(绿色标签)；1瓶32ml红色终止液（红色标签）4.2需要但未提供的材料提取材料；蒸馏水或去离子水；100ml量筒；150ml的具塞三角瓶；滤纸；样品收集具塞试管；漏斗；粉碎机；称量为5～25克的秤；带450nm滤光片的酶标仪；200μl移液器；200μl吸咀；纸巾或等效的吸水材料；计时器；防水记号笔；洗瓶；移液器用的试剂槽；蒸馏水或去离子水；计时器等5.注意事项本测试盒不使用时应在2～8℃下存放。

呕吐毒素DON(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)检测试剂盒适用Beacon脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测小麦，大麦，麦芽，玉米及燕麦中的呕吐毒素。

检测原理Beacon脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。

用水震荡萃取粉碎样品中的DON,过滤水相萃取物，然后进行免疫学检测。

加入呕吐毒素的酶标记物到已加有标准或样品的测试孔中，抗体被加入后反应开始，样品及酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合呕吐毒素和酶标记物。

加入无色的底物溶液，培养5分钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。

加入停止液然后读取吸光度值，未知浓度样品与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的呕吐毒素浓度。

特异性Beacon脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测试剂盒对于脱氧雪腐镰刀菌烯醇有很强的特异性，以下表格展示了与其他形式的交叉反应率。

复合物交叉反应率3-acetyl-deoxynivalenol >1%15-acetyl-deoxynivalenol <300%LOD(最低检测限) 100ppbLOQ(最低定量限) 200ppb试剂及材料若试剂盒保存在2-8℃，未拆开包装的试剂盒在标识的保质期之前均可放心使用。

1．真空包装，包含干燥剂的8×12的微孔板。

2．5瓶2ml浓度为0，0.2，0.5,1.0,2.5 ug/ml（ppm）的DON标准品，（注意：因为谷物样品在萃取过程中1：5稀释，标准品实际上为设定标准浓度的1/5，原始样品的浓度无需换算。

）3．1瓶8ml的酶标记物。

4．1瓶8ml的鼠抗DON抗体。

5．1瓶14ml的底物溶液6．1瓶14ml的停止液（注意：1N 盐酸，小心操作！）7．1包洗液粉末。

8．操作说明书注意事项1．每种试剂最适用于Beacon DON试剂盒。

其他生产商的试剂不可替代本试剂盒中的任何试剂，不同批次之间的试剂不可混用。

呕吐毒素ON检测仪安全操作及保养规程1. 前言呕吐毒素ON检测仪是一种高精度、高灵敏度的仪器，用于检测食物中的呕吐毒素含量。

为了保障使用者的安全和仪器的性能，本文将详细介绍呕吐毒素ON检测仪的安全操作及保养规程。

2. 仪器的安全操作2.1 声明在使用呕吐毒素ON检测仪前，请仔细阅读使用说明书，并严格按照要求操作。

否则可能导致检测结果不准确、仪器损坏或人身伤害等事故发生。

2.2 操作环境和条件•仪器应该在无风、干净、无异味、震动小的环境中使用。

•操作人员应该穿戴实验室常规防护服，佩戴防护眼镜、手套等，并确保双手干燥、无油污和无化妆品等物质。

•操作时要注意保持仪器表面清洁，不要碰触或擦拭仪器表面。

2.3 操作步骤•首先，仔细检查仪器是否在正常工作状态。

如有异常情况，请勿启动检测程序。

•将取样棒或其他取样装置插入取样槽。

注意不要将其插入深度过大，以避免损坏取样槽和仪器。

•启动检测程序，按照程序提示操作。

在检测过程中，不要移动或震动仪器，避免干扰检测结果。

•当检测结果显示完成后，查看结果是否符合要求。

如果结果不准确或超出检测范围，请不要使用该结果。

2.4 关机•在使用完毕后，及时关闭电源开关，待风扇停转后方可离开实验室。

•注意，不要在操作过程中猛拉电源线，以避免电源线损坏。

3. 仪器的保养规程3.1 仪器保养的目的正确的仪器保养可延长仪器的寿命、保障仪器性能、保障检测结果准确可靠。

3.2 仪器保养步骤•在使用完毕后，清洁仪器外壳表面。

•定期清洁检测窗口、取样槽和附件。

•定期更换附件中的滤膜，以保证检测结果准确。

•定期检查仪器连接线头、插孔是否正常，如有问题请及时维修或更换。

4. 总结对于呕吐毒素ON检测仪，正确的操作和保养对仪器的正常运行和检测结果的准确性至关重要。

因此，我们必须认真执行操作规程、认真进行保养，保证仪器安全地正常工作，为检测食品安全作出自身的贡献。

ELISA kit for quantitative detection of deoxynivalenol一、概要呕吐毒素(V omitoxin)，是一种单端孢霉烯族毒素，主要由禾谷镰刀菌和粉红镰刀菌产生，化学名称为脱氧腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，容易存在于各种谷物类粮食及加工产品中，污染水平一般为mg/kg（ppm）级。

DON具有很强的细胞毒性。

人误食DON含量高的食物后，容易导致急性中毒头昏、腹胀、恶心、呕吐，以及白细胞缺乏症。

目前通常应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对谷物（小米、玉米、大麦等）及其制品（蛋糕、饼干、面包等）中的DON含量进行快速、定量检测。

二、原理本试剂盒是利用间接酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达12.5 µg/kg（ppb）。

样品或标准品中游离的呕吐毒素与包被在微孔中的抗原竞争结合游离单克隆抗体上的结合位点，形成抗原抗体结合物，经洗板洗去多余的抗体与呕吐毒素后，加入酶标记的二抗与单克隆抗体结合，经再次洗板后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明呕吐毒素越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的呕吐毒素污染水平。

三、试剂盒构成1、反应板支架…………………………………………………………………………1块2、呕吐毒素抗原包被反应板………………………………………………………….36孔3、呕吐毒素标准品溶液（0 ppb，12.5 ppb，25 ppb，50 ppb，100 ppb，200 ppb）…1套4、呕吐毒素单克隆抗体………………………………………………………1瓶5、稀释液……………………………………………………………………1瓶6、酶标二抗溶液………………………………………………………………1瓶7、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶8、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶9、终止液………………………………………………………………………………1瓶10、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。

饲料中呕吐毒素（DON）荧光定量8min快速检测系统，国粮局权威验证一、呕吐毒素危害及检测方法介绍呕吐毒素作为一种常见的真菌毒素，在自然界中广泛存在于小麦等粮谷类农作物中，在世界范围内存在着较高的污染率，小麦一旦被呕吐毒素产毒菌株污染，在适宜生长环境（水分活度Aw>0. 87）中，产毒菌株会迅速生长，产生呕吐毒素，而小麦中的呕吐毒素又会随小麦粉的生产过程带入到面粉中，严重威胁人体健康。

我国2013 年国家风险监测计划已将小麦和面粉中呕吐毒素含量的监测列为重点。

目前呕吐毒素的检测方法主要分为两大类：即确认方法和快速方法。

确认方法主要基于理化仪器设备，如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高压液相色谱法(HPLC)和各种联用技术如气质联用(GC-MS)、液质联用(HPLC-MS)等；快速方法主要是基于免疫化学基础上的免疫分析方法如免疫亲合柱-荧光检测(IAC-FLD)、酶联免疫吸附法(ELlSA)和胶体金免疫层析法等。

结果准确、法定认可是理化方法最大的优点，但是仪器设备价格昂贵，前处理过程复杂、操作繁琐、效率低，成本极高，因此不适用于大规模样本的筛查和日常的内控检测，一般仅用于最终的确证。

酶联免疫吸附法ELISA 方法和胶体金快速检测卡是企业常用的快速检测方法，但也均存在各自的优缺点：ELISA 方法能灵敏度相对较高，且能定量检测，但操作过程相对复杂，对环境和人员要求高，环境干扰因素复杂，重复性较差；胶体金检测卡可以满足现场快速的要求，能在5-10min内快速测定，但是只能定性，且灵敏度较低，肉眼观察主观性较强，重复性差。

二、饲料中呕吐毒素国家残留限量标准引自：《GB 137078-2017 饲料卫生标准》。

三、上海飞测饲料中呕吐毒素荧光定量快速检测系统上海飞测生物基于全球领先的荧光定量FPOCT技术平台，开发了呕吐毒素荧光定量快速检测系统，该系统结合了胶体金快速、酶联免疫定量以及色谱法准确的特点，可在8min内快速准确定量的测定出饲料中的呕吐毒素的含量，样品前处理简单（仅需7min），操作简便，只需一步加样，无需标准品，无需做标准曲线，采用荧光免疫定量分析仪读数，结果准确可靠且可现场打印，准确性高度符合HPLC法的检测结果，为呕吐毒素的快速检测和控制提供了一种全新的技术手段，适用于各类饲料加工企业、检测机构及政府相关监管部门。