抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性测定试剂盒说明书

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。

绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。

细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。

本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。

本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。

细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。

谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。

在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。

但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。

货号: QS1008 规格：50管/48样单脱氢抗坏血酸还原酶（monodehydroascorbate reductase,MDHAR）活性测定试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：MDHAR催化MDHA还原生成AsA，在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。

测定原理：MDHAR 催化 NADH 还原MDHA 生成 AsA和NAD+，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD+没有。

通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算出MDHAR活性。

自备实验用品及仪器：研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和双蒸水试剂组成和配置：试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体50mL×1瓶，室温保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。

试剂五：液体25μL×1瓶，4℃保存。

临用前加5mL试剂二充分溶解。

粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2.. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g ，4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。

3. 血清等液体：直接测定。

MDHAR测定操作：1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。

3. 依次在比色皿中加入100μL试剂三、100μL试剂四、100μL试剂五和600μL试剂二，最后加入100μL上清液，迅速混匀后于340nm比色，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A1-A2。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX ）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC1195规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×2瓶4℃保存试剂二液体10 μL×1瓶4℃保存试剂三液体30mL×1瓶4℃保存试剂四液体15 mL×1瓶4℃保存试剂五液体5mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支 4℃保存稀释液液体20 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入3.3 mL 稀释液，充分溶解；2、试剂二：临用前按2 μL 试剂二：10 mL 蒸馏水的比例稀释试剂二，现用现配；3、试剂三：瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；4、标准品：10 mg 还原型谷胱甘肽。

临用前加入0.405 mL 稀释液溶解为80 μmol/mL 的标准溶液备用。

产品说明：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px 或GPX ）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。

GPX能够催化还原型谷胱甘肽（GSH ）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG ），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。

GPX 催化H 2O 2氧化GSH ，产生GSSG ，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。

植物抗坏血酸过氧化物酶的作用机制、酶学及分子特性一、本文概述植物抗坏血酸过氧化物酶（Ascorbate Peroxidase，AP）是一种在植物细胞内广泛存在的关键酶，其在植物抗氧化防御系统中发挥着至关重要的作用。

本文旨在全面探讨植物抗坏血酸过氧化物酶的作用机制、酶学特性以及分子特性，以期为深入理解植物抗氧化防御系统的运行规律，以及提高植物抗逆性和农业生产力提供理论基础。

我们将详细介绍抗坏血酸过氧化物酶的生化功能，包括其催化抗坏血酸清除活性氧的能力及其在细胞氧化还原稳态中的作用。

接着，我们将深入探讨抗坏血酸过氧化物酶的酶学性质，如酶的动力学特性、抑制剂和激活剂的影响等。

我们将对抗坏血酸过氧化物酶的分子特性进行阐述，包括其基因结构、表达调控以及蛋白质结构等方面的研究。

通过本文的综述，我们期望能够为植物生物学、农业生物技术以及植物抗逆性研究等领域提供有益的参考和启示。

二、植物抗坏血酸过氧化物酶的作用机制植物抗坏血酸过氧化物酶（AP）是一种关键的抗氧化酶，主要作用是清除植物细胞中的过氧化氢（H2O2），以防止氧化应激对细胞造成的损伤。

AP的作用机制主要涉及到酶的催化活性以及其与底物的相互作用。

在AP的催化过程中，抗坏血酸（AsA）作为还原剂，将H2O2还原为水（H2O），而自身则被氧化为单脱氢抗坏血酸（DHA）。

这个过程可以表示为：2AsA + H2O2 → 2DHA + 2H2O。

DHA随后通过抗坏血酸再生系统被还原回AsA，从而维持了AP的催化循环。

AP的作用机制还涉及到其在细胞内的定位。

在植物细胞中，AP 主要分布在叶绿体、细胞质和线粒体等细胞器中。

这些细胞器中的AP通过特定的信号肽序列被定位到相应的位置，从而实现了对特定区域H2O2的高效清除。

AP的活性还受到多种因素的调节，包括光照、温度、pH值以及底物和抑制剂的浓度等。

光照和温度可以影响AP的稳定性和活性，而pH值则可以影响AP与底物的结合能力。

组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC2140规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体30 mL×1瓶4℃保存试剂一液体10 mL×1瓶4℃保存试剂二液体10 mL×1瓶4℃保存试剂三液体30 mL×1瓶4℃保存标准液液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、标准液：10 μmol/mL 酚标准液，临用前蒸馏水稀释至2.5μmol/mL 备用。

产品说明：AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。

AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。

在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm 有特征光吸收；通过测定510nm 吸光度增加速率，来计算AKP 活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g 组织，加提取液1mL 充分研磨，4℃，10000rpm 离心10min ，取上清液待测。

血液可直接用于测定，或者适当稀释后用于测定。

二、操作步骤1、可见分光光度计预热30min 以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。

2、操作表试剂名称（μL ）测定管对照管空白管标准管蒸馏水--20-标准品---20上清液20---试剂一200200200200试剂二200200200200混匀后置于37℃水浴中保温15min试剂三600600600600上清液-20--混匀后于510nm测定吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。