谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。

绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。

细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。

本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。

本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。

细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。

谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。

在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。

但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。

谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。

谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。

GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。

谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。

适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。

从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。

本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。

图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。

图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。

本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。

一个试剂盒共可以进行100次检测。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件：-20ºC保存，一年有效。

γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号:UPLC-MS-4494规格:50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体50mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂二液体12.5mL×1瓶4℃保存试剂三液体44.5mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、工作液（在试剂一瓶中配制）：临用前配制，把试剂二倒入试剂一瓶中，充分溶解（室温过低时可以40℃水浴促进溶解）；然后把试剂三倒入试剂一瓶中，混匀后室温保存。

产品说明：γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。

γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。

也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。

γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基苯胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000rpm4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约0.1g样本，加提取液1.0mL充分研磨，于4℃，10000rpm离心15min，取上清液待测。

谷胱甘肽还原酶检测说明书
谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase，GR）检测是一种用于测定谷胱甘肽还原酶活性的实验方法。

谷胱甘肽还原酶是一种关键的抗氧化酶，参与谷胱甘肽（glutathione，GSH）的再生过程，从而保护细胞免受氧化损伤。

以下是一种简化的谷胱甘肽还原酶检测说明：
1.实验原理：谷胱甘肽还原酶检测主要依赖于酶促
反应的光度测定。

在此反应中，谷胱甘肽还原酶将氧化型谷胱甘肽（glutathione disulfide，GSSG）还原为还原型谷胱甘肽（GSH），同时将还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADP+）。

反应过程中，NADPH的消耗可以通过其吸光度的变化来监测。

2.实验试剂：主要试剂包括缓冲液、还原型谷胱甘
肽、氧化型谷胱甘肽、NADPH、谷胱甘肽还原酶标准品等。

3.实验步骤：
a.样品处理：收集需要测定谷胱甘肽还原酶活
性的样品（如血清、组织或细胞提取物等），
并进行适当的处理和稀释。

b.反应体系建立：在96孔板中，分别加入缓冲
液、样品、GSSG和NADPH，然后添加谷胱
甘肽还原酶标准品。

c.光度测定：在340nm波长下，定时测定各孔
的吸光度变化，记录吸光度值。

d.计算结果：根据吸光度变化值，计算样品中
谷胱甘肽还原酶的活性。

4.注意事项：
a.在操作过程中，请遵循实验室安全规程，佩
戴必要的防护装备。

b.实验过程中，请保持试剂的纯净和稳定。

c.光度测定时，请确保仪器的准确性和稳定性。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC1195规格:100T/48S 产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px 或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。

GPX 能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。

GPX 催化H 2O 2氧化GSH，产生GSSG，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。

产品内容：提取液：液体80mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3.3mL 蒸馏水溶解备用；试剂三：液体10μL×1支，临用前按1μL 试剂三：499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三，4℃保存。

现用现配；试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水溶解备用；标准品：粉剂×1支，10mg 还原型谷胱甘肽，4℃保存。

临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。

操作步骤：一、粗酶液的提取：1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。

10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。

氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒自备材料：1、匀浆器或研钵、离心管或小试管、低温离心机、水浴锅2、蒸馏水、PBS或生理盐水、70%乙醇3、分光光度计、比色皿操作步骤(仅供参考)：1、配制GSSG标准储存液：取12.5mgGSSG标准加入2mlddH2O，溶解并混匀，即为GSSG 标准储存液(10mM)。

一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。

2、配制GSH清除剂工作液：在1mlGSH清除剂中加入9ml70%乙醇，溶解并混匀，即为GSH 清除剂工作液。

3、配制NADPH工作液：在33.2mgNADPH中加入4mlddH2O，即成NADPH工作液，一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。

4、配制DTNB储存液：在79.2mgDTNB中加入16mlDMSO，溶解并混匀，即为DTNB储存液(12.5mM)。

一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。

5、配制GR工作液：按GR：GSSGassaybuffer=1:49的比例混合，即为GR工作液。

-20℃保存，1个月有效。

注意：试剂(I)量较少，使用前应先4℃离心后再使用。

6、配制标准品：把GSSG标准储存液(10mM)用蛋白清除试剂稀释成50μM标准溶液，然后依次稀释成25、12.5、6.25、3.125μMGSSH标准溶液，取空白、3.125、6.25、12.5、25、50μMGSSG标准溶液6个点作标准曲线。

注意：由于GSSG标准在蛋白清除试剂中不太稳定，用蛋白清除试剂配制的GSSG溶液必须新鲜配制后使用，不可冻存后再使用。

7、准备样品：①红细胞或血浆样品：取新鲜血液，600r/min离心10min，沉淀为红细胞，上清为血浆。

对于红细胞，用PBS洗涤两次，取约50μl红细胞沉淀或血浆，加入50μl蛋白清除试剂，充分Vortex振匀。

4℃或冰浴放置10min，4℃10000r/min离心10min，取上清，用于GSSG测定，样品需暂时4℃保存备用，不立即测定的样品可以-70℃保存，但不宜超过10天。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒
微量法100T/96S
测定意义：
GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。

GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。

测定原理：
GSH-Px催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。

小鼠谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）ELISA检测试剂盒说明书小鼠谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。

颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。

严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。

全部液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

南京建成GPX试剂盒说明书一、产品简介南京建成GPX试剂盒是一种用于测定谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性的试剂盒。

谷胱甘肽过氧化物酶是一种重要的抗氧化酶，在生物体内起到清除自由基的作用。

该试剂盒采用酶促反应原理，通过检测GPX酶催化反应的速率，反映样品中GPX活性的强弱。

二、试剂盒组成1.GPX试剂盒2.GPX标准品3.过氧化氢（H2O2）稀释液4.反应底物液5.转化液6.二恶吖啶试剂7.芳醛显色剂液8.脱氧胆酸液三、操作步骤步骤一：样品处理1.将待测样品离心收集沉淀，去除杂质；2.取适量样品，加入过氧化氢（H2O2）稀释液，混匀；3.将处理后的样品转移至离心管，进行离心提取。

步骤二：制备标准曲线1.取GPX标准品不同浓度的工作液，依次加入反应孔；2.使用空白对照孔作为空白对照；3.分别加入转化液和反应底物液，混匀。

步骤三：反应过程1.加入样品提取液和转化液，混匀；2.加入反应底物液，混匀；3.加入二恶吖啶试剂，混匀；4.加入芳醛显色剂液，混匀；5.加入脱氧胆酸液，混匀。

步骤四：测定吸光度使用酶标仪在450nm波长下测定样品、标准品和空白对照的吸光度值。

四、结果判读根据标准曲线，计算出样品中GPX活性的浓度，进行数据分析。

根据浓度值的高低，可以判断出样品中GPX活性的强弱。

五、注意事项1.试剂盒的各组分应在4℃保存，开封后应尽快使用；2.不同批次的试剂盒不能混合使用；3.操作前，必须严格按照说明书操作，确保实验的准确性；4.不同样品的处理方式可能不同，请参照具体样品类型的处理方法；5.操作过程中应佩戴实验手套，避免接触试剂；6.尽量避免阳光直射，保持试剂的保存质量。

六、故障排除1.若标准曲线呈线性上升趋势，则说明实验条件符合要求，结果可信；2.若标准曲线呈非线性趋势，则可能是试剂盒保存不当或过期，需更换新的试剂，重新进行实验；3.若实验结果不符合预期，可能是样品处理不当或操作过程中出错，请检查并重新进行实验。