细菌β-内酰胺酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)

请在使用前仔细阅读说明书微生物活性检测试剂盒-W S T————比色法微生物代谢活性检测概述：微生物活性检测试剂盒-WS是一种全新的通过比色法检测微生物代谢活性的试剂盒。

本试剂盒采用WST®-8作为比色指示剂。

WST®-8通过电子载体被细胞内的脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲臜染料。

（如下图所示），生成的甲臜量与活细胞数量成正比。

本试剂盒包含所有所需的试剂。

可以简单，快速的进行检测。

试剂内含：- WST溶液： 1 ml x 5 tubes- 电子载体溶液（DMSO溶液）：0.5ml x 1 tube贮藏条件：4℃保存。

所需设备和材料：z酶标仪（450-490nm滤光片）z 96孔培养板z培养箱µl，200 µl单枪和200 µl排枪z 10tubez 1.5ml操作说明书：染色溶液的配制：在无菌的1.5ml tube内，按9:1的比例混合WST溶液和电子载体溶液。

（该配制好的染色溶液可以在4℃保存1个月）*在96孔板中，每孔需加入10 µl染色溶液，请提前计算并准备好适当提及的染色溶液。

*如果您检测的样品是革兰氏阳性菌、真菌、低响应菌种（如副溶血弧菌），请先用DMSO或无菌水8倍稀释电子载体溶液，将WST溶液和稀释后的电子载体溶液按照9:1的比例配制成染色溶液。

微生物代谢检测：1. 制备适当浓度微生物细胞的悬液，在96孔板内每孔接种190µl该悬液2. 每孔加入10µl的染色溶液3. 将培养板在培养箱中培养（37℃或合适的温度）4. 用酶标仪测定在450nm处的吸光度经本试剂盒测试过的微生物种类：真菌：Candida utilis, Saccharomyces cerevisiae, Zygos accharomyces rouxii, Candida albicans, Candida krusei, Candida parapsilosis革兰氏阳性菌：Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Corynebacterium glutamicum, Enterococcus faecalis,Lactobacillus casei, Listeria monocytogenes, Micrococcus luteus, Staphylococcusaureus, Staphylococcus epidermidis革兰氏阴性菌：Acetobacter sp., Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, Serratia marcescens, Vibrioparahaemolyticus, Yersinia enterocolitica药物敏感性测试：革兰氏阴性菌：1. 根据McFarland比浊法制备107CFU/ml的微生物细胞悬液。

β-内酰胺酶免疫胶体金快速检测试剂板使用说明书【产品简介】本产品用于快速检测生乳中的β–内酰胺酶残留，灵敏度见下表一，适用于各类企业及检测机构。

表一：温浴时间与产品灵敏度关系表【产品组成】1、β-内酰胺酶免疫胶体金快速检测试剂板（内含药片、试剂板、滴管、干燥剂）（40份/盒）2、说明书（1份/盒）3、2ml刻度管（40个/盒）4、β-内酰胺酶专用稀释液（1管/盒）【样品处理】1、开启水浴锅调节至37℃，待水温升到37℃，再开始实验；2、取试管架放在水浴锅中，水面略低于试管架最上层；3、撕开β–内酰胺酶免疫胶体金快速检测试剂板包装袋，取出小封口袋，将袋中的药片放入配送的2ml刻度管中；4、用移液枪各取0.9mlβ–内酰胺酶专用稀释液和0.3ml生乳到加入药片的2ml刻度管中，盖紧盖子，剧烈震荡1min；（温浴前务必使药片浸没于奶样中）5、将上述2ml刻度管放入试管架里温浴；（奶样液面必须低于水面）6、温浴时间请根据上面《表一》中数据自行选择；7、温浴后，取出2ml刻度管剧烈震荡10秒；然后打开盖子将该刻度管放回水浴锅试管架里；8、用配套的滴管吸取处理后奶样3滴滴板。

【使用步骤】测试前先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板恢复至室温（20℃~30℃）。

从原包装袋中抽出试剂板，水平放置于观察者正面，如下图右侧所示（打开后请立即使用）；用滴管吸取待检样品溶液，垂直滴加3滴（约100ul）于加样孔中，加样后开始计时；结果应在3~5分钟读取，半小时后结果判读无效。

【结果判断】阴性（—）：仅质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区（T）内无紫红色条带出现。

阳性结果表明，样品中β–内酰胺酶浓度低于检测限或无β–内酰胺酶残留。

阳性（+）：两条紫红色条带出现。

一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）内。

阴性结果表明，样品中β–内酰胺酶浓度高于检测限；无效：未出现C线，可能是操作不当或试剂板已失效。

应再次阅读说明书，并用新的试剂板重新测试。

GENMED SCIENTIFICS INC.GENMED真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）要紧用途GENMED真菌/细胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂是一种旨在利用化学和物理方式，快速有效地裂解真菌细胞，通太高速离心，取得澄清细胞裂解悬液，在β-半乳糖苷酶反映体系里，以邻硝基苯基-β-D- 半乳糖苷为无色底物，水解所产生的亮黄色的邻硝基酚，即采纳比色法定量测定细胞裂解悬液制备样品中的β-半乳糖苷酶活性，藉此成立一种简单的定量评判报告基因的权威而经典的技术方式。

该技术通过精心研制、成功实验证明的。

普遍应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。

其适用于转基因后的真菌/酵母活体细胞分析。

产品即到即用，性能稳固，参数优化，操作简便、比色灵敏，可谓国际上同类产品最正确。

技术背景大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶（β-galactosidase ；β-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中取得。

β-半乳糖苷酶超级稳固，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。

因此β-半乳糖苷酶成为目前最经常使用的报告基因，以评判载体转染的成效。

邻硝基苯基-β-D-半乳糖苷（o-nitrophenyl-β-D-galactopyraniside；ONPG），是一种无色底物，以替代乳糖，在β-半乳糖苷酶的催化下，水解成无色的半乳糖和亮黄色的邻硝基酚（o-nitrophenol；ONP），通过420nm波长的吸光值分析，来测定β-半乳糖苷酶的活性单位。

产品内容GENMED裂解液（Reagent A）10毫升GENMED强化液（Reagent B）2毫升GENMED活性液（Reagent C）250微升GENMED稀释液（Reagent D）20毫升GENMED反映液（Reagent E）4毫升GENMED终止液（Reagent F）10毫升产品说明书1份保留方式保留GENMED裂解液（Reagent A）、GENMED活性液（Reagent C）和GENMED反映液（Reagent E）在－20℃冰箱里，幸免反复冻融；其余的保留在4℃冰箱里；GENMED反映液（Reagent E）幸免光照；有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器毫升离心管：用于样品操作的容器（微型）台式离心机：用于样品操作比色皿或酶标板：用于比色分析的容器恒温水槽或培育箱：用于反映物孵育计时器：用于反映计时分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，开启分光光度仪预热，设置波长420nm；开启恒温水槽，设置温度为28℃。

细菌活死染色试剂盒说明书
可以通过流式细胞仪有效的区分活、死细菌并实现定量检测；而且对各类细菌的混合物也可以实现定量分析检测。

该试剂盒采用两种核酸染料来进行细菌活力测定：绿色荧光染料meilungreen （美仑自主研发，功能等同于SYTO9）以及红色荧光染料PI（碘化丙啶），并通过标准微球精准测量样品体积。

用适当比例的meilungreen与PI混合物染色时，细胞膜完好的细菌发出明亮的绿色荧光，而细胞膜受损的细菌则表现出绿色荧光明显减弱，同时发出较强的红色荧光。

细胞类型和革兰氏特征会影响死细菌产生红色荧光的强度。

meilungreen与PI染料在大部分流式细胞仪中都是由488nm激光器实现有效激发的，各自的核酸复合物荧光信号可分别在绿色通道和红色通道中检测到，并且几乎没有背景荧光。

标准微球悬浮液作为样品体积的参考标准，尺寸和荧光经过仔细筛选，以确保微球在流式细胞检测中荧光–侧向散射图中可以明显的区别于被染色的细菌。

用meilungreen和PI对细菌培养液进行简单染色，在流式细胞仪上分析样本前加入固定数量的微球。

β-内酰胺类抗生素胶体金快速检测卡说明书【产品简介】本产品用于快速检测生鲜奶中β内酰胺类抗生素的残留，整个检测过程只需要5分钟左右，适用于各类企业及检测机构。

以下列表为部分β内酰胺类药物检出限（μg/kg）【产品组成】β内酰胺类抗生素免疫胶体金快速检测卡（40份/盒）说明书（1份/盒）提取管（40份/盒）【未配套提供的试剂、器具】恒温金属浴、5ml提取管【样品处理】-----------简单操作方法1.预热恒温金属浴：将金属浴温度调至50℃，并保持恒温。

2.取一定量待检测样品（液态奶）于一个干净干燥的5ml提取管中，（待检测样品为新鲜生奶时，需与纯水1:3稀释后，为待检测样品）。

3.将放有待检样品的5ml提取管放入恒温金属浴孔中预热5min左右。

4.用滴管吸取5滴已预热充分的待检样品（预热后奶样）滴加到试剂板加样孔。

【使用步骤】1、在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡恢复至室温，并按照说明书“样品处理”这一步进行样品预处理；2、从原包装袋中取出试剂板，水平放置于观察者正面，打开后请立即使用；3、将检测卡平放，用滴管吸取待检样品溶液，垂直加3滴（约120μl）于加样孔中，加样后开始计时；4、结果应在3-5分钟读取，其他时间判读无效。

【结果判断】◆阴性（-）：检测T线出现，显红色，对照线C线显色，表示样品中抗生素浓度低于检测限或无抗生素残留。

◆阳性（+）：检测T线不显色，只有对照线C线显色。

◆无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已失效。

【注意事项】1、立即取用刚挤出的生鲜奶进行检测可能发生问题，最好先静置2小时以上再进行检测；2、检测卡请在保质期内一次性使用；3、检测时避免阳光直射和电风扇直吹；4、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面；5、滴管不可混用，以免交叉污染；6、实验遇到的任何问题，请与供应商联系。

7、抗生素过敏者使用时请注意自我保护。

【特异性】本产品与氯霉素、链霉素、磺胺类药物无交叉反应。

β-淀粉酶（β-AL）活性检测试剂盒说明书（DNS显色法）微量法UPLC-MS-4172100T/48S试剂名称规格保存条件试剂一液体35mL×1瓶常温保存试剂二液体10mL×2瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2支2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；2、试剂二：临用前取取1支试剂三加入到1瓶试剂二中，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂2-8℃保存4周；3、标准品：10mg无水葡萄糖。

临用前加入1mL蒸馏水配制成10mg/mL的标准溶液，2-8℃保存两周。

淀粉酶负责水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。

β-淀粉酶(EC3.2.1.2)从淀粉的非还原端切开α-1,4糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。

α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。

根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。

Starchα-AL Reducing SugarReducing Sugar+3,5-dinitrosalicylic acid3-Amino-5-Nitrosalicylate(540nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g样本，加入0.8mL蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取15min，每5min振荡1次，使其充分提取；6000g，常温离心10min，取上清液加蒸馏水定容至10mL，摇匀，即淀粉酶原液。

吸取上述淀粉酶原液1mL，加入4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α+β）淀粉酶总活力的测定。

肠道细菌快速药敏试剂盒(比色法)
药品名称：
通用名称：肠道细菌快速药敏试剂盒(比色法)
英文名称：RAPID ATB E4
成份：
RAPID ATBE4试条+干燥剂：氨苄西林、头孢吡肟、阿莫西林-克拉维酸、庆大霉素、替卡西林、妥布霉素、替卡西林-克拉维酸、奈替米星、哌拉西林、阿米卡星、哌拉西林+他唑巴坦、四环素、亚胺培南、氯霉素、头孢噻吩、复方新诺明、头孢唑啉、奈啶酸、头孢西丁、诺氟沙星、头孢孟多、氧氟沙星、头孢呋辛脂、环丙沙星、头孢呋辛、左氟沙星、头孢曲松、磷霉素、头孢他啶、呋喃妥英；
孵育盖；使用说明书。

产品有效期：2-8℃下避光保存，有效期12个月。

附件：
注册产品标准，产品说明书。

适应症：
该产品用于测定可导致腹泻、血流感染、尿路感染的肠道细菌在孵育4.5-5小时
后对抗生素的敏感性。

用法用量：
暂无
不良反应：
暂无。

禁忌：
暂无。

注意事项：
暂无。

贮藏：
暂无
有效期：
暂无
标准文号：
国食药监械(进)字2012第2402778号。

专利名称：检测β-内酰胺酶的试剂盒
专利类型：实用新型专利
发明人：何方洋,万宇平,冯才伟,冯静,汪善良,罗晓琴,何丽霞,赵正苗,冯才茂,崔海峰,李勇,王建霞
申请号：CN201020579035.2
申请日：20101021
公开号：CN201852842U
公开日：
20110601
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本实用新型提供了一种检测β-内酰胺酶的试剂盒，试剂盒包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶包括8个试纸条和两个微孔试剂条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，其中一个微孔试剂条冻干有头孢类药物单克隆抗体-胶体金标记物，另一个微孔试剂条中冻干有青霉素药物，在反应膜具有包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物构成的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体构成质控线。

本实用新型试剂盒具有便携性好，灵敏度高，检测时间短等特点，可以在β-内酰胺酶检测中发挥重要作用。

申请人：北京勤邦生物技术有限公司
地址：102206 北京市昌平区回龙观镇生命园路29号创新大厦B座236、240室
国籍：CN
更多信息请下载全文后查看。

一种凝胶培养基中β-内酰胺酶的酶活力定量检测方法
1. 凝胶培养基中β-内酰胺酶的酶活力定量检测方法是一种用于测量细菌中β-内酰胺酶酶活性的方法，它可以通过测量底物的降解速率来确定酶的活力。

2. 酶活力定量检测方法最常用的底物是含有β-内酰胺环的化合物，例如酶对其进行水解产生胺类产物。

许多酶活性检测方法使用人工合成的底物，例如酚红，其水解生成的胺类产物可以通过吸光度测量来确定酶活力。

3. 该方法的原理是，在凝胶培养基中，添加一定浓度的底物，并培养一段特定的时间，然后通过测量培养基中胺类产物的浓度变化来获得酶的活力。

4. 实验首先制备含有合适浓度底物的凝胶培养基样品，并将其分配到培养皿中。

然后将待测的菌株接种于培养皿中，并在一定温度下培养。

5. 在培养一定时间后，可以使用薄层层析法将培养基中的胺类产物与底物分离。

通过比较样品与标准品在层析板上的迁移距离，可以确定胺类产物的浓度。

6. 利用分光光度计测量胺类产物的吸光度，通过构建标准曲线，可以得到吸光度与胺类产物浓度的线性关系。

然后根据酶水解底物产生的胺类产物的浓度变化来确定酶活力。

7. 在进行实验时，需注意控制培养温度、培养时间和培养基pH等因素，以确保实验结果的可靠性。

8. 该方法相比其他方法具有较高的灵敏度和准确性，用于研究β-内酰胺酶的特性和抗生素抗性机制具有重要意义。

9. 在实际应用中，该方法可以用于筛选抗生素敏感性菌株和评估β-内酰胺酶抗性的传播情况。

10. 酶活力定量检测方法在药物研发和临床药物监测中具有广泛的应用前景，有助于指导临床用药和制定治疗方案。

β-内酰胺酶及其活力测定法培养基胨15g甘油50g氯化钠4g0.1％硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)溶液0.5ml枸橼酸钠5.88g20％硫酸镁(MgSO4·7H2O)溶液1ml磷酸氢二钾4g肉浸液1000ml混合上述成分，调节pH值使灭菌后为7.0～7.2，分装于500ml锥形瓶内,每瓶80ml,在115℃灭菌30分钟。

酶溶液的制备取蜡样芽孢杆菌［Bacillus cereus CMCC(B)63301］的斜面培养物,接种至上述一瓶培养基内,在25℃摇床培养18小时后，取此培养物接种至其余各瓶培养基内，每瓶接种10ml，同时每瓶加入无菌青霉素4500单位，在25℃摇床培养24小时，再加无菌青霉素2万单位，继续培养24小时，再加无菌青霉素2万单位,继续培养24小时,离心沉淀菌体，调pH值至约8.5,用滤柱滤过除菌，滤液用无菌操作调pH值至近中性后，分装于适宜容器内，在10℃以下贮存，备用。

酶活力测定法青霉素溶液称取青霉素钠（钾）适量，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)溶解成每1ml中含青霉素1万单位的溶液。

青霉素酶稀释液取青霉素酶溶液，按估计单位用磷酸盐缓冲液(pH7.0) 稀释成每1ml中约含青霉素酶8000～12 000单位的溶液，在37℃预热。

测定法精密量取青霉素溶液50ml,置100ml量瓶中，预热至37℃后，精密加入已预热的青霉素酶稀释液25ml，迅速混匀，在37℃准确放置1小时，精密量取3ml，立即加至已精密量取的碘滴定液(0.01mol/L)［精密量取碘滴定液(0.1mol/L)10ml，置100ml量瓶中，用醋酸钠缓冲液(pH4.5)稀释至刻度］25ml中,在室温暗处放置15分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L) 滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失。

空白试验取已预热的青霉素溶液2ml，在37℃放置1小时，精密加入上述碘滴定液(0.01mol/L)25ml，然后精密加青霉素酶稀释液1ml，在室温暗处放置15分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定。