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安捷伦液相色谱仪常见问题解决方案 液相色谱解决方案

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第 1 页 共 6 页 安捷伦液相色谱仪常见问题解决方案 液相色谱解决方案

1、基线波动的原因？

基线波动有可能与试验室的温度及湿度变化有关系。需确保室温及湿度稳定，将安捷伦液相色谱仪从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细管进行隔热保温。

2、安捷伦液相色谱仪—什么原因导致基线毛刺？

这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来进行确认,假如毛剌消失，则很有可能是由于流动池内有气泡。需要冲洗流动池。假如毛剌仍旧存在，则需检查检测器本身的电噪音有关。

3、如何削减基线噪音？

无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱，对样品做合适的 第 2 页 共 6 页 前处理以避开污染，并使用HPLC级别的溶剂。连续噪音有可能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵，请先关泵停掉流量，监测基线。假如此时基线平稳，则噪音可能与泵有关系。使用ChemStation在线诊断或LC手持掌控器检查泵方面的故障。假如停泵后噪音连续存在，则说明噪音与检测器有关。首先，请尝试更换灯。假如问题仍旧存在，则请厂家联系联系。

4、如何避开液相基线飘移？

基线向上飘移表明系统中有污染。请冲洗色谱柱，净化样品，然后使用新溶剂。向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波动的原因。减小室温变化，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细管保温隔热。向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是HPLC级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸取。

5、如何排出流动相/流动池中的气泡？

避开流动相中产生气泡的方式是将流动相经脱气装置进行脱气。假如没有脱气装置，则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调整流动池中的背压，但 第 3 页 共 6 页 必需注意不要超过流动池的最大压力，否则会造成流动池漏液或流动池损坏。假如流动池中显现气泡，则先摘下色谱柱，用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。将异丙醇以较大的流速注入流动池。直到基线上看不到尖峰为止。气泡就应当清除掉了。

液相色谱仪的原理就是利用待分别的各种物质在两相中的调配系数、吸附本领等亲和本领的不同来进行分别的。使用外力使含有样品的流动相气体、液体、通过一固 定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。液相色谱仪的保养：1、至少每天进行一次检漏。2、泵正在带压工作时，不可拆卸其部件除非有阅历的维护和修理人员在进行故障处理、。3、配制两种或两种以上洗脱液时，确定要先脱气再使用，保证流动相系统中不要形成气泡。4、定期检查泵的润滑，只使用仪器说明书指定的润滑油。5、定期检查检测器噪声、漂移，定期进行检测器校正。6、除非实践证明其它纯度级别的溶剂可用，否则使用高效液相色谱流动相专用试剂。7、更换溶剂时，确定要对系统进行冲洗。假如两种溶剂互不相溶，则应先用与这两种溶剂都能互溶的溶剂进行冲洗，再用新溶剂进行冲洗。8、柱子不论何时都不能拆卸下接头，以免损失柱效，废掉柱子。

高效液相色谱仪的构成与特点

高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分构成。储液器中的流动相被高压泵打入系统， 第 4 页 共 6 页 样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相） 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的调配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附— 解吸的调配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分别成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

高效液相色谱仪紧要有进样系统、输液系统、分别系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的构成与特点。

1.进样系统 一般接受隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。

2.输液系统 该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。 第 5 页 共 6 页 高压泵的一般压强为l.47～4.4X107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高辨别率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而更改，包括更改洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质（即使仅有一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分别。

3.分别系统 该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管），内径为2～5mm，由优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）.固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000？）和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样），或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分别出来。

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另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高辨别率是有益的。依据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高辨别率的道理。 再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可加添层析柱的效率。

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安捷伦液相色谱使用问题与解决方案

安捷伦液相色谱使用问题与解决方案

安捷伦液相色谱使用问题与解决方案 Agilent LC 问题与答案

一．什么原因导致液相色谱仪压力过高？ 可能的原因：

1. 排气阀里面的 PTFE 滤蕊堵塞。

2. 压力上限设置太低。

3. 压力传感器堵塞。

4. 建议的措施：

1. 打开排气阀。如果压力依然很高，则更换排气阀内的 PTFE 滤芯。

2. 查看软件的压力上限设置并确保设置值适于分析。

3. 检查系统内的堵塞部位。（如下所述） 要检查是否堵塞，请采用隔离系统的方法来排除

故障： 将安装的色谱柱、预色谱柱和预色谱柱过滤器摘开。

①. 如果压力恢复到正常值，则在色谱柱的位置安装 ZDV 接头。 A 如果压力正常，则色谱柱、预色谱柱或过滤器是产生问题的原因。请进行更换。 B 如果压力仍然很高，则在色谱柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入检测器或从其通出的管路）。

②. 如果取出色谱柱后压力依然很高，则检查从排气阀到自动进样器的管路。如果压力正常，则使用进样步骤命令将自动进样器的进样阀切换到旁路状态。 A 如果压力正常，则说明自动进样器堵塞。请检查针、针座、针座毛细管和转子密封垫。 B 如果压力依然很高，则检查从进样六通阀到色谱柱入口之间的管线.。

二．改变填料孔径大小对液相色谱分离有什么影响？

填料孔径越小，允许的流动相线速度越高。最佳流动相线速度取决于固定相的颗粒大小。在最佳线速度时，色谱柱生成的理论塔板数最多。对于内径为 4.6mm 的色谱柱，10um 的颗粒流动相线速度为 0.75ml/min 或 5um 的颗粒流动相线速度为 1.5ml/min 时，塔板数最多

三．如何避免峰拖尾和峰分叉？ 与色谱柱相关的原因及处理方法

1 色谱柱污染; 处理方法:清洗或更换色谱柱

2 色谱柱填料有问题;处理方法:反冲色谱柱或更换柱头过滤片 3 色谱柱中间出现间断;处理方法:更换色谱柱或填充空隙 4 保护柱失效;处理方法:更换保护柱

液相色谱仪的操作与基线问题处理

液相色谱仪的操作与基线问题处理

第 1 页 共 8 页 液相色谱仪的操作与基线问题处置

安捷伦液相色谱仪的日常维护及保养方法如下，一起来看看

1、手动进样器：

平常应当注意使用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗；假如显现漏液现象，原因极可能为转子密封垫磨损或污染，一般要申请维护和修理或更换配件。

2、排液阀：

此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损，可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。

3、单向阀：

如碰到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀显现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中，切记不可与安装方向倒置超洗！

4、工作站：

显现死机可重起计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障；或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。

5、过滤器：

当色谱峰显现异常情况时，有可能是此部件被污染，拆下用异 第 2 页 共 8 页 丙醇超洗或更换过滤垫片。

6、吸滤头：

特别情况下可拆下滤头抽取以判定其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判定其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；清洗不成功则需要更换。

7、流动相的抽作要求：

高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐肯定要过滤；

流动相脱气至关紧要（可采纳抽滤，超声波脱气等方法）

8、流通池：

在色谱峰不正常时会可能是此部件补污染。可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗（可依据说明书进行操作或申请维护和修理）。

9、泵头：

泵头漏液或显现其它故障一般要申请维护和修理（如漏液，或更换柱塞杆及其密封垫等）

泵压不稳：

1、泵头有气泡——流动相脱气/大流量冲洗泵/用注射器抽取流动动相

2、单向阀故障——清洗 第 3 页 共 8 页 若上述操作仍不能解决，可用异丙醇冲洗流动（无色谱柱冲洗，由手动进样器直接进检测器），流量为3—4ml/min，冲洗50分钟左右，然后重新安装色谱柱，更换流动相平衡，如此再不能解决泵压波动故障，可申请更换配件。

安捷伦气相色谱仪测定常见问题解答 气相色谱仪解决方案

安捷伦气相色谱仪测定常见问题解答 气相色谱仪解决方案

第 1 页 共 10 页 安捷伦气相色谱仪测定常见问题解答 气相色谱仪解决方案

在利用安捷伦气相色谱仪测测定物质时，常常回碰到一些问题，导致试验不能正常进行，下面我们来看看这些问题该怎么去解决

一、有什么方法能替代液液萃取？

固相微萃取、加速溶剂提取、微波萃取都是现在开展比较广泛的前处理方法

二、色谱柱老化一般怎么处理好一些？

1、程序升温老化效果较好，多做几个来回；

2、柱子确定要接上载气；

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3、不要接检测器一端；

4、紧密柱子zui高使用温度，应在低于此温度20度以下老化

三、安捷伦气相色谱仪气相进样溶剂可以选择MtBE吗？与丙酮相比哪个更好呢？

可以的，只是要看你的目标物在那个溶剂系统里面溶解性更强些，基质效应更小。

四、pgm是什么意思？

Pgm是“program”的缩写，指的是这个柱子在程序升温的情况下可以短时间保持在这个温度。

第 3 页 共 10 页 五、安捷伦气相色谱仪酒类样品进样 是顶空进样吗？

不愿定，这个要看对酒类中什么样的物质感喜好，假如是沸点较低的挥发性有机物，那用顶空进样就可以得到较好的试验重复性。

六、安捷伦气相色谱仪标样溶于甲醇，进样时用丙酮稀释后，峰拖尾，且基线较高，有什么方法可以改善吗？是用正己烷溶解的？

估量是不分流进样，可以调大隔垫吹扫的流量

七、ecd一般用什么 试剂溶解标样 好一些？是不是 甲醇 乙腈 丙酮 一类 对ecd进样不好

不要用电负性较强的溶剂，甲醇、乙腈等的确要尽量少用，但丙酮还好。

第 4 页 共 10 页 八、乙酸乙酯 对ecd合适吗，还有甲苯、正己烷、环己烷，

虽然正己烷对ecdzui合适，但好多农药标样在正己烷溶解度低，只能溶解在强极性溶剂中，在这种情况 有需要ecd检测 怎么配标样比较好？

对于ECD，尽量不要用电负性大的溶剂，但乙酸乙酯算中等极性，在某些情况下还是可以考虑使用的。

九、NPD是不是 也对 强极性试剂 也是不太好？

Agilent-HPLC使用过程中常见问题及解决方法

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精品

可编辑 Agilent HPLC使用过程中常见问题及解决方法

一、如何处理 HPLC 中的盐带来的问题？

很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。建议在清洗时将水加热后再冲洗，这样既可以将盐溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物质，会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出，基线噪音……

二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护

泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。

1. 流动相的准备

为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损，流动相（特别是水相）应该新鲜配置并且过滤。上机前对流动相进行适当的超声脱气，以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。

2. 比例阀溶剂通道的分配

四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道，建议将盐溶液接在下面的通道（A或D），将有机溶剂接在上面的通道（B 或C）上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。

3. 过滤白头的维护

过滤白头位于排气阀内，是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯，用于过滤流动相中的微粒，是经常需要维护的地方。当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白精品

可编辑 头是否阻塞了。判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次，更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫，如果发现变形，也应及时更换。 如果过滤白头更换过于频繁，则需要认真检查一下流动相的品质，确保流动相上机前过滤，确保使用了合适的过滤膜。如果流动相有长菌现象，除了配置新的溶剂，还应对相应的溶剂管线和脱气机通道进行彻底的清洗。

4. 柱塞杆与柱塞密封圈的维护