安捷伦液相常见问题
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HPLC故障排除
症状类型 可能的原因 解决方案
基线噪声大 随机性-污染物积聚 冲洗柱;净化样品;使用HPLC级溶剂
连续性—检测器灯故障 更换紫外灯（寿命为1000小时)
偶然性-外部电气干扰 使用LC系统专用稳压器
样品量过大 进样量应为流动相进样量的1/6
双峰 样品量过大 进样量应为流动相进样量的1/6
进样溶剂过强 使用较弱的进样溶剂或流动相
滤芯堵塞 更换并使用0。5μm孔隙率的在线过滤器
柱有空隙或气沟 用玻璃珠或填料填充空隙；重填柱
进样器流路不通畅 更换进样器转子
柱头有空隙 使用填料或玻璃珠填充柱顶部
柱上样品超载 使用更高负载量的固定相；增加色谱柱内径;减少样品量
单峰—存在干扰性组分 净化样品；预分离
拖尾峰 开始出双峰 请参见双峰
存在未扫的死体积 减少接头的数量;确保进样器密封垫紧密；确保接头正确固定
碱性化合物-硅醇相互作用 换成聚合物固定相
碱性物质—硅醇相互作用 使用更强的流动相或添加竞争碱(例如,三甲胺)
硅胶基—柱降解 使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻
峰展宽 进样量过大 降低进样溶剂的强度以集中溶质
进样阀中的峰扩散 在进样前/后引入气泡以减少扩散
数据系统的采样速率过低 增大采样
检测器时间常数低 调节时间常数使之与峰宽匹配
流动相粘度过高 提高柱温
检测器流通池容积过大 使用尽可能小的池容积(系统中无热交换器）
注射器体积过大 减少进样量
保留时间长 使用梯度洗脱或较强的流动相
压力波动 单向阀泄漏 更换单向阀
泵密封垫泄漏 更换泵密封垫
微粒积聚 过滤样品;在线过滤器;过滤流动相
压力渐增 微粒积聚 过滤样品；在线过滤器；过滤流动相
水/有机系统—缓冲液沉淀 测试缓冲液—有机混合物；确保兼容性
保留时间超出总渗透体积 体积排阻—特异性相互作用 添加流动相改性剂或更改溶剂
保留时间不断变柱温不断变化 使柱恒温;绝缘；保证实验室温度恒动 定
平衡时间不足以适应梯度洗脱要求,或梯度洗脱流动相起变化 确信在溶剂改变或梯度结束后至少10个柱容积通过色谱柱
流动相组分选择性蒸发 减少氦气的剧烈脱气;保持溶剂贮器盖好;制备新的流动相
缓冲能力不足 用〉20mM浓度的缓冲液
在线流动相混合不一致 保证梯度系统输送恒定组成;与手动制备流动相核对
污染积聚 冲洗色谱柱以去除污染物
最初几次进样-吸附在活性部位 用浓样品进样冲洗柱，使其处于正常状态
保留时间逐渐缩短 流速在增加 检查泵以确保正确;否则需重调
柱上进样超载 减少样品
键合固定相的流失 保持流动相pH值在2—8.5间
保留时间逐渐增加 流速在减慢 解决液流中的漏液现象,更换泵密封垫,检查泵的涡流和气泡
硅胶填料的活化点 使用流动相改性剂
键合固定相的流失 保持流动相pH值在2—8.5间
流动相组成在变化 确保流动相容器盖好
硅胶填料的活化点 流动相中加竞争碱
硅胶填料的活化点 固定相用更高覆盖度的填充料
灵敏度问题 峰位于检测器线性范围之外 稀释或浓缩使之处于线性区内 最初几次进样-样品在样品池或柱中被吸附；自动进样器;流路阻塞 用浓样品处理样品池/柱
自动进样器流路阻塞 检查流量情况，确保无阻塞现象
进样器样品定量管未充满 确保样品池中已充满样品
在样品制品时有关的样品流失 用内标法在制备样品,优化样品制备方法
柱平衡时间减慢（离子对现象） 长链离子对试剂平衡时间慢 使用较短的烷链试剂
1。常见色谱故障——压力波动
可能原因：溶剂进口过滤芯堵塞；溶剂未脱气;泵的密封垫老化;出口单向阀失效；主动阀失效。
最常见原因:泵内有气泡
2. 常见色谱故障——压力过低
可能原因：溶剂进口过滤芯堵塞；连接管路泄漏或其它备件(泵头密封垫)；溶剂或流速改变；主动阀失灵；四元比例阀失灵；单向出口阀失灵；色谱柱失效（固定相流失)。
3. 常见色谱故障—-压力过高
可能原因：柱子进口过滤芯被污染;PURGE(排气）阀过滤芯被污染；色谱柱被污染;连接管路，尤其是针座毛细管堵塞；进样器旋转密封阀被堵塞;进样针或针座被阻塞
4. 常见色谱故障——基线噪音
是—检测器？
基线噪音——停泵-—噪音是否依然存在—-—
否-泵或流动相?
其它要考虑的问题：是否改变了流动相的组成?是否改变了检测波长？在你的仪器上使用的最后的流动相是什么？流动相是否相溶？流动相是否干净？
如何排除流动相中的气泡？如何排出流动池中的气泡？
避免流动相中产生气泡的最佳方式是将流动相经脱气装置进行脱气。如果没有脱气装置，则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中的背压，但必须注意不要超过流动池的最大压力，否则会造成流动池漏液或流动池损坏。 如果流动池中出现气泡,则先摘下色谱柱，用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。将异丙醇以较大的流速注入流动池。直到基线上看不到毛刺为止。气泡就应该清除掉了.
如何减少基线噪音?
无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱，对样品做合适的前处理以避免污染，并使用 HPLC 级别的溶剂。
连续噪音有可能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵，请先关泵停掉流量，监测基线。如果此时基线平稳，则噪音可能与泵有关系。使用 ChemStation
在线诊断或 LC 手持控制器检查泵方面的故障。如果停泵后噪音继续存在，则说明噪音与检测器有关。首先,请尝试更换灯。如果问题依然存在，则请与安捷伦科技公司联系.在中国,请拨打 800 820 3278.
什么原因导致基线毛刺？
这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来进行确认,如果毛剌消失，则很有可能是由于流动池内有气泡。需要冲洗流动池。如果毛剌仍然存在，则需检查检测器本身的电噪音有关。如果需要更多帮助,则请致电安捷伦科技公司.在中国,请拨打 800 820 3278.
色谱图上出现鬼峰。如何消除？
可能的原因：上次进样遗留组分产生；有污染；有气泡；色谱柱问题;保护柱失效。
建议用户:做样品后应保证有足够时间冲洗色谱柱，有必要的话在运行结束后使用更强溶剂冲洗色谱柱；
洗脱原色谱柱中得原有污染；为确保系统中没有气泡，只使用彻底脱气后的溶剂；更换色谱柱；
更换保护柱；检查流动相纯度；检查样品中的其它成分。
如何决定何时更换保护柱？
许多色谱人员在测试一定数量的样品和标准样后更换保护柱。样品数量通常由实验决定,在长时间未更换保护柱而造成分析柱破损时或样品分析数量增加，而保护柱需要更换.
保护柱的更换频率通常根据经验而定，按照每个方法/样品类型综合考虑，但是许多分析人员会在完成一定数量的样品分析或测试一些柱的性能指标（例如增加10%峰展宽或拖尾因子，或降低10%的柱效(塔板数））后更换保护柱。
如何开发一个反相 HPLC 的方法？有什么经验或建议吗
开发一个RPLC方法有很多不同的途径。目前，很多HPLC专家的一般经验建议，方法开发可从一个低 pH值（pH 2-3。5)开始，使用C8或C18色谱柱。他们还建议使用共轭酸-共轭碱作缓冲溶液，如浓度为20-50mM的NaH2PO4/H3PO4.其他可用于控制pH值的添加剂包括但不限于：0.05-0.1% v/v三氟乙酸（TFA)、0。1—0。4%甲酸、0.1—1%乙酸和用磷酸调节pH值的水（pH最高为2。9以确保pH控制正常)。
有关更多信息，请参考小分子方法开发指南。
由于方法的重要性、范围和/或使用的不断增加，请务必记住始终同时进行方法开发和方法确认.方法确认可以在方法开发的开始阶段就进行简单的选择性、进样和分析重复性测试。 什么原因导致液相色谱仪压力过高？
可能的原因:吹扫阀的PTFE滤芯堵塞；压力上限设置太低；压力传感器堵塞
建议的措施：打开排气阀。如果压力依然很高，则更换排气阀的PTFE滤芯；查看软件的压力上限设置并确保设置值适于分析；检查系统内的堵塞部位（如下所述）:
要检查是否堵塞，请采用隔离系统的方法来排除故障:将安装的色谱柱、预色谱柱和预色谱柱过滤器摘开。
1.如果压力恢复到正常值，则在色谱柱的位置安装ZDV接头。
如果压力正常，则色谱柱、预色谱柱或过滤器是产生问题的原因。请进行更换。
如果压力依然很高，则在色谱柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入检测器或从其通出的管路)。
2.如果取出色谱柱后压力依然很高,则检查从排气阀到自动进样器的管路。如果压力正常，则使用进样步骤命令将自动进样器的取样阀切换到路模式.
如果压力正常，则说明自动进样器堵塞.请检查针、针座、针座毛细管和转子密封垫。
如果压力依然很高，则检查从进样六通阀到色谱柱入口之间的管路.
何时应更换泵密封圈？
泵密封圈应定期更换.建议每个液相色谱仪用户建立一个泵密封圈更换的定期检修计划。这应根据泵的使用和流动相组成情况而定.由于它们易磨损的特点，盐缓冲大大加速密封圈和活塞的磨损。
在活塞下面的泵头上检测到泄漏时，保留时间不稳定时,或系统压力不稳定时，都应更换密封圈。请按照以下程序更换所维护的泵的密封圈.
当LC检测器灯强度测试没有通过时我该如何办?
强度测试是内置的UV / Vis检测器诊断测试功能。 是用于测试光学单元在全波长范围内的性能.安捷伦化学工作站在多个波长范围测量检测器的光谱强度,针对每个范围的极限值报告Pass（通过)/ Fail(失败）状态。
这一测试的失败是由于:灯老化了；流通池中有吸光的溶剂/空气泡；流通池脏了/污染了；光学窗口/透镜等被污染了.
要纠正这些问题，需要在流通池充满水/并用足够的时间让检测器稳定。检查开灯的运行时间，并当其寿命到期时更换之。用甲醇/无棉布清洗光学窗口。
1200VWD和1200VWD S有什么区别？
1200 VWD SL能够实现超快速LC分析，因为其数据采集速率为27Hz到55Hz。而1100 VWD的数据采集速率为14HZ。
标准HPLC柱和RRLC柱有何区别？
一般来说，RRLC （快速分离液相色谱）柱有较小的填料粒度- 1。8微米，而传统的柱为2到10微米.
由于填料粒度小，故比普通柱的操作压力（400 Bar)高(600 Bar ）。
我刚刚更换了1100模块的主板,得到出错信息’Synchronization Lost'或者它不能与其他模块通讯. 问题是什么？
如果一个固件版本为A。05.11或更高的主板安装在已有的模块上，所有模块都必须升级为固件版本
