微生物实验
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环境因素
对微生物生长的影响
班级：食品科学与工程102班
指导老师：郭玉宝
学号：3100401214
姓名：何月
实验目的：
1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。
2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。
实验原理：
微生物的生长繁殖受外界因素的影响。
物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。
1、生物因素
在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。
不同抗生素的抗菌谱是不同的。
当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。
培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。
2、化学消毒剂
常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。
燃料和表面活性剂。
实验器材：
1、菌种
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌
2、培养基
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
3、溶液和试剂
青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭
4、仪器和其他用品
酒精灯，接种环，玻璃棒，报纸，牛皮纸，镊子，无菌平皿，无菌滤纸片，滴管，无菌滤纸片，涂布棒，记号笔，高压蒸汽灭菌锅、三角瓶，量筒，棉线
实验过程：
一、生物因素对微生物生长的影响
（1）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基熔化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀。
（2）贴滤纸条：无菌操作，用镊子取无菌滤纸条浸入青霉素溶液中润湿，在容器内壁沥去多余溶液，再将滤纸贴在平板上。
（3）接种：无菌操作，用接种针分别取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌，从滤纸条边缘分别垂直向外划线接种。
（4）培养、观察：对上述平板导致于37℃，保温24h，观察细菌生长状况并记录。
二、化学消毒剂对微生物生长的影响（滤纸片法）
（1）菌液制备：无菌操作将金黄色葡萄球菌菌接种至装有
5mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管中，37℃培养18h。
（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀。
（3）涂平板：无菌操作吸取0.2mL金黄色葡萄球菌菌液加入上述平板，用无菌三角涂棒涂布均匀。
（4）标记：将上述平板皿底用记号笔分成三等分，分别标明一种消毒剂名称。
（5）贴滤纸片：无菌操作，用镊子取无菌滤纸片分别浸入各种消毒剂（2.5%碘酒、5%石炭酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭）在容器内壁沥去多余液体，再将滤纸片分别贴在平板上相应位置（不要在培养基表面拖动滤纸片）
（6）培养，观察：将上述平板倒置于37℃保温培养1d，观察
并记录抑（杀）菌圈大小。
实验结果:
一、青霉素对微生物生长的影响
由图可知，
青霉素对金黄
色葡萄球菌有
明显的抑制作
用，对大肠杆
菌几乎没有抑
制作用，对枯
草芽孢杆菌也
几乎没有抑制，但抑制作用比对大肠杆菌的抑制作用大。
原因：因为青霉素为窄谱抗生素，只对革兰氏阳性菌有抑制作用。
所以对大肠杆菌几乎没有抑制作用，对金黄色葡萄球菌抑制作用较大。
枯草芽孢杆菌也为革兰氏阳性菌，但是它的抗逆性较强，所以抑制作用不大。
二、滤纸片法检测的各种化学消毒剂对细菌的作用效果如下
75%乙醇可能是因为挥发作用太快，导致没有产生抑菌效果。
思考题：
（1）根据青霉素的抗菌机制，你的试验平板上出现的抑菌带是致死
效应还是抑制效应？若抑菌带在隔一段时间后又长出少数菌落，你
如何解释这一现象？
答：出现的抑菌带是抑制效应。
抑菌带在隔一段时间后有长出少
数菌落，可能原因如下：1，抑菌物质失效；2，该菌产生抗性突变，可以分解抑菌物质；3，落入了杂菌，抑菌物质不能抑制杂菌的生长。
（2）利用滤纸片法测定化学消毒剂对微生物的影响时，影响抑菌圈大小的因素有哪些？抑菌圈大小能否准确反映化学消毒剂抑菌能力
的强弱？
答：影响抑菌圈大小的因素：1、培养条件：温度、湿度、培养
基PH值。
2、菌液浓度，制板时培养基温度。
3、滤纸片中消毒剂
的浓度，消毒剂效价等。
抑菌圈大小只能在一定程度上反应杀菌能力差异，但不能准确反映。
