革兰氏染色法的原理和步骤

简要方法步骤:涂片→干燥→冷却→结晶初染→碘液媒染→酒精脱色→番红复染→干燥→镜检。

原理:与两类细菌的细胞壁成分笔结构有密切关系。

革兰氏阴性菌的细胞壁中含较多的类脂质，而肽聚糖含量较少。

当用酒精脱色时，类脂质被溶解，从而增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后则呈现复染剂的颜色。

而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少,经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，因而细胞仍保留初染时的颜色。

革兰氏染色原理步骤革兰氏染色是用于细菌分类和鉴定的一种常用染色方法。

其步骤如下：1. 准备好细菌培养物。

将待染色的细菌培养物均匀涂布在玻璃片上，形成细菌涂片。

2. 固定细菌涂片。

将涂片在火焰上加热，杀死细菌并使其附着在玻璃片上。

3. 滴加革兰染色液。

将革兰染色液滴在细菌涂片表面，使其完全覆盖细菌。

4. 革兰染色液浸渍。

将细菌涂片放置在革兰染色液上，静置约1分钟，确保染色液充分浸渍细菌。

5. 温和洗涤。

用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的革兰染色液。

6. 涂紫晶染色液。

将涂片放置在紫晶染色液上，静置约1分钟，使细菌染成紫色。

7. 温和洗涤。

用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的紫晶染色液。

8. 加碘液。

将碘液滴在细菌涂片上，静置1分钟，使细菌形成革兰氏阳性细菌与革兰氏阴性细菌的复合物。

9. 温和洗涤。

用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的碘液。

10. 酒精去色。

用75%乙醇溶液滴在细菌涂片上，静置10-30秒，直到溶液从细菌涂片上下滴。

11. 温和洗涤。

用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的酒精。

12. 涂甲基蓝染色液。

将涂片放置在甲基蓝染色液上，静置30-60秒，使细菌染成蓝色。

13. 温和洗涤。

用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的甲基蓝染色液。

14. 倒置晾干。

将细菌涂片倒置在干净的滤纸或架子上晾干。

完成上述步骤后，通过显微镜观察细菌涂片即可看到革兰氏染色的结果，革兰氏阳性细菌呈紫色，革兰氏阴性细菌呈蓝色。

革兰氏染色机理介绍革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，能够将细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类。

本文将详细介绍革兰氏染色的原理、步骤和应用。

原理革兰氏染色的原理是利用革兰阳性和革兰阴性细菌细胞壁的差异，通过染色后的颜色反映出两者的区别。

步骤革兰氏染色步骤如下：准备细菌样品1.取一份细菌培养液的样品。

固定细菌样品1.将细菌样品滴在洁净的玻璃片上。

2.用火焰将玻璃片加热，使细菌附着在玻璃片上。

染色1.用紫色碘溶液滴在固定的细菌样品上，静置1分钟。

2.用水冲洗碘溶液。

脱色1.将酒精滴在细菌样品上，直至从玻璃片上脱色。

染色1.用红色素溶液滴在细菌样品上，静置1分钟。

2.用水冲洗红色素溶液。

倒置晾干1.将玻璃片倒置在纸巾上晾干。

结果解读根据革兰氏染色的结果，可以得出以下结论：革兰阳性细菌革兰阳性细菌在染色后呈紫色，这是因为细菌细胞壁含有较多的革兰阳性染色颗粒。

革兰阴性细菌革兰阴性细菌在染色后呈红色，这是因为细菌细胞壁含有较少的革兰阴性染色颗粒。

应用革兰氏染色技术在微生物学领域有广泛的应用，包括但不限于以下方面：细菌分类革兰氏染色可以帮助鉴定不同类型的细菌，根据染色结果可以进行初步的分类和鉴定。

感染诊断医学上，革兰氏染色可以用于感染诊断，帮助医生判断细菌感染的类型和严重程度。

细菌研究在细菌研究领域，革兰氏染色常用于观察细菌形态和细胞壁结构的变化，为研究细菌的生长和繁殖机制提供基础数据。

食品安全革兰氏染色也可以用于食品安全领域，帮助检测食物中是否含有细菌污染物，保障食品的安全性和卫生标准。

总结革兰氏染色机理通过染色反映了革兰阳性和革兰阴性细菌细胞壁的差异。

通过上述步骤，我们可以得到染色后的细菌样品，并通过染色结果对不同类型的细菌进行初步分类和鉴定。

革兰氏染色在微生物学研究、临床医学和食品安全等领域有着广泛的应用。

革兰氏染色的原理和应用1. 原理革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它能够将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

革兰氏染色的原理基于细菌细胞壁的化学和物理性质的差异。

细菌的细胞壁结构对革兰氏染色起着重要作用。

细胞壁主要由肽聚糖和肽聚肌糖醇组成，革兰氏阳性菌的细胞壁更加复杂，主要由很多层的肽聚糖组成，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较为简单，只含有一层肽聚肌糖醇。

此外，革兰氏阳性菌的细胞壁中还含有一种叫做胆固醇的化合物，革兰氏阴性菌则没有。

革兰氏染色的步骤如下： 1. 将待染物固定在载玻片上。

2. 用结晶紫染料涂覆在待染物上，使其染色。

3. 用碘酒固定染料。

4. 用酒精洗去细胞表面的多余染料。

5. 用颜色反转（用洗去去色的酒精和洗去紫色染料的碘酒）后，用蔗糖溶液涂覆在细胞上，使之染色。

6. 用酒精洗去细胞表面的蔗糖。

7. 最后将待染物在显微镜下观察，根据颜色反转的效果将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

2. 应用革兰氏染色广泛应用于细菌学研究和临床诊断。

2.1 细菌学研究革兰氏染色可以帮助研究者在显微镜下直接观察到细菌的形态、结构和染色性质。

通过观察菌体是否染色、染色程度以及染色形态的差异，可以初步区分不同类型的细菌，并加深对其特征的理解。

此外，革兰氏染色还可以用于观察细菌的胞外结构，如菌丝、胞外多糖等。

2.2 临床诊断革兰氏染色也被广泛应用于临床诊断中。

通过对临床样本（如血液、尿液、脑脊液等）进行革兰氏染色，可以快速鉴定细菌感染的类型和数量。

这对于临床医生选择合适的抗生素治疗非常重要，因为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌对不同的抗生素有不同的敏感性。

2.3 医疗设施卫生监测革兰氏染色还可用于医疗设施卫生监测，通过对医疗设施表面、器械、空气等样本进行革兰氏染色，可以检测是否存在细菌污染。

这对于保障患者安全、控制医疗感染非常重要。

2.4 食品安全检查革兰氏染色也可以在食品安全检查中起到重要作用。

通过对食品样本（如肉类、蔬菜、水产品等）进行革兰氏染色，可以检测是否存在细菌污染和有害细菌。

革兰氏染色的原理流程及颜色反应下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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革兰氏染色的过程和原理
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，通过此方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。

该染色方法基于不同细菌细胞壁组成的差异，通过特定的染色步骤使细菌在显微镜下呈现不同的颜色。

革兰氏染色的过程包括以下几个步骤：
1. 取一片细菌培养物，涂抹在玻片上，使其形成薄膜。

2. 将涂片在火焰中烘烤，以使细菌附着在玻片上。

3. 将烘烤后的涂片浸入革兰氏紫染色剂中，静置数分钟。

4. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有紫色溢出。

5. 在涂片上滴加碘酒，静置一段时间。

6. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。

7. 滴加脱色剂（乙醇或乙醚）在涂片上，迅速冲洗。

8. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。

9. 滴加革兰氏染色剂（碱性洋红）在涂片上，静置1-2分钟。

10. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。

11. 用纸巾或吹风机轻轻吹干涂片。

12. 使用显微镜观察涂片下的细菌。

革兰氏染色的原理是基于细菌细胞壁的差异。

革兰氏阳性菌的细胞壁含有较厚的层状壁，并富含肽聚糖和穿孔蛋白，所以在革兰氏紫染色剂作用下会显现紫色。

而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，内层有脂多糖包裹，所以在革兰氏紫染色剂作用下不易显现出紫色。

革兰氏染色是一种常用的初步细菌分类方法，通过观察细菌在显微镜下的染色特性，可以初步判断细菌的类型，对于临床诊断和细菌研究都有重要意义。

革兰氏染色法的过程及原理一，过程1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。

固定时通过火焰l 一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。

2 ．染色( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。

( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。

( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。

( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。

( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。

以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。

( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。

二，原理革兰氏染色法（Gram stain ）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。

细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。

革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。

革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。

此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。

青霉素作用机制干扰细菌细胞壁的合成。

青霉素你的结果与细胞壁的成分粘肽结构中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。

革兰氏染色法的原理革兰氏染色法是一种最常用的细菌染色方法之一，它是由丹麦细菌学家克里斯汀·格拉姆（Christian Gram）于1884年发明的。

这种染色方法可以将细菌分为两类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

革兰氏染色法的原理是利用细菌细胞壁的化学成分差异，通过染色剂的作用，使得革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在显微镜下呈现不同的颜色。

在进行革兰氏染色法时，首先需要将待检测的细菌样本涂抹在玻片上，然后经过热固定，使细菌固定在玻片上。

接着，将碘液滴在细菌上，碘液可以使细菌细胞壁中的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都呈现出蓝紫色。

然后用酒精洗涤，革兰氏阳性菌由于细胞壁的特殊结构，可以保持蓝紫色，而革兰氏阴性菌则会被酒精冲淡。

最后再用碘液染色，使革兰氏阴性菌也呈现出蓝紫色，而革兰氏阳性菌则不受影响。

革兰氏染色法的原理主要是利用了细菌细胞壁的化学成分差异。

革兰氏阳性菌的细胞壁主要由大量的肽聚糖和穿链肽构成，而革兰氏阴性菌的细胞壁则含有较多的脂多糖。

由于革兰氏阳性菌的细胞壁结构较为复杂，具有较强的染色剂保持能力，因此在进行革兰氏染色时能够保持紫色，而革兰氏阴性菌的细胞壁结构相对简单，染色剂容易被洗去，因此在后续的酒精洗涤中会失去染色。

革兰氏染色法的原理虽然简单，但却具有重要的临床意义。

通过革兰氏染色法，医生可以快速准确地鉴别出细菌的类型，有助于选择合适的抗生素进行治疗。

此外，革兰氏染色法也是微生物学实验室中常用的一种方法，可以帮助科研人员进行对细菌的鉴别和分类。

总之，革兰氏染色法的原理是基于细菌细胞壁的化学成分差异，通过染色剂的作用，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

这种染色方法不仅在临床诊断中有重要意义，也在微生物学研究中发挥着重要作用。

通过了解革兰氏染色法的原理，我们可以更好地理解其在医学和科研领域的应用，为细菌研究和临床诊断提供更多的帮助。

简述革兰氏染色的原理革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它是由丹麦微生物学家克里斯汀·格拉姆于1884年发明的，用于区分细菌的结构特征。

革兰氏染色的原理是利用革兰氏染色试剂对细菌进行染色，通过细菌细胞壁的不同结构，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两种类型。

首先，让我们来了解一下革兰氏染色的步骤。

革兰氏染色的步骤通常包括以下几个步骤，准备细菌涂片、涂染、固定、染色、洗净和干燥。

在进行染色的过程中，革兰氏阳性菌会呈紫色或紫红色，而革兰氏阴性菌则呈蓝色或粉红色。

接下来，让我们来详细了解一下革兰氏染色的原理。

革兰氏染色的原理主要是利用细菌细胞壁的不同结构特点。

革兰氏阳性菌的细胞壁主要由厚层的壁多糖和穿过细胞壁的大量的穿透蛋白组成，这些穿透蛋白可以使革兰氏染色试剂在细菌细胞壁上形成紫色沉淀。

而革兰氏阴性菌的细胞壁则由较薄的壁多糖和较少的穿透蛋白组成，这使得革兰氏染色试剂在细菌细胞壁上形成蓝色或粉红色的沉淀。

革兰氏染色的原理可以通过以下几个方面来总结，首先，革兰氏染色试剂中的紫色染料结合到了革兰氏阳性菌的细胞壁上，形成紫色的沉淀；其次，革兰氏染色试剂中的蓝色或粉红色染料结合到了革兰氏阴性菌的细胞壁上，形成蓝色或粉红色的沉淀。

这样，通过观察细菌在显微镜下的染色情况，我们可以区分出革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

总的来说，革兰氏染色的原理是利用革兰氏染色试剂与细菌细胞壁的特定结构相互作用，从而实现对细菌的染色和区分。

通过这种方法，我们可以快速准确地区分出不同类型的细菌，对于临床诊断和细菌学研究具有重要的意义。

在实际操作中，革兰氏染色的原理为我们提供了一种简单而有效的方法来区分细菌类型，为医学诊断和细菌学研究提供了重要的帮助。

同时，革兰氏染色的原理也为我们深入了解细菌的结构特征提供了重要的实验手段。

综上所述，革兰氏染色的原理是利用革兰氏染色试剂与细菌细胞壁的特定结构相互作用，通过染色的方式区分出革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

革兰氏染色的原理
革兰氏染色是细菌学中最为常用的染色方法之一，其原理是利用革兰氏染色技术来将细菌区分成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。

具体原理如下：
在进行革兰氏染色时，首先将待检测的细菌样本涂在玻片上，然后通过以下几个步骤进行染色：
1. 涂以革兰染色剂（紫色）：首先将革兰染色剂（紫色）涂抹在玻片上，待其充分渗透。

2. 洗涤：用蒸馏水或生理盐水冲洗玻片，以洗去多余的革兰染色剂。

3. 涂以碘液：再将碘液涂抹在玻片上，待其充分渗透。

4. 洗涤：用蒸馏水或生理盐水冲洗玻片，以洗去多余的碘液。

5. 涂以解染剂（酒精/乙醇）：将解染剂（酒精/乙醇）涂抹在玻片上进行漂洗，革兰氏阳性菌的细胞壁不易被漂掉，
表现为紫色或紫黑色，而革兰氏阴性菌的细胞壁被漂洗掉，表现为无色或浅红色。

6. 涂以对比染色剂（红色）：最后将对比染色剂（红色）涂抹在玻片上，革兰氏阴性菌会被染成红色。

通过以上步骤，革兰氏染色技术可将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌显色为紫色或紫黑色，而革兰氏阴性菌显色为红色。

该技术的原理基于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构不同，可用于细菌的初步鉴定和分类。

革兰染色的原理革兰染色是一种常用的细菌分类和鉴定方法，它是以丹尼尔·埃德温·革兰（1881-1938）的名字命名的。

革兰染色的原理是利用革兰氏染色法对细菌进行染色，根据细菌细胞壁的结构特点来区分细菌的分类。

首先，我们来了解一下革兰氏染色法的步骤。

革兰氏染色法是一种区分细菌的染色方法，它包括了紫晶染色、碘液固定、酒精脱色和蓝色染色四个步骤。

在进行革兰氏染色时，首先将细菌涂片加上紫晶液，使细菌涂片呈紫色；然后加入碘液固定，使细菌涂片呈蓝黑色；接着用酒精脱色，将细菌涂片中的染色物质去除；最后再加上蓝色染色，使革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌呈粉红色。

革兰染色的原理主要是利用了细菌细胞壁的特点来进行区分。

革兰阳性菌的细胞壁较厚，含有大量的穿过细胞壁的多糖和多肽，这些物质能够与紫晶染料结合，使细菌呈紫色。

而革兰阴性菌的细胞壁较薄，含有脂多糖，这些物质不能与紫晶染料结合，因此在酒精脱色后，革兰阴性菌会呈粉红色。

革兰染色的原理还可以通过细菌的形态特征来进行区分。

革兰阳性菌在显微镜下呈现为紫色或蓝黑色的颗粒状或条状结构，而革兰阴性菌则呈现为粉红色的圆形或椭圆形结构。

革兰染色的原理在临床诊断和实验室研究中有着重要的应用价值。

通过革兰染色，可以快速、简便地区分细菌的分类，为临床诊断提供重要参考依据。

同时，革兰染色还可以帮助科研人员对细菌进行初步鉴定，为后续的实验研究提供便利。

总的来说，革兰染色的原理是通过染色方法和细菌细胞壁的特点来进行细菌的分类和鉴定。

革兰染色不仅在临床诊断中有着重要的应用，也在科研领域发挥着重要作用。

通过了解革兰染色的原理，我们可以更好地理解这一方法的应用和意义。

革兰氏染色原理
革兰氏染色原理是一种常用的细菌染色方法，它基于细菌细胞壁的物理和化学特性差异。

该方法常用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

革兰氏染色的步骤分为四个关键步骤：染色、定色、脱色和透明化。

在染色步骤中，细菌样本首先要通过加热固定，使其黏附在玻璃片上。

然后，将菌液涂抹在玻璃片上，加入革兰染色剂――结晶紫，革兰染色剂能渗透细菌细胞并将细胞壁着色成紫色。

接下来，在定色步骤中，用碘化钠溶液加强细菌细胞壁与革兰染色剂的结合，形成革兰染色复合物。

然后，通过脱色步骤，使用酒精或酸性酒精溶液去除细菌细胞色素。

革兰氏阳性菌的细菌细胞壁较厚，不易被脱色，保持紫色染色；而革兰氏阴性菌的细菌细胞壁较薄，容易被脱色，颜色会被去除。

最后，通过透明化步骤，使用洗净剂（一般为醇类溶液）进行清洁和透明化处理，去除残留的染色剂和背景杂质。

经过革兰氏染色处理后，革兰氏阳性菌呈紫色，而革兰氏阴性菌则呈粉红色。

通过革兰氏染色，可以快速、简便地判断细菌菌株的革兰氏染色特性，便于对细菌进行初步分类和鉴定。

这在微生物学和临床诊断中都有重要应用。

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Ⅱ、革兰氏染色法一、实验原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C．Gram所创立的。

革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。

革兰氏染色法的主要步骤是先用结晶紫进行初染；再加媒染剂--碘液，以增加染料与细胞间的亲和力，使结晶紫和碘在细胞膜上形成分子量较大的复合物；然后用脱色剂(乙醇或丙酮)脱色；最后用蕃红复染。

凡细菌不被脱色而保留初染剂的颜色(紫色)者为革兰氏阳性菌，如被脱色后又染上复染剂的颜色(红色)者为革兰氏阴性菌。

该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。

G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。

G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。

二、实验器材1、菌种牛肉膏琼脂斜面28℃培养24h的大肠杆菌(Escherichia coli)斜面菌种，牛肉膏琼脂斜面28℃培养16h的枯草杆菌(Bacillussubtilis)斜面菌种；2、仪器显微镜；3、材料载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。

4、染料草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液；三、操作步骤1、涂片在一张载玻片上加两滴蒸馏水后，分别涂布枯草芽孢杆菌和大肠杆菌(注意涂片切不可过于浓厚)。

2、固定将制成的涂片干燥固定，固定时通过火焰1-2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。

3、染色⑴初染将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1-2min。

倾去染色液，用自来水小心地冲洗。

⑵媒染滴加(Lugol)碘液，染1-2min，水洗。

1.革兰氏染色的机理和步骤机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，抗脱色能力的差异。

主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。

G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。

乙醇脱色时CW脱水，孔径减少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。

G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。

乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，透性升高，细胞被复染显红色。

步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。

②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。

③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。

④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。

(细胞内形成结晶紫与碘的复合物，增强相互作用）⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，是乙醇脱色完全。

⑥水洗，吸干。

⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。

⑧干燥镜检。

2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。

芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。

3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能够维持微培PH稳定。

答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，会导致PH变化。

（第2张中的图）还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N 低，经培养基后PH明显上升。

PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K2HPO4 呈碱性，KH2PO4 酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2）②大量产酸的菌株，加CaCO3调节，CaCO3难溶于水，不会使培养液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。

③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，也起缓冲的作用。

④过酸：治标------加NaOH、Na2CO3中和，治本-----加适量氮源：NaNO3、Pr、NH3·H2O；增加通风量。

革兰氏染色步骤和原理第一步：准备好白色的玻璃板和酒精革兰氏染色是一种常用的细菌检测方法，可以快速检测出细菌的形态、分布和数量。

该方法是由丹麦微生物学家革兰氏于1884年发明的，经过多年的临床实践和改良，现在已成为临床医学和微生物学领域中的重要检测手段之一。

1.样品制备：首先要准备好待检测的细菌样品，通常需要从血液、尿液、痰液、分泌物或其他体液中获得。

为了确保样品的洁净和完整性，最好将样品进行稀释，减少样品的干扰，同时也便于操作。

2.染色处理：将制好的样品涂在载玻片上，使其干燥，然后用甲醇进行固定处理，使细胞蛋白质凝固，并烘干。

随后将载玻片以45度角倾斜，加入革兰染色液，静置约1分钟，然后用水冲洗2-3秒钟。

再加入碘酒，静置1分钟，然后再用水冲洗2-3秒钟。

洗涤后可以在载玻片上滴一两滴乙醇，退色1-2秒钟，再用水冲洗，并用滤纸吸干表面水分。

3.洗涤：将载玻片表面涂上感兴趣的菌株的染色处理，静置一定时间后，用盐水等进行洗涤，去除载玻片表面无关物质，使细胞染色更加清晰。

4.显微镜观察：用油镜片把载玻片放到显微镜上，通过放大镜片观察载玻片上的细菌。

革兰氏染色能够使革兰氏阳性的细菌形成紫色，而革兰氏阴性的细菌则形成粉色。

革兰氏染色的原理基于细菌细胞壁化学成分的差异性。

革兰氏阳性菌细胞壁厚，主要由多层厚壁多聚糖和蛋白质组成，其细胞壁中还含有少量脂质和磷酸化甘露醇，能够吸附革兰染色液，形成紫色颗粒。

而革兰氏阴性菌细胞壁相对较薄，主要由一层厚度较小的胞外膜和较厚的革兰氏染色物质组成，故染色后革兰氏阴性菌呈粉色。

革兰氏染色方法简单、便捷、易于操作，能够快速鉴别出不同类型的细菌，是一种常用的细菌检测方法。

这种染色方法对细菌的形态、数量和分布都能进行精确的检测和分析，对于临床医学和微生物学领域的细菌研究和治疗具有重要意义。

革兰染色原理及步骤
革兰染色是一种常用的细菌染色方法，用于区分细菌的形态结构和封闭性。

其原理是基于细菌细胞壁的差异性，将细菌分为革兰阳性和革兰阴性。

革兰阳性细菌的细胞壁主要由厚而密的层状的胞外多聚糖和多链肽组成，通过革兰染色可以将其染成紫色。

革兰阴性细菌的细胞壁相对较薄，主要由外膜、胞壁肽聚糖层和内膜组成，通过革兰染色可以将其染成红色。

革兰染色的步骤如下：
1. 做好菌液的制备：取一小圈细菌涂于玻璃片上，使用无菌培养基或生理盐水稀释菌液，使其浓度适宜。

2. 固定细菌：将涂有细菌的玻璃片放在火焰中加热，使其细菌固定在玻璃片上。

3. 染色：将固定的细菌玻璃片放入革兰碘液（碘酒加入碘化钾溶液制成），置于室温下静置1分钟。

4. 倒出碘液，用洗净的蒸馏水冲洗玻璃片，使其没有紫色溶液流出。

5. 倾倒蒸馏水，将玻璃片放置在革兰蓝（碱性溴甘酚蓝）液中，静置30秒至1分钟。

6. 冲洗：将玻璃片用清水冲洗1-2次，直到没有蓝色溶液流出。

7. 脱水：将玻璃片放入96%乙醇中，脱水15-30秒。

8. 倒出乙醇，用吹风机快速吹干玻璃片。

9. 固定染色：将玻璃片在菲尔利涂片中涂覆一层透明固定剂，以保护染色结果不褪色。

通过以上步骤，可以通过显微镜观察到革兰阳性菌形成紫色细菌体，而革兰阴性菌则呈现红色细菌体。

革兰氏染色法的过程及原理
细菌培养：首先，把细菌样本放入一种适合细菌生长的培养基中。

细
菌可以在培养基中繁殖，并在培养基表面形成一个厚厚的菌膜。

︰等待培养、灭菌：然后等待培养。

一般培养4-24小时，直到细菌
厚度达到均匀的状态。

之后，用70％的乙醇或氯仿灭菌。

分离细菌：之后，用称重的方法将培养基向玻片上移动，或者用分离
到新的玻片上，以便后期染色分析。

染色：最后，细菌玻片进行染色。

革兰氏染色分为单色染色和复合染色。

单色染色使用单一物质染色，复合染色使用一种物质的多种染色剂来
染色细菌。

革兰氏染色的原理主要是应用染色剂对细菌的形态特征，如质壁厚度，膜厚度，细菌颗粒形状，胞素和细菌颗粒大小，以及细菌的生理特性，如
环境的Tolerance，抗生素的Tolerance，等给予染色。

染色剂会在细菌
的膜和质壁上积聚，从而形成不同的染色环境，形成细菌的不同形态及染
色特征。