细胞的涂片及简单染色法

实验三细菌涂片的制备及革兰氏染色[实验目的]1、掌握细菌涂片的制备方法及革兰氏染色。

2、学习无菌操作，树立无菌观念。

[实验原理]细菌细胞微小，无色而半透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须借助染色使菌体着色（由于毛细管、渗透、吸附和吸收等物理作用以及离子交换、酸碱亲和等化学作用，染料能使细菌着色，并且因细菌细胞的结构和化学成分不同而有不同的染色反应）后，使其与背景形成明显的色差，从而能较清楚的观察到细菌的基本形态和结构。

根据不同的染色反应，可作为鉴别细菌的一种依据。

微生物染料是一种带苯环的有机化合物，其分子上具有发色基团和助色基团。

前者给化合物以特有的颜色，但不能与细菌结合；后者使化合物具成盐的性质，能和菌体结合。

分为碱性染料、酸性染料和中性染料三类。

根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为三种方法即简单染色、鉴别染色和特殊染色。

革兰氏染色：1884年由丹麦病理学家C.Gram创立。

此法可将所有细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。

是细菌学上最常用的鉴别染色法，有着重要的理论和实践意义。

其染色过程是先用草酸铵结晶紫进行初染，再加媒染剂-革兰氏碘液，以增加染料和细胞的亲和力，使结晶紫和碘在细胞膜上形成相对分子量较大的复合物，然后用脱色剂-乙醇脱色，最后用沙黄液复染。

凡细菌不被脱色而保留初染剂的颜色（紫色）者即为G+菌，反之，脱色后染上复染剂颜色（红色）者即为G-菌。

其原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同，通过染色加以鉴别。

革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，且类脂质含量少，经乙醇处理发生脱水作用后反而使其孔径缩小，通透性降低，结晶紫-碘形成的复合物保留在细胞内而不被脱色，结果细胞呈现紫色。

而革兰氏阴性菌的的肽聚糖层薄，网状结构交联少，而且类脂质含量较高，经乙醇处理后，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，结果细菌被脱色，再经沙黄复染后呈现红色。

细菌一般染色方法细菌染色是一种常用的实验技术，通过染色使细菌在显微镜下能够更清晰地观察和分析。

细菌染色通常分为简单染色、阴性染色和阳性染色三种方法。

一、简单染色方法：简单染色是最基础的细菌染色方法，主要是用一种染色剂来染色所有类型的细菌。

常用的染色剂有墨汁、甲基蓝、伊红等。

简单染色的步骤如下：1.取一片细菌涂片，将其干燥。

2.在涂片上滴加染色剂，覆盖整个片面。

3.将染色剂置于片上一分钟，用水冲洗。

4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。

5.镶片并观察。

简单染色可以使细菌呈现出斑点或条纹状，并能够区分一些基本形态和结构，但不能提供更多细菌信息。

二、阴性染色方法：阴性染色可使细菌显现为透明，而背景呈色的方法。

常用的阴性染色剂有阿里兹红、印度墨等。

阴性染色的步骤如下：1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上，使其成薄层。

2.滴加阴性染色剂到涂片上，使其均匀覆盖涂片表面。

3.用水冲洗染色液，并用纸巾擦干涂片。

4.镶片并观察。

阴性染色使背景呈色，使细菌透明，从而可以更清晰地观察其形态特征。

三、阳性染色方法：阳性染色可以使细菌显现为有色的圆点或杆状，常用的阳性染色剂有甲基蓝、伊红等。

阳性染色的步骤如下：1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上。

2.将染色剂滴加到涂片上，使其完全覆盖涂片。

3.置片5-10分钟，然后用水冲洗染色剂。

4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。

5.镶片并观察。

阳性染色可以染色细菌，使其呈现有色的形态，便于观察和鉴定。

此外，还有一些特殊染色方法，如革兰氏染色法、氢酒精酸快速染色法等。

革兰氏染色是一种经典的细菌染色方法，通过不同细菌细胞壁的染色性质来将其分为革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。

该方法使用革兰紫染色剂和碘液，以及酒精和碳酸盐条件溶液进行染色处理。

氢酒精酸快速染色法是一种常用的快速染色方法，将细菌用甲基蓝染色液处理一段时间后，用酒精和酸性酒精进行洗涤和脱色，最后用伊红染色液着色。

这种方法可以快速地将细菌分为两种主要类型：革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。

细菌的常用染色技术简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

例如番红。

1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。

2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。

3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。

4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。

5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。

6．干燥7．镜检复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色。

例如革兰氏染色法。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，需要碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。

碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。

媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine ）是常用的媒染剂。

脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精（ethanol）。

复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，而且将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液为番红。

1.载玻片固定。

在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。

2.草酸铵结晶紫染1分钟。

3.自来水冲洗，去掉浮色。

4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。

5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。

革兰氏染色步骤6则以下是网友分享的关于革兰氏染色步骤的资料6篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。

革兰氏染色步骤（1）革兰氏染色步骤步骤革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1、涂片固定。

2、草酸铵结晶紫染1分钟。

3、自来水冲洗。

4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。

5、水洗，用吸水纸吸去水分。

6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

7、蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。

干燥，镜检。

染色后，革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。

细菌分类：革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。

革兰氏染色法的步骤（2）详细阐叙革兰氏染色法的步骤浏览次数：174次悬赏分：0 | 解决时间：2011-5-25 17:44 |提问者：肖箫2011shaw最佳答案革兰氏染色一、目的：在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。

二、原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

简单染色法步骤一、引言染色是一种常见的实验方法，广泛应用于生物学、化学、医学等领域。

其中，简单染色法是最基础、最常用的染色方法之一。

本文将介绍简单染色法的步骤及其应用。

二、准备实验材料和设备1. 实验材料：待染色的样本（如细胞、组织切片等）、染色剂（如甲苯胺染料、嗜酸性染料等）、脱水、透明和固定剂（如乙醇、木质醋酸等）。

2. 实验设备：玻璃片、显微镜、显微镜镜头、显微镜载玻片、显微镜载玻片盖片、显微镜载玻片夹。

三、固定样本1. 取一小片待染色的样本，放置在玻璃片上。

2. 用透明剂和固定剂依次浸泡样本，使其固定在玻璃片上。

3. 将固定后的样本置于通风处晾干。

四、脱水处理1. 取一盛有乙醇的容器，将固定的样本放入其中。

2. 逐渐增加乙醇浓度，例如从浓度较低的乙醇（如70%）开始，逐渐转移到浓度较高的乙醇（如95%）中，最后转移到绝对乙醇中。

3. 每次转移样本之前，需在乙醇中浸泡一段时间，使其充分脱水。

五、染色处理1. 取一盛有染色剂的容器，将脱水后的样本放入其中。

2. 根据染色目的选择适当的染色剂，如甲苯胺染料用于碱性染色，嗜酸性染料用于酸性染色。

3. 将样本在染色剂中浸泡一段时间，使其充分染色。

六、清洗和封片1. 用脱离剂清洗染色后的样本，去除多余的染色剂。

2. 取一片干净的玻璃片，将样本置于其上。

3. 滴加一滴显微镜载玻片夹中的透明剂，将玻璃片盖在样本上。

4. 轻轻压平，使样本均匀分布在玻璃片上。

七、观察和分析1. 将封好的玻璃片放置在显微镜载玻片上。

2. 装上显微镜载玻片盖片，并用夹子夹紧。

3. 将载玻片放入显微镜镜头下，调节放大倍率和焦距，观察样本的染色情况。

4. 根据观察结果，进行分析和记录。

八、实验注意事项1. 在实验过程中，需佩戴手套和口罩，做好个人防护。

2. 实验材料和设备要保持清洁，避免污染。

3. 染色剂的选择要根据不同样本和染色目的来确定。

4. 染色时间和温度要控制适当，避免过度染色或不足染色。

血细胞常用的染色方法
导入新课
导言：在学习完显微镜使用以及血涂片制备课程之后，我们借助于显微镜观察到了细胞，但是显微镜下细胞都是圆形的，如何将这些细胞区分开呢？我们可以借助于染色技术将血细胞染上颜色，这样我们就能在显微镜下观察到它们的形态了
【板书】
五、血细胞常用的染色方法
1、瑞氏染色法
【讲解策略及方法】：图示法讲解
瑞氏染色法是临床检验血细胞检查中最常用的染色技术，简要介绍其历史再从试剂组成、染色原理、染色方法、染色结果、影响因素等方面进行讲解。

试剂组成：酸性染料伊红E-和碱性染料美蓝M+
染色原理：化学的亲合作用+物理的吸附作用（配合图例进行讲解）
染色方法：涂片、染色、水洗
染色结果：结合图例进行讲解
影响因素：pH
讲解中应注意重点突出，对染色原理、染色结果做重点讲解。

影响因素是本段的难点，可以对蛋白质的化学结构进行分析，加深学生理解。

其余略讲。

2、吉姆萨染色法
【讲解策略及方法】：简单介绍。

实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）一目的要求1．了解简单染色法和革兰氏染色法的基本原理，熟练掌握细菌的涂片与革兰氏染色技术。

2．初步学习细菌细胞特殊结构的染色方法，并观察细菌的特殊结构。

3．观察细菌的菌落平板，学会识别大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌的菌落特征，学会初步鉴别微生物的种类的方法。

二实验内容与原理1．简单染色法原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，一般用于观察个体形态与细菌排列。

由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫对细菌进行染色。

美蓝是美蓝的盐酸盐，可解离为带正电荷的美蓝，很容易与细菌结合使菌体着色。

染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。

简单染色过程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检涂片→ 固定→ 干燥→ 水洗、吸干→镜检→染色 1mim2．革兰氏染色法原理革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。

它是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G + ）和革兰氏阴性菌（G －）两大类。

革兰氏染色过程：涂片→固定→结晶紫初染（1min）→碘液媒染（1min）→乙醇脱色（95% 酒精,30s）→番红复染（30 秒）→干燥→镜检阳性菌：紫色阴性菌：红色革兰氏染色要点：（1）初染：用结晶紫，染色 1 分钟，水洗。

（2）媒染：加碘液覆盖 1 分钟后水洗。

（3）脱色：连续滴加 95％乙醇，约 30 秒，直到滴下的乙醇无色为止，水洗。

（4）复染：加番红染色 1 分钟，水洗。

（5）干燥。

（6）镜检：先低倍镜，后油镜观察。

注意：涂片要薄而均匀，脱色程度要控制得当。

学生做大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草杆菌的革兰氏染色。

观察细菌个体形态与排列，绘图。

3．芽孢染色原理细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营养体结构。

简单染色法的名词解释简单染色法是一种常见的生物学实验技术，用于染色和可视化细胞、组织或生物分子的研究。

这种方法利用染色剂与特定的生物分子或细胞结构发生反应，使其在显微镜下可见。

本文将对简单染色法的基本原理和常见应用进行解释。

一、基本原理简单染色法的基本原理是利用染色剂与目标物质之间的物理或化学相互作用，以改变目标物质的颜色或形态，并使其能够被光学设备观察到。

常见的染色剂包括染料、荧光探针和金属离子等。

通常，染色剂会选择性地与目标物质结合，使其产生明显的颜色反应。

例如，生物组织常用的染色剂溴化乙锭会与DNA结合形成蓝色颗粒，从而帮助研究者观察和定位细胞核。

此外，脂质染色剂类似尼罗红和苏丹红可以染色细胞膜和脂滴，从而帮助研究者观察和分析细胞膜的形态和构成。

二、常见应用1. 细胞标记简单染色法被广泛应用于细胞标记，以研究细胞的结构和功能。

通过选择合适的染色剂，研究者可以染色和区分细胞核、细胞质、细胞膜等不同细胞结构，并可视化细胞中的特定分子或蛋白质，以便研究其相互作用和功能。

2. 组织切片染色在研究组织学时，简单染色法可以帮助研究者观察和分析不同组织的形态、结构和成分。

经过适当的处理和染色，可以将细胞核、细胞质、细胞器、间质等区分开来，有助于对组织的组成和功能进行研究。

3. 分子探针染色剂也可以用于特定分子或基因的检测和分析。

例如，荧光染料羟吡啶绿和丙烯香豆素可以与DNA结合，形成特定的荧光信号，帮助研究者观察和定位基因或染色体。

此外，还有许多专门用于检测特定蛋白质、酶活性或细胞信号通路的染色剂和化学荧光探针。

4. 分子定位和定量通过简单染色法，可以确定分子或细胞在组织或细胞中的定位和分布情况。

例如，在免疫组织化学中，通过与特定抗体结合，可以标记和检测特定蛋白质在组织切片或细胞中的定位，从而揭示与该蛋白质相关的结构和功能信息。

5. 疾病诊断和研究简单染色法在病理学和临床诊断中也有着重要的应用。

例如，肿瘤组织切片常用的染色法可以帮助病理学家识别和分类肿瘤细胞，为肿瘤的诊断和治疗提供依据。

细菌的染色方法范文细菌染色是一种常见的实验方法，用于从复杂的细菌群体中提取有关其结构、形态和一些特定性质的信息。

它是微生物学研究中不可或缺的工具。

本文将介绍常见的细菌染色方法，包括简单染色、差异染色和特殊染色。

1.简单染色简单染色是最基本的细菌染色方法，使用一种染色剂将细菌细胞全部染色。

最常用的染色剂是碘蓝和甲基蓝。

染色方法如下：(1)将细菌涂片固定在玻片上，可以使用热固定法或化学固定法。

(2)在涂片上滴加碘蓝或甲基蓝溶液，让其渗透细菌细胞。

(3)用水冲洗玻片以去除多余的染色剂。

(4)用纸巾将玻片上的水分吸干。

(5)在显微镜下观察染色的细菌。

2.差异染色差异染色是通过使用多种染色剂及/或特定条件，使不同种类或部分细菌以不同颜色呈现。

主要的差异染色方法有革兰氏染色和酸性忍受染色。

(1)革兰氏染色革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，主要用于将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。

染色方法如下：-将细菌涂片固定在玻片上。

-滴加革兰氏紫素，让其渗透细菌细胞。

-用碘液固定染色，形成染色颗粒。

-用乙醚或酒精去除多余的染色剂。

-滴加脱色剂，使革兰氏阴性细菌脱色，而革兰氏阳性细菌保持染色。

-用水冲洗玻片以去除脱色剂。

-在显微镜下观察染色的细菌。

(2)酸性忍受染色酸性忍受染色是一种特殊的染色方法，适用于具有特殊的抗酸性结构的细菌，如结核菌和其他抗酸杆菌。

染色方法如下：-将细菌涂片固定在玻片上。

-滴加浓硫酸，让其固定和脱水细菌。

-滴加酸性忍受染色液，让其渗透细菌细胞。

-冲洗玻片以去除多余的染色液。

-在显微镜下观察染色的细菌。

3.特殊染色特殊染色方法主要用于染色细菌的特定部分或结构，以使其更清晰可见。

一些常见的特殊染色包括荧光染色、胞外多糖染色和内孢子染色。

(1)荧光染色荧光染色是一种利用荧光染料如荧光素和荧光素同系物染色细菌的方法。

这种染色方法可以给细菌标记上特定的荧光标记物，以在显微镜下观察细菌。

荧光染色是现代生物学和医学研究中常用的方法之一(2)胞外多糖染色胞外多糖染色是一种常见的细菌染色方法，用于染色细菌细胞表面的胞外多糖。

细菌的常用染色技术简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

例如番红。

1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。

2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。

3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。

4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。

5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。

6．干燥7．镜检复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色。

例如革兰氏染色法。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，需要碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。

碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。

媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine ）是常用的媒染剂。

脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精（ethanol）。

复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，而且将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液为番红。

1.载玻片固定。

在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。

2.草酸铵结晶紫染1分钟。

3.自来水冲洗，去掉浮色。

4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。

5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。

实验室做细胞常⽤的细胞固定及染⾊⽅法（详细）实验室做细胞常⽤的细胞固定与染⾊⽅法⼀、爬⽚前盖玻⽚处理⽅法对于悬浮培养的细胞，在进⾏各种染⾊前常需先制备成涂⽚。

为了保证细胞在长时间的染⾊过程中不从载玻⽚脱落，必须使其牢固贴附于载玻⽚上。

在载玻⽚上涂布⼀层有助于细胞黏附的物质是经常采⽤的⽅法之⼀。

能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这⾥介绍多聚赖氨酸的涂布⽅法。

1、将载玻⽚⽤玻璃专⽤洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。

2、⽤⾃来⽔冲洗5min。

3、以1％盐酸—70％⼄醇溶液浸泡5min。

4、烤箱⼲燥(⾄此即可⽤于普通染⾊)。

5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离⼦⽔)浸泡5min，振荡。

6、⼊60℃烤箱1 h，或室温过夜⼲燥(⽤于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。

⼆、细胞固定常⽤⽅法固定细胞的⽬的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发⽣降解、⾃溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防⽌细胞和组织的各种分⼦变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制⽚过程中亦不发⽣改变和破坏。

同时，固定还可使细胞的各部分易于着⾊，适于观察、长期保存和分析。

1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选⽤新鲜培养物；根据检测⼯具、对象、⽬的和要求选择固定剂和固定⽅法。

2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖⽚悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖⽚单层培养物都可作固定材料。

对双盖⽚悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离⼼收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制⽚；对盖⽚单层培养物来说，将盖⽚从培养器⽫中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去⾎清和附着于细胞表⾯的残渣，备固定⽤。

3.常⽤固定液：常⽤的固定液分两类，⼀类是以单⼀化学物质配成的固定液，称简单固定液。

主要有甲醇、⼄醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊⼆醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。

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