补体在溶血反应中的作用实验讨论

补体实验报告篇一：补体结合试验第二节补体结合试验补体结合试验（complementfixationtest，cft）是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反应系统抗原或抗体的试验。

早在1906年wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。

这一传统的试验经不断改进，除了用于传染病诊断和流行病学调查以外，在一些自身抗体、肿瘤相关以原以及hla的检测和分析中也有应用。

一、类型及原理自身免疫性溶血，如果有补体参与时，补体通过一系列的激活，最后形成膜攻击复合物（membrane attack complex），它可以直接攻击红细胞膜，导致红细胞破裂，这就是所谓“血管内溶血”。

而没有补体参与的免疫性溶血，抗体与红细胞膜上抗原结合后，没有直接把红细胞破坏，而是把红细胞“致敏”，致敏RBC在通过脾脏等网状内皮系统时，被吞噬细胞“吃掉”，这就是所谓“血管外溶血”。

该试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统：①反应系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即srbc与相应溶血素，试验时常将其预先结合在一起，形成致敏红细胞。

反应系统与指示系统争夺补体系统，先加入反应系统给其以优先结合补体的机会。

如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。

如果反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性（图14-2）。

因此补体结合试验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。

图14-2补体结合试验示意图二、试验方法补体结合试验的改良方法较多，较常用的有全量法(3ml)、半量法(1.5ml)、小量法(0.6ml)和微量法（塑板法）等。

目前以后两种方法应用较为广泛，因为可以节省抗原，血清标本用量较少，特异性也较好。

一、实验背景溶血反应是输血过程中可能发生的严重并发症之一，它可能导致患者出现贫血、黄疸、血红蛋白尿等症状，甚至危及生命。

间接溶血反应是指由于血型不配合而导致的溶血，常见于ABO血型系统的不相容输血。

为了确保输血安全，本实验旨在通过间接溶血实验，检测受试者血清中的抗体，从而判断其血型兼容性。

二、实验目的1. 掌握间接溶血实验的基本原理和操作方法。

2. 了解血型不配合引起的溶血反应的特点。

3. 通过实验检测受试者血清中的抗体，判断其血型兼容性。

三、实验原理间接溶血实验是通过观察红细胞与抗体结合后，在补体作用下发生的溶血现象来检测血清中的抗体。

当受试者血清中含有针对特定抗原的抗体时，这些抗体与红细胞表面的相应抗原结合，激活补体系统，导致红细胞溶解。

实验中常用的红细胞为ABO血型系统的标准红细胞，包括A型、B型、O型及AB型。

四、实验材料与仪器1. 实验材料：A型、B型、O型及AB型标准红细胞悬液，受试者血清，生理盐水，补体溶液，抗凝剂，试管，离心机，显微镜等。

2. 实验仪器：恒温水浴箱，微量移液器，振荡器等。

五、实验步骤1. 标准红细胞悬液的制备：取A型、B型、O型及AB型标准红细胞悬液，用生理盐水洗涤3次，以去除血浆蛋白。

2. 血清处理：取受试者血清，用生理盐水稀释10倍。

3. 实验分组：将试管分为A、B、C、D四组，分别加入不同血型的标准红细胞悬液。

4. 加血清：在A、B、C、D四组试管中分别加入等量的受试者血清。

5. 加入补体：在A、B、C、D四组试管中分别加入等量的补体溶液。

6. 混匀：轻轻振荡试管，使血清、红细胞和补体充分混合。

7. 观察结果：将试管置于37℃恒温水浴箱中孵育30分钟，观察红细胞是否发生溶血现象。

8. 结果判断：根据红细胞溶解情况，判断受试者血清中是否存在抗体。

六、实验结果与分析1. A组：红细胞未发生溶血，说明受试者血清中不存在针对A型抗原的抗体。

2. B组：红细胞未发生溶血，说明受试者血清中不存在针对B型抗原的抗体。

补体结合实验原理：补体无特异性，可与任何抗原抗体复合物结合而被激活，但不能与单独的抗原或抗体结合。

补体结合试验是一种有补体参与，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应体系。

绵羊红细胞与溶血素结合后可激活补体，导致红细胞破坏，出现溶血现象。

参与补体结合反应的五种成分可分为两个系统：(1)检测系统，已知抗原（或抗体）、待测抗体（或抗原）；（2）指示系统，SRBC、溶血素。

待检测系统与补体作用后，加入指示系统，若不出现溶血，表示待测系统中的抗原抗体相对应；两者特异性结合形成抗原抗体复合物结合并消耗了补体，无游离的补体与指示系统结合，故不溶血，为补体结合试验阳性。

反之，若出现溶血，则为补体结合试验阴性。

方法：1.取五支试管，依次做好标记，放在试管架中。

2.按照下表加样。

结果：结果分析：1.羊血用前轻轻摇匀，避免剧烈正当引起溶血。

2.各种试剂的吸管不要混用。

3.补体的性质较不稳定，低温保存，加样时再从冰箱里取出。

4.水浴时避免水滴滴进试管。

5.本实验影响因素很多，对照组的反应情况是否正常是判断实验可信度的参照。

人外周血单个核细胞分离原理：常用来分离人外周血单个核细胞的分离液是由聚蔗糖和泛影葡胺按一定比例混合制成。

它分子量大又无化学活性，20摄氏度时比重约为1.077kg/L，淋巴细胞和单核细胞比重略小于分层液，为1.070kg/L左右。

而粒细胞和红细胞比重大，为1.092 kg/L左右。

通过离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布，淋巴细胞和单核细胞位于分离液的上层，而粒细胞和红细胞沉于离心管的管底，从而将淋巴细胞和单核细胞等单个核细胞分离出来。

方法：1.抽取1.5ml静脉血至肝素抗凝管，加入1.5ml Hank’s液2.混匀后取3ml稀释液，沿试管壁缓慢加入到2ml分离液中。

2000rpm,离心20min。

3.小心吸取淋巴细胞层，加入2ml Hank’s液，2000rpm,离心10min。

4.弃上清，加入2ml Hank’s液。

一、实验目的1. 了解血清总补体活性的检测原理和方法。

2. 掌握血清总补体活性（CH50）测定的操作步骤。

3. 通过实验结果，分析血清总补体活性的临床意义。

二、实验原理血清总补体活性（CH50）是指补体在经典途径中活化的程度。

在CH50测定中，补体通过激活C1～C9等补体成分，使红细胞发生溶血。

通过测定溶血程度，可以评估血清总补体活性。

三、实验材料1. 试剂：溶血素、兔抗羊红细胞抗体、生理盐水、5%羊红细胞悬液、2.5%巴比妥缓冲液、CH50标准品。

2. 仪器：恒温水浴箱、分光光度计、移液器、试管、试管架等。

四、实验方法1. 标准曲线绘制：将CH50标准品用生理盐水稀释成一系列浓度，分别加入5%羊红细胞悬液，37℃水浴30分钟，测定吸光度（A542nm）。

以CH50浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定：取待测血清样本，用生理盐水稀释成一定浓度。

按照标准曲线绘制的方法，测定吸光度（A542nm）。

3. 结果计算：根据标准曲线，计算出待测血清样本的CH50活性。

五、实验结果1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制标准曲线。

2. 样品测定：待测血清样本的吸光度为X。

3. 结果计算：根据标准曲线，计算出待测血清样本的CH50活性为Y。

六、讨论与分析1. 血清总补体活性（CH50）测定原理及方法：CH50测定是一种常用的检测补体活性的方法，通过测定红细胞溶血程度，评估血清总补体活性。

2. 实验结果分析：本次实验中，待测血清样本的CH50活性为Y。

与正常值50-100UL相比，该样本的CH50活性处于正常范围内。

3. 血清总补体活性（CH50）的临床意义：血清总补体活性（CH50）在临床上具有重要的诊断意义。

增高见于急性炎症感染、组织损伤、风湿热急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、心肌梗死、伤寒、多发性关节炎、癌肿等。

降低见于急性肾小球肾炎、膜增殖性肾小球肾炎、系统性红斑狼疮（SLE）活动期、类风湿关节炎、病毒性肝炎、慢性肝病、亚急性细菌性心内膜炎、遗传性血管神经性水肿等。

实验报告4. 补体结合反应实验原理补体结合反应是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。

参与本反应的五种成分可分为两个系统：一为待检系统，即为已知抗原（或抗体）和待检抗体（或抗原）；另一个为指示系统，即绵羊红细胞和其相应的溶血素。

待检抗原、抗体和补体作用后，再加入指示系统。

若待检系统中的抗原和抗体相对应，两者特异性结合后激活补体，补体被消耗。

再加入的指示系统无补体结合，不出现溶血；若待检系统中的抗原与抗体不对应或缺少一方，补体不被激活，当指示系统加入后，绵羊红细胞和溶血素复合物激活补体，产生溶血现象。

5. 空斑形成实验是一种体外检测IgM、IgG类型抗体产生细胞的实验方法，又称空斑形成细胞（PFC)测定。

可作为评估药物影响抗体产生水平以及临床筛选抗肿瘤新药的重要依据。

经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞与一定量的绵羊红细胞混合后，抗体形成细胞产生的抗体与绵羊红细胞结合；在补体参与下，绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。

一个空斑即代表一个抗体形成细胞。

一、SRBC的制备（一）无菌抽取绵羊血1.手术剪减去绵羊颈部毛发备皮，止血带扎住颈部，碘酒消毒，酒精棉球再擦拭。

2.抽取一定量的绵羊血，注入无菌玻璃瓶，轻轻摇晃获得抗凝绵羊血，摇晃时不能用力过猛，防止SRBC破裂。

（二）绵羊红细胞的制备1.在无菌实验室中，用移液枪吸取5ml抗凝绵羊血于试管中，共4支试管。

2.配平后对称放入离心机中2000rpm离心10分钟。

3.4支试管，胶头滴管吸去上清液，加入适量的灭菌生理盐水后轻轻摇晃混匀。

4.再次配平后，2000rpm离心10分钟，2-3次。

5.吸去上清液，获得绵羊红细胞。

（三）绵羊红细胞悬液制备1.20%绵羊红细胞悬液制备在无菌实验室中，用移液枪吸取2ml绵羊红细胞于锥形瓶中，用移液管再加入8ml灭菌生理盐水，混合均匀。

2.2%绵羊红细胞悬液制备在无菌实验室中，用移液枪吸取1ml绵羊红细胞于锥形瓶中，量筒量取49ml无菌生理盐水加入锥形瓶，混合均匀。

补体溶血实验报告册实验目的1. 了解并掌握补体的结构及功能。

2. 学习补体溶血实验的原理、步骤和操作方法。

3. 探究不同因素对补体溶血实验结果的影响。

实验原理补体是一组在机体免疫反应中起重要作用的蛋白质，主要由补体系统中的9个蛋白质组成。

其中，C1～C9分别为补体的各个成分。

补体溶血实验是通过观察各个溶血系统中红细胞溶解的程度，来检测补体功能的一种方法。

实验步骤1. 根据实验需求，准备适量的补体、受试样品（如病人血清、抗原抗体复合物等）以及需要用到的试剂。

2. 将受试样品与补体混合，孵育一段时间，使补体与抗原抗体复合物发生反应。

3. 将一定量的鲜红细胞悬液加入到孵育好的溶血系统中。

4. 在适当的条件下，使红细胞与溶血系统中的抗原抗体复合物发生反应。

5. 离心或静置一段时间，观察红细胞的溶解程度。

6. 根据溶解程度，判断补体溶血实验是否呈阳性或阴性。

结果与分析在本次实验中，我们对不同因素对补体溶血实验的结果进行了分析。

首先，我们对补体的浓度进行了调整，发现补体浓度的升高会导致溶血反应的强度增大。

这是因为补体与抗原抗体复合物发生反应后，溶血系统中的补体浓度越高，溶血效应越明显。

其次，我们做了不同的孵育时间实验，结果显示，孵育时间的延长会导致溶血反应的强度增加。

这是因为，补体与抗原抗体复合物需要一定的时间来发生反应，孵育时间长，反应足够充分，溶血效应也越明显。

此外，我们还探究了红细胞浓度对补体溶血实验的影响。

实验结果表明，红细胞浓度越高，溶血反应的强度越大。

这是因为，红细胞是溶血反应的靶细胞，红细胞浓度越高，则溶血系统中的红细胞越多，从而导致溶血效应的增强。

总结与展望补体溶血实验是一种常用且有效的检测补体功能的方法。

通过本次实验，我们深入了解了补体的结构及功能，并学会了补体溶血实验的操作方法。

实验结果表明，补体浓度、孵育时间和红细胞浓度是影响补体溶血实验结果的重要因素。

未来，我们可以进一步探究其他因素对补体溶血的影响，并结合临床实际，应用补体溶血实验来诊断和监测某些疾病的发生和发展。

实验三补体参与的免疫反应一、溶血反应1. 原理：绵羊红细胞在溶血素（绵羊红细胞的抗体）、补体均存在的条件下出现溶血。

此溶血反应是补体结合试验的指示系统。

2. 方法：按照实验指导进行操作。

3. 现象观察与分析：观察溶血现象；分析第3、5管为何未出现溶血，分别缺什么成分。

二、补体结合试验（原理）1. 原理：补体结合试验是补体参与，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统进行抗原或抗体检测的试验。

以检测抗原为例，若待检系统有抗原，和已知抗体结合形成抗原抗体复合物，消耗补体；此时，再加入绵羊红细胞和溶血素，不出现溶血（补体全部消耗）或部分溶血（补体部分消耗）。

若待检系统无抗原，只有已知抗体，无抗原抗体复合物，不消耗补体；此时，再加入绵羊红细胞和溶血素，出现溶血且溶血最完全（补体没有消耗）。

最后根据溶血现象判断抗原的有无并可定量。

秋8周，周三，免疫实验实验四免疫标记技术一、概述免疫标记技术是指将已知抗体或抗原用放射性核素、酶、荧光素、胶体金、化学发光物质或电子致密物质等标记物标记作为试剂，检测相应抗原或抗体的一类免疫实验技术。

根据标记物不同，免疫标记技术分放射免疫技术、酶免疫技术、荧光免疫技术、金免疫技术、化学发光免疫技术等。

二、双抗体夹心法ELISA（以检测HBsAg为例）1. 原理：ELISA全称酶联免疫吸附试验，属以酶作为标记物的酶免疫技术。

ELISA用于标本中抗原或抗体测定。

ELISA分双抗体夹心法、间接法、竞争法等不同方法。

双抗体夹心法ELISA用于标本中的抗原测定。

2. 方法（以检测HBsAg为例）：已知抗体（抗HBsAg）包被酶标板→洗板→封闭→洗板→加待检标本，设阳性对照、阴性对照→洗板→加酶标抗体（抗HBsAg）→洗板→加底物→观察结果。

3. 结果判断肉眼观察：阳性对照显色，阴性对照未显色。

待检标本显色为待检抗原（HBsAg）阳性，待检标本不显色为待检抗原（HBsAg）阴性三、斑点免疫层析试验（以检测HCG为例）1. 原理：斑点免疫层析试验属金免疫技术，以胶体金作为标记物。