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实验五蛋白质的沉淀和变性实验一、实验目的1.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3.了解蛋白质变性与沉淀的关系。
二、实验原理在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
1.可逆的沉淀反应。
此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解在原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
2.不可逆沉淀反应。
此时蛋白质分子内部结构发生大改变，蛋白质常因变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
如加热引起的蛋白质沉淀于凝固，蛋白质于重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类反应。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷）并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
三、实验材料、器材与试剂1. 材料鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1：9）。
2. 器材（1）试管及试管架；（2）吸量管；（3）滴灌；（4）小烧杯；（5）容量瓶。
3. 试剂（1）3%硝酸银溶液；（2）5%三氯乙酸溶液（3）95%乙醇；（4）饱和硫酸铵溶液；（5）硫酸铵结晶粉末。
四、实验方法1.蛋白质的盐析中性无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。
盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。
如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。
由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析是可逆的过程。
加蛋清溶液5mL于试管中，再加入等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。
倒出少量浑浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。
盐析蛋白质的原理一、盐析是怎么回事说到盐析蛋白质，可能有些小伙伴会觉得，这不就是把蛋白质溶解在盐水里吗？盐析这个过程比你想的要复杂得多。
简单来说，盐析就是利用盐分的加入，来改变蛋白质的溶解性。
你可以把它理解为盐是“调皮”的角色，它不喜欢蛋白质呆在水里，结果就是让蛋白质“出来”了。
这就像你在超市看到满满的货架，上面堆满了各种各样的商品。
有些商品堆得特别紧密，但如果你撒上一些盐，就像给商品们撒了一层霜，结果一部分商品不堪重负，纷纷掉了下来。
这就和盐析差不多，盐一旦加入到水中，它的离子就会和水中的蛋白质发生反应，扰乱了蛋白质原本稳定的状态，导致蛋白质无法继续在水中“安然无恙”地溶解，最终“掉出来”了。
二、盐析的原理蛋白质在水中的溶解性，是由很多因素决定的，其中最重要的因素就是水和蛋白质之间的相互作用。
水分子通过氢键和蛋白质分子结合，形成一个“水壳”，帮助蛋白质保持稳定。
可是，当你加入盐时，盐中的离子就像小捣蛋鬼一样，开始打破水分子和蛋白质之间的这种平衡。
盐分子通过带电的离子作用，把水分子从蛋白质周围“赶走”，这种“赶走”就让蛋白质不再有那么多水来帮助它溶解。
如果盐浓度足够高，水中的离子干扰会变得更加严重，蛋白质就会因为失去了水的帮助，开始聚集在一起，甚至会形成沉淀。
就好像是你在沙滩上玩水，原本一切很平静，突然海浪来了，把沙滩上的贝壳推倒了。
这些沉淀下来的蛋白质，就是盐析的结果。
三、盐析的应用盐析蛋白质不仅仅是一个理论上的过程，它还广泛应用于食品、医药以及生物工程等领域。
比如，在食品加工中，盐析被用来从肉类或蔬菜中提取出蛋白质，这样可以做成各种各样的食品制品。
你可能吃过的香肠、火腿，里面就有通过盐析提取的蛋白质成分，它们口感好，保质期长，营养也不差。
再比如，在生物学研究中，盐析是用来分离和提纯特定蛋白质的一种重要手段。
在实验室里，研究人员通过改变盐的浓度来从复杂的溶液中提取某一种目标蛋白质。
这一过程就像是打捞宝藏一样，目标蛋白质通过盐析“浮出水面”，而其他杂质则留在了溶液里，彻底解决了“你不能一锅煮”的问题。
盐析法综述摘要：沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。
盐析法是其中的一种，盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,可使某些成分在水中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离。
常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。
关键词:沉淀法；盐析；原理；方法评价；蛋白质盐析沉淀法沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。
有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。
有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。
等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。
但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。
两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。
、非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子非离子多聚物是六十年代发展起来的一类重要沉淀剂，最早用于提纯免疫球蛋白、沉淀一些细菌和病毒，近年来逐渐广泛应用于核酸和酶的分离提纯。
最常用的是铅盐法，可以用于除去杂质，也可用于沉淀有效成分。
沉淀法通常是在溶液状态下将不同化学成分的物质混合,在混合液中加人适当的沉淀剂制备前驱体沉淀物,再将沉淀物进行干燥或锻烧,从而制得相应的粉体颗粒。
一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。
在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。
对沉淀形式的要求（1）沉淀的溶解度要小，以保证被测组分能沉淀完全。
（2）沉淀要纯净，不应带入沉淀剂和其他杂质。
（3）沉淀易于过滤和洗涤，以便于操作和提高沉淀的纯度。
（4）沉淀易于转化为称量形式。
实验二蛋白质的呈色反应，沉淀反应实验人：刘彦汶学号：20100331024 班级：针外2010七同组人：曲畅试验日期：2012年3月15日指导老师：路雪雅一．实验目的1．了解蛋白质的性质。
2．掌握蛋白质的鉴定方法。
3．理解蛋白质呈色反应和沉淀反应原理。
二．实验内容1．蛋白质的呈色反应。
2．蛋白质的沉淀反应。
三．实验器材水浴锅（100摄氏度），试管（若干），烧杯，一次性滴管，酒精灯，漏斗，火柴，滤纸四．实验试剂1．1：10鸡蛋白溶液 2．10%NaOH 3．1%硫酸铜 4．尿素 5．0．1%茚三酮乙醇液 6．0．25%丙氨酸溶液 7．饱和硫酸铵溶液 8．固体硫酸铵 9．0．5%NaOH 10．0．5%硫酸锌 11．10%磺基水杨酸 12．10%Hcl 13．1%HAc 14．10%HAc 15.无离子水五．实验原理及操作步骤（一）蛋白质的呈色反应蛋白质的呈色反应是蛋白质中某些氨基酸特殊基团与一定的化学试剂作用而呈现的各种颜色反应，可作为检查蛋白质是否存在的参考。
另外，不同的蛋白质中氨基酸的种类及含量各不相同，而在某些蛋白质内还可能缺乏呈某种颜色反应的氨基酸。
因此不但不同蛋白质呈色反应的强度不同，而且某些呈色反应在某种蛋白质可能不存在。
本实验操作两种呈色反应：双缩脲反应与茚三酮反应，用以比较和鉴别不同的蛋白质。
1．双缩脲反应【实验原理】在浓碱液中，双缩脲能与硫酸铜结合生成紫色或紫红色的复合物，这一呈色反应为双缩脲反应，凡含有两个及多个肽键（酰胺键）的化合物都可能发生此反应，故蛋白质及二肽以上的物质都有此反应，但除肽键外，有些基团如—CSNH—，—C（NH2）NH—等也有双缩脲反应，因此，一切蛋白质或多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的不一定都是蛋白质或多肽。
【操作】（1）取小试管一支，加1：10鸡蛋白液2滴，10%NaOH溶液5滴及1%硫酸铜溶液2滴，混匀，可见溶液变成紫色。
（2）另取一小试管，加一小匙尿素（绿豆大小），小火加热至熔，嗅其气味为（臭鸡蛋味）。
生物化学实验讲义实验一蛋白质的性质实验——蛋白质及氨基酸的呈色反应及蛋白质的沉淀反应实验目的1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。
2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
4．加深对蛋白质溶液的胶体性质的认识，了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
，一、茚三酮反应1.实验原理除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。
尿素、马尿酸、二酮吡唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。
因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。
在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。
该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
此反应的适宜pH为5~7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
2.材料、仪器与试剂蛋白质溶液；新鲜鸡蛋清溶液（蛋清∶水=1∶9）；0.5%甘氨酸溶液；0.1%茚三酮水溶液；0.1%茚三酮-乙醇溶液3.实验操作①取2支试管分别加入鸡蛋清溶液和0.5%甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
②在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。
二、黄色反应1.实验原理含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
蛋白质沉淀反应—蛋白质的盐析作用
【实验原理】 盐析现象是指—般蛋白质在高浓度盐溶液中溶
解度下降， 故向其溶液中加入中性盐至一定浓度时，蛋白质即自溶
液中 沉淀析出。盐析作用与两种因素有关：
①蛋白质分子被浓盐脱水 ;
②分子所带电荷被中和。 蛋白质的盐析作用是可逆过程，用盐
析方法沉淀蛋白质 时，较少引起蛋白质变性，经透析或用水稀释时
又可溶解。
盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及 pH 有 关。
分子量大的蛋白质 （ 如球蛋白 ）比分子量小的 （ 如清蛋白 ） 易
于析出。球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中即可析出，而清蛋 白需在饱
和硫酸铵溶液中才能析出。
【 试剂 】
1.鸡蛋清的氯化钠溶液 （一份鸡蛋清加 10 份的 0.9%氯化 钠
溶液 ）
2. 固体硫酸铵
3.10%氢氧化钠溶液
4..1% 硫酸铜溶液
【实验操作】
1.取鸡蛋清氯化钠溶液约 2ml 于 试管 中，加入硫酸铵粉 末，
至硫酸铵饱和不再溶解为止，此时溶液颜色为乳白色，
用滤纸过滤
2. 取滤液做双缩脲反应，检查滤液中有无蛋白质存在。 蛋白质
沉淀用 1ml 蒸馏 水溶解后作双缩脲反应，证明盐 析的蛋白质重新
溶解于水而未引起变性。试管编号 1234567
磷酸溶液的浓度 (mol/L)124681012
磷酸溶液的加入量 (滴)1 1 1 1111
混合溶液的 PH值543.532.521.5
盐析时 (NH4)2SO4
饱和溶液的用量 (滴)1 0766666
