三列凹顶藻化学成分研究Ⅱ

第３２卷第２４期２００７年１２月

中国中药杂志

ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａＶ０１．３２，Ｉｓｓｕｅ２４

Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００７

三列凹顶藻化学成分研究Ⅱ孙杰１，韩丽君“，杨润亚１，史大永２，袁兆慧２，石建功３＋

（１．鲁东大学生命科学学院，山东烟台２６４０２５；２．中国科学院海洋研究所，山东青岛２６６０７１；３．中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室，北京１０００５０）

［摘要】目的：从三列凹顶藻Ｌａｕｒｅｎｃｉａｔｍｔｗｈａ中寻找具有多样性结构的化学成分，供药理活性筛选。方法：采用凝胶柱色谱、硅胶柱色谱、重结晶和高效液相色谱等方法进行分离；借助核磁共振等波谱方法鉴定化合物的结构；用ＭＴＹ法对得到的化合物进行细胞毒活性评价。结果：分离得到７个化合物，分别鉴定为鉴定为胆甾醇（１），胆甾－５．烯－３＃，７ａ二醇（２），３－谷甾醇（３），叶绿醇（４），玉米黄素（５），对羟基苯甲醛（６），３・吲哚甲醛（７）；在人肿瘤细胞株ＨＣＴ－８，Ｂｅｌ刁４０２，ＢＧｅ－８２３，Ａ５４９和ＨＥＬＡ模型上，化合物２对所有细胞株均显示毒性，化合物４对ＨＣＴ－８和ＨＥＬＡ细胞显示中等强度的细胞毒活性，其它化合物对所有细胞株均无明显毒性，Ｉｃ卯均大于１０．０峭・ｍＬ～。结论：化合物１—７均为首次从三列凹顶藻中得到，化合物２对所有细胞株均显示毒性，化合物４对ＨＣＴ－８和ＨＥＬＡ细胞具有中等强度的选择性细胞毒活性。［关键词】三列凹顶藻；化学成分；细胞毒活性［中图分类号】Ｒ２８４．１［文献标识码］Ａ【文章编号】１００１－５３０２（２００７）２４－２６１０－０３

三列凹顶藻Ｌａｕｒｅｎｃｉａｔｒｉｓｔｉｃｈａ松节藻科Ｒｈｏｄｏｍｅｌａｃｅａｅ凹顶藻属Ｌａｕｒｅｎｃｉａ红藻，是我国特有的红藻品种，广泛分布于南海海域。为了从海洋生物中寻找具有新颖结构和显著生理活性的次生代谢产物，作者对采自广东湛江硇洲岛海域的三列凹顶藻的化学成分进行了研究，从其９５％乙醇提取物的醋酸乙酯部位中分离得到７个化合物，分别鉴定为胆甾醇（１），胆甾－５一烯部，７ａ二醇（２），卢一谷甾醇（３），叶绿醇（４），玉米黄素（５），对羟基苯甲醛（６）和３一吲哚甲醛（７）。在人肿瘤细胞株ＨＣＴ－８，Ｂｅｌ一７４０２，ＢＧｃ－８２３，Ａ５４９和ＨＥＬＡ模型上，发现化合物２对所有细胞株均显示毒性，Ｉｃ卯（Ｉｚｇ・ｍＬ。１）分别为１．９０，２．０２，１．９９，６．５２和１．２０，化合物４对ＨＣＴ－８和ＨＥＬＡ显示选择性毒性，ＩＣ∞（斗ｇ・ｍＬ卅）分别为３．５ｌ和２．０４。ｌ材料、仪器及试剂［收稿日期】２００７－５－１２［基金项目］国家自然科学基金（２０４３２０３０）；鲁东大学校博士基金（ＬＹ２００６３３０２）【通讯作者】’石建功，Ｔｅｌ：（０１０）８３１５４７８９，Ｅ—ｍａｉｌ＊＿ｓｈＵｇ＠ｉｍｍ．∽．ｅｎ；韩丽君，（０５３２）８２８９８６４１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｊｕｎｈａｎ２００１＠ｙａｈｏｏ．ｅｏｍ・２６１０・三列凹顶藻于２００３年４月采集于广东湛江硇洲岛，由中国科学院海洋研究所丁兰平博士鉴定，标本保存在中国科学院海洋研究所海藻化学研究室。Ｂｏｅｔｉｕｓ显微熔点测定仪（温度未校正）；ＺＦ—Ｃ型三用紫外分析仪；Ｎｉｃｏｌｅｔ傅立叶变换红外光谱仪（ＩＭＰＡＣ一４００型）；ＩＮＯＶＡ一５００核磁共振谱仪（ＴＭＳ为内标）；ＡｕｔｏｓｐｅｃＵｌｔｉｍａ—Ｔｏｆ质谱仪；Ｗａｔｅｒｓ６００高效液相色谱仪（Ｗａｔｅｒｓ２４８７检测器；Ａｌｌｔｅｃｈ

公司ＥｃｎｏｓｐｈｅｒｅＣ１８制备柱２２ｍｍ×２５０

Ｉｎｌｎ，１０

岬）；凝胶ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ一２０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司生产）；

柱色谱硅胶（１６０～２００目）和薄层色谱硅胶ＧＦ２５４

（６０型）（青岛海洋化工厂生产）。所用试剂为北京化工厂生产的分析纯和色谱纯产品。２提取和分离风干海藻样品（干重１０．５ｋｇ）粉碎后用９５％的乙醇室温浸泡提取３次，每次７２ｈ，提取液合并后减

压浓缩（温度低于４５℃），浓缩物悬浮于蒸馏水中，用醋酸乙酯进行萃取。醋酸乙酯相经减压浓缩后得到浸膏５５０ｇ，将其进行正相硅胶柱色谱分离，以石

油醚－醋酸乙酯梯度洗脱，薄层色谱检查合并相似组分。石油醚一醋酸乙酯（５０：１）洗脱组分经凝胶柱色谱、反复硅胶柱色谱分离及重结晶得化合物３（５

　万方数据第３２卷第２４期２００７年１２月中国中药杂志

ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａＶ０１．３２．１８ｓＩＩｅ２４

１）ｅｅｅｍｌｍ，２００７

ｒａｇ）和４（４０ｒａｇ）。石油醚一醋酸乙酯（１０：１）洗脱组分经反复硅胶柱色谱和重结晶得到化合物１（１２５ｍｇ）和６（７ｍｇ）。石油醚－醋酸乙酯（３：１）洗脱组分经凝胶柱色谱和高效液相纯化得到化合物５（９ｍｇ）和７（５ｒａｇ）。石油醚一醋酸乙酯（２：１）洗脱组分经凝胶柱色谱和硅胶柱色谱得到化合物２（１２ｍｇ）。３结构鉴定化合物１白色晶体（氯仿），ｍｐ：１４２℃一１４４℃，ＥＩ－ＭＳ毗（％）３８６［１Ｖ１］＋。其１Ｈ—ＩＶＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００Ｉ－Ｉｚ）与１３Ｃ－ＮｌＶＩＲ（ＣＤＣｌ３，１２５Ｈｚ）数据与文献［１，２］报道的胆甾醇的相关数据一致，因此确定化合物１为胆甾醇。化合物２白色晶体（丙酮），ｍｐ：１９６—１９８℃，ＥＩ—ＭＳｍ／ｚ（％）４０２［Ｍ］＋（５）。１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＯＣＤ３，５００Ｈｚ）６：０．７１（３Ｈ，ｓ，Ｈ一１８），０．８６（６Ｈ，ｄ，，＝６．５Ｈｚ，Ｈ－２６，Ｈ－２７），０．９５（３Ｈ，ｄ，＿，＝６．０Ｈｚ，Ｈ－２１），０．９８（３Ｈ，８，Ｈ・１９），２．９９（１Ｈ，Ｈ—ＯＨ），３．４０（１Ｈ，１１１１，Ｈ－３），３．６８（１Ｈ，Ｈ－ＯＨ），３．７４（１Ｈ，１１１１，Ｈ一７），５．５２（１Ｈ，ｄ，＿，＝５．５Ｈｚ，Ｈ－６）。１３Ｃ—ＮｌＶＩＲ（ＣＤ３ＣＯＣＤ３，１２５Ｈｚ）６：３７．９（Ｃ一１），３２．４（Ｃ－２），７１．３（Ｃ・３），４２．８（Ｃ＿４），１４５．６（Ｃ－５），１２５．４（Ｃ－６），６５．１（Ｃ－７），３８．７（Ｃ－８），４３．２（Ｃ－９），３８．０（Ｃ一１０），２１．５（Ｃ－１１），４０．２（Ｃ一１２），４３．０（Ｃ－１３），５０．３（Ｃ－１４），２４．８（Ｃ－１５），２９．０（Ｃ・１６），５７．０（Ｃ－１７），１２．０（Ｃ－１８），１９．２（Ｃ・１９），３６．７（Ｃ－２０），１８．６（Ｃ－２１），３７．０（Ｃ．１２），２４．５（Ｃ－２３），４０．３（Ｃ－２４），２８．７（Ｃ－２５），２３．０（Ｃ－２６），２２．８（Ｃ－２７）。以上数据与文献［２］报道的胆甾－５－烯一筇，７ａ二醇数据一致，因此确定化合物２为胆甾＿５一烯－３口，７ａ二醇。化合物３白色固体，ｍｐ：１３７～１３９ｏＣ，ＥＩ．ＭＳｍ／ｚ（％）：４１４［Ｍ］＋（１００）。其１Ｈ．ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＯＣＤ３，５００Ｈｚ）与”Ｃ—ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＯＣＤ３，１２５Ｈｚ）数据与文献［３，４］报道的／３－谷甾醇的数据一致，因此确定化合物３为口－谷甾醇。化合物４浅红色油状物，ＥＩ－ＭＳ，砒（％）２９６［Ｍ］＋。１Ｈ—ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＯＣＤ３，５００Ｉ－Ｉｚ）８：０．９０（１２Ｈ，ｄ，．，＝６．５Ｈｚ），１．１０—１．５９（１９Ｈ，ｍ），１．６４（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３ａ），２．０５（２Ｈ，ｍ，Ｈ４），３．４０（１Ｈ，ｔ，．，＝５．０Ｈｚ，Ｈ・ＯＨ），４．０９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，Ｈ—１），５．３８（１Ｈ，ｍ，ｉ－ｉ－２）。＂Ｃ－ＮｌＶｌＲ（ＣＤ３ＣＯＣＤ３，１２５Ｉ－Ｉｚ）６：５９．２（Ｃ－１），１２５．９（Ｃ－２），１３７．４（Ｃ－３），４０．１（Ｃ１４），２５．９（Ｃ－５），３８．１（Ｃ－６），３３．４（Ｃ－７），３７．９（Ｃ－８），２５．５（Ｃ－９），３７．３（Ｃ－１０），３３．５（Ｃ・１１），３８．１（Ｃ－１２），２５．１（Ｃ－１３），４０．７（Ｃ－１４），２８．６（Ｃ－１５），２３．０（Ｃ・１６），１６．１（Ｃ－３ａ），２０．１（Ｃ－Ｔａ），２０．１（Ｃ—ｌｌａ），２２．９（Ｃ一１５ａ）。以上数据与文献［５，６］报道的叶绿醇的数据一致，因此确定化合物４为叶绿醇。化合物５橙红色粉末，ｍｐ：１０７℃，ＥＩ．ＭＳｍ／ａ（％）５６８［Ｍ］＋（５９）。１Ｈ—Ｎｒｄｌｌ（ＤＩＶＩＳＯ，５００ｒｌｚ）艿：

１．０３（１２Ｈ，ｓ，Ｈ－１６，１６’，１７，１７’），１．３２（２Ｈ，ｍ，Ｈ－２ａ，２ａ７），１．６４（２Ｈ，Ｉｌｌ，Ｈ－２ｂ，２ｂ７），１．６７（６Ｈ，８，Ｈ．１８，１８７），１．９３（２Ｈ，Ｉｌｌ，Ｈ－４ａ，４ａ’），１．９４（１２Ｈ，ｓ，Ｈ．１９，

１９７，２０，２０

７），２．２５（２Ｈ，ｍ，Ｈ－４ｂ，４ｂ７），３．７５（２Ｈ，ｍ，

Ｈ－３，３７），６．１４（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ，Ｈ－７，７’，８，８７），６．２２

（ＺＩ－Ｉ，ｄ，，＝１１．５Ｈｚ，Ｈ・１０，１０’），６．３４（２Ｈ，ｄ，．，＝９．０Ｈｚ，Ｈ一１４，１４’），６．３９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，Ｈ一１２，１２７），６．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，Ｈ－１１，１１’），６．７１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，Ｈ－１５，１５７）０１３Ｃ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ。１２５Ｈｚ）６：

３７．２（Ｃ一１，１’），４９．２（Ｃ－２，２７），６３．３（Ｃ－３，３７），４３．４

（Ｃ一４，４’），１２７．６（Ｃ－５，５’），１３７．７（Ｃ－６，６’）。１２６．３（Ｃ－７，７’），１３８．４（Ｃ－８，８’），１３６．２（Ｃ－９，９７），１３１．１（Ｃ・１０，１０７），１２５．９（Ｃ一１ｌ，１ｌ’），１３８．１（Ｃ－１２，１２７），１３７．０（Ｃ・１３，１３７），１３３．４（Ｃ—１４，１４’），１３２．０（Ｃ．１５，

１５’），２９．３（Ｃ一１６，１６７），３１．Ｏ（Ｃ—１７，１７’），２２．２（Ｃ－

１８，１８’），１３．３（Ｃ—１９，１９７，Ｃ－２０，２０’）。以上数据与

文献［７，８］报道的玉米黄素数据一致，确定化合物５为玉米黄素。化合物６浅黄色结晶（丙酮），ｍｐ１１４—１１６℃，ＥＩ—ＭＳｍ／ｚ（％）１２２［Ｍ］＋（９５）。其１Ｈ．ＮＩＶＩＲ

（ＣＤ，ＣＯＣＤ３，５００Ｈｚ）数据与文献［９］报道的对羟基苯甲醛数据一致，因此确定化合物６为对羟基苯甲醛。

化合物７淡黄色针晶（丙酮），ｍｐ１９６～１９８℃，ＥＩ—ＭＳｍ／ｚ（％）１４５［Ｍ］＋（９０）。其１Ｈ．ＮＭＲ

（ＣＤ３ＣＯＣＤ３，５００Ｈｚ）与１３Ｃ－ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＯＣＤ３，１２５

Ｉ－Ｉｚ）数据与文献［１０，１１］报道的３．吲哚甲醛一致，因此确定化合物７为３－吲哚甲醛。４药理实验采用ｌ、『ｌＴｒ法Ｈ２１对所得单体化合物在ＨＣＴ－８，Ｂｅｌ－７４０２，ＢＣｃ－８２３，Ａ５４９和ＨＥＬＡ细胞上进行细胞毒活性筛选，发现化合物２对所有细胞均具有毒性，ＩＣ５０（斗ｇ・ＩｒＩｌ。１）分别为１．９０，２．０２，１．９９，６．５２和１．２０。化合物４对ＨＣＴ一８和ＨＥＬＡ有毒性，ＩＣ５０（斗ｇ・ｍＬ‘１）分别为３．５ｌ和２．０４。・２６１１．