抗CD5单链抗体基因克隆和表达

免疫球蛋白超家族成员I z u m o 是精卵融合的必要蛋白1Naokazu Inoue, Masahito Ikawa, Ayako Isotani & Masaru Okabe 2陈凌 译、江一平 校作为构建人体的60万亿细胞的代表，精子和卵子相遇、互相识别并融合形成新一代生命。

精卵膜融合即受精是非常重要的事件，人们长期致力于寻找与该事件相关的因子[1]。

最近，已发现CD9是卵膜上与精卵融合相关的基本因子[2-4]，但精子方面与卵膜融合相关的因子尚未找到。

本文报道，运用抑制融合的单克隆抗体[5]和基因克隆技术，我们找到了精子的融合相关抗原，并发现该抗原是免疫球蛋白超家族的一个新蛋白。

我们将该基因命名为Izumo 并培育了该基因缺陷的小鼠品系。

Izumo -/-小鼠是健康的，但其雄性不育。

雄性的Izumo -/-小鼠能产生外观正常且能结合并穿透透明带的精子，但这些精子却不能与卵膜融合。

人精子也含有Izumo ，而且抗人Izumo 抗体能阻止人精子与去透明带的金黄地鼠卵融合。

为了寻找人精子中与卵膜融合的关键因子，我们利用2-D 电泳分离小鼠精子粗提蛋白，然后用能特异性阻断精卵融合的抗精子单克隆抗体OBF13[5]进行免疫标识，分离到一种精子跨膜蛋白成分，我们以日语中的婚姻之神 “Izumo ”① 为之命名。

通过液相串联质谱（LC-MS/MS ）分析发现，该蛋白中的10条短肽段与小鼠蛋白质数据库中一段名为RIKEN 的注册序列的部分肽段完全匹配（NCBI 登录号：XM_133424）。

利用该注册序列设计引物，我们成功地利用RT-PCR 从小鼠睾丸总RNA 中分离到该蛋白的编码序列。

同时，从人类基因组数据库中我们还查到了该蛋白的人类同源物的编码序列（NCBI 登录号：BC034769），该序列编码一种特殊的免疫球蛋白超家族（IgSF ），是一种I 型跨膜蛋白，其胞外部分为免疫球蛋白结构域，并可能含有一个糖基化位点（图1，a ，b ）。

分子诊断单选题库（附参考答案）、单选题（共100题，每题1分，共100分）l、可以用来分辨16SrRNA基因不能鉴别的非常接近的菌种和种内菌株的是A、23SrRNA基因B、16S-23S rRNA基因C、18S rRNA基因D、65000抗原基因E、penA基因正确答案：B2、Northe rn印迹杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测DNA样品中是否某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、用于基因定位分析D、检测靶分子是RNAE、用于阳性菌落的筛选正确答案：D3、DTT可以断开蛋白质分子间氨基酸残基形成A、酣键B、离子键C、二硫键D、氢键E、疏水键正确答案： C4、不适宜于直接作为第一代测序技术的DNA模板是A、双链DNA片段和PCR产物B、单链DNA片段C、克隆于质粒载体的DNA片段D、克隆于真核载体的DNA片段E、提取的染色质DNA正确答案：E5、关于核酸探针的描述下列不正确的是A、可以是DNAB、可以是RNAC、可用放射性标志物D、可用非放射性标志物E、必须是单链核酸正确答案：E6、下列说法错误的是A、用于RNA检测的样本短期可保存在'—20°cB、用于PCR检测的样本可用肝素作为抗凝剂C、如使用血清标本进行检测应尽快分离血清D、外周血单个核细胞可从抗凝全血制备E、用于核酸提取的痰液标本应加入lmol/LNaOH初步处理正确答案：B7、影响DNA分离纯化效果的是A、材料新鲜，低温保存B、加核酸酶抑制剂C、剧烈振荡D、除净蛋白质E、除净多糖正确答案： C8、cAMP对转录的调控作用是通过A、cAMP转变为C APB、CAP转变为cAMPC、形成cAMP-CAP复合物D、葡萄糖分解活跃，使cAMP增加，促进乳糖利用来扩充能源E、cAMP是激素作用的第二信使，与转录无关正确答案： C9、其3'经基末端带有可化学切割部分的d NTP称“可逆终止子"(reversible t erminator), 使用”可逆终止子”的测序反应是A、焦磷酸测序B、边合成边测序C、化学裂解法测序D、双脱氧终止法测序E、寡连测序正确答案：B10、荧光原位杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、检测的目标是RNAC、用于基因的定位分析D、阳性菌落的筛选E、蛋白水平的检测正确答案： C11、理想质粒载体具备的条件不包括下列哪项A、具有松弛型复制子B、单一的酶切位点C、分子量较大D、具有高的拷贝数E、具有插入失活的筛选标记正确答案： C12、血友病是一种A、染色体病B、先天畸形C、先天性代谢缺陷病D、常染色体隐性遗传病E、X连锁遗传病正确答案：E13、一般来说，设计的寡核菩酸探针的长度为A、200"'300b pB、2"'10b pC、100~2oob pD、60"'100b pE、17"'50b p正确答案：E14、首个被证实和克隆的乳腺癌易感基因是A、BRCAlB、BRCA2C、c-eeb B-2IHR2D、ATME、p53正确答案：A15、关于多顺反子m的描述，正确的是A、几个m RNA分子有不同的开放阅读框B、几个结构基因由不同的启动子调控转录C、一个mR NA分子有几个开放阅读框D、多个结构基因编码一类蛋白质E、一个结构基因编码多种蛋白质正确答案：C16、线粒体基因组22个tRNA可转录几种tRANA、22种B、20种C、18种D、13种E、2种正确答案：B17、可作为分子遗传标记的是A、HLAB、单拷贝序列C、高表达蛋白D、RFL PE、染色体正确答案：D18、关于增强子的叙述，正确的是A、与基因表达的时间、空间特异性无关B、只能近距离影响启动子活性的转录调控元件C、具有抑制基因转录的作用D、具有增强基因转录的作用E、它的作用有方向性正确答案：D19、下列不可以作为核酸探针使用的是A、microRNAB、单链DNAC、寡核昔酸D、mRNAE、病毒RNA正确答案：A20、下列属于核昔酸三联体重复序列发生高度重复所致的是A、珠蛋白生成障碍性贫血B、血友病C、迪谢内肌营养不良D、脆性X综合征E、镜状细胞贫血正确答案：D21、人类基因组中DNA的多态性不包括下列那种形式A、限制性片段长度多态性B、微卫星和小卫星多态性C、单核眢酸多态性D、非限制性片段长度多态性E、拷贝数多态性正确答案：D22、遗传病的最基本特征是A、遗传物质发生了改变B、患儿发病的家族性C、染色体畸变D、酶的缺陷E、先天性正确答案：A23、第三代DNA测序技术可能使用A、毛细管凝胶电泳B、PCR技术C、芯片技术D、荧光标记技术E、非光学显微镜成像正确答案：E24、碱基修饰剂导致DNA损伤的机制是A、与DNA正常碱基结构类似B、直接插入到DNA碱基对中C、造成DNA两条链错位D、能引起碱基的脱氨基E、可取代正常碱基掺入DNA链中正确答案：D25、结核分技杆菌的基因组特征是A、单链DNAB、双链DNAC、单正链DNAD、单正链RNA双聚体E、单负链RNA正确答案：B26、最常用的DNA探针标记方法是A、随机引物标记B、切口平移标记C、3'—末端标记D、5'—末端标记E、PCR法正确答案：A27、下列哪种蛋白质染色方法会出现“雪崩效应”A、银染色B、SYPRO OrangeC、考马斯亮蓝染色D、胶体考马斯亮蓝染色E、SYPRO Ruby正确答案：A28、下列不能用于核酸转移作固相支持物的是A、NC膜B、尼龙膜C、化学活性膜D、滤纸E、PVC膜正确答案：E29、目前被DNA自动化测序技术广泛应用的酶是A、大肠杆菌DNA聚合酶IB、Klenow片段C、测序酶D、耐热DNA聚合酶E、限制性内切核酸酶正确答案：D30、数字PCR技术是一种A、单分子绝对定量的技术B、单分子相对定量的技术C、多分子绝对定量的技术D、多分子相对定量的技术E、以上都不是正确答案：A31、DNA探针的长度通常是A、1000,..___.,2000个碱基B、500,..___.,1000个碱基C、400,..___.,500个碱基D、100,..___.,400个碱基E、<100个碱基正确答案： C32、基因多态性连锁分析中，第一、二、三代遗传标记分别是A、RFLP、SSCP、STRB、RFLP、SNP、STRC、RFLP,STR、SNPD、VNTR、SCCP、SNPE、VNTR、STR、RFLP正确答案： C33、基因诊断对下列哪些疾病最具有确切的临床诊断意义A、单基因遗传病B、畸形C、肿瘤D、多基因遗传病E、染色体疾病正确答案：A34、关于微卫星的说法正确的是A、通常由9D10个核昔酸组成B、是一类低度多态性的遗传标记C、是一种简单串联排列的RNA序列D、微卫星序列定位于基因的启动子、编码区、内含子及其外显子交界区E、通过改变RNA结构或与特异性蛋白结合而发挥作用正确答案：D35、HIV核酸类型是A、单链DNAB、双链DNAC、单正链DNAD、单正链RNA双聚体E、单负链RNA正确答案：D36、用于病毒基因突变检测的技术是A、荧光定量P CR技术B、P CR—RFL P技术C、P CR微卫星检测技术D、原位杂交技术E、c DNA表达芯片技术正确答案：B37、新一代测序技术中的边合成测序和焦磷酸测序均需要A、DNA聚合酶(DNA polymerase)B、AT P研充酸化酶(AT P sul f ury l ase)C、荧光素酶(luc iferase)D、三磷酸腺昔双磷酸酶(a p y rase)E、DNA连接酶(DNA1 igase)正确答案：A38、以下为荧光染料技术的优点，不正确的是A、适合任何一个反应体系B、荧光信号量与P CR反应产物量成正比，可以实时监测C、荧光信号的检测在每一次循环延伸后，简单方便D、不需要进行凝胶分离等第二次处理P CR产物，避免污染E、特异性高正确答案：E39、董组DNA技术的基本步骤不包括A、选B、分C、转D、接E、表达正确答案：E40、下列位置关系叙述正确的是A、启动子不会位于转录起始点下游B、增强子位于结构基因内部C、TATA盒位于转录起始点下游D、转录调控序列位于结构基因之外E、翻译起始密码子位于转录起始点下游正确答案：E41、人类基因组计划的大部分工作草图绘制工作通过该载体完成A、M13m p质粒B、细菌质粒C、载体有酵母人工染色体(YAC)D、细菌人工染色体(BAC)E、穿梭质粒正确答案： C42、第一代DNA测序技术的核心技术是A、Sanger的双脱氧链终止法B、Ma xa m和Gilbert的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR技术E、DNA自动分析技术正确答案：A43、基因芯片技术的本质就是A、聚合酶链反应技术B、酶切技术C、蛋白质分子杂交技术D、基因重组技术E、核酸分子杂交技术正确答案：E44、硝酸纤维素膜的缺点不包括A、轻微电渗作用B、易蒸发C、吸水性差D、脆性大E、标本用量少正确答案：B45、焦磷酸测序技术不使用的酶是A、DNA聚合酶(DNA polymerase)B、DNA连接酶(DNA1 igase)C、ATP研充酉变于七酉每(ATP sulfury lase)D、荧光素酶(luc iferas e)E、三磷酸腺茬双磷酸酶(Apy rase)正确答案：B46、双向电泳的样品制备目的不包括的是A、去除蛋白质杂质B、变性C、氧化D、还原E、溶解正确答案：B47、某基因位点正常时表达为精氨酸，突变后为组氨酸，这种突变方式为A、错义突变B、无义突变C、移码突变D、同义突变E、动态突变正确答案：A48、肤质量指纹图谱常与哪一种质谱技术联合应用A、TOFB、E SIC、E SI-MSD、MAL DIE、FAE正确答案：D49、下面关于mtDNA基因突变的说法不正确的是A、同一细胞内所有的mtDNA会发生同样的变异B、同一细胞内的mtDNA会发生不同的变异．C、mtDNA—般很难发生改变，一但mtDNA基因突变就会导致疾病的发生D、点突变是mtDNA碱基突变的主要形式E、mtDNA拷贝数目会发生改变，也属于mtDNA基因突变正确答案： C50、核酸分子杂交的基础是A、磷酸化B、碱基互补配对C、配体受体结合D、抗原抗体结合E、甲基化正确答案：B51、受精卵中的线粒体A、几乎全部来自精子B、几乎全部来自卵子C、精子与卵子各提供1/2D、不会来自卵子E、大部分来自精子正确答案：B52、原核生物基因组中没有A、操纵子B、外显子C、内含子D、转录因子E、插入序列正确答案： C53、荧光定量PCR检测核酸量的时间段在A、非指数期B、PCR反应的最初阶段C、PCR反应最后的时间段D、指数期的起始阶段E、指数期的终末阶段正确答案：D54、在重组DNA技术领域，DNA克隆主要是指A、建立单克隆抗体B、建立多克隆抗体C、构建重组DNA分子D、无性繁殖DNAE、有性繁殖DNA正确答案：D55、下列哪种病毒在复制过程中可产生RNA-DNA杂交体A、HPVB、旧VC、HBVD、HCVE、流感病毒正确答案：B56、下面对m t DNA中D环区C D-loo p)的描述正确的是A、是结构基因，编码13个蛋白多肤B、编码22个tRNAC、编码2种rRNA,即12SrRNA和16SrRNAD、参与调控线粒体的复制和转录E、可折叠成茎环结构正确答案：D57、编码HIV包膜g pl20的基因是A、gag基因B、pol基因C、env基因D、E6基因E、LTR正确答案： C58、基因芯片技术的主要步骤不包括A、杂交反应B、样品制备C、芯片的设计与制备D、酶切分析E、信号检测正确答案：D59、对于关核昔酸探针，杂交温度一般低于其T m值A、30"'40°CB、10"'15°CC、20"'30°CD、15"'30°CE、5°c正确答案：E60、以质粒为载体，将外源基因导入受体菌的过程称A、转位B、转染C、感染D、转导E、转化正确答案：E61、聚合酶链反应可表示为A、P ECB、P ERC、P DRD、BCRE、PCR正确答案：E62、PCR反应必需的成分是A、BSAB、DTTC、Tween20D、明胶E、Mg2+正确答案：E63、关于Ct值的描述，不正确的是A、Ct值是荧光定量PCR获得的最初数据资料B、Ct代表了反应达到预定设置的阔值时的循环次数C、Ct与反应模板的初始模板量成正比D、Ct越小代表其模板核酸拷贝数越多E、Ct值处于扩增曲线和荧光本底基线的交叉点正确答案： C64、生物芯片根据芯片上固定的探针种类不同可分为几种，其中不包括A、测序芯片B、蛋白质芯片C、细胞芯片D、组织芯片E、DNA芯片正确答案：A65、重复序列通常只有106b p,重复10口60次并呈高度多态性的DNA序列称为A、小卫星DNAB、微卫星DNAC、c DNAD、高度重复顺序DNAE、单拷贝顺序DNA正确答案：A66、未知突变的检测，下列最准确的方法是A、PCRB、序列测定C、核酸杂交D、RFLPE、ASO正确答案：B67、DHPLC技术检测异质突变，阳性结果应该出现A、单峰B、双峰C、三峰D、无峰E、多峰正确答案：B68、细胞周期检查点激酶l基因定位于哪个染色体上A、染色体l p32B、染色体12q24C、染色体llq24D、染色体2q32E、染色体9p21正确答案： C69、DNA提取中不能有效的去除蛋白质的是A、酚／氯仿抽提B、S DSC、高盐冼涤D、蛋白酶kE、RNase正确答案：E70、真核生物基因表达调控的关键环节是心染色质活化＠转录起始＠转录后加工＠翻译起始＠翻译后加工A、®+@B、心＋＠＋＠C、@D、CD+®+@E、®CD+®正确答案： C71、某人提取DNA后将DNA溶液稀释10倍，然后经紫外分光光度计检测结果为A260=0.56A280=0.31, 比色皿光径1cm,该DNA样品的浓度为A、180µg/mlB、150µg/mlC、224µg/mlD、250µg/mlE、280µg/ml正确答案：E72、大部分II类限制性核酸内切酶识别序列的特点是A、超螺旋结构B、a螺旋结构C、串联重复序列D、锌指结构E、回文结构正确答案：E73、原核生物基因组结构特点不应包括A、含插入序列B、具有操纵子结构C、含有重复顺序D、断裂基因E、转录产物为多顺反子正确答案：D74、某个体体细胞中染色体数目为49,称为A、四倍体B、三倍体C、亚二倍体D、超三倍体E、超二倍体正确答案： C75、用于基因定位分析的是A、Northern印迹杂交B、点／狭缝杂交C、Southern印迹杂交D、菌落杂交E、原位杂交正确答案：E76、下列哪种不属于真核生物基因的顺式作用元件A、沉默子B、衰减子C、激素反应元件D、启动子E、增强子正确答案：B77、HIV最易发生变异的部位是A、包膜蛋白B、逆转录酶C、核衣壳蛋白D、剌突蛋白E、内膜蛋白正确答案：D78、操纵子结构不存在于A、病毒基因组中B、真核生物基因组中C、原核生物基因组中D、细菌基因组中E、大肠杆菌基因组中正确答案：B79、关于RNA探针的描述下列不正确的是A、可用于随机引物标记B、特异性高C、灵敏度高D、可用非同位素标记法标记E、不易降解正确答案：E80、关于核酸探针的描述下列不正确定的是A、可以是DNAB、可以是RNAC、可用放射性标志物D、可用非放射性标记E、必须是单链核酸正确答案：E81、巢式PCR错误的是A、是对靶DNA进行二次扩增B、第二次扩增所用的模板为第一次扩增的产物C、巢武PCR可提高反应的灵敏度和特异性D、常用于靶基因的质和（或）量较低时E、第二对引物在把序列上的位置应设计在第一对引物的外侧正确答案：E82、下列方法中不能分辨野生型和突变型基因的是A、PCR-SSCPB、变性梯度凝胶电泳C、溶解曲线分析D、逆转录PCRE、RFLP正确答案：D83、用于确诊HIV感染的是A、ELI SA检测p24抗原B、I FA检查P24抗体C、ELI SA检测g pl20抗原D、W este rn检测P24抗原及g pl20抗原E、RI A检测g pl20抗原正确答案：D84、可以快速确定是否存在目的基因的方法是A、So uthern印迹杂交B、Northern印迹杂交C、原位杂交D、点／狭缝杂交E、菌落杂交正确答案：D85、Alu家族属于A、可变数目串联重复序列B、短串联重复序列C、短散在核元件D、长散在核元件E、DNA转座子正确答案： C86、West ern印迹过程中若转移>20K D的蛋白质时应采用何种硝酸纤维素膜A、0.25µmB、0.35µmC、0.45µmD、0.55µmE、0.6µm正确答案： C87、以下不需要对引物或探针预先标记的实时定量PCR方法是A、TaqMa n水解探针技术B、探针杂交技术C、分子信标技术D、SYBR Gr een I荧光染料技术E、数字PCR技术正确答案：D88、Sou t h ern印迹杂交的描述正确的是A、用于基因定位分析B、检测靶分子是RNAC、不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息D、用于阳性菌落的定位分析E、用于蛋白质水平的检测正确答案： C89、下列哪种克隆载体为容纳大片段外源DNA的首选载体？A、质粒B、粘粒C、酵母人工染色体D、入噬菌体E、M13噬菌体正确答案： C90、下列有关蛋白质提取和分离的说法，错误的是A、采用透析法是蛋白质与其他小分子化合物分离开来B、离心沉淀法通过控制离心速率使分子大小、密度的蛋白质分离C、蛋白质在电场中与其自身所带的电荷相同的电极方向移动D、透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质不能通过半透膜的特性E、在蛋白质溶液中加入大量中性盐可使蛋白质沉淀析出正确答案： C91、原核生物与DNA结合并阻止转录进行的蛋白质称为A、正调控蛋白B、阻遏物C、诱导物D、反式作用因子E、分解代谢基因激活蛋白正确答案：B92、关于管家基因叙述错误的是A、在生物个体的几乎各生长阶段持续表达B、在生物个体的几乎所有细胞中持续表达C、在生物个体全生命过程的几乎所有细胞中表达D、在生物个体的某一生长阶段持续表达E、在一个物种的几乎所有个体中持续表达正确答案：D93、关于单基因遗传病的叙述，正确的是A、可进行定性诊断和定量诊断B、在群体中发病率高C、受多对等位基因控制D、原发性高血压是单基因遗传病E、发病机制都巳阐明正确答案：A94、有关微卫星的描述正确的是A、散在重复序列的一种B、l O"'l OO b p组成的重复单位C、主要存在于着丝粒区域，通常不被转录D、形式为C C A)n/(TG)n、(AG)n、(CAG)n等E、又称为可变数目串联重复序列(VNTR)正确答案：D95、DHPLC检测要求样品片段大小范围A、<200b pB、200"'500b pC、<500b pD、300"'600b pE、100"'300b p正确答案：B96、第二代测序技术最主要技术特征是A、对单分子DNA进行非PCR的测序B、针对SNP进行非PCR的测序C、高通量和并行PCR测序D、直接分析SNPE、直接进行个体基因组测序和SN P研究正确答案： C97、HI V结构具有C D4分子受体的部位是A、衣壳B、包膜C、内膜D、剌突E、核酸正确答案：D98、P CR的变性温度一般为A、72°cB、55°c左右C、75—80°CD、94—95°CE、25°C正确答案：D99、有关SNP位点的描述，不正确的是A、生物芯片技术可提高SNP位点检测正确性B、单个SN P位点信息量大，具广泛的应用前景C、在整个基因组中大概有300万个SNP位点D、被称为第三代DNA遗传标点E、SNP位点是单个核昔酸的变异正确答案：A100、最容易降解的核酸探针是A、c DNA探针B、ds DNA探针C、ss DNA探针D、g DNA探针E、RNA正确答案：E。

细胞与分子免疫学杂志(Chin J Cell Mol Immunol)2020,36(12)1129•论著•文章编号：1007-8738(2020)12-1129-05抗人肿瘤内皮标志物1(TEM1)抗体的表达及活性鉴定张玲玲'，吴介恒S韩东晖'，杨发S郑国旭S席文锦-郭张燕-杨安钢2,秦卫军顼，温伟红仆(空军军医大学：I西京医院输血科J基础医学院免疫学教研室，彳西京医院泌尿外科，陕西西安710032;°西北工业大学医学研究院，陕西西安710072)［摘要］目的构建抗人肿瘤内皮标志物1(TEM1)全抗体IgG78的真核表达载体，进行表达纯化后鉴定其生物学活性。

方法利用PCR分别从单链抗体ScFv78中扩增TEM1抗体的轻、重链可变区基因，并克隆入带有小鼠抗体恒定区的真核表达载体Bichim-L,瞬时转染HEK293F细胞，表达产物用蛋白G亲和层析柱进行纯化，所得蛋白用SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定，采用流式细胞术和活细胞ELISA检测该抗体与TEM1阳性细胞的结合特异性及亲和力。

结果成功构建了TEM1全抗体IgG78的真核表达载体，并在HEK293F细胞中表达。

SDS-PAGE和Western blot法证实目的蛋白符合预期大小，流式细胞术及细胞ELISA结果显示该抗体可特异性结合TEM1阳性肿瘤细胞，且有较高的亲和力。

结论成功获得了一株具有良好结合特异性和较高亲和力的TEM1抗体。

［关键词］肿瘤内皮标志物1(TEM1)；CD248；抗体；HEK293F细胞；真核表达［中图分类号］R392.ll,R730.51,R392-33［文献标志码］A肿瘤内皮标志物1(tumor endothelial marker1, TEM1),又称内皮唾液酸蛋白或CD248,人TEM1基因定位于染色体Hql3,其编码的TEM1蛋白相对分子质量(他)为165000,是一种单链跨膜糖蛋白⑷。

抗ICAM-1单链抗体基因的克隆及序列分析李月红;张国力;岳玉环;邱叶峰;李树民;吴广谋;朱平【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2004(24)6【摘要】应用 RT- PCR技术 ,从分泌具有中和活性的抗 ICAM- 1单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 F12中 ,扩增出抗体VH和 VL 基因 ,用 linker(Gly4 Ser) 3基因 ,将 VH和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆到 p MD18- T载体中。

经核苷酸序列分析证实 ,VH、VL 基因和 linker基因拼接正确 ,基因全长为 74 4 bp。

经计算机分析 ,VH 和 VL 基因均为新发现的基因序列 ,符合功能性重排鼠抗体可变区基因特征。

VH和 VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链 (B)和轻链к【总页数】3页(P556-558)【关键词】抗ICAM-1单链抗体基因;基因克隆;序列分析;pMD18-T载体【作者】李月红;张国力;岳玉环;邱叶峰;李树民;吴广谋;朱平【作者单位】吉林农业大学动物科技学院;军事医学科学院军事兽医研究所【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.抗磺胺二甲嘧啶单链抗体基因的克隆与序列分析 [J], 安宇;王颖;张东杰;柳增善2.抗新城疫病毒HN蛋白单链抗体基因的克隆与序列分析 [J], 黄艳艳;路希山;胡北侠;徐栋;李士娟;程凯慧;潘宗海;张秀美3.抗盐酸克伦特罗单链抗体基因的克隆、序列分析及表达 [J], 霍方珍;卢士英;周玉;杨正涛;柳增善4.抗脂肪细胞特异膜蛋白单链抗体基因的克隆及序列分析 [J], 汪磊;高士争;张曦;郝军元;张玉静5.抗隐孢子虫子孢子表膜单链抗体基因的克隆和核苷酸序列分析 [J], 尹继刚;张西臣;朱平;张国利;李建华;何宏轩;田宗成;杨举因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。