免疫组织化学检验技术.ppt

第十三章免疫组织化学技术免疫组织化学技术又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。

第一节概述免疫组织化学的基本过程包括：①抗原的提取与纯化；②免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；③将标志物与抗体结合形成标记抗体；④标本的处理与制备；⑤抗原抗体免疫学反应以及标志物呈色反应；⑥观察结果。

一、标本的处理（一）标本的主要来源1.活体组织：应取材于病变组织及病变与正常组织交界处，大小适中。

减少对组织标本的损伤与挤压。

2.体液、穿刺液：可直接涂片或经离心后取沉淀物涂片。

3.培养细胞：悬浮培养的细胞经离心沉淀后做细胞涂片，盖玻片上的单层培养细胞直接固定。

（二）标本的固定与保存1.标本固定的目的：使细胞内蛋白质凝固，细胞内分解酶反应终止，以防止细胞自溶，保持细胞形态和结构；保存组织细胞抗原性；防止标本脱落；除去妨碍抗体结合的类脂，便于保存；抑制组织中细菌的繁殖，防止组织腐败和在后续组织制备中的细胞结构和成分的改变。

标本的固定应以不损伤细胞形态，不干扰固定后抗原的识别和结合为原则。

2.固定剂的选择：蛋白质类抗原，可用乙醇或甲醇固定；微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定；如需除去病毒的蛋白质外壳，可使用胰蛋白酶；多糖类抗原用10%福尔马林固定或以微火加热固定；如有黏液物质存在，应用透明质酸酶等处理除去；类脂质丰富的组织进行蛋白、多糖抗原检测时，需用有机溶剂（乙醚、丙酮等）处理除去类脂。

组织标本常规固定液为中性缓冲甲醛。

3.制片方法的评价：冷冻和石蜡切片是免疫组化最常用的制片方法。

首选冷冻切片。

其操作简便，可避免石蜡切片因固定（甲醛）、脱水、浸蜡等对抗原所造成的损失，适用于不稳定的抗原。

石蜡切片是研究形态学的主要制片方法，它不但是观察组织细胞结构的理想方法，而且可用在陈旧石蜡包埋材料免疫组化的回顾性研究。

免疫组织化学检验技术免疫组织化学检验技术的发展和应用一、引言免疫组织化学检验技术是一种重要的生物医学实验技术，通过对组织样本中特定抗原的检测，可以帮助医生诊断病变组织或肿瘤类型，以及评估其分子表达水平。

本文将从免疫组织化学检验技术的基本原理、发展历程以及应用领域等方面综述相关知识。

二、免疫组织化学检验技术的基本原理免疫组织化学检验技术是一种建立在免疫学原理基础上的组织学检测方法。

其基本原理是通过使用专门设计的抗体与标记物的结合来检测组织样本中的特定蛋白质。

常用的标记物包括酶、荧光染料等，可以使抗原表达区域呈现显色或发光的现象，进而实现对组织中抗原的定性或定量分析。

三、免疫组织化学检验技术的发展历程免疫组织化学检验技术的发展经历了多个重要的里程碑。

早在20世纪50年代，Papst和Russell等学者首次使用抗体来检测肿瘤细胞蛋白质的表达。

从那时起，免疫组织化学检验技术逐渐成为研究和诊断领域中不可或缺的工具。

随着抗体和标记物的不断改进以及细胞和分子生物学的进展，免疫组织化学检验技术也日益完善。

四、免疫组织化学检验技术的应用领域免疫组织化学检验技术在生物医学领域中有着广泛的应用。

在肿瘤病理学中，免疫组织化学检验技术可以用来确定不同类型的肿瘤，并分析其分子表达特征。

在研究某些重要蛋白质表达与疾病关系的基础研究中，免疫组织化学检验技术可以帮助寻找新的生物标志物，促进疾病的早期诊断和治疗。

该技术还可以用于药物研发过程中的药物靶点评估、药效评估以及药物安全性评估等方面。

五、个人观点和理解免疫组织化学检验技术作为一种重要的生物医学实验技术，对于促进人类健康和疾病治疗具有重要意义。

通过使用免疫组织化学检验技术，我们可以更加准确地诊断患者的疾病类型，并对其进行个体化的治疗。

免疫组织化学检验技术还可以帮助我们深入了解蛋白质的分子机制，促进生物医学研究的进展。

总结与回顾本文主要介绍了免疫组织化学检验技术的基本原理、发展历程以及应用领域。

免疫组织化学技术应⽤：细胞表⾯成份的研究胶体⾦技术与冷冻蚀刻技术结合-细胞膜蛋⽩颗粒或其它膜成份进⾏精细定位电镜原位杂交技术，能够在超微⽔平上精确定出基因位点免疫胶体铁细胞化学染⾊法胶体铁是⼀种阳离⼦胶体，将抗体分⼦标记上胶体铁，通过普鲁蓝反应呈⾊，胶体铁颗粒有⼀定⼤⼩，还具有⼀定电⼦密度，可⽤在电镜和光镜⽔平的抗原定位研究。

酶免疫电镜技术酶免疫电镜技术是利⽤酶的⾼效率的催化作⽤对其底物的反应形成不同的电⼦密度，借助于电⼦显微镜观察，证明酶的存在，从⽽对抗原进⾏定位。

第六节免疫组化技术的应⽤⼀、免疫组织化学技术的临床应⽤荧光免疫组织化学技术的应⽤⾃⾝抗体的检测游离在外周⾎中的抗体固定在组织中的的抗体HEP-2细胞抗着丝粒抗体的阳性显⾊肾⼩球抗基底膜抗体的阳性显⾊细菌、病毒的快速鉴定藤黄微球菌绿⾊-活菌红⾊-死菌寄⽣⾍的检测与研究猴胚肾细胞内⼸形⾍繁殖吖啶橙染⾊绿⾊-DNA红⾊-RNA恶变组织中肿瘤抗原的检测⼈肝癌细胞吖啶橙染⾊其他：免疫荧光技术也应⽤于⾎液中B细胞和T细胞及其亚群的鉴定、特殊染⾊体的鉴定、激素和酶的局部组织定位等⽅⾯。

酶免疫组织化学技术的应⽤提⾼病理诊断准确性（HE可观察到炎性细胞浸润，ED1染⾊可观察到巨噬细胞浸润）Survivin在肝癌细胞核的表达癌基因蛋⽩的临床应⽤对肿瘤细胞增⽣程度的评价Ki67在⼩肝癌组织中的表达肿瘤转移分期判断肿瘤的靶向治疗辅助诊断免疫性疾病和感染性疾病，观察免疫复合物沉积状况⼆、免疫组织化学技术的拓展荧光激活细胞分类仪（FACS）FACS是将免疫荧光与细胞⽣物学、流体⼒学、激光和微机信息处理系统等多学科的⾼新技术融为⼀体，进⾏细胞和分⼦⽔平的基础理论与应⽤研究的⼀种先进仪器FACS原理⽰意图488nmlaser+-FluorescenceActivatedCellSortingChargedPlatesSin glecellssortedintotesttubesFALSSensorFluorescencedetector共聚焦显微镜技术的应⽤“细胞CT”！激光扫描共聚焦显微镜(LaserScanningConfocalMic roscope，简称LSCM)⼯作原理共轭光路使⾮焦平⾯的光线被抑制，减少了⼲扰，以及使⽤光⾊较纯的激光，所以成像分辨率更⾼增加了激光扫描部分，可连续、固定范围内⼩功率扫描，记录动态变化光学结构为共轭聚焦结构，此结构可使样品中间固定层⾯被激光扫描，通过调节参数可实现样品的多层扫描，俗称“细胞CT”⼀般荧光显微镜（左）与激光共聚焦显微镜（右）的区别LSCM应⽤⼴泛罗丹明123染细胞线粒体细胞器研究-籍特异性荧光探针。

免疫组织化学检验技术一、免疫组织化学检验技术简介免疫组织化学检验技术（Immunohistochemistry，IHC）是一种常用的实验技术，它利用抗原-抗体的特异性结合反应，检测组织或细胞中的蛋白质、多肽、激素等生物活性物质。

该技术可用于疾病的诊断、病理学研究、药物靶点筛选等多个领域。

二、免疫组织化学检验技术的基本原理免疫组织化学检验技术的核心是抗原-抗体的特异性结合反应。

这种反应基于抗体和抗原的互补性，即抗体分子中的抗原结合部位能够与抗原分子中的互补部位结合。

在免疫组织化学检验中，将组织或细胞固定在载玻片上，然后加入特异性抗体，通过孵育反应，抗体与组织或细胞中的抗原结合。

随后加入显色剂进行显色反应，根据显色情况判断是否存在相应的抗原。

三、免疫组织化学检验技术的应用例子1.肿瘤诊断：免疫组织化学检验技术可用于肿瘤诊断，通过检测肿瘤组织中的特异性抗原，如癌胚抗原、糖类抗原等，有助于确定肿瘤的性质和分化程度。

例如，乳腺癌患者的肿瘤细胞可能表达ER、PR、HER2等基因蛋白，通过检测这些蛋白的表达情况，有助于指导治疗和判断预后。

2.感染性疾病诊断：免疫组织化学检验技术也可用于感染性疾病的诊断，例如检测病毒抗原、细菌抗原等，有助于确定感染的病原体种类。

例如，在流感病毒感染中，通过检测病毒核蛋白抗原，有助于确诊病毒感染。

3.药物靶点筛选：免疫组织化学检验技术还可用于药物靶点筛选，通过检测目标蛋白在组织或细胞中的表达情况，筛选出可能的药物作用靶点。

例如，在寻找治疗肿瘤的新药时，可利用免疫组织化学技术检测肿瘤细胞中的各种蛋白表达情况，筛选出可能的药物作用靶点。

四、免疫组织化学检验技术的优缺点1.优点：具有高特异性、高灵敏度、操作简便、易于定量等优点。

同时，免疫组织化学检验技术可以用于检测组织或细胞中的蛋白质、多肽、激素等生物活性物质，有助于深入探讨疾病的发病机制和病理过程。

2.缺点：可能会出现非特异性染色和交叉反应，影响结果的准确性。