免疫组织化学(傅琦博)-免疫组织化学

免疫组织化学技术免疫组织化学技术又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。

概述免疫组织化学（简称免疫组化）技术中根据标志物的不同，可分为免疫荧光组织化学技术、酶免疫组织化学技术、免疫金（银）组织化学技术、亲和免疫细胞化学技术、免疫电子显微镜技术等。

免疫组织化学的基本过程包括：①抗原的提取与纯化；②免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；③将标志物与抗体结合形成标记抗体；④标本的处理与制备；⑤抗原抗体免疫学反应以及标志物呈色反应；⑥观察结果。

标本的处理标本的主要来源标本的来源主要有以下几种：1.活体组织各种实验动物和人体活检组织。

标本应取材于病变组织及病变与正常组织交界处，大小适中，应减少对组织标本的损伤与挤压。

2.各种体液、穿刺液标本量少，可直接涂片或经离心后取沉淀物涂片。

3.培养细胞悬浮培养的细胞经离心沉淀后做细胞涂片，盖玻片上的单层培养细胞直接固定，吹干后保存备用。

标本的固定与保存使细胞内蛋白质凝固，保持细胞形态和结构；保存组织细胞抗原性；防止标本脱落；除去妨碍抗体结合的类脂，便于保存；抑制组织中细菌的繁殖，防止组织的改变。

蛋白质类：可用乙醇或甲醇固定；微生物：可用丙酮或三氯化碳固定；多糖类：用10%福尔马林（甲醛溶液）或以微火加热固定；去除黏液物质：透明质酸酶等；去除类脂质：有机溶剂（乙醚、丙酮等）。

冷冻切片可使抗原达到最大限度的保存。

石蜡切片是研究形态学的主要制片方法。

抗原的保存与修复使组织抗原决定簇重新暴露，是免疫组织化学技术中的重要步骤。

常用方法有：1.酶消化法无花果蛋白酶为轻度消化酶；胰蛋白酶为中度消化酶；胃蛋白酶为强消化酶。

2.盐酸水解法操作中应注意掌握盐酸浓度、水解温度及水解时间，以最大限度暴露抗原而又不破坏抗原性为目的。

3.微波法将石蜡切片置于缓冲液中，凭借微波辐射产生的高热效应及高速分子运动能量解开交联蛋白，暴露被掩盖的抗原决定簇。

免疫组织化学技术第一篇：免疫组织化学技术基础免疫组织化学技术是一种利用免疫学原理对细胞或组织进行化学定位的技术。

该技术可以用于鉴定细胞或组织中某种特定抗原的存在及分布情况，从而为病理诊断、学术研究和药物研发等提供有力的支持。

一、免疫组织化学技术的原理免疫组织化学技术的原理是利用抗体与其靶分子间的特异性结合反应，来实现对目标物的检测和定位。

抗体可以识别并结合到人体或动物体内的大部分蛋白质，包括生物芯片检测、ELISA检测、Western blotting等技术所用的基质和抗原。

在免疫组织化学技术中，针对某种抗原的特异性抗体先与组织样本中的特异性抗原发生特异性结合，然后通过检测抗体所标识的色素或荧光物等发射的信号，加以可视化。

例如，用特异性抗体和明胶酶-抗明胶酶复合物在组织样本上进行化学染色，从而定位并可视化样本中的抗原。

二、免疫组织化学技术的步骤1. 样本制备：第一步是样本的制备，包括切片、固定和脱水等处理。

固定组织样本是为了保持其形态和结构，因此往往使用福尔马林等固定剂进行固定。

在制片时，细胞或组织切割成相对较薄的切片，一般为5-10 μm。

切割后，通常漂洗去除固定剂，然后脱水，通常采用乙醇浓度逐渐递增的方法进行。

最后，将切片放置于有机媒介中，如去石蜡等。

2. 抗原修复：切片离体后，抗原结构可能会发生改变，因此需要进行抗原修复。

抗原修复可以通过热处理、酶解或酸解等方式进行。

热处理方法包括水浴、压力釜等；酶解包括蛋白酶和肝素酶等；而酸解则是利用酸将组织溶解并解离抗原。

3. 抗体标记：抗体标记是免疫组织化学技术的核心步骤。

选择具体的抗体，可以选择单克隆或多克隆抗体等。

接着，抗体常被标记为一种检测信号(如与酶或荧光物质结合)。

免疫荧光技术通常是通过荧光标记的二抗或荧光标记的可溶解复合物来可视化。

荧光地染色颜色有多种不同的方式，如荧光素-醌染料、荧光素-异硫氰酸染料等，可以根据不同的研究目的选择不同的荧光染色方法。

免疫组织化学技术在病理学研究中的应用病理学是研究疾病发生、发展和变化特点的一门学科，是现代医学研究的重要领域。

随着科技的发展和人们对疾病认识的深入，病理学研究的内容和技术手段也在不断变化和更新。

其中，免疫组织化学技术的应用越来越广泛，成为病理学研究中不可或缺的一个重要工具。

一、免疫组织化学技术的基本原理免疫组织化学技术是一种利用抗体与相应抗原特异性结合的原理，通过一系列化学反应实现检测细胞、组织或器官中特定抗原分布及量的方法。

其基本原理是将具有特异性的抗体与需要检测的组织或细胞样本结合，再经过一系列的化学反应，使得需要检测的分子表达出最终的信号。

二、免疫组织化学技术已经广泛应用于病理学的研究中，有助于对疾病的诊断、预后和疗效评估做出更精确的判断和处理。

以下是几个典型的应用场景。

1.疾病诊断和鉴别诊断在疾病的诊断和鉴别诊断中，免疫组织化学技术可以帮助医生区分疾病类型和分子亚型。

例如，病理学家可以利用免疫组织化学技术来鉴别癌细胞和正常细胞之间的区别，判断该细胞属于哪种癌症类型及其分子表型，以便制定相应的治疗方案。

2.预后评估免疫组织化学技术还有助于帮助医生预测病人的预后。

一些免疫组织化学的蛋白质标志物，能够帮助预测疾病的复发和生存时间。

例如，HER2，是乳腺癌中一个非常重要的标志物，可用于预测病人的预后和治疗方案的制定。

3.研究疾病的发病机理免疫组织化学技术也广泛应用于研究疾病的发病机理。

例如，探究一些免疫相关的疾病，医生可以利用免疫组织化学技术来检测细胞中免疫相关分子的表达，如细胞因子、趋化因子、炎症介质等，以此来研究疾病的发生、发展及其治疗策略。

4.治疗效果评估免疫组织化学技术还可以用于治疗效果的评估。

例如，他汀类药物在病毒感染和白血病中的研究表明，该类药物可以抑制细胞中蛋白质酶活性，抑制病毒复制和细胞增殖。

利用免疫组织化学技术可以检测出药物治疗后免疫相关分子的差异，从而评估治疗的有效性。

三、免疫组织化学技术的局限性免疫组织化学技术并不是一种完美的技术，也存在着一些局限性。

免疫组织化学是一种用于研究组织中特定抗原或蛋白质表达的方法。

下面是免疫组织化学的一般步骤：
取材和固定：从感兴趣的组织或细胞中取材，常用方法包括活体组织切片或细胞培养。

然后将取得的样本进行固定，常用的固定剂有福尔马林和乙醛等。

抗原解露：将固定的样本进行抗原解露处理，以增强目标抗原的可见性。

常用的解露方法包括热解露、酶解露和抗原修复等。

阻断非特异性结合：在进行免疫染色前，需要使用适当的阻断剂或血清来阻断非特异性结合位点，减少假阳性结果的产生。

抗体染色：将适当的一抗（特异性抗体）加入样本中，与目标抗原结合形成免疫复合物。

一抗可以是单克隆抗体或多克隆抗体。

通常会在该步骤中进行洗涤，以去除未结合的抗体。

二抗染色：添加与一抗宿主动物种类不同的二抗（标记有特定染色剂的抗体），使其与一抗结合。

二抗的标记剂可以是酶、荧光染料或金颗粒等，用于可视化免疫反应结果。

可视化：根据标记剂的性质，采用相应的方法对免疫反应结果进行可视化。

例如，使用底物来检测酶标记的二抗，或者直接观察荧光染料的发光信号。

染色和显微观察：在免疫反应完成后，可以对样本进行染色以增强对组织结构的观察。

最后，在显微镜下观察和记录结果。

免疫组织化学免疫组织学是研究细胞、组织和器官在发生免疫反应时所发生的化学变化的科学。

通过采用组织化学和免疫组织化学技术可以观察和研究免疫系统中各个细胞分子、细胞膜和细胞内物质在免疫反应中的变化情况，从而了解和诊断疾病。

一、组织化学技术1.石蜡切片技术石蜡切片技术是通过对组织进行处理后包埋在石蜡中，再将石蜡切片来观察组织状态的技术。

这种技术可以非常清晰地显示细胞和细胞膜，同时被用于对组织进行染色和特定化学分析。

2.冻切片技术冻切片技术是将组织冷冻并且快速切片来观察组织状态的一种技术。

这种技术用于光镜下检测细胞活性和免疫反应时的病理学变化以及细胞的病态化变化。

3.光镜检查光镜检查是针对石蜡切片和冻切片进行的检查，对病理学变化等细节进行更加细致的观察。

二、免疫组织化学技术1.免疫荧光技术免疫荧光技术是通过对组织中某些成分进行标记，利用特定的荧光染料来显示出细胞、分子及其他细节结构的技术。

这种技术主要用于开展多种体外免疫试验。

2.酶标记技术酶标记技术也称为酶免疫分析技术或酶联免疫试验技术，利用酶或其他分子标记的抗体来对组织进行特定分析的技术。

这种技术可以应用于抗体定性、半定量和全定量测定。

三、应用通过免疫组织化学技术，可以对各种组织进行检查。

例如，可以用来检查肿瘤细胞，对具体癌细胞和癌细胞分子进行定位和识别。

除此之外，免疫组织化学技术还可以用于疾病的诊断和治疗。

例如，对于免疫性关节炎，可以通过对炎症反应区域进行研究发现疾病过程中先后发生的变化，从而掌握疾病过程，为提高治疗效果提供依据。

同时，通过免疫组织化学技术可以对新的治疗方法进行评估。

例如，对药物的抑制和消灭癌细胞和癌细胞分子进行研究，有助于设计合适的治疗方案。

总之，免疫组织化学技术是一种非常强大的工具，能够帮助人们更好地理解生物学、医学等领域的疾病过程，并且有助于评估治疗方案和开发新药物。

免疫组织化学简介免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。

主要过程免疫组织化学的全过程包括：1.抗原的提取与纯化；2.免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；3.将显色剂与抗体结合形成标记抗体；4.标本的相关操作免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。

它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。

免疫组化技术近年来得到迅速发展。

50年代还仅限于免疫荧光技术，50年代以后逐渐发展建立起高度敏感，且更为实用的免疫酶技术。

仪器设备1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅试剂1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L。

2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g。

3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。

4）1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml。

5）酶消化液：a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。

b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。

免疫组织化学技术
免疫组织化学(immunohistochemistry)，也称免疫细胞化学(immunocytochemistry)，是由免疫学和传统的组织化学方法相结合发展形成的研究方法，能定位、定性或定量检测组织切片上的特殊蛋白质、多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖、受体、病原体等。

利用抗原与抗体能特异性结合的原理，用标记的抗体(或抗原)与组织或细胞中的特定抗原(或抗体)结合，形成带有标记物的抗原抗体复合物。

通过普通显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察标记物，从而证明这些抗体或抗原物质在组织细胞内的分布。

根据标记物的不同，免疫组织化学染色可分为免疫荧光组织化学技术、免疫酶组织化学技术、亲和免疫组织化学技术、免疫金银及铁蛋白标记技术等。

免疫组织化学方法将形态学改变与功能和代谢结合起来，既保持了传统形态学对组织和细胞的客观、细致形态观察的优点，又克服了生物化学、免疫学反应只能定性和定量不能定位的缺点，已成为生物医学各学科领域的重要研究手段。

在生物学、医学等领域的研究和诊断中日以显出巨大的实用价值，尤其在肿瘤病理学中已成为常规的诊断方法。

标记在抗体上的荧光素
荧光素标记的羊抗兔IgG (间接荧光抗体)
兔抗人角蛋白的IgG(特异性抗体)
人组织细胞中的抗原(如角蛋白)
直接法间接法
免疫荧光组织化学方法示意图
组织切片的免疫酶组织化学染色培养细胞的亲和免疫组织化学染色
免疫荧光染色免疫荧光染色
(兰色为细胞核，红色为角蛋白) (兰色为细胞核，绿色为上皮膜抗原)。

免疫组织化学（免疫组化）技术利用抗原抗体的特异性结合反应来检测和定位组织或细胞中的某种化学物质的一门技术，它是免疫学和传统的组织化学相结合而形成的，这种技术称免疫组织化学（immunohistochemistry IHC）或免疫细胞化学（immunocytochemistry）。

其特点是将形态学改变与功能，代谢变化结合起来，直接在组织切片，细胞涂片或培养细胞爬片上定位一些蛋白质或多肽物质的存在，并可精确到亚细胞结构水平，结合电子计算机图像分析系统或激光扫描共聚焦显微术等技术，可对被检物质进行定量分析。

第一节免疫组化的发展史及应用自1941年Coons及其同事首创免疫组织化学技术以来，拌随免疫学和组织化学理论与技术的发展，免疫组织化学已发生了日新月异的变化。

如下表由于免疫组化具有特异性强、灵敏度高等显著特点，且能将形态与功能研究有机的结合在一起，所以，这门技术从一诞生起就显示出了强大的生命力和广阔的应用前景，现今它已被广泛地应用于生物学和医学研究的许多领域，推动了学科的发展，取得了令人瞩目的成就。

免疫组织化学染色技术的应用随着大量商品化的单克隆和多可隆抗体出现，配套试剂盒的使用及方法的不断完善，使免疫组化染色已经成为医学基础研究和病理外检中应用最为广泛的技术手段之一。

免疫组化可用于各种蛋白质或肽类物质表达水平的检测，细胞属性的判定，淋巴细胞的免疫表型分析，细胞增殖和凋亡的研究，激素受体和耐药基因蛋白表达检测，以及细胞周期和信号转导的研究等。

在病理学研究中，免疫组化技术的作用和意义更重要。

以肿瘤研究为例，在免疫组化技术出现以前，对肿瘤的诊断和分类还局限于细胞水平，而引入免疫组化技术后，则使研究的深度提高到了生物化学水平、分子水平。

近年来，拌随基因探针研究而兴起的核酸分子原位杂交技术也正在蓬勃发展，更使免疫组化如虎添翼，两者相得益彰，将研究推进到了基因水平。

越来越多的癌基因与抗癌基因的发现不仅有助于对肿瘤发生机制的探讨，而且使肿瘤的预防，早期诊断，甚至治疗都向前迈进了一大步，为人类征服癌症代来了希望的曙光。

免疫组织化学技术的特点免疫组织化学技术（Immunohistochemistry，IHC）是一种利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究方法。

这一技术在生物学、医学等领域发挥着重要作用，具有诸多显著的特点。

首先，免疫组织化学技术具有高度的特异性。

这是因为抗体与抗原的结合是高度特异性的，就像一把钥匙开一把锁。

每种抗体只会与特定的抗原结合，从而能够准确地识别和定位目标分子。

例如，在肿瘤诊断中，针对特定肿瘤标志物的抗体能够精确地识别肿瘤细胞中相应的抗原，帮助医生判断肿瘤的类型和分期。

这种特异性使得免疫组织化学技术能够在复杂的组织环境中准确地检测到目标分子，减少了假阳性和假阴性结果的出现。

其次，免疫组织化学技术具有较高的敏感性。

即使目标抗原在组织中的含量很低，通过使用高亲和力的抗体和灵敏的检测系统，也能够被检测到。

这对于早期疾病的诊断和微量生物标志物的检测尤为重要。

例如，在某些神经退行性疾病的早期阶段，相关蛋白的表达水平可能仅有轻微的变化，但免疫组织化学技术能够敏锐地捕捉到这些细微的变化，为疾病的早期诊断提供依据。

再者，免疫组织化学技术能够实现原位检测。

这意味着可以在组织细胞的原有位置上观察抗原的分布和定位。

相比于其他一些检测方法需要将组织细胞破碎提取成分进行分析，原位检测能够更好地保留组织的形态结构和细胞之间的关系。

这对于研究细胞的功能、细胞之间的相互作用以及疾病的病理机制具有重要意义。

比如，在研究肾脏疾病时，可以通过免疫组织化学技术观察特定蛋白在肾小球、肾小管等部位的分布情况，从而深入了解疾病对肾脏结构和功能的影响。

此外，免疫组织化学技术还具有多标记能力。

可以同时使用多种不同的抗体标记不同的抗原，从而在同一张切片上同时检测多个目标分子。

这有助于更全面地了解组织细胞的生理和病理状态。

例如，在研究肿瘤微环境时，可以同时标记肿瘤细胞标志物、免疫细胞标志物以及细胞外基质成分，从而综合分析肿瘤与周围微环境的相互作用。

病理学中的免疫组织化学技术免疫组织化学技术是病理学中常用的一种技术，它利用特异性抗体来检测并鉴定组织中的特定细胞或分子。

这种技术在肿瘤学、免疫学、神经科学等领域得到广泛应用，并且对于疾病的早期诊断、治疗有着重要的作用。

免疫组织化学技术是在组织学的基础上发展起来的一种技术，它利用特异性抗体识别组织中的不同成分，并将它们染色或标记。

目前常使用的免疫组织化学技术主要有免疫荧光、免疫酶标记、免疫金标记等。

免疫荧光是一种利用荧光染料标记抗体或标记物并将其显色的技术。

它可以快速、准确地鉴定出组织中的不同分子或细胞，并可以通过多重荧光染色技术同时检测出多种分子，从而实现复杂的研究目的。

免疫荧光技术在病理学中的应用十分广泛，包括免疫球蛋白的分布、肿瘤细胞的识别和定位、免疫细胞的分布和功能等。

免疫酶标记是一种将酶标记物（如过氧化物酶、碱性磷酸酶等）标记在抗体或其他分子上，然后通过酶促反应将其染色或显色的技术。

这种技术可以用于特定细胞或分子的定量分析，可以通过数字化显微镜来定量计算染色强度等参数。

在肿瘤学中，免疫酶标记技术常被用来鉴定肿瘤细胞的种类和分化程度，以及进行肿瘤的分子分型。

免疫金标记技术是一种将金标记物标记在抗体或标记物上，然后通过放大或显色等方式来进行检测的分析技术。

这种技术的优点在于其对细胞结构和分子的高分辨率显微镜观察，同时可通过计算机数字化技术实现图像分析和处理。

在神经科学领域中，免疫金标记技术常被用于观察神经元的形态和分布，以及神经递质的定位和释放。

总之，免疫组织化学技术在病理学中得到了广泛应用。

这种技术的出现和发展，为疾病的诊断、治疗和研究提供了有力的工具，同时也为未来疾病防治的研究和治疗提供了新的思路和可能性。

免疫组织化学的定义
免疫组织化学，简称免疫组化，是病理诊断中的一种检测方法。

它应用免疫学的基本原理，即抗原抗体反应，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，来确定组织细胞内的抗原，并对这些抗原进行定位、定性及相对定量的研究。

免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高、定位准确等优点，被广泛应用于临床病理诊断、法医学鉴定以及生物学和医学基础研究等领域。

在病理诊断中，免疫组织化学技术主要用于协助疾病的诊断和鉴别诊断。

例如，对于肺癌，通过免疫组化可以检测到癌细胞是否表达某些特定的肿瘤标志物，从而帮助医生判断肺癌的类型和恶性程度。

同时，免疫组化技术还可以用于判断肿瘤的来源，例如通过检测癌细胞表面的某些糖蛋白或糖脂来鉴别肿瘤是来自消化系统还是泌尿系统。

在法医学鉴定中，免疫组织化学技术常用于检测生物样本中的毒品、药物等物质，以协助司法机关进行犯罪调查和审判。

此外，免疫组织化学技术还被广泛应用于生物学和医学基础研究中，例如研究细胞生长、发育、分化等过程中的基因表达和调控机制，以及研究肿瘤发生、发展过程中的基因变异和信号转导机制等。

总之，免疫组织化学技术在医学领域中发挥着重要作用，为疾病诊断和治疗提供了重要的依据和支持。

免疫组织化学技术免疫组织化学（简称：免疫组化）技术是近些年发展起来的一门新技术。

它是在抗原抗体特异性反应存在的前提条件下，用免疫学的方法进行组织化学检测。

即借助于被标记一种可见物质（酶、荧光素或金属）的手段，检测另一种物质（抗原/抗体，主要是用标记抗体来查找抗原）在组织细胞内存在的部位。

标记物与组织内特异性抗原或抗体反应，经细胞化学染色后，于光镜或电子显微镜下观察、分析。

近20年来，随着新方法的日新月异，标记物层出不穷，免疫组化技术在国内外得到了广泛的普及，应用范围逐渐扩大，技术环节也日趋成熟、简练，用于临床病理，对病理学的发展起到了极大的推动作用。

成为当今形态学研究领域中不可或缺的手段。

同时也能为临床病理诊断、肿瘤性质的判定、鉴别诊断、预后的估测等提供重要依据，已成为临床病理诊断中常规检查方法之一。

免疫组化注意事项：1. 组织标本的良好固定是免疫组化获得理想的染色效果和正确判断结果的重要环节。

因为如果抗原物质在组织细胞间弥散、丢失或失去免疫活性，无论采取何种染色都是徒劳的。

在这方面，应统一组织固定程序。

首先，固定液的配制要统一，要求使用“中性福尔马林“。

标本及时固定，固定时间亦要充分，但一般不超过24小时。

大标本要注意得到及时和充足固定液的浸透固定，必要时测量后切开固定，或取成小块合适的病变组织后再固定。

这对普通病理形态结构的显示可能也有好处，更是建立具有可重复性的标准的免疫组化程序至关重要的一步。

2. 切片时需注意的问题（见本细则第三章）。

3. 载玻片的处理:抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。

为保证试验的正常进行，可选用APES 或PoLy-L-Lysine等几种试剂，对己清洗的载玻片进行处理。

4. 常用酶消化:胰蛋白酶: 一般使用浓度为0.05%～0.1%，消化时间为37℃、10～40分钟，主要用于细胞内抗原的显示。

胃蛋白酶: 一般使用浓度为0.4%，消化时间为37℃、30～180 分钟，主要用于细胞间质抗原的显示，如: Laminin （层粘蛋白），CollagenⅣ(Ⅳ型胶原)等。