细胞毒性试验总结

MTS 或者CCK8细胞删殖及毒性考查之阳早格格创做一、所需试剂1、CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay 试剂盒（-20℃躲光保存，4℃保存6周，黄色）（1）MTS：新一代四氮唑蓝盐化合物，即被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还本成有色的甲瓒产品，其颜色深浅与某些敏感细胞株的活细胞数正在一定范畴内呈下度相闭.（2）PES：吩嗪硫酸乙酯，一种电子奇联剂，具备巩固的化教宁静性，那使它可与MTS混同产死宁静的溶液2、Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）（保存条件共上，紫色）（1）WST-8：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-两磺酸苯)-2H-四唑单钠盐（2）1-Methoxy PMS：1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸两甲酯3、药物或者毒素（药物IC50等用到）4、96孔板两、真验步调1、种板（96孔板）（个/孔），先配总管再加样（多算5孔的量去配总管，免得没有敷用）每种处理树立3个副孔（空黑组可1个），加进100μl培植基：（1）细胞删殖真验：树立NC组，处理组，空黑组，6天时间，仄衡每孔1000-2000个细胞（2）毒性或者药物或者搁疗IC50：树立梯度给药组（包罗没有给药组），空黑组，仄衡每孔5000-8000个细胞2、正在37°C，5% CO2的环境下培植（1）删殖：8h或者24h（细胞揭壁时间）,也可种板后直交测第一次，动做基准线，之后每隔24小时检测下一天的细胞量（MTS 每孔加20μl，CCK8加10μl）（2）毒性战药物：培植24h后加进药物培植48小时及以上3、删殖真验每天丈量一次，以100齐培植基：20MTS比率配造总管（CCK8以100:10）4、吸掉96孔板内待测孔内培植基，每孔加进120μl密释后的MTS试剂（CCK8加进110μl）4、正在37°C，5% CO2的环境下孵育1-4个小时（普遍选2h）5、采用波少，MTS选492nm，CCK8选450nm，读与吸光度值，记录截行，以时间为横坐标，每日吸光值/基准值为纵坐标画造细胞死少直线.三、注意事项1、CCK8本理WST-8正在电子载体1-Methoxy PMS的效率下被细胞中的脱氢酶还本为具备下度火溶性的黄色甲瓒产品（Formazan dye）.死成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比2、所有历程没有成爆收气泡，免得对于测光爆收效率3、如果需要以去检测每孔加进25ul 10% SDS末行反应，躲光保存于室温的干盒中最多可保存18小时4、可正在待测孔四面加进PBS预防中围的待测孔液体挥收效率截行.（革新于2018.11）。

毒理学实验技术总结毒理学是一门研究外源化学物、物理因素和生物因素对生物体产生有害作用的科学。

而毒理学实验技术则是研究这些有害作用的重要手段。

通过一系列的实验操作和观察，我们能够评估物质的毒性、确定安全剂量范围，为保护人类健康和环境安全提供科学依据。

接下来，让我们详细了解一下毒理学实验技术。

一、急性毒性实验急性毒性实验是毒理学中最常见的实验之一，其目的是测定化学物质在短时间内（通常为 24 小时至 14 天）对生物体造成的损害。

实验通常采用两种方法：经口急性毒性实验和经皮急性毒性实验。

经口急性毒性实验是将化学物质以特定的剂量灌胃给予实验动物，然后观察动物在短期内出现的中毒症状和死亡情况。

通过计算半数致死剂量（LD50）来评估物质的毒性强度。

LD50 越小，说明物质的毒性越强。

经皮急性毒性实验则是将化学物质涂抹在动物的皮肤上，观察其对皮肤的刺激性以及可能产生的全身性毒性反应。

在进行急性毒性实验时，需要严格控制实验条件，包括实验动物的种类、年龄、体重、性别等，以及化学物质的给予方式和剂量。

同时，要对实验动物进行密切观察，记录其症状出现的时间、严重程度和持续时间等。

二、亚慢性和慢性毒性实验与急性毒性实验不同，亚慢性和慢性毒性实验的观察周期较长。

亚慢性毒性实验的观察期通常为 90 天左右，而慢性毒性实验则可能持续一年甚至更长时间。

这些实验旨在评估化学物质在长期低剂量暴露下对生物体产生的潜在危害，如对器官功能的影响、致癌性、致畸性等。

实验过程中，需要定期监测实验动物的体重、饮食、行为、血液生化指标等，并在实验结束时对动物进行解剖，检查各个器官的病理变化。

三、遗传毒性实验遗传毒性实验用于检测化学物质对生物体遗传物质的损害作用，包括基因突变、染色体畸变和 DNA 损伤等。

常见的遗传毒性实验方法有：1、细菌回复突变实验（Ames 实验）：通过检测化学物质对细菌基因突变的诱导作用，来评估其遗传毒性。

2、微核实验：观察细胞中微核的形成，以判断化学物质是否导致染色体损伤。

细胞毒性的检测实验三、细胞毒性的检测一、实验材料及设备培养箱、雷杜RT-6100酶标仪、移液器（THERMO）、枪头、吸管、96孔板、盐水、PBS、1640培养液、离心管、血球计数板、CCK-8（日本同仁）二、实验步骤1、在96孔板中配置100微升的细胞悬液。

将培养板在培养箱中预培养24小时（37℃,5% CO2）（注：贴壁细胞最小的接种量为10000个/孔，细胞数目由血球计数板中计算得来，若计数时浓度太大，可以先稀释一定倍数取融合度为90%左右的细胞，吹打均匀，取样计数一般细胞接种后贴壁大约需要2~4小时，但是不同类型的细胞所需要的时间有差异，根据实验情况而定细胞悬液一定要混匀，培养基周围容易挥发，为减少误差，建议培养板的四周只加培养基，而不作为检测孔）。

2、向培养板加入10微升不同浓度的待测物质。

在培养箱中孵化一段时间。

（6、12、24、48，时间根据OD值来选择，OD值在1.0~2.0都可以，最好在1.0附近比较好，时间根据细胞周期来定，起码要一代以上的时间）3、向每孔加入10微升CCK-8溶液，加完后轻轻敲击培养板以帮助混匀。

【注：每孔培养基体积的10%加入CCK-8，注意不要在孔中形成气泡，他们会影响OD值得读数。

如果待测物质有氧化或者还原性的话，或者细胞培养时间较长使得培养基颜色或者pH发生变化的话，可以在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞俩次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。

斜贴壁加CCK-8,不要插到培养基下，容易产生气泡，干扰读数，而且速度要快，减少试剂在移液器上的残留，加后要轻轻地振荡培养板使试剂和培养基充分混合，可以将CCK-8用培养基稀释一倍，混匀后每孔加20uL使用】4、将培养板在培养箱内孵育1~4小时。

（细胞不同形成的甲臜的量也不同，如果显色不够的话，可以继续培养，以确定最佳条件建议BEL-7402 2h，）。

5、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

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药物免疫毒性试验实验报告实验目的：本实验旨在评估某药物对免疫系统的潜在毒性，通过一系列体外和体内实验，确定药物对免疫细胞功能的影响，为药物安全性评估提供科学依据。

实验材料：1. 药物样品2. 小鼠脾细胞3. 人外周血单核细胞(PBMCs)4. 细胞培养基5. 细胞计数板6. 酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒7. 流式细胞仪8. 实验动物：BALB/c小鼠9. 其他必要的实验试剂和设备实验方法：1. 细胞培养：将小鼠脾细胞和人外周血单核细胞(PBMCs)在适宜的细胞培养基中培养。

2. 药物处理：将药物以不同浓度加入细胞培养体系中，进行不同时间的处理。

3. 细胞活性测定：采用MTT法测定药物处理后细胞的活性。

4. 细胞增殖能力测定：通过细胞计数板计数细胞数量，评估细胞增殖情况。

5. 细胞因子释放测定：使用ELISA试剂盒测定药物处理后细胞释放的细胞因子水平。

6. 细胞凋亡检测：采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡情况。

7. 免疫细胞功能测定：通过流式细胞仪检测药物处理后免疫细胞表面标志物的表达情况。

8. 动物实验：将药物以不同剂量给药于BALB/c小鼠，观察药物对小鼠免疫器官的影响，并进行免疫细胞功能的相关检测。

实验结果：1. 细胞活性：药物处理后，细胞活性随药物浓度的增加而降低，表明药物具有一定的细胞毒性。

2. 细胞增殖：药物处理组的细胞增殖能力较对照组有所下降，说明药物可能影响细胞的增殖。

3. 细胞因子释放：药物处理后，部分细胞因子的释放水平发生显著变化，提示药物可能影响免疫细胞的功能。

4. 细胞凋亡：药物处理组的细胞凋亡率较对照组有所增加，说明药物可能诱导免疫细胞凋亡。

5. 免疫细胞功能：药物处理后，免疫细胞表面标志物的表达发生变化，表明药物可能影响免疫细胞的活化和功能。

6. 动物实验：药物给药后，小鼠免疫器官的重量和形态发生改变，免疫细胞功能检测结果显示药物对小鼠免疫系统有影响。

毒素对细胞的作用机制及其毒性评估方法毒素是指对生物体有害的化学物质，它们可以引起中毒和疾病。

近年来，由于人类污染和人类生活方式的变化，毒素的存在和影响越来越重要。

毒素对人体的危害不仅仅是彻底的破坏，同时也会导致许多疾病和症状的发生。

毒素对细胞的影响毒素是一种非常特别的化学物质，它可以对生物体的细胞进行严重的损伤和杀死，甚至影响整个器官的功能和生命力。

这种影响是在分子水平上进行的，因为毒素可以改变生物体内部的化学平衡和生物信息传递的速度、质量和途径。

毒素的作用机制可以大致分为以下三个方面。

1. 作用于膜层。

某些毒素可以改变膜层的结构和功能，细胞内外界物质的交换失去平衡。

这种失衡可能导致细胞的死亡，例如病毒、链球菌等。

2. 作用于细胞内途径。

毒素对细胞内信息传递的途径有影响，例如抑制酶的活性或改变蛋白结构，导致信号传递异常。

3. 作用于细胞生命力。

毒素可能影响细胞的DNA复制或细胞的新生，导致基因突变或细胞的生命周期出现问题。

例如重金属、放射性物质等。

毒性评估方法在评估毒性的时候，必须考虑到细胞和人体的生理特点和差异性。

这是因为毒素在不同的环境中作用方式可能不同，相反也可能导致细胞的代谢和生命力指标的改变。

以下是常见的毒性评估方法：1. 透析膜毒性试验透析膜毒性试验是一种性价比较高的毒性试验方法，它通常用于毒素的筛选，测试毒素是否会对生物体产生毒性，两种物质的对比测试等。

2. 细胞毒性试验细胞毒性试验是在培养皿中进行的，它通常是向一组正常细胞培养中加入毒素，以此评估出毒素的危害程度。

3. 动物毒性试验动物毒性试验是一种比较全面的毒性试验方法，它通常用于毒素对人类的危害评估，测试毒素的致癌性、致畸性、急性毒性等等。

毒素对细胞的影响和危害常常不为人类所知，需要科学家和医学专家们的不断探索和研究。

当然，在进行毒素研究时，要尽量避免使用易受伤害和易受危害的生物，采用合理的科学方法，尽力减少不必要的生命损失。

辅具中颈托的体外细胞毒性试验研究栾会芹;谷慧茹;闫和平;张莹莹;樊瑜波【摘要】Objective To study the cytotoxicity of cervical collar in rehabilitation technical aids and to investigate the cytotoxicity of domestic marketed products. Methods According to the experimental principle of GB/T 16886.5-2003 and GB/T 16175-2008,microscopic observa-tion and Thiazole Blue Colorimetric methods were used to observe the toxicity of extract from four different cer-vical collars on the cells(L929). Results When the concentration of the extract was 0.1 g/ml,the cytotoxicity was grade three and grade two in the cervi-cal collars D and A,respectively;and it was grade one both in cervical collars B and C.When the concentration of the extract was 0.2 g/ml,the cytotoxicity was grade four in cervical collars A and D,and was grade two in cer-vical collars B and C. Conclusion The cervical collars varied in the cytotoxicity,especially in cervical collars A and D.%目的研究辅具中颈托的体外细胞毒性,调查中国市售颈托的细胞毒性现状.方法参照GB/T 16886.5-2003和GB/T 16175-2008体外细胞毒性的实验原则,采用显微镜观察与噻唑蓝比色法,在小鼠成纤维细胞(L929株)上对4种不同品牌颈托进行细胞毒性检测.结果颈托浸提浓度为0.1 g/ml时,颈托D的细胞毒性反应为3级,颈托A为2级,颈托B与颈托C的细胞毒性反应均为1级.颈托浸提液浓度为0.2g/ml时,颈托A与颈托D的细胞毒性反应均为4级,而颈托B与颈托C的细胞毒性反应均为2级.结论受试颈托均有不同程度的细胞毒性反应.颈托A与颈托D细胞毒性反应级别较高.【期刊名称】《中国康复理论与实践》【年(卷),期】2018(024)002【总页数】4页(P229-232)【关键词】辅具;颈托;细胞毒性;噻唑蓝比色法【作者】栾会芹;谷慧茹;闫和平;张莹莹;樊瑜波【作者单位】国家康复辅具研究中心,北京市100176;北京市老年功能障碍康复辅助技术重点实验室,北京市100176;民政部康复辅具分析评定重点实验室,北京市100176;康复辅具评价重点实验室,北京市100176;国家康复辅具研究中心,北京市100176;北京市老年功能障碍康复辅助技术重点实验室,北京市100176;民政部康复辅具分析评定重点实验室,北京市100176;康复辅具评价重点实验室,北京市100176;国家康复辅具研究中心,北京市100176;北京市老年功能障碍康复辅助技术重点实验室,北京市100176;民政部康复辅具分析评定重点实验室,北京市100176;国家康复辅具研究中心,北京市100176;北京市老年功能障碍康复辅助技术重点实验室,北京市100176;民政部康复辅具分析评定重点实验室,北京市100176;国家康复辅具研究中心,北京市100176;北京市老年功能障碍康复辅助技术重点实验室,北京市100176;民政部康复辅具分析评定重点实验室,北京市100176【正文语种】中文【中图分类】R496颈托属于辅具产品，是颈椎病辅助治疗器具，可应用于各种颈椎问题的辅助治疗中。

医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验1 范围GB/T 16886 的本部分阐述了评价医疗器械体外细胞毒性的试验方法。

这些方法规定了下列供试品以直接或通过扩散的方式与培养细胞接触和进行孵育；a）用器械的浸提液，和／或b）与器械接触。

这些方法是用相应的生物参数测定哺乳动物细胞的体外生物学反应。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T 16886 的本部分的引用而成为本部分的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。

GB/T 16886. 1 医疗器械生物学评价第1部分：评价与试验（GB/T 16886.1-2001,idt ISO 10993- 1:1997）CB/ T 16886. 12-2000 医疗器械生物学评价第12部分：样品制备和参照材料（idt ISO 10993-12 :1996）3 术语与定义GB/ T 16886. 1/ ISO 1993-1中确立的以及下列术语和定义适用于本部分。

3.1阴性对照材料negative control material按照本部分试验时不产生细胞毒性反应的材料。

注：阴性对照的目的是验证背景反应，例如高密度聚乙烯1）已作为合成聚合物的阴性对照材料，氧化陶瓷棒则用作牙科材料的阴性对照物。

3.2阳性对照材料 pos itive control material按照本部分试验时可重现细胞毒性反应的材料。

注：阳性对照的白目的是验证相应试验系统的反应，例如用有机锡作稳定剂的聚氯乙烯2）已用作固体材料和浸提液的阳性对照，酚的稀释液用于浸提液的阳性对照。

_____________________________________1)高密度聚乙烯可从美国药典委员会（Rockvillie, Maryland, USA）和Hatano研究所食品和药品安全中心（Ochiai729-5 ,Hanagawa.257-Japan）获得。

细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。

有时需要进行特定物质细胞毒性的检测，比如药物筛选。

细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法：MTT、XTT法：利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测LDH的方法：通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性，来检测细胞毒性其它酶方法：如检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等细胞增殖能力分析试剂盒原理：正常细胞代谢旺盛，其线粒体内的琥珀酸脱氢酶，可将四唑盐类物质（如MTT、XTT、WST-1等）还原为紫色的结晶状的物质，沉积在细胞周围，然后通过酶标仪读取OD 值，从而检测到细胞增值状态荧光素发光法细胞生存能力检测原理：腺苷酸激酶（AK）存在于所有真核和原核细胞的胞浆中，AK具有激活ADP生成ATP。

当细胞受损后，细胞膜发生破损，AK会释放到培养上清中。

该试剂盒利用荧光素酶和荧光素在ATP作用下可以发光，通过化学发光仪可以定量进行检测。

LDH法细胞毒性检测原理：LDH（乳酸脱氢酶）是一种稳定的蛋白质，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH即被释放到细胞外；LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应形成紫色的结晶物质，可通过500nm酶标仪进行检测。

通过检测细胞培养上清中LDH的活性，可判断细胞受损的程度"细胞毒性" 英文对照cytotoxic; cell toxicity; cytotoxicity;"细胞毒性" 在学术文献中的解释1、根据欧洲标准化组织CEN1992年30号文件的定义,细胞毒性是指由产品、材料及其浸渍物所造成的细胞死亡、细胞溶解和细胞生长抑制文献来源2、细胞毒性是指该物质对培养细胞的毒性通常用P－－388LulZ0白血病细胞或KB肿瘤细胞作体外试验.检验海洋天然产物的细胞毒性常利用海胆受精卵观察样品对其细胞分裂的抑制作用文献来源3、强其细胞毒性并促进这两种细胞增殖又称为细胞毒性编辑本段分类及应用细胞毒性是化学物质（药物）作用于细胞基本结构和/或生理过程，如细胞膜或细胞骨架结构，细胞的新陈代谢过程，细胞组分或产物的合成、降解或释放，离子调控及细胞分裂等过程，导致细胞存活、增殖和/或功能的紊乱，所引发的不良反应。