R2A培养基 计数培养基适用性验证方案

培养基验证文件制药有限公司制药有限公司验证立项申请表验证方案的审批验证方案目录1、概述2、验证目的3、验证范围4、验证项目小组成员及职责5、验证合格标准6、试验材料7、菌液制备8、适用性检查9、验证记录10、验证结论及综合评价计数培养基适用性检查的验证方案1. 验证目的：需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基是否适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数测定。

2. 参照标准：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检查法。

3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基的适用性检查。

4.验证小组人员及职责：5. 合格标准：被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

6. 试验材料：6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基。

6.2. 仪器设备：6.2.1. YXQ-LS-100G型立式压力蒸汽灭菌器6.2.2. GHT-00双人净化工作台6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安全柜6.2.4.MJ-250I型霉菌培养箱(20～25℃)6.2.5. LRH-250生化培养箱(30～35℃)6.2.6.电热恒温干燥箱6.2.7微波炉6.4. 验证用菌株：(第代)7. 菌液制备按6.4规定程序培养各试验菌株。

取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液。

微生物计数培养基适用性检查验证方案
1、验证目的：
细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基的适应性检查，本次验证的目的是为了确证营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌测定。

2、参照标准：《2010年版中国药典》
3、验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基
4、验证所用培养基：
5、菌液制备
接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基斜面上。

培养24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面，培养24小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液逐级稀释制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。

6、适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，混匀，凝固，每株实验菌平行制备2个平皿，另1平皿不接种菌作为空白对照，置35℃培养48小时，计数；
取白色念珠菌50～100cfu，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固，每株实验菌平行制备2个平皿，另1平皿不接种菌作为空白对照，置25℃培养72小时，计数。

同时，用相应对照培养基替代被检培养基同步进行上述试验。

7、结果记录
备注：空白皿均未长菌
8、结果判定：若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平
均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的一致，判该培养基实用性检查符合规定。

9、结论：本次所检培养基上的菌落平均数对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的一致，该培养基适用性检查规定。

试验人复核者。

R A培养基适用性检查方案文件排版存档编号：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]批准页目录1.验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查10.阴性对照附件1.检测记录1.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。

2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。

3.验证项目R2A培养基的适用性检查。

4.验证小组人员及职责：验证小组人员:验证人员职责及要求Array验证中各部门的职责负责验证资料及结果的审核工作。

负责验证报告的批准工作。

验证工作小组职责负责验证方案的起草工作。

参与验证方案的讨论、确认工作。

负责验证方案的实施。

负责验证结果的分析、统计、报告工作。

参与验证结果的评价工作。

质量部职责负责公司验证日常管理工作。

负责验证方案的审核工作。

负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

证过程中的各项检验工作负责。

5.判定标准被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在的范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

6.试验材料被验证产品：R2A琼脂培养基仪器设备压力蒸汽灭菌器HF1200LC型生物安全柜DNP-9160BS型培养箱DHG90型鼓风干燥箱微波炉. 验证用培养基. 验证用菌株：(第代)7. 菌液制备分别取铜绿假胞杆菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养不超过18-24h。

取经30～35℃培养18-24h的铜绿假单胞菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物1ml加入到%无菌氯化钠溶液中，倍稀释获得约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

8.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）分别取铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌菌悬液1ml分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，置30～35℃培养不少于5天；菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（cfu∕ml）9.适用性检查分别取铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌菌悬液1ml分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，置30～35℃培养不不少于5天；菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（cfu∕ml）10.阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。

.培养基适用性验证方案起草人：方案审核人：方案批准人：XXXXX药业股份有限公司目录1. 验证目的 (2)2. 参照标准 (2)3. 验证项目 (2)4. 验证小组人员及职责 (3)5. 验证可接受的标准 (3)6. 验证步骤 (3)7. 菌液制备 (6)8. 适用性检查 (6)9. 控制菌检查 (7)10. 操作方法 (8)11.结论 (11)1. 验证目的：需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数及测定和控制菌适用性检查。

2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。

3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查和控制菌适用性检查。

4.验证小组人员及职责：4.14.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

4.3.1.3负责验证方案的批准工作。

4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责4.3.3.1负责验证方案的审核工作。

4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。

4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。

4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。

微生物计数培养基适用性验证报告
微生物计数培养基是一种用于定量分离和培养微生物的培养基。

在微
生物学研究和实验室中，微生物计数是非常重要的，因为它可以帮助我们
了解微生物的存在数量和分布。

因此，对微生物计数培养基的适用性进行
验证是非常必要的。

本报告旨在验证一种特定的微生物计数培养基的适用
性并评估其准确性和可靠性。

在实验过程中，我们遵循了国际标准方法来进行微生物计数。

我们首
先制备了适当的稀释液，并将样本依次进行稀释。

然后，我们将稀释后的
样本分别在微生物计数培养基上平面涂布。

接下来，我们将培养皿放在恒
温培养箱中，并进行恒温孵育。

最后，我们对培养皿上生长的菌落进行了
计数。

此外，我们还进行了对照实验，使用了其他常用的微生物计数培养基。

结果显示，验证的微生物计数培养基的结果与其他培养基的结果一致。

这
进一步证明了所验证的培养基的准确性和可靠性。

总的来说，通过本次适用性验证实验，我们证明了所验证的微生物计
数培养基的适用性。

该培养基可以用于各种微生物样本的计数和培养。

然而，需要注意的是，由于不同微生物在不同培养基上的生长特性存在差异，所以在使用该培养基前，需要对特定的微生物进行培养条件的优化。

纯化水需氧菌总数计数用培养基适用性检查验证方案纯化水需要氧菌总数计数，是用来检查水中的氧需求微生物的数量。

这项检测可以确认水样品的纯度和卫生质量，以确保水可以安全使用。

本文将介绍一种用于验证纯化水需氧菌总数计数用培养基的适用性的方法，包括准备培养基、验证培养基的选择以及验证培养基性能的实验方案。

1.准备培养基首先，需要选择适用于需氧菌的培养基。

通常使用含有可溶性碳源和其他适当营养物质的培养基。

常用的培养基有碳水化合物培养基、富含氨基酸的培养基等。

可以根据具体需求来选择合适的培养基。

2.培养基选择验证为了验证培养基的选择是否适用于需氧菌的计数，可以进行以下实验验证。

2.1.培养基对需氧菌的支持能力验证：将需氧菌接种在待验证的培养基上，并进行恒温（通常在30-37°C 之间）和恒氧（使用压力式培养器或其他适当方法）条件下的培养。

培养一段时间（通常为24-48小时），观察生长情况。

如果培养基能够支持需氧菌的生长并产生可见的生长，说明培养基是适合用于需氧菌计数的。

2.2.培养基对其他微生物的选择性验证：将其他非需氧菌或其他微生物接种在待验证的培养基上，并进行相同的培养条件下的培养。

观察生长情况，如果其他微生物能够在该培养基上生长，说明培养基存在选择性差异性，可能不适用于需氧菌计数。

3.验证培养基性能实验方案在验证培养基适用性之后，可以进行以下实验方案来验证培养基性能。

3.1.验证培养基的灵敏度：根据纯化水需氧菌总数预期浓度的范围，使用不同的稀释比例将水样接种在培养基上。

根据菌落形成情况和数量，可以确定培养基的灵敏度。

通常，预期浓度越高，菌落数量越多。

3.2.验证培养基的线性范围：在一定的时间内，使用不同浓度的需氧菌接种培养基，观察菌落数量和接种浓度的关系。

如果菌落数量和接种浓度呈线性关系，则说明培养基的线性范围较好。

3.3.验证培养基的重复性：使用相同浓度的需氧菌接种培养基的多个平行样品，进行培养。

类别：验证文件编号：部门：质量控制组页码：第 1 页共8页培养基适用性验证方案起草人：年月日审核会签：年月日年月日批准人：年月日目录1.概述 (3)2. 验证目的 (3)3.验证参考依据 (3)4.验证范围 (3)5. 验证人员及职责 (3)6. 验证可接受的标准 (3)7. 验证用材料 (4)8. 菌液制备 (4)9. 菌液计数 (5)10.验证实施 (5)11.验证结果 (6)12.验证分析与评价 (7)13.再验证 (8)一、概述：培养基质量是微生物检查结果的重要影响因素。

计数用培养基的促生长能力对微生物限度检查结果有重要的影响，控制菌检查用培养基的促生长能力，指示能力、抑制能力的差异，会对菌落颜色、形态等适成差异，从而影响结果的判断。

为此，为保证检验结果的真实、可靠，需要对微生物限度检查用计数培养基和控制菌检查用培养基进行适用性验证。

二、验证目的：通过与对照培养基的对比验证实验，以证明所选用的培养基适合于物料和产品的微生物限度检查。

三、参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。

四、验证范围：4.1 细菌、霉菌及酵母菌数计数用培养基：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。

4.2 控制菌检查用培养基：胆盐乳糖培养基和MUG培养基的适用性检查。

五、验证小组人员及职责：5.1验证小组人员:5.2 验证人员职责及要求5.2.1 按验证方案及相关文件实施验证。

5.2.2 认真观察并做好验证原始记录。

5.2.3 对实施验证的结果负责。

5.3 验证中各部门的职责5.3.1 验证领导组职责5.3.1.1 负责验证方案的批准工作。

5.3.1.2 负责验证资料及结果的审核工作。

5.3.1.3 负责验证报告的批准工作。

5.3.2 验证工作小组职责5.3.2.1 负责验证方案的起草工作。

5.3.2.2 参与验证方案的讨论、确认工作。

5.3.2.3 负责验证方案的实施。

5.3.2.5 参与验证结果的评价工作。

题目计数培养基适用性验证方案方案号01版本号批准页起草人审核人签字日期QC经理批准人签字日期QA经理目录1.验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查10.阴性对照附件1.检测记录 1.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认R2A 培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。

2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。

3.验证项目R2A 培养基的适用性检查。

4.验证小组人员及职责： 4.1验证小组人员: 4.2验证人员职责及要求 4.3验证中各部门的职责 4.3.1.4负责验证资料及结果的审核小组人员职务姓 名 所在部门 组 长 质量部 组 员 质量部 组 员质量部工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。

4.3.3.2负责验证方案的审核工作。

4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

证过程中的各项检验工作负责。

5.判定标准被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2的范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

6.试验材料6.1 被验证产品：R2A琼脂培养基6.2 仪器设备6.2.1 压力蒸汽灭菌器6.2.2 HF1200LC型生物安全柜6.2.3 DNP-9160BS型培养箱6.2.4 DHG90型鼓风干燥箱6.2.5微波炉6.3. 验证用培养基名称生产厂家批号R2A琼脂培养基6.4. 验证用菌株：(第代)试验菌株增菌培养基培养温度培养时间枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨液体培养基30—35℃18-24h铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养基23—28℃18-24h7. 菌液制备分别取铜绿假胞杆菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养不超过18-24h。

培养基适用性验证方案编制人：________________ 日期：_________________ 审核人：________________ 日期：_________________批准人：________________ 日期：_________________目录1. 概述2. 验证目的3. 验证依据4. 验证项目5. 验证小组成员及职责6. 验证时间7. 验证材料8. 验证内容8.1.无菌检查用培养基适用性验证8.2.计数用培养基适用性验证9. 验证方案的评定与建议10. 验证方案的最终审核意见培养基适用性验证报告1.概述培养基是无菌检查和微生物限度检查的关键物品之一，培养基的是否符合检验要求，影响着检验结果的准确性、有效性。

2.验证目的验证培养基是否符合检验要求3.验证依据《中国药典》2015版通则1101生物检查法4.验证项目无菌检查用培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、营养肉汤；计数用培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙式葡萄糖琼脂培养基、R2A琼脂培养基、大豆酪蛋白琼脂培养基5.验证小组成员6.验证时间本次验证于2016年1月18日开始进行，将于2016年1月22日完成7.验证材料7.1.仪器设备手提式压力蒸汽灭菌器、生物安全柜、生化培养箱、霉菌培养箱、电热鼓风干燥箱、净化工作台7.2.对照培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基、沙式葡萄糖琼脂对照培养基、R2A琼脂对照培养基、大豆酪蛋白琼脂对照培养基7.3.其他器具酒精灯、试管、75%乙醇、灭菌刻度吸量管(1ml)、灭菌硼硅酸玻璃培养皿(© 90mr K 15mm)、锥形瓶，移液器，无菌吸头等。

7.4. 菌种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、黑曲霉、白色念珠菌；8. 验证内容8.1.无菌检查用培养基适用性验证8.1.1. 无菌性验证随机选取灭菌后硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基各5 瓶，并对培养基分别编号。

第1页共2页检品培养基名称培养基来源批号配制编号检验日期
R2A琼脂培养基
检验人：复核人：
检品培养基名称培养基来源批号配制编号检验日期R2A琼脂培养基
第2页共2页
与对照培养基上的菌落阴性皿1皿2平均A阴性皿1皿2平均B
铜绿假单胞菌□一致□不一致
枯草芽孢杆菌□一致□不一致
标准判定
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上一致。

判该培养基的适用性检查符合规定。

结论□符合规定□不符合规定
检验人：复核人：。