实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验(2)

一、实验目的1. 了解大吞噬现象的基本原理和过程。

2. 观察和分析巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。

3. 掌握大吞噬实验的操作步骤和注意事项。

二、实验原理大吞噬是指巨噬细胞对细胞外较大颗粒物质（如细菌、细胞碎片等）的吞噬作用。

巨噬细胞通过胞吞作用，将吞噬物质包裹在内吞泡中，然后将其降解并排出细胞外。

本实验采用鸡红细胞作为吞噬物质，观察和分析巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。

三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 试剂：鸡红细胞、生理盐水、无菌淀粉液、冷亚甲蓝溶液、染色剂等3. 仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、载玻片等四、实验方法1. 小鼠腹腔巨噬细胞的制备（1）实验前3小时，给小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。

（2）将小鼠处死，打开腹腔，用无菌生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔液。

（3）将腹腔液离心，弃去上清液，沉淀即为小鼠腹腔巨噬细胞。

2. 巨噬细胞吞噬鸡红细胞的观察（1）将鸡红细胞用生理盐水洗涤，制成悬液。

（2）取制备好的巨噬细胞，加入鸡红细胞悬液，使其比例为1:10。

（3）37℃孵育30分钟后，取出培养皿，用冷亚甲蓝溶液染色。

（4）将染色后的细胞涂片，在高倍显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。

五、实验结果1. 观察到巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬。

2. 部分巨噬细胞内出现多个鸡红细胞，表明巨噬细胞具有吞噬多个鸡红细胞的能力。

3. 观察到部分鸡红细胞聚集在巨噬细胞附近，可能与巨噬细胞释放的趋化因子有关。

六、实验分析1. 本实验成功观察到了巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，验证了大吞噬现象的存在。

2. 实验结果表明，巨噬细胞具有吞噬多个鸡红细胞的能力，说明巨噬细胞在免疫过程中起着重要作用。

3. 实验过程中，巨噬细胞释放的趋化因子可能参与了鸡红细胞的聚集现象，提示趋化因子在免疫过程中的作用。

七、实验总结1. 本实验成功观察到了巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对大吞噬现象的理解。

一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。

3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。

二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。

吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。

本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。

2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。

3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。

四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。

2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。

（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。

（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。

（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。

3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。

五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。

2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。

六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。

2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。

3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。

七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。

一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。

2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。

二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。

在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。

2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。

3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。

四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。

2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。

3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。

4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。

5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。

五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。

具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。

2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。

3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。

六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。

2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。

3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。

4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。

七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。

实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验(2)实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验一实验目的1(掌握小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理2(熟悉细胞吞噬作用的基本过程二基本原理细胞的吞噬作用在单细胞动物是摄取营养物质的方式，在高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。

巨噬细胞是由骨髓干细胞分化生成，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解。

吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成;免疫抑制剂环磷酰胺(CYP)对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。

三实验用品1(器材:显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、1ml注射器、载玻片、盖玻片、吸管等2(试剂:0.9%生理盐水;可溶性淀粉6.0g加水100ml煮沸备用。

(6%淀粉中含0.3%台盼蓝)3(材料:小白鼠;0.5%鸡红细胞悬液四实验步骤1. 鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为0.5%。

2. 实验前一天，向小鼠腹腔注射1ml可溶性淀粉。

3. 实验前30分钟，向腹腔内注射1ml 0.5%的鸡红细胞，并轻揉腹部，使鸡红细胞悬液分散。

4. 30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠(右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓与脑髓间断并致死)。

5. 迅速剖开腹腔，用装针头的注射器吸取腹腔液。

6. 在干净的载玻片上滴加一滴腹腔液，盖上盖玻片，显微镜下检查。

7. 观察时，将视野调暗。

在高倍镜下，先分辨清楚鸡红细胞和巨噬细胞。

鸡红细胞为淡红色、椭圆形、有核的细胞。

而体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突起(伪足)，细胞质中有数量不等的蓝色颗粒(为吞入的含台盘蓝淀粉形成的吞噬泡)即为巨噬细胞。

小鼠腹腔吞噬实验报告小鼠腹腔吞噬实验报告一、引言吞噬作为一种重要的细胞功能，在免疫系统中起着重要的作用。

腹腔巨噬细胞是一类在腹腔内胚胎发育过程中产生的巨噬细胞，它们能够吞噬和消化异物、细菌和坏死细胞等。

本实验旨在观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。

二、材料与方法1. 材料：BALB/c小鼠（8周龄，雄性和雌性各5只）、PBS、0.1%苏木精溶液、0.1%酚溶液、尼龙网、离心管、移液管、顶针、显微镜和实验台。

2. 方法：（1）将BALB/c小鼠以适当的麻醉方式麻醉后置于实验台上；（2）在小鼠腹部剃毛，用70%酒精消毒；（3）用显微镊子将小鼠腹部皮肤拉开，插入15号顶针穿透腹腔；（4）慢慢抽取腹腔中积聚的液体；（5）将抽取的液体均匀滴在一块尼龙网上，用PBS洗涤；（6）将尼龙网取出，放入一滴0.1%苏木精溶液中染色10分钟，洗净；（7）将尼龙网摆到显微镜下，观察包括吞噬细胞数量和吞噬效果等。

三、结果与分析经过腹腔巨噬细胞吞噬实验后，我们观察了吞噬细胞的数量和吞噬效果。

在5只雌性小鼠中，吞噬细胞的数量平均为10个，吞噬效果良好，吞噬颗粒清晰可见。

在5只雄性小鼠中，吞噬细胞的数量平均为12个，吞噬效果也良好，吞噬颗粒清晰可见。

通过统计分析发现，雄性小鼠相较于雌性小鼠具有更高的吞噬细胞数量，但两者之间差异不显著。

四、讨论1. 从实验结果来看，小鼠腹腔巨噬细胞具有较好的吞噬能力，能够有效地清除异物和消化坏死细胞等。

2. 在我们的实验中，我们观察到雄性小鼠的吞噬细胞数量略高于雌性小鼠，这可能与性别激素的差异有关，但仅仅依靠本实验无法确定性别激素对吞噬能力的具体影响，需要进一步的研究来证实。

3. 本实验中使用的苏木精和酚溶液可以染色吞噬细胞，便于观察。

但这种方法相对于其他荧光染色方法来说更为繁琐，同时也可能对细胞造成一定的伤害。

4. 本实验中只是通过观察吞噬细胞数量和吞噬效果来判断腹腔巨噬细胞的吞噬能力，后续的实验可以考虑使用其他细胞学和分子生物学技术来进一步验证腹腔巨噬细胞的功能和机制。

沉淀反应—双向扩散【实验原理】在一定条件下，抗原能与相应的抗体相互作用，发生免疫沉淀反应。

免疫扩散就是使抗原与抗体在琼脂糖凝胶中自由扩散而相遇，从而形成抗原抗体复合物，由于此复合物分子量增大并产生聚集，不再继续扩散而形成肉眼可见的带状或线状沉淀带。

利用琼脂糖凝胶作为扩散介质是因为一定浓度的琼脂糖凝胶，其内部为多孔网状。

而且孔径很大，可以允许大分子物质（分子量自十几万到几百万以上）自由通过。

因为大多数抗原和抗体的分子量都在20万以上，所以它们在琼脂糖凝胶中几乎可以自由扩散。

而且琼脂糖凝胶又具有良好的化学稳定性、含水量大、透明度好、来源方便、处理容易等优点，因此是免疫沉淀检测技术中最理想的扩散介质。

双向琼脂扩散试验是定性实验。

本实验测定时将加热溶化的琼脂或琼脂糖浇至玻片上，等琼脂凝固后，打多个小孔，将抗原和抗体分别加入小孔内，使抗原和抗体在琼脂板上相互扩散。

当二个扩散圈相遇，如抗原和抗体呈特异性的结合且比例适当时，将会形成抗原抗体复合物的沉淀，该沉淀可在琼脂中呈现一条不透明的白色沉淀线。

如果抗原与抗体无关，就不会出现沉淀线，因此可以通过该试验，用特异性抗体鉴定抗原。

【实验方法】❶制备琼脂玻片：将已加热溶化的1%琼脂5mL，迅速倾入洁净干燥的载玻片上，室温自然冷却凝固。

❷打孔：在凝固的琼脂糖胶上用打孔器或吸嘴按左图所示打梅花孔（孔径约3mm，孔距4mm），用针头小心挑去琼脂。

为便于识别加样方向或区分不同的组，可在琼脂糖胶边缘打上小孔或切角标记。

打孔完毕，将载玻片在酒精灯火焰上方过几遍，可防止漏液。

❸加样：在中央孔加抗体，上下孔加抗原1（Ag1），左右孔加抗原2（Ag2），每孔约10μL。

❹温育：将琼脂糖胶置于湿盒（饭盒垫上纱布，加蒸馏水润湿）中，37℃温育12-24h。

❺结果观察：观察抗原抗体产生的白色沉淀线。

免疫血清的滴度以一定抗原浓度下出现白色沉淀线的最高稀释度来表示。

【实验结果】实验结果如上图所示，红线箭头所示部分为沉淀线。

一、实验目的通过本实验，观察细胞吞噬作用的过程，了解细胞吞噬功能的机制，加深对细胞吞噬作用的理解。

二、实验原理细胞吞噬作用是指细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质的过程。

细胞吞噬作用是细胞免疫和体液免疫的重要组成部分，对于清除病原体、衰老细胞和凋亡细胞等异物具有重要作用。

三、实验材料1. 细胞：小鼠腹腔巨噬细胞、鸡红细胞；2. 试剂：无菌生理盐水、0.03%冷亚甲蓝溶液、无菌淀粉液；3. 仪器：显微镜、载玻片、滴管、酒精灯、镊子、剪刀等。

四、实验方法1. 细胞培养：将小鼠腹腔巨噬细胞接种于培养皿中，加入无菌生理盐水，37℃、5%CO2培养箱中培养24小时。

2. 巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验：（1）取培养好的巨噬细胞，用无菌生理盐水洗涤2次，制成细胞悬液；（2）取鸡红细胞，用无菌生理盐水洗涤2次，制成红细胞悬液；（3）将细胞悬液与红细胞悬液按一定比例混合，37℃、5%CO2培养箱中孵育30分钟；（4）将孵育后的混合液用无菌生理盐水洗涤2次，制成细胞悬液；（5）取载玻片，将细胞悬液滴于载玻片上，加盖玻片；（6）在显微镜下观察细胞吞噬鸡红细胞的现象。

3. 细胞吞噬功能测定：（1）取培养好的巨噬细胞，用无菌生理盐水洗涤2次，制成细胞悬液；（2）取鸡红细胞，用无菌生理盐水洗涤2次，制成红细胞悬液；（3）将细胞悬液与红细胞悬液按一定比例混合，37℃、5%CO2培养箱中孵育30分钟；（4）将孵育后的混合液用无菌生理盐水洗涤2次，制成细胞悬液；（5）计算吞噬百分率和吞噬指数。

五、实验结果1. 观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。

2. 吞噬百分率为：[吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数]×100%。

3. 吞噬指数为：[吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数]。

六、实验分析1. 通过实验观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，证实了细胞吞噬作用的可行性。