小吞噬细胞实验幻灯片

1、取样
2、孵育
3、制片
4、镜检
实 验 步 骤
①
② ③
3.8%枸橼酸钠或肝素 0.4ml 无菌采血 0.2ml 菌液 0.02-0.04ml
单凹玻片
370C孵育30-45min
湿盒
孵箱
1. 取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻片推 成薄血片，自然干燥。 2. 滴加甲醇固定5min，水洗。 3. 置瑞特液1min，置pH6.4PB中3min，置吉姆萨液染5-
————————————
X 100%
100
吞噬指数=
100个吞噬细胞吞噬的细菌总数 ——————————————
100
1. 人类白细胞的吞噬活性在37℃时最好，温度过 高过低均会使其吞噬能力减低。
注 意 事 项
2. 个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能 力亦不同。
3. 掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。中性粒 细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞 噬5min时吞噬率达45%，10min时接近80%， 20min 即达饱和。
4. 取“细菌－全血”涂片时，要混匀后再取；制 作血涂片要求推出尾部，过厚或过薄，均不利 观察。
二.小鼠腹腔中性粒细胞吞噬功能检测（体外检测）
材 料
1. 2. 3. 4.
15-20g小白鼠。 表皮葡萄球菌菌液（9亿/ml）。 瑞特-吉姆萨染液。 注射器及针头、无菌肉汤、解剖板、 剪刀、镊子、碘酊、乙醇。
实 验 原 理
小 吞 噬 细 胞
• 来 源： 骨髓。 • 存在部位： 血液 、 炎症部位（全 身）。 • 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及 杀菌物质。 • 功 能：具有吞噬细菌和清除溃 残物质等防御功能。 • 反应时间及寿命：反应时间快,数分 钟到几小时，寿命短.平均数小时。
实 验 材 料
1. 菌液：表皮葡萄球菌菌液（9亿/ml） 2. 抗凝剂：3.8%枸橼酸钠或肝素 （25U/ml） 3. 毛细吸管、凹玻片、载玻片、 牙签、甲醇、瑞特-吉姆萨染液、 pH6.4PB、酒精棉球、采血针等。
小吞噬实验
实 验 目 的
一．掌握血液中的中性粒细胞体外吞 噬异物能力的测定方法。 二．观察机体的非特异性免疫现象。
实 验 内 容
一．人外周血中性粒细胞吞噬功能检 测（体外实验）。 二．小鼠腹腔中性粒细胞吞噬功能的 检测（体内实验）。
一.人外周血中性粒细胞吞噬功能检测（体外实验）
血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、 调理、吞入和杀菌等步骤，能吞噬和消化衰老， 死亡细胞即病原微生物等异物，是机体固有免疫 的重要组成部分。将白细胞悬液与细菌混合，保 持一定时间后，取样涂片染色镜检，可以测定中 性粒细胞吞噬细菌的百分率和吞噬指数。本实验 有助于诊断疑有吞噬细胞障碍的疾病。 在某些情况下，小吞噬细胞也参与某些超敏反应 和自身免疫疾病的组织损伤和炎症过程，因此， 测定小吞噬细胞的功能可在一定程度上反映机体 的免疫状态，也可作为判定疗效的一种指标。
2. 注意掌握好染色时间
1. 诱导：实验前一天给小白鼠腹腔注射无菌肉汤0.51.0ml，轻揉腹部。 2. 实验前4-5h给小白鼠腹腔注射无菌肉汤0.5-1.0ml， 轻揉腹部。 3. 4. 注射：实验时给小白鼠腹腔内注射表皮葡菌菌液 0.5ml，轻揉腹部。 取样： 注射后35 -45min处死小白鼠，用毛细吸待干。
红细胞
镜 检
中性粒细胞
葡萄球菌
油镜观察下，中性粒细胞细胞质呈淡蓝色，细菌 呈深蓝色，红细胞呈褐色，细胞核呈紫色。
结 果 观 察
计数100个中性粒细胞，同时计数吞噬细菌的中 性粒细胞数以及被吞噬的细菌总数，计算吞噬 百分率或吞噬指数。
表 示 法
吞噬百分率=
吞噬细菌的中性粒细胞数
实 验 步 骤
5. 染色：标本干燥后瑞氏染-吉姆萨染液染色。（染 色同体外法） 6. 镜检，观察中性粒细胞吞噬表皮葡萄球菌的现象。
结 果 观 察 及 表 示 法
结果观察：油镜检查，先寻找白细 胞，观察细胞质中有无被吞噬的细 菌。 结果表示法同体外实验。
注 意 事 项
1. 注射菌液时不要注射到皮下或腹 腔脏器内，注射后轻揉腹部，使 液体在腹腔内分散均匀