吞噬细胞吞噬功能的检测

第二次实验2：吞噬细胞吞噬功能检测一、实验目的学习并掌握吞噬细胞吞噬功能检测。

二、实验原理吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体固有免疫中发挥重要作用。

小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠，可刺激巨噬细胞的聚集。

四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液，一小时后解剖收集腹腔吞噬细胞，染色、镜检可观察对羊红细胞的吞噬现象。

通过计算吞噬百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞噬功能。

一、实验材料1. ICR 品系小鼠（北京大学医学部实验动物中心提供）2. PBS 缓冲液3. 3％硫代乙醇酸钠4.羊红细胞（1％悬液，北京大学医学部实验动物中心提供）5. 解剖器材、注射器、尖吸管、橡皮吸头、小试管及载玻片6. 瑞氏染液、甲醇四、实验步骤1. 实验准备：用无菌注射器吸取3％硫代乙醇酸钠3ml，注射于小鼠腹腔内。

2. 四日后，注射羊红细胞（1％悬液）1ml 于小鼠腹腔内。

3. 注射1 小时后，将小鼠用颈椎脱臼法处死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用镊子轻轻夹起腹膜，将腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml 预温的PBS，同时用手反复揉搓腹腔约1—2 分钟，以便尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞。

4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一洁净试管内。

5. 用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡)，吸取一滴滴于载玻片上，加盖玻片镜检。

6. 观察结果，也可以将腹腔液涂片，平放于湿盘内，37℃，孵育30 分钟。

取出涂片，用预温的PBS 冲洗3 次，然后用甲醇固定1 分钟，以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混匀后，滴于涂片上染色5-10 分钟，以蒸馏水冲洗（切勿先将染液倾去）后，待干，镜检。

五、实验结果观察小鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞对羊红细胞的吞噬现象，计算吞噬百分比，即每100 个吞噬细胞中吞噬有羊红细胞的细胞数。

也可用吞噬指数表示，即将100 个吞噬细胞中所吞噬羊红细胞的总数除以100。

吞噬百分比和吞噬指数一般是平行的。

小吞噬实验实验报告小吞噬实验报告篇一：巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞，局域活跃的吞噬功能。

吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。

在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷亚甲蓝染色，显微镜下计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目，以判断吞噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。

【方法】体内法：（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。

（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。

（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片过，再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。

（4）高倍镜下进行观察，计数。

【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。

二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，二者均可发生扩散，并且随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。

本实验是定性实验，常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。

【方法】（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl（4）结果观察：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观察结果。

【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。

中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。

吞噬细胞吞噬功能的检测一、小吞噬细胞的吞噬作用(一) 体内法[材料](1) 动物: 豚鼠。

(2) 菌种: 金黄色葡萄球菌菌液。

(3) 无菌注射器及针头、无菌肉汤、玻片、瑞氏染液。

[方法](1) 第1天注射无菌肉汤10 ml 于豚鼠腹腔，隔24 h 同法注射肉汤5 ml。

20 min 后，再注射金黄色葡萄球菌菌液Iml 于上述部位。

(2) 注射完毕，每隔20 min 用注射器抽取腹腔液，并做推片，待其自千后，用瑞氏染色法染色，镜检时见金黄色葡萄球菌被小吞噬细胞吞入胞浆时为宜。

(3) 瑞氏染色方法如下: 将瑞氏染液滴加数滴于涂片上。

加入等量的蒸馏水，轻轻混匀，染5 -10 min。

用蒸馏水(或自来水) 冲洗。

待干或轻轻用吸水纸将涂片吸干，油镜检查。

[结果]染色后，可见小吞噬细胞的核及被吞噬的细菌呈深紫蓝色，而小吞噬细胞的胞浆为紫色。

(二) 体外法[目的]1.熟悉检测白细胞吞噬作用的原理与实验方法。

2.通过吞噬细胞的吞噬功能检测了解机体的非特异性免疫功能。

3.掌握显微镜、油浸镜的使用与保护方法。

[原理]中性粒细胞具有在噬杀菌功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合后，孵育一定时间，颗粒物质被中性粒细胞吞噬。

根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能，但不能反映其杀伤功能。

[材料](1) 3.8% 枸橼酸钠。

(2) 碘伏、无菌注射器及针头、吸管、试管、载玻片、温箱等。

(3)瑞氏染液(4) 葡萄球菌悬液: 取白色葡萄球菌在琼脂斜面上生长24 h的培养物，用无菌生理盐水刮洗下菌苔，用PBS洗涤2次，最后用比浊法将菌液调整至5 x10 7ml悬液，100℃加热15min，置4℃冰箱备用。

[方法](1) 自静脉采血0.2 m,放于含3.8% 枸橼酸钠0.2 ml的小试管中，混匀，防止凝血(或由一人抽血10 ml 抗凝，供全小班使用)。

(2) 取葡萄球菌悬液0.2 ml,加于上述血液中混匀。

(3) 37 C温箱孵育30min,每10 min取出振摇1次，再继续静置孵育，于30 min 时取出。

（一）炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒医学教|育网搜集整理，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒，据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁（炭粒悬液），间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。

（二）吞噬功能的检测
巨噬细胞具有较强的吞噬功能，实验室常用比细菌大的细胞性抗原作为被吞噬颗粒，如鸡红细胞。

其检测原理是将受检细胞与适量的颗粒抗原混合后，置37℃保温0.5～1h，其间时加振摇，最后离心取测定细胞制成涂片，染色镜检，分别计数出吞噬百分比和吞噬指数。

各实验室应根据自己的条件建立正常参考值。

（三）巨噬细胞溶酶体酶的测定
巨噬细胞富含溶酶体酶，如酸性磷酸酶、非特异性酯酶、溶菌酶等，测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的实用指标之一。

一、实验目的1. 了解吞噬细胞吞噬功能的测定原理和方法。

2. 掌握中性粒细胞和巨噬细胞吞噬功能测定的操作步骤。

3. 分析吞噬功能测定的结果，评估吞噬细胞的功能状态。

二、实验原理吞噬细胞是免疫系统中的重要组成部分，具有吞噬、消化病原微生物和衰老细胞等功能。

吞噬功能测定是评估机体免疫功能的一种方法。

本实验通过测定中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能，了解其吞噬能力，从而评估机体免疫功能。

三、实验材料1. 实验动物：小白鼠（6-8周龄，体重20-25g）。

2. 试剂：中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂、鸡红细胞悬液、瑞氏染液、生理盐水、0.1%吐温-80、磷酸缓冲盐溶液（PBS）等。

3. 仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、载玻片、试管等。

四、实验方法1. 中性粒细胞和巨噬细胞分离将小白鼠处死，无菌操作取腹腔液，加入中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂，充分混匀后室温放置5分钟。

低速离心（1000r/min，5分钟）分离中性粒细胞和巨噬细胞。

2. 吞噬功能测定（1）中性粒细胞吞噬功能测定取分离的中性粒细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。

低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。

洗涤、干燥、封片，显微镜下观察中性粒细胞吞噬鸡红细胞的情况。

（2）巨噬细胞吞噬功能测定取分离的巨噬细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。

低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。

洗涤、干燥、封片，显微镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况。

3. 结果分析计算吞噬百分率和吞噬指数。

吞噬百分率=吞噬有鸡红细胞的细胞数/细胞总数×100%；吞噬指数=吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的细胞数。

五、实验结果1. 中性粒细胞吞噬功能吞噬百分率：60.5%；吞噬指数：1.2。

2. 巨噬细胞吞噬功能吞噬百分率：70.2%；吞噬指数：1.8。

六、讨论本次实验成功测定了中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能。

一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。

2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。

二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。

在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。

2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。

3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。

四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。

2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。

3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。

4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。

5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。

五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。

具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。

2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。

3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。

六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。

2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。

3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。

4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。

七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。

实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。

项目十九吞噬细胞功能检测一、中性粒细胞吞噬功能测定(Neutrophil phagocytosis assay)(一)吞噬试验【实验原理】中性粒细胞具有吞噬功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质被吞噬。

根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。

【试剂和器材】1．试剂20%FCS RPMI-1640培养液、pH6.4 0.015mol/L PBS、Wright染液、金黄色葡萄球菌培养物、抗凝剂(4g/L柠檬酸钠溶液)。

2．器材37℃温箱、显微镜、滴管、一次性采血针、微量细胞培养板、无菌干棉球、酒精棉球、碘酒棉球、接种环等。

【步骤和方法】1．热灭活葡萄球菌悬液配制取金葡菌24h琼脂斜面培养物，用无菌生理盐水洗下菌苔，用PBS洗涤2次，100℃加热15min灭活。

取热灭活金黄色葡萄球菌混悬于20% FCS RPMI-1640培养液中, 用比浊法调整浓度至6×107/ml。

4℃保存，备用。

2．于微量细胞培养板孔内加1滴(约50μl)抗凝剂，无菌采人末梢血2滴(约100μl)与抗凝剂混匀。

3．向孔内加6×107/ml金黄色葡萄球菌悬液2滴(约100μl)，混匀。

4．置37℃烛缸或5% CO2孵箱内培养30min。

5．取1滴培养液推片，自然干燥，Wright染色，水洗，干燥，油镜镜检。

【结果判定】计数200个中性粒细胞，并分别记下吞噬细菌的细胞数和各个细胞吞入的细菌数。

计算吞噬率和吞噬指数：200个中性粒细胞中吞噬细菌的中性粒细胞数? 100％200200个中性粒细胞吞噬的细菌总数200【注意事项】1．所用器材要洁净。

2．越接近片子末梢细胞数越多，计数时应取片子前、中、后三段计数，以提高准确性。

3．抗凝剂用量要适当，过高则抑制吞噬功能，过低使血液凝固。

【方法评价】此法易操作、不需特殊设备，省时，费用低廉。

结果直观，可用于评价其他方法获得的结果，但是光学显微镜分辨率低，有时难以计数吞入的细菌颗粒。

荧光乳胶微粒法检测巨噬细胞吞噬实验
（1）将巨噬细胞以50%密度接种于六孔板中，待细胞贴壁后，给予干预处理，并设对照组，干预后弃去培养基。

（2）将细胞与乳胶珠粒（10μL乳胶珠稀释于2mL DMEM中）共孵育2小时。

（3）用1×PBS洗3次，目的是洗掉没有被吞噬的乳胶粒。

流式细胞法
（4）收集细胞，1200r/min，离心5min，弃上清液。

（5）1×流式Buffer重悬细胞，1200r/min，离心5min。

（6）细胞计数，每组调整细胞个数为1×106个细胞，1200r/min，离心5min。

（7）弃上清，加入1×流式Buffer 重悬细胞，清洗2次，1200r/min，离心5min。

（9）弃上清液，加入500μl 1×流式Buffer 重悬细胞，等待上机流式细胞仪检测。

荧光显微镜法
（1）将巨噬细胞以50%密度接种于含细胞爬片的六孔板中，待细胞贴壁后，给予干预处理，并设对照组，干预后弃去培养基
（2）将细胞与乳胶珠粒（10μL乳胶珠稀释于2mL DMEM中）共孵育2小时。

（3）用1×PBS洗3次，目的是洗掉没有被吞噬的乳胶粒。

（4）加入4%多聚甲醛固定30min。

（5）弃甲醛液，加入1×PBS 洗涤5min×3次。

（15）避光条件下，DAPI 染液染细胞核5min。

（16）1×PBS 洗涤5min×3次。

（17）用抗荧光淬灭剂封片，荧光显微镜下观察并保存图像。

细胞的吞噬活动的实验报告一、实验目的探究细胞的吞噬活动对有机物的分解和清除的作用。

二、实验原理细胞的吞噬活动是通过细胞膜上的吞噬体来将外部的物质包裹进细胞内部，以实现分解和清除的功能。

吞噬体是由细胞膜形成的直径约0.5-5微米的的小囊泡结构。

三、实验材料和仪器1. 细胞培养液2. 细胞培养皿3. 细胞培养槽4. 显微镜5. 有机物溶液（如蛋白质溶液）四、实验步骤1. 将细胞培养液均匀地加入细胞培养皿中，使细胞均匀分布在培养皿底部。

2. 加入适量的有机物溶液到培养皿中，使有机物溶液与细胞充分接触。

3. 放入细胞培养槽，保持适宜的温度和湿度，促进细胞的生长和吞噬活动。

4. 在一定时间间隔后，取出细胞培养皿，用显微镜观察细胞的吞噬活动情况。

五、实验结果经过一定时间的观察，我们发现细胞对有机物溶液的吞噬活动较为明显。

在显微镜下观察，我们可以看到大量的吞噬体形成，将有机物包裹在细胞内部，并进行分解和消化。

六、实验讨论通过实验结果可以得出结论，细胞的吞噬活动是一种重要的细胞功能，能够对外界的有机物进行分解和清除。

这一过程对于细胞代谢和清除废物具有重要的意义。

在实验中，我们只观察了细胞对有机物的吞噬活动，实际上细胞还能够通过吞噬活动清除细菌和病毒等外源性物质。

细胞的吞噬活动是机体免疫系统的重要组成部分。

此外，细胞的吞噬活动还受到多种因素的调控，如细胞膜上的受体和信号通路的参与。

这些调控机制的研究对于深入理解细胞的吞噬活动和相关疾病的发生发展具有重要的意义。

七、实验总结细胞的吞噬活动是一种重要的细胞功能，能够对外界的有机物进行分解和清除。

通过本次实验，我们观察到了细胞对有机物溶液的吞噬活动情况，并且探讨了细胞吞噬活动的重要性和调控机制。

随着科学技术的不断进步，我们相信对细胞吞噬活动的研究会有更深入的认识，为人类健康和疾病治疗带来更多的突破。

八、参考文献- Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al. Molecular Biology of the Cell. 4th edition. New York: Garland Science; 2002. [Link]- Luzio JP, Pryor PR, Bright NA. Lysosomes: fusion and function. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007;8(8):622-632. doi:10.1038/nrm2217. [Link]。

1. 了解中性粒细胞吞噬功能试验（小吞噬试验）的原理和方法。

2. 掌握中性粒细胞吞噬功能试验的操作步骤。

3. 观察中性粒细胞吞噬功能的变化，分析实验结果。

二、实验原理中性粒细胞吞噬功能试验（小吞噬试验）是一种检测中性粒细胞吞噬功能的方法。

中性粒细胞在人体免疫系统中起着重要作用，具有吞噬、消化病原体的功能。

通过观察中性粒细胞对特定物质的吞噬情况，可以了解中性粒细胞的吞噬功能。

三、实验材料1. 实验动物：健康小鼠2. 实验试剂：中性粒细胞吞噬功能试剂、生理盐水、染色液、显微镜等3. 实验仪器：离心机、显微镜、培养箱等四、实验步骤1. 选取健康小鼠，随机分为实验组和对照组。

2. 实验组：腹腔注射中性粒细胞吞噬功能试剂，对照组：腹腔注射等体积的生理盐水。

3. 注射后24小时，取小鼠血液，分离中性粒细胞。

4. 将中性粒细胞与特定物质（如细菌、酵母等）混合，置于培养箱中培养。

5. 观察中性粒细胞对特定物质的吞噬情况，记录吞噬百分率和吞噬指数。

6. 对实验结果进行统计分析。

五、实验结果1. 实验组中性粒细胞的吞噬百分率和吞噬指数均高于对照组，说明中性粒细胞吞噬功能试验结果显著。

2. 随着培养时间的延长，中性粒细胞的吞噬百分率和吞噬指数逐渐增加，说明中性粒细胞吞噬功能随时间延长而增强。

1. 实验结果表明，中性粒细胞吞噬功能试验可以有效地检测中性粒细胞的吞噬功能。

2. 中性粒细胞吞噬功能试验具有操作简便、结果直观等优点，适用于临床和科研工作。

七、实验结论通过本次实验，我们掌握了中性粒细胞吞噬功能试验的原理和方法，了解了中性粒细胞吞噬功能的变化规律。

实验结果表明，中性粒细胞吞噬功能试验可以有效地检测中性粒细胞的吞噬功能，为临床和科研工作提供了有力支持。

八、实验反思体会1. 实验过程中，应严格按照操作步骤进行，避免人为误差。

2. 实验结果的分析应客观、准确，避免主观臆断。

3. 中性粒细胞吞噬功能试验具有实际应用价值，为临床和科研工作提供了有力支持。

巨噬细胞功能检测巨噬细胞是一类具有吞噬能力的白细胞，是机体最重要的免疫细胞之一、它们由骨髓造血干细胞分化而来，广泛存在于机体的各个组织和器官中。

巨噬细胞的主要功能是吞噬、杀灭和消化各种病原微生物，包括细菌、病毒和真菌等。

除此之外，巨噬细胞还有调节和递质释放的功能，能够参与机体的炎症反应、组织修复和免疫调节等过程。

在巨噬细胞的功能检测中，常用的方法包括体外测定和体内评价两种。

体外测定是指将巨噬细胞分离、培养，并通过一系列方法和试剂来评价其功能。

最常用的体外功能检测方法是吞噬活度测定。

通过给巨噬细胞提供特定的病原微生物（如大肠杆菌、酵母菌等），并使用显微镜或流式细胞仪等工具观察巨噬细胞吞噬数量和效果，从而评价巨噬细胞的吞噬能力。

此外，还可以利用溶菌酶、超氧化物歧化酶等试剂来评价巨噬细胞杀菌和抗氧化能力。

体内评价是指通过动物实验研究巨噬细胞在机体免疫反应中的功能。

常用的方法包括巨噬细胞移行实验、伤口愈合实验以及炎症模型制备等。

巨噬细胞移行实验是通过将其中一部位的巨噬细胞标记，然后观察其在体内的移行情况，从而了解其调节和清除作用。

伤口愈合实验是通过制造小鼠皮下创伤刺激，并观察巨噬细胞在创伤修复中的作用。

炎症模型制备则是在小鼠体内引起炎症反应，然后观察和测定巨噬细胞的参与及相关分子的表达变化。

巨噬细胞功能检测的结果可以帮助医生了解患者免疫状态，并指导治疗方案的选择。

临床中常见的应用包括感染性疾病、自身免疫疾病和肿瘤等。

例如，在感染性疾病中，巨噬细胞的吞噬和杀菌能力对于清除病原微生物起着关键作用，通过评估巨噬细胞功能可以了解患者感染风险、判断疾病的严重程度以及监测治疗效果。

而在肿瘤中，巨噬细胞则具有抗肿瘤作用，通过评价其杀伤肿瘤细胞能力可以协助肿瘤治疗的选择和预后判断。

总之，巨噬细胞功能检测是一种重要的免疫学分析方法，可以评估巨噬细胞的吞噬、杀伤和调节能力，从而帮助医师了解患者的免疫状态和疾病发展情况，并指导相应的治疗方案。

篇一：巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞，局域活跃的吞噬功能。

吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。

在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷亚甲蓝染色，显微镜下计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目，以判断吞噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。

【方法】体内法：（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。

（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。

（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片过，再滴一滴%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。

（4）高倍镜下进行观察，计数。

【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。

二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，二者均可发生扩散，并且随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。

本实验是定性实验，常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。

【方法】（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl（4）结果观察：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观察结果。

【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。

中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。

【分析】抗体与抗原发生扩散时，随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。

1. 掌握吞噬实验的基本原理和方法。

2. 了解巨噬细胞和小吞噬细胞的功能特点。

3. 观察并分析吞噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。

二、实验原理吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质的过程。

在动物体内，巨噬细胞和小吞噬细胞是主要的吞噬细胞，它们具有识别、摄取、消化和清除病原体、衰老细胞和异物的功能。

吞噬作用在机体非特异性免疫中起着重要作用。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：昆明种小鼠2. 实验材料：鸡红细胞、无菌生理盐水、6%无菌淀粉液、冷亚甲蓝染色液3. 仪器设备：显微镜、离心机、移液器、培养皿、吸管等四、实验方法1. 诱导巨噬细胞渗出：实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。

2. 制备鸡红细胞悬液：取鸡红细胞，用无菌生理盐水洗涤3次，制成鸡红细胞悬液。

3. 观察吞噬现象：实验时，每只小鼠注射鸡红细胞悬液1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。

30分钟后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片上。

滴一滴冷亚甲蓝染色液，盖上盖玻片。

在高倍显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。

五、实验结果1. 观察到巨噬细胞形态正常，细胞核清晰可见。

2. 部分巨噬细胞周围有鸡红细胞聚集，说明巨噬细胞已吞噬鸡红细胞。

3. 部分鸡红细胞被吞噬细胞吞噬后，细胞内出现鸡红细胞。

1. 本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，证实了巨噬细胞具有吞噬功能。

2. 吞噬细胞在机体非特异性免疫中起着重要作用，能够清除病原体、衰老细胞和异物，维持机体内环境的稳定。

3. 吞噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，进一步说明了吞噬细胞在清除血液中异物方面的作用。

七、实验讨论1. 吞噬细胞的吞噬能力受多种因素影响，如细胞表面的受体、吞噬物质的性质等。

2. 吞噬细胞在吞噬过程中，需要消耗能量，并分泌多种生物活性物质，如溶酶体酶等。

巨噬细胞吞噬功能试验
取前臂斑蛰发泡后的皮泡液。

巨噬细胞能吞噬和杀灭胞内寄生虫、细菌、自身衰老和死亡的细胞以及肿瘤细胞，参与机体的免疫防御、免疫自稳、免疫监视功能。

【正常参考值】
巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率 61.39～64.15 %
吞噬指数 1.009～1.107
【异常结果分析】
当手术切除肿瘤，或放疗、化疗后病情好转，吞噬率及吞噬指数可回升，因此可作为肿瘤疗效判断的参考指标。

恶性肿瘤病人（如食管癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、宫颈癌等）病人的吞噬百分率常在45％以下，吞噬指数也下降。

项目十九 吞噬细胞功能检测一、中性粒细胞吞噬功能测定 (Neutrophil phagocytosis assay)(一)吞噬试验【实验原理】中性粒细胞具有吞噬功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质被吞噬。

根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。

【试剂和器材】1．试剂 20%FCS RPMI-1640培养液、pH6.4 0.015mol/L PBS 、Wright 染液、金黄色葡萄球菌培养物、抗凝剂(4g/L 柠檬酸钠溶液)。

2．器材 37℃温箱、显微镜、滴管、一次性采血针、微量细胞培养板、无菌干棉球、酒精棉球、碘酒棉球、接种环等。

【步骤和方法】1．热灭活葡萄球菌悬液配制 取金葡菌24h 琼脂斜面培养物，用无菌生理盐水洗下菌苔，用PBS 洗涤2次，100℃加热15min 灭活。

取热灭活金黄色葡萄球菌混悬于20% FCS RPMI-1640培养液中, 用比浊法调整浓度至6×107/ml 。

4℃保存，备用。

2．于微量细胞培养板孔内加1滴(约50μl)抗凝剂，无菌采人末梢血2滴(约100μl)与抗凝剂混匀。

3．向孔内加6×107/ml 金黄色葡萄球菌悬液2滴(约100μl)，混匀。

4．置37℃烛缸或5% CO 2孵箱内培养30min 。

5．取1滴培养液推片，自然干燥，Wright 染色，水洗，干燥，油镜镜检。

【结果判定】计数200个中性粒细胞，并分别记下吞噬细菌的细胞数和各个细胞吞入的细菌数。

计算吞噬率和吞噬指数：％菌的中性粒细胞数个中性粒细胞中吞噬细吞噬率＝100 200200 200200菌总数个中性粒细胞吞噬的细吞噬指数＝ 【注意事项】1．所用器材要洁净。

2．越接近片子末梢细胞数越多，计数时应取片子前、中、后三段计数，以提高准确性。

3．抗凝剂用量要适当，过高则抑制吞噬功能，过低使血液凝固。

【方法评价】此法易操作、不需特殊设备，省时，费用低廉。