吞噬作用的实验原理

一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。

3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。

二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。

吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。

本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。

2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。

3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。

四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。

2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。

（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。

（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。

（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。

3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。

五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。

2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。

六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。

2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。

3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。

七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。

实验八巨噬细胞吞噬现象的观察
一、实验原理
巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成, 然后进入血液到达各组织内, 并进一步分化为各种巨噬细胞, 当病原微生物或其它异物侵入机体时, 能招引巨噬细胞, 而巨噬细胞又有趋化性, 能响应招引因子的招引, 产生活跃的变形运动, 主动向病原体和异物移行, 在接触到病原体和异物时, 即伸出伪足, 将之包围并内吞入胞质, 形成吞噬体, 继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合, 形成吞噬性溶酶体, 通过其中水解酶等作用下, 将病原体杀死, 消化分解, 最后将不能消化的残渣排了出细胞外。

台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂, 台盼蓝染料进入细胞, 细胞变蓝, 即为坏死。

如果细胞膜完整, 细胞不为台盼蓝染色, 则为正常细胞或凋亡细胞。

此方法对反映细胞膜的完整性, 区别坏死细胞有一定的帮助。

二、实验步骤
1. 在小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝）1ml。

2．24h后注射1%鸡红细胞悬液1ml, 轻按腹部使分散。

3. 20分钟后脱颈骨处死小鼠。

4. 开腹取腹腔液（慎防小鼠血污染）。

5．腹腔液滴于载玻片上, 盖上盖玻片。

6. 显微镜观察吞噬现象。

三、实验结果
四. 结果讨论。

小鼠荧光吞噬实验原理-概述说明以及解释1.引言1.1 概述小鼠荧光吞噬实验是一种常用的实验方法，用于研究细胞内吞噬过程中的分子运输和代谢。

该实验利用小鼠体内携带的荧光信号标记基因，通过观察和分析小鼠体内特定细胞或组织的吞噬活动，以揭示细胞吞噬机制及其在生物体内功能的调控机制。

小鼠荧光吞噬实验的基本原理是将荧光标记基因导入小鼠体内的特定细胞或组织，并通过特定技术手段使标记基因在细胞内表达。

荧光标记基因通常与特定的信号分子或蛋白质相连，能够精确地标记细胞或组织中的吞噬相关结构或分子。

在荧光吞噬实验中，研究人员可以观察和记录荧光信号在特定细胞或组织中的表达和分布情况，从而了解吞噬过程中的分子运输路径和动力学过程。

通过对比荧光标记与非标记的细胞或组织，可以准确地定位和识别细胞吞噬结构，分析吞噬动力学和运输效率。

实验操作步骤包括小鼠基因导入、标记基因表达检测和分析、吞噬过程观察和定量分析等。

在实验过程中，研究人员需要注意实验材料的选择、实验条件的控制以及数据的准确记录和分析等方面的问题，以确保实验结果的可靠性和科学性。

小鼠荧光吞噬实验在生物医学研究领域具有重要的应用价值。

通过该实验方法，可以揭示细胞吞噬过程中的分子调控机制，探索细胞内代谢途径和信号转导通路的功能和调控方式，为相关疾病的诊断和治疗提供理论基础和实验依据。

同时，该实验方法还可以为其他吞噬相关的生物学研究和应用提供技术支持和实验平台。

综上所述，小鼠荧光吞噬实验是一种有力的实验方法，可以帮助我们深入了解细胞吞噬过程中的分子运输和代谢情况。

通过该实验方法，我们可以揭示细胞内吞噬机制的调控原理，为细胞生物学和生物医学研究提供重要的理论和实验基础。

1.2文章结构1.2 文章结构本文旨在介绍小鼠荧光吞噬实验的基本原理和实验操作步骤，并对实验结果进行分析，探讨实验的意义。

文章将分为三个主要部分。

第一部分是引言，将概述整篇文章的内容，并说明本文的目的。

第二部分是正文，将详细介绍小鼠荧光吞噬实验的基本原理，包括涉及的关键概念和基本原则。

项目十九吞噬细胞功能检测一、中性粒细胞吞噬功能测定(Neutrophil phagocytosis assay)(一)吞噬试验【实验原理】中性粒细胞具有吞噬功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质被吞噬。

根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。

【试剂和器材】1．试剂20%FCS RPMI-1640培养液、pH6.4 0.015mol/L PBS、Wright染液、金黄色葡萄球菌培养物、抗凝剂(4g/L柠檬酸钠溶液)。

2．器材37℃温箱、显微镜、滴管、一次性采血针、微量细胞培养板、无菌干棉球、酒精棉球、碘酒棉球、接种环等。

【步骤和方法】1．热灭活葡萄球菌悬液配制取金葡菌24h琼脂斜面培养物，用无菌生理盐水洗下菌苔，用PBS洗涤2次，100℃加热15min灭活。

取热灭活金黄色葡萄球菌混悬于20% FCS RPMI-1640培养液中, 用比浊法调整浓度至6×107/ml。

4℃保存，备用。

2．于微量细胞培养板孔内加1滴(约50μl)抗凝剂，无菌采人末梢血2滴(约100μl)与抗凝剂混匀。

3．向孔内加6×107/ml金黄色葡萄球菌悬液2滴(约100μl)，混匀。

4．置37℃烛缸或5% CO2孵箱内培养30min。

5．取1滴培养液推片，自然干燥，Wright染色，水洗，干燥，油镜镜检。

【结果判定】计数200个中性粒细胞，并分别记下吞噬细菌的细胞数和各个细胞吞入的细菌数。

计算吞噬率和吞噬指数：200个中性粒细胞中吞噬细菌的中性粒细胞数? 100％200200个中性粒细胞吞噬的细菌总数200【注意事项】1．所用器材要洁净。

2．越接近片子末梢细胞数越多，计数时应取片子前、中、后三段计数，以提高准确性。

3．抗凝剂用量要适当，过高则抑制吞噬功能，过低使血液凝固。

【方法评价】此法易操作、不需特殊设备，省时，费用低廉。

结果直观，可用于评价其他方法获得的结果，但是光学显微镜分辨率低，有时难以计数吞入的细菌颗粒。

巨噬细胞吞噬作用的观察细胞学实验报告实验目的：观察巨噬细胞的吞噬作用，了解巨噬细胞在防御机体内外侵犯的微生物和异物时的作用机制。

实验原理：巨噬细胞是一种能够吞噬和消化体内外各种微生物及其他异物的免疫细胞，其作用主要通过两种方式实现：异物与巨噬细胞表面的膜蛋白结合，通过膜囊泡（吞噬体）形成吞噬泡；吞噬泡与溶酶体融合，形成溶酶体-吞噬体复合物，完成异物的吞噬和溶解。

实验步骤：1.实验前准备1.1. 预先培养巨噬细胞至对数生长期，并调整细胞浓度为1×10^6 cells/mL；1.2.准备巨噬细胞富集培养液、悬浮液和含有正常培养液的对照组，分别标记为A、B和C组；1.3.准备大肠杆菌溶菌液；1.4.准备各组的显微镜载玻片。

2.差速计数法确定吞噬指数2.1.取3只显微镜载玻片，分别滴加A、B和C组巨噬细胞液，每个组各滴2滴；2.2.于25℃恒温槽中孵育15分钟；2.3.分别在显微镜下用10倍镜进行巨噬细胞数目计数；2.4.计算巨噬细胞吞噬指数，公式如下：吞噬指数=A-B/C-B。

3.吞噬试验3.1.在显微镜盖片上涂抹一层巨噬细胞富集液；3.2.将滴管中的巨噬细胞悬浮液加入巨噬细胞富集液之上，形成巨噬细胞层；3.3.在巨噬细胞层上滴加大肠杆菌溶菌液，并进行密封；3.4.将盖片置于37℃恒温槽中孵育30分钟；3.5.取出巨噬细胞盖片，用0.01%新洁尔灭溶液洗涤；3.6.加入吉姆萨酮染色试剂，显色15分钟后以洁净水洗净；3.7.在显微镜下观察巨噬细胞内的大肠杆菌数量。

4.数据处理4.1.统计吞噬细胞内大肠杆菌数量；4.2.分析吞噬指数和巨噬细胞内大肠杆菌数量的关系。

实验结果：根据差速计数法得出的巨噬细胞吞噬指数为0.67、在吞噬试验中观察到，巨噬细胞内存在许多吉姆萨酮染色的大肠杆菌。

实验讨论：巨噬细胞的吞噬作用是免疫系统中重要的第一道防线，可以吞噬和杀灭多种病原菌和异物。

实验结果表明，巨噬细胞吞噬指数为0.67，说明巨噬细胞具有较强的吞噬能力。

巨噬细胞吞噬功能测定【实验原理】巨噬细胞对颗粒性异物具有很强的吞噬功能。

当鸡红细胞被注入小鼠腹腔时，会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。

取小鼠腹腔液涂片、染色，在显微镜下可见到鸡红细胞被吞噬的现象。

计算吞噬百分率和吞噬指数，可判断吞噬细胞的吞噬功能。

【试剂和器材】1. 动物体重20-25g的健康小鼠。

2. 1%鸡红细胞（CRBC）悬液自鸡液静脉或心脏采血，放Alsever液中保存（鸡血与Alsever 液1：5混合），置4℃可有效保存1个月，临用前用生理盐水将CRBC洗3次，按红细胞压积配成1%CRBC悬液。

3. 6%可溶性淀粉肉汤培养基肉汤培养基100ml加入可溶性淀粉6g，混匀，置100℃水浴煮沸消毒。

4. 其他试剂瑞氏（Wright）染液、生理盐水等。

5. 器材无菌注射器及针头、剪刀、镊子、解剖盘、载玻片、显微镜等。

【步骤和方法】1.试验前3天，于小鼠腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤培养基1ml。

2.于试验当天，小鼠腹腔注入1%CRBC悬液0.5ml，并轻轻揉腹。

3.30min后小鼠颈椎脱臼处死，取腹腔液涂片，自然干燥后瑞氏染色，用油镜观察。

【结果判定】镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。

呈油镜下随机观察100个巨噬细胞，计数吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数。

吞噬百分率= (吞噬CRBC的巨噬细胞数/100)*100%吞噬指数= 吞噬细胞吞噬的CRBC总数/100【注意事项】1.涂片的薄厚要适当，否则影响计数。

2.小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。

3.如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。

4.剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。

5.被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。

阿氏液配方：葡萄糖 2.05克柠檬酸钠0.8克柠檬酸0.055克氯化钠0.42克加蒸馏水至100毫升，加热溶解后将pH值调到6.1，经过69千帕，15分钟的高压灭菌，放置在4℃的环境内，保存备用。

小吞噬实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞，局域活跃的吞噬功能。

吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。

在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷亚甲蓝染色，显微镜下计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目，以判断吞噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。

【方法】体内法：实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。

实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。

30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片过，再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。

高倍镜下进行观察，计数。

【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。

二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，二者均可发生扩散，并且随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。

本实验是定性实验，常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。

【方法】制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl结果观察：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观察结果。

【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。

中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。

【分析】抗体与抗原发生扩散时，随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。

当有沉淀线出现时，说明有抗原抗体反应。

巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告一．实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。

2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。

3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。

二．实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。

连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。

2.台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。

活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。

巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。

是一种溶酶体染色的方法。

3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三．实验材料及设备1.实验材料：a)连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b)鸡红细胞悬液c)生理盐水2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片、盖玻片若干c)注射器d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a)连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。

b)选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。

c)一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。

按摩小鼠腹部。

d)20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水（0.9%NaCl）按摩小鼠腹部。

e)3分钟后，引颈法处死小鼠f)迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。

g)在载玻片上滴2-3滴腹腔液，加上盖玻片，在显微镜下观察。

2.观察在不同倍数下观察样本，找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬细胞。

注意避免玻片液体干涸。

五．实验结果小鼠红细胞巨噬细胞鸡红细胞已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞图1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（100X物镜不染色）左上角示未知种类细胞100x物镜放大倍数，光镜下可见随机分布的不同种类的细胞。