苏云金杆菌对环境生物的安全性评价
- 格式:pdf
- 大小:674.42 KB
- 文档页数:9
苏云金杆菌在温室蔬菜害虫防治中的应用随着城市化的不断推进,人们对蔬菜的需求越来越大。
为了满足市场需求,越来越多的蔬菜在温室中种植。
然而,温室中蔬菜生长环境的特殊性质也为害虫提供了良好的生存条件,导致害虫的繁殖和危害程度加剧。
传统的化学农药防治方法不仅会对环境造成污染,还容易导致害虫产生抗药性,使得防治效果大打折扣。
因此,寻求一种新的、环保的、高效的防治方法是亟待解决的问题。
苏云金杆菌是一种常见的土壤细菌,具有显著的杀虫作用。
近年来,越来越多的研究表明,苏云金杆菌可用于温室蔬菜害虫防治中,具有广阔的应用前景。
本文将从苏云金杆菌的特性、在蔬菜害虫防治中的应用、及其推广与应用前景三个方面进行论述。
一、苏云金杆菌的特性苏云金杆菌(Pseudomonas syringae)是一种革兰氏阴性细菌,广泛存在于土壤、植物表面及水中等环境中。
该菌属于假单胞菌属,是一种非致病性菌株。
苏云金杆菌具有以下特性:1. 高效的杀虫作用。
苏云金杆菌不仅能够抑制害虫的繁殖,还能够直接杀死害虫。
这是由于苏云金杆菌产生的一些代谢产物能够直接对害虫产生毒性作用,如产生的蛋白酶可以破坏害虫的消化道,使其死亡。
2. 对环境友好。
苏云金杆菌是一种自然存在的微生物,不会对环境造成污染,也不会对作物产生残留。
3. 高度适应性。
苏云金杆菌能够在不同的温度、湿度和土壤环境中生长繁殖,具有高度的适应性。
二、苏云金杆菌在蔬菜害虫防治中的应用苏云金杆菌在蔬菜害虫防治中的应用主要有以下几个方面:1. 防治白粉虱。
白粉虱是温室蔬菜中的一种常见害虫,对叶片的吸食会导致叶片变黄、萎蔫、凋谢等现象,影响蔬菜的生长和产量。
研究表明,苏云金杆菌能够有效地抑制白粉虱的繁殖和发展,减轻害虫对蔬菜的危害。
2. 防治蚜虫。
蚜虫是温室蔬菜中的另一种常见害虫,对蔬菜的生长和产量也有很大的影响。
苏云金杆菌能够通过产生一些代谢产物,如产生的蛋白酶能够破坏蚜虫的消化道,减轻害虫对蔬菜的危害。
苏云金芽孢杆菌存在的问题及发展方向与化学农药相比,苏云金杆菌制剂安全性强,但产品的稳定性差,残效期短,杀虫速度慢,而且受施用环境影响大。
苏云金杆菌制剂作为微生物农药,要取代化学农药,除了依*人们生态意识的提高,更要从技术上达到高效价、低成本、规模化,从选育菌种、降低培养基成本、提高发酵控制水平、减少后处理过程中毒效损失等各环节优化。
寻找新的高活性菌株近30年来人们已分离出大量苏云金杆菌的菌种。
现在大约已知有69个血清型,82个血清亚种。
大多数生产厂家主要使用血清III型、V型、VII型菌株,包括HD−1, Bt−K, 8010等。
针对苏云金杆菌菌种发酵效价低、杀虫谱窄、见效慢、菌种退化等问题,可以采用诱变的方法筛选高毒力的菌株,选择合适的诱变剂量,将化学诱变和物理诱变结合能显著提高突变率。
丁学知等将菌株7012C经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合诱变,菌株的毒力与原始菌株相比提高了7.5倍。
目前许多科学家致力于采用遗传工程的办法,对原有的ICP基因重组改造,构建成杂种基因或工程菌,以提高杀虫效率,扩大杀虫谱,延长有效期或改进制剂效能。
除了广谱杀虫工程菌,提高杀虫活性的工程菌、延缓抗性的工程菌、延长持效期的工程菌等也已研制成功。
走复配农药增效之路农药合理复配,能克服单个农药制剂本身存在的不足,同时取长补短发挥各自所长。
进行农药复配使用,是一项行之有效的措施。
二种杀虫剂混用时产生的毒效、防治范围,超过各自单独使用时的毒效和防治范围的总和,即1+1>2。
农药复配有很多优点:1. 延缓和治理抗药性2. 拓宽农药防治谱3. 增效作用4. 降低使用时的毒性、药害或残留5. 节约药剂用量,降低防治成本6. 方便使用,省工省力省时武大绿洲的产品就是采用的这种方式,从大面积的田间试验表明,病毒杀虫剂和苏云金杆菌合理复配后,毒力、杀虫谱都大大提高,许多品种的杀虫剂杀虫效果已经超过了化学农药,而且用量更少,用药次数更少。
从崖城农田土壤中发现一种具有杀死植物害虫功能的细菌——苏云金芽孢杆菌崖城高级中学高一(1)班龚彩秀指导老师:翟鸿武一次偶然的机会让我在一本生物杂志上接触到苏云金芽孢杆菌(Bacillus Thuringiensis ,Bt)当时的我觉得很神奇——它能杀死农作物害虫。
人类从刀耕火种以来,一直备受害虫的威胁,给人类的生活造成了多种危害,其中虫害是威胁农作物高产的主要原因之一,全世界每年因此损失约数千亿美元,每年世界上因虫害而造成的农产品损失估计为13%。
在我国,水稻每年因虫害减产10%以上,小麦减产近20%,棉花产量损失达20%~30%。
为了控制农林病虫害,人们不得不大量使用化学农药,但长期大剂量地使用化学合成的农药,致使多种害虫对化学杀虫剂产生了一定的抗性,因此不但不能有效地控制害虫,结果还面临着三大难题无法解决,①环境污染,残毒上升,人畜均遭毒害;②用药浓度不断提高,防治费用不断增加,不得不无休止地研制新农药;③杀伤天敌,破坏了生态平衡,引起害虫再猖獗和次虫害虫大爆发,导致自然界中恶性循环。
苏云金芽孢杆菌由于能在生长代谢过程中产生对多种农林害虫具有特异性杀虫毒力的生物活性蛋白,并能由此生产相应的微生物杀虫剂来用于害虫生物防治而受到国内外的广泛重视。
广泛的研究与应用实践证明,与化学农药等其他类型的杀虫剂相比,Bt杀虫剂具有杀虫特异性强,对人、畜及非目标昆虫无毒副作用;安全性能好,不污染环境,由于具有多种类型的杀虫晶体蛋白,昆虫难以产生抗性或产生抗性较缓慢;具较低的生产成本等优点。
目前已推广使用的表达Bt毒素基因的转基因植物都有较为显著的抗虫性能,在大田栽培中无需或只需喷洒少许化学杀虫剂,从而大大减少了对环境的污染。
因此苏云金芽孢杆菌作为新型生物农药解决了一个长期以来让无数劳动农民头痛的问题。
而对生物有着浓厚兴趣的我对它有种相识恨晚的感觉,而这次的“科技创新”活动让我坚定了对它认识的决心,在老师和同学们的帮助下,我开始了我的创新实验。
《微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bt)的研究现状及应用》苏云金杆菌又称苏云金芽胞杆菌,简称Bt。
苏云金杆菌的发现,为人们利用微生物消灭植物病虫害提供了美好的前景。
化学杀虫剂的长期使用对生态环境产生了严重的破坏,而害虫种群的抗药性也日益提高,因此生物杀虫剂因为其“绿色环保”的特点日益引起人们的广泛关注。
现在,人们已经用发酵罐大规模地生产苏云金杆菌并制成粉剂或可湿剂、液剂,应用于农业,对100多种害虫有不同的致病和毒杀作用。
苏云金芽孢杆菌是目前世界上产量最大、应用最广的生物杀虫剂。
本文简要介绍作为生物杀虫剂的Bt的发展历史、研究现状和应用情况。
研究历史[1]1901年,日本学者石渡繁胤(Ishiwata Shigetane)从虫尸体液中分离出苏云金杆菌猝倒变种(Bacillus.thuringiensis var.sott)成为苏云金杆菌研究的起点[2]。
1911年,Berliner发现一杆菌,并详细描述了该菌的形态和培养特征,定名为苏云金杆菌(Bacil-lus.thuringiensis),指明苏云金杆菌含伴孢晶体(Paraspora crystl)[3]。
1938年,苏云金杆菌商品化,用于防治地中海粉螟。
20世纪50年代许多国家进行了商业性生产。
1953年,Hannay第一次发现苏云金杆菌的杀虫活性与伴孢晶体有关,并和Fitz-James于1955年证实,伴孢晶体是一种蛋白质。
1981年,Schnept和Whiteley首次将HD21菌株伴孢晶体的基因克隆到大肠杆菌中,并得到表达。
20世纪60年代用血清学技术进行Bt的鉴定和分类。
自二次世界大战后,苏云金芽孢杆菌被广泛使用,至今已有60多年[4]。
由于其推广力度以及人们的农药使用意识的传统观念限制,目前生物农药仅占全部农药市场份额很少一部分,从此可看出,苏云金芽孢杆菌杀虫剂任然具有较大的发展潜力。
简介Bt是一种革兰氏阳性芽孢杆菌,为昆虫病原细菌,其菌体为短杆状、有鞭毛,一般单生或形成短链。
编辑:杨风光**************文/ 赵国庆生物农药苏云金杆菌苏云金杆菌(Bt制剂)是在德国苏云金地区发现的一种细菌性杀虫剂。
常见商标名称:阿苏、苏力菌、菜蛙、天然之宝、敌宝、拂康、贝林、碧绿、碧星、娇蓝、金中、奇佳、芯钻、乐棵多、驱雀济农、百事威风、高点、九鲤、力道、灵秀、润奇、生绿、顺诺、应螟、真精、洲际、爱地益、塞诺菲、蛙先生、强敌315、杀虫菌1号、菌杀敌、青虫灵、都来施、农林丰、BT、Bt等。
苏云金杆菌性能原药为黄褐色晶体,属好气性蜡状芽孢杆菌群,在芽孢囊内内产生晶体,有12个血清型、17个变种,主要杀虫成分为内毒素和外毒素。
干粉在40℃以下稳定,碱性环境中分解,属低毒性杀虫剂,对人无毒性反应。
苏云金杆菌(Bt制剂)是一种有很多变种的芽孢杆菌,属细菌杀虫剂,由于杀虫范围广,防治效果好,不污染环境,生产工艺先进,目前世界上已有几十个国家500余个厂家获准登记,商品种类达100余种,年生产能力达50余万吨,是生物杀虫剂第一品牌。
苏云金杆菌杀虫剂作用方式主要是胃毒作用,苏云金杆菌从害虫口腔进入消化道后,在体内大量繁殖,同时吸收虫体内的营养物质,使害虫不能正常生长发育;同时细菌还产生大量毒素,使害虫形成败血症死亡。
病死虫体颜色加深变黑,并软化腐烂失去原形,一般均有臭味。
我国生产的苏云金杆菌大多加入0.1%~0.2%菊酯类杀虫剂,可加快害虫死亡。
苏云金杆菌特点1.选择性强,对人畜安全。
只对病虫害有作用,一般对人、畜及各种有益生物(包括动物天敌、昆虫、蜜蜂、传粉昆虫及鱼、虾等水生生物)比较安全,对非靶标生物的影响也比较小。
2.对生态环境影响小。
苏云金杆菌的活性成分完全存在和来源于自然生态系统,最大特点是极易被日光分解,是一种来于自然,归于自第12月 上半月刊然正常的物质循环方式。
因此可以认为对自然生态环境安全、无污染。
3.生产过程节能环保。
生产加工生物农药,一般主要利用天然可再生源,如农副产品的豆饼、花生饼、菜籽饼、鱼粉、麦麸或某些植物体等,原材料的来源十分广泛、生产成本比较低廉。
苏云金杆菌WP防治水稻稻纵卷叶螟田间药效试验1. 引言1.1 研究背景水稻稻纵卷叶螟是水稻上的一种重要害虫,其危害严重影响了水稻的产量和质量。
传统防治方法主要依靠化学农药,但长期使用容易导致害虫的抗药性和环境污染问题。
寻找一种安全高效的生物防治方法成为当前研究的重点之一。
苏云金杆菌是一种常见的土壤细菌,具有较强的杀虫活性。
近年来,有研究表明苏云金杆菌对水稻稻纵卷叶螟具有很好的防治效果,且具有环境友好和无毒副作用等优点。
开展苏云金杆菌在水稻稻纵卷叶螟防治中的应用研究具有重要的意义和潜在价值。
本研究旨在通过田间药效试验,评价苏云金杆菌WP对水稻稻纵卷叶螟的防治效果和安全性,为水稻的病虫害综合防治提供科学依据和理论支持。
通过这一研究,可以为实现绿色高效的水稻生产提供新的思路和方法。
1.2 研究目的本研究的目的是评估苏云金杆菌WP对水稻稻纵卷叶螟的防治效果,并对其田间药效进行试验。
通过该研究,我们希望能够探讨苏云金杆菌WP在水稻病虫害防治中的应用潜力,为农业生产提供有效的防治方法。
也为农业科研人员和农民提供科学依据,推动绿色农业发展和生态农业建设。
通过本次试验,我们希望能够为提高水稻产量和质量,减少对化学农药的依赖,提供一种新的生物防治方法,促进农业可持续发展。
通过对苏云金杆菌WP防治水稻稻纵卷叶螟的田间药效试验研究,为农业生产提供有效的防治技术和策略,促进水稻生产的可持续发展。
1.3 研究意义水稻是我国的重要粮食作物之一,其产量直接影响着粮食安全和农民的收入。
水稻在生长过程中常常受到危害,其中稻纵卷叶螟是水稻的主要害虫之一。
该害虫以幼虫在叶片内卷形成缩小花堆,导致叶片干枯枯黄,严重影响水稻的生长发育,严重降低水稻的产量和质量。
通过本试验的研究,可以为水稻的病虫害防治提供参考依据,为推广苏云金杆菌WP在水稻生产中的应用提供科学依据。
深入探讨苏云金杆菌WP对水稻稻纵卷叶螟的药效,对于促进绿色农业的发展,提高农业生产的效益和可持续性具有重要的意义。
苏云金杆菌(BT)毒素及其应用苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis, BT)是一种属于芽孢杆菌科的厌氧革兰氏阳性细菌,被广泛应用于生物农药领域。
其特殊之处在于它所产生的杀虫毒素对昆虫具有高度选择性和毒杀力,而对其他生物如人类和哺乳动物等无害。
苏云金杆菌通过杀虫毒素中的晶体蛋白(crystal protein, Cry)来对昆虫进行毒杀作用。
Cry毒素是一种孢晶蛋白,具有独特的作用机制。
其在昆虫肠道内会被消化酶切割,产生一种活性物质,结合并破坏肠道上皮细胞的细胞膜,导致肠道溶解和细胞死亡。
这一过程会导致昆虫水分和营养丧失,最终导致昆虫死亡。
苏云金杆菌毒素的应用主要集中在农业方面。
作为一种生物农药,它对昆虫的毒杀力非常高效,尤其适用于各类害虫的防治。
由于BT毒素对昆虫具有高度选择性,对其他生物无害,因此其在生态环境中的施用相对安全可靠。
同时,BT产品对环境的污染也很小,对人体的副作用也非常低。
因此,BT毒素被认为是一种环保、安全、有效的农药。
在实际应用中,BT毒素主要以两种形态存在:一种是悬浮液,可以直接喷洒在作物上,通过作物表面的附着和昆虫食用来实现毒杀作用;另一种是基因工程改造后的杂质,通常用于生产转基因植物。
这些转基因植物通过在其基因中导入BT毒素的编码序列,实现对害虫的防治。
这种转基因技术的应用使得BT毒素能够更加方便地被作物吸收,并在昆虫发生侵害时迅速发挥作用。
除了农业领域,BT毒素还被应用于其他一些领域。
在医学上,BT毒素被用作治疗和预防各种寄生虫病的药物。
在环境保护方面,BT毒素还可以被用来控制蚊蝇等各类害虫的繁殖。
此外,BT毒素还可以用于基因工程技术的研究和发展。
总之,苏云金杆菌(BT)毒素是一种对昆虫具有高度选择性和毒杀力的生物农药。
其应用广泛,可用于农业、医学、环境保护等多个领域。
随着技术的不断发展,BT毒素的应用将进一步扩展,为人类的生活和生产带来更多的益处。
苏云金芽孢杆菌前言化学杀虫剂的长期使用对生态环境产生了严重的破坏,而害虫种群的抗药性也日益提高,因此生物杀虫剂因为其“绿色环保”的特点日益引起人们的广泛关注。
其中以自1901年日本学者从家蚕体内分离到以来的被广泛应用到植物病虫害的生物防治的苏云金芽孢杆菌最为有名。
苏云金芽孢杆菌是目前世界上产量最大、应用最广的生物杀虫剂。
其形成的蛋白晶毒素能够对鳞翅目、膜翅目、双翅目、鞘翅目、食毛目、直翅目等9个目500多种害虫具有毒杀作用,同时还对线虫、瞒虫、原生动物等害虫有特异的杀虫活性。
并且科学家关于苏云金芽孢杆菌的科学研究已经有很长的历史,自二次世界大战后,苏云金芽孢杆菌被广泛使用,至今已有60多年。
1、苏云金芽孢杆菌杀虫剂历史研究以及其应用苏云金芽孢杆菌最初是日本人石渡繁胤于1901年首次从有病的家蚕虫体内分离,并且证明其对一些鳞翅目的昆虫具有杀虫活性。
1911年,德国人恩斯特·贝尔林纳从德国苏云金省的地中海粉螟虫体内又重新分离出一种高效杀虫的细菌,并正式定名为苏云金芽孢杆菌(Bacillusthutingiensis n.sp.)。
[5]至今为止,苏云金芽孢杆菌杀虫剂是世界上应用最成功的生物杀虫剂。
并且,科学家对于苏云金芽孢杆菌的研究已经有100a的历史。
自二次世界大战后,苏云金芽孢杆菌被广泛使用,至今已有60多年。
而且以苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白为活性的生物杀虫剂年销售额占全球生物杀虫剂的95%以上。
但是因为其推广力度以及人们的农药使用意识的传统观念,目前生物农药仅占全部农药市场5%~8%,从此可看出,苏云金芽孢杆菌杀虫剂任然有具有较大的发展潜力。
同时,苏云金芽孢杆菌被认为是对环境安全友好的生物杀虫剂,生产过程符合环境安全保护的要求,喷撒杀虫剂后在野--外残留少。
苏云金芽孢杆菌农药生产成本较低,主要原料为淀粉、蛋白胨和豆粕粉等。
生产和使用苏云金芽孢杆菌杀虫剂具有如下优点:(1)大罐液体发酵生产,生产工艺简单,设备投资少,生产成本低;(2)原材料来源广泛,均为农、副产品,价格比较便宜;(3)建厂周期短;(4)产品杀虫谱广,对鳞翅目的200多种害虫均有毒杀作用;(5)使用Bt杀虫剂对环境和水源无污染,对人畜无害。
苏云金杆菌能杀什么虫防治对象使用技术苏云金杆菌能杀什么虫?苏云金杆菌防治对象有哪些?苏云金杆菌科学使用技术是什么?据悉,苏云金杆菌杀虫剂是对人和环境友好的安全型细菌杀虫剂,占据了微生物农药95%以上的市场。
苏云金杆菌由于它的选择性强,对人畜、天敌、植物都非常安全。
那苏云金杆菌可以杀什么虫?可以防治哪些害虫?今天小编会为大家讲解一下!一、苏云金杆菌到底能杀什么虫苏云金杆菌对鳞翅目、双翅目、鞘翅目等100多种害虫和动植物线虫有很好的毒杀作用。
国内外应用统计,苏云金杆菌对64种森林害虫,34种果树害虫,12种茶树害虫都显示高毒力。
二、苏云金杆菌防治对象:菜青虫、小菜蛾、斜纹夜蛾、玉米螟、稻苞虫、稻纵卷叶螟、二化螟、三化螟、棉铃虫、棉小造桥虫、茶毛虫、茶尺蠖、松毛虫、天幕毛虫、毒蛾、刺蛾等鳞翅目、膜翅目、双翅目、鞘翅目等害虫有很好的防治效果,且有杀卵作用。
此外对大豆拌种防治地下线虫也有特效。
三、苏云金杆菌使用技术苏云金杆菌主要应用于喷雾,在玉米上也可用于心叶撒施。
1、喷雾。
从害虫发生初期或卵孵化盛期开始用药,喷洒应均匀、周到。
在蔬菜、豆类及甘薯上使用时,一般每667平方米使用2000单位/微升悬浮剂600~800毫升,或4000单位/微升悬浮剂300~400毫升;在苹果、梨、柑橘、林木、茶树等树木上使用时,一般使用2000单位/微升悬浮剂75~100倍液,或4000单位/微升悬浮剂150~200倍液喷雾。
2、撒施。
主要用于防治玉米螟,在喇叭口期用药。
一般每667平方米使用2000单位/毫克颗粒剂300~400克,或8000单位/毫克可湿性粉剂100~200克,或16000单位/毫克可湿性粉剂50~100克,拌细土均匀心叶撒施。
Open Journal of Nature Science 自然科学, 2018, 6(1), 63-70Published Online January 2018 in Hans. /journal/ojnshttps:///10.12677/ojns.2018.61010Safety Evaluation of Bacillus thuringiensis to Environmental OrganismsZeqing Wang1,2, Fanmin Huang1,3, Jianhua Chen1,31Guangdong Engineering Research Center of Microbe Pesticides, Yangjiang Guangdong2Guangzhou Harit Bioscience CO. LTD, Guangzhou Guangdong3Guangdong New Scene Biological Engineering CO. Ltd., Yangjiang GuangdongReceived: Jan. 1st, 2018; accepted: Jan. 12th, 2018; published: Jan. 19th, 2018AbstractThis study evaluates the safety of Bacillus thuringiensis GDX026 to environmental organisms based on degrees of toxicity and division standards. The results showed that the toxic degree of Bacillus thuringiensis8000 IU/μL SC to birds, bees, zebrafish, Daphnia, Trichogramma and silk-worm was Ib. The toxic degrees of Bacillus thuringiensis·Indoxacarb 5% SC to bees, silkworm and Daphnia magna was I b, to zebrafish and Trichogramma was II and low toxicity to birds. The toxic degrees of Emamectinbenzoate·Bacillus thuringiensis2.4% SC of silkworm and Daphnia magna was Ia, Ib to bees and zebrafish, II to Trichogramma and no risk to birds. Mixture of Bacillus thu-ringiesis GDX026 and chemical pesticides showed higher risk levels to environmental organisms compared with Bacillus thuringiesis GDX026.KeywordsBacillus thuringiensis, Environmental Organisms, Safety Evaluation苏云金杆菌对环境生物的安全性评价王泽清1,2,黄番敏1,3,陈建华1,31广东省微生物农药工程技术研究中心,广东阳江2广州禾立田生物科技有限公司,广东广州3广东新景象生物工程有限公司,广东阳江收稿日期:2018年1月1日;录用日期:2018年1月12日;发布日期:2018年1月19日王泽清 等摘 要本研究通过室内生物活性测定,评价了苏云金杆菌GDX026制剂对环境生物的安全性。
结果表明,8000 IU/微升苏云金杆菌悬浮剂对鸟、蜜蜂、斑马鱼、大型溞、赤眼蜂、家蚕低毒;5%苏云金杆菌·茚虫威悬浮剂对蜜蜂、家蚕、大型溞、赤眼蜂高毒,对斑马鱼中毒,对鸟低毒;2.4%甲维·苏云金杆菌悬浮剂对家蚕、大型溞剧毒,对蜜蜂、斑马鱼高毒,对赤眼蜂中毒,对鸟不存在高风险性。
苏云金杆菌GDX026与化学农药复配后,对环境生物的风险性增加。
关键词苏云金杆菌,环境生物,安全性评价Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). /licenses/by/4.0/1. 引言苏云金杆菌 Bacillus thuringiensis (简称Bt)是一种重要的病原细菌,其在发酵过程中可产生具有杀虫活性的毒素蛋白[1],对双翅目、鳞翅目、鞘翅目、膜翅目、同翅目、直翅目昆虫,螨类、线虫均显示出杀虫活性[2],在全球农林病虫害防治中发挥重要作用。
由于苏云金杆菌杀虫速度较慢,杀虫范围比较窄[3] [4]。
近年来,国内农药研究者对苏云金杆菌复配作了较多研究,发现与杀虫剂的合理混用,不仅能有效地延缓害虫抗药性的发展进程,同时还能提高药效[5] [6],但对复配药剂对环境生物安全性的关注不多。
本研究利用苏云金杆菌GDX026,研究其复配制剂对环境生物安全性影响,引起人们对环境生物的关注,指导其科学用药。
2. 材料与方法2.1. 试验材料供试生物:日本鹌鹑(Coturnixcoturnix japonica ),由佛山市南海区大沥沥丰市场鸡档10号提供,雌雄各半,在实验室中驯养7天。
选用35 d 鸟龄的试验鸟;试验周期为7 d ;在温度为25℃~28℃(>14 d 鸟龄),相对湿度为50%~75%,14 h~16 h 光照的试验条件下进行。
意大利工蜂(Apis mellifera L.)由佛山市三水区西南街野山花蜂蜜店提供,试验前在人工气候室内饲养观察24 h ,饲养条件为:温度25℃ ± 1℃;相对湿度60%~70%;微光。
试验时选用大小一致、健康、活泼的工蜂,试验前饥饿2 h 。
家蚕(Bombyx mori L),选用品种为7湘 × 9芙,由广东省蚕业技术推广中心提供,在温度:25℃ ± 2℃,湿度:70%~85%微光条件下,选择孵化出的1龄蚁蚕开始驯养,至2龄眠起开始试验。
斑马鱼(Brachydanio rerio ),由广州杨氏水族馆提供,体长为24.30 mm/尾~27.63 mm/尾,体重为0.241 g/尾~0.303 g/尾。
购回后驯养7 d ,水温22℃~23℃;每天喂食2次刚孵化的丰年虫幼体,试验前24 h 停止喂食。
赤眼蜂(Trichogramma ostriniae ),从衡水田益生防有限责任公司引进蜂种,待羽化出蜂后以米蛾王泽清等(Corcyra cephalonica)卵为寄主扩大繁殖。
采用继代饲育的新羽化的成虫进行试验。
温度25℃± 1℃,相对湿度70%~80%,光周期L/D = 14 h/10 h。
羽化后48 h内的成蜂用于急性毒性试验。
大型溞(Daphnia magna)由中国疾病预防控制中心提供,实验室自行保种繁育,每日喂食1次绿藻。
水温20℃± 1℃;光照强度1151-1201lx溶解氧:7.0~8.0 mg·L−1。
试验用溞为同一母体孤雌繁殖3代以上,出生时间为6~4 h健康的幼溞。
供试药剂:8000 IU/微升苏云金杆菌(GDX026)悬浮剂(广东省微生物农药工程技术研究中心),5%苏云金杆菌·茚虫威悬浮剂(3%茚虫威+ 2%苏云金杆菌GDX026,广东省微生物农药工程技术研究中心) 2.4%甲维·苏云金杆菌悬浮剂(2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐+ 0.4%苏云金杆菌GDX026,广东省微生物农药工程技术研究中心)。
仪器:人工气候室、人工气候箱(PYX-300Q-B)、电子天平(精确至0.0001 g)、水质参数测定仪(HACH HQ40d)、pH计(MP511)、试验蜂笼(自制)。
2.2. 试验方法2.2.1. 鸟类毒性实验本次试验选用35 d鸟龄的试验鸟;试验周期为7 d;在温度为25℃~28℃,相对湿度为50%~75%,14 h~16 h光照的试验条件下进行。
试验用鸟以经口灌注法一次性给予供试药液1 mL/100 g体重。
各处理浓度和空白对照均设立1个平行实验,每个平行10只试验鸟,雌雄各半。
试验期间,于试验开始后每天观察试验鸟的饮食、外观、行为、排泄物以及试验鸟死亡情况等,并及时取出死鸟。
2.2.2. 蜜蜂经口毒性试验试验在人工气候室内进行,温试验温度为25℃± 2℃,相对湿度为50%~70%,黑暗。
用50%的蔗糖水溶解供试药剂,得到系列处理浓度染毒蔗糖水溶液。
试验设计1个空白对照组和7个受试物试验组,每组设置3个平行,每个平行10只蜜蜂。
将蜜蜂麻醉后分装于试验蜂笼中,每笼10只蜜蜂。
先测定饲喂器重量m0,在饲喂器中加入100 μL不同浓度受试物试验溶液,测定总重量m1,然后把饲喂器置于蜂笼中。
试验进行至4 h时受试物试验组受试物试验溶液已完全消耗,取出饲喂器,称量其重量m2,换上不含受试物的蔗糖溶液进行饲喂。
计算药液的消耗量m3 (m3 = m1 − m2)。
空白对照组在饲喂器中加入100 μL 50%蔗糖溶液进行试验。
试验期间,于试验开始后48 h观察并记录蜜蜂的异常行为、病理症状和死亡情况。
2.2.3. 蜜蜂接触毒性试验试验在人工气候室内进行,温试验温度为25℃± 2℃,相对湿度为50%~70%,黑暗。
供试药剂用2%吐温溶液溶解,得到系列处理浓度染毒吐温水溶液。
试验设计1个空白对照组、1个溶剂对照组和1个受试物试验组,每组设置3个平行,每个平行10只蜜蜂。
用氮气把蜜蜂麻醉后,用微量移液器对准蜜蜂中胸背板处,点滴受试物试验溶液2.0 μL,待蜂身晾干后转入试验笼中。
其中空白对照组不进行点滴,溶剂对照组点滴2.0 μL 2‰吐温溶液。
试验周期48 h,于试验开始后48 h观察并记录蜜蜂的异常行为、病理症状和死亡情况。
2.2.4. 斑马鱼毒性试验试验用水为过滤曝气的自来水,总硬度为118.40 mg/L(以CaCO3计),pH变化范围为7.70~7.95;温度变化范围为22.0℃~23.3℃;溶解氧含量的变化范围为64%~83%。
用试验用水溶解供试药剂,得到系列处理浓度染毒溶液。
试验设计1个空白对照组和1个受试物试验组,每组设置3个平行,每个平行10尾试验鱼;以半静态方式(分别在试验24 h、48 h和72 h更换一次试验溶液)进行试验。