2019届高考生物专项复习微生物的培养与应用土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验__土壤中分解尿素的细菌的

专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，指示剂将( )A．变蓝色B．变红色C．变黑色D．变棕色解析：细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，加入酚红指示剂将变红。

答案：B 2．测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是( )A．细菌个体小，真菌个体大B．细菌易稀释，真菌不易稀释C．细菌在土壤中数量比真菌多D．随机的，没有原因解析：土壤中的微生物大约70%～90%是细菌，真菌的数量要比细菌少。

样品的稀释度越高，在平板上生成的菌落数目就越少。

在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。

答案：C 3．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。

原因是( )A．平板上的一个菌落就是一个细菌B．菌落中的细菌数是固定的C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同解析：用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个细菌，所以此方法统计的菌落数可能与活菌的实际数不相同。

答案：C4．土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种( )A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶D．肽酶解析：能够分解利用尿素的细菌，其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后进一步利用。

答案：B5．回答有关微生物的培养与应用问题：(1)微生物的培养需要使用培养基，不同培养基的配方不同，但一般都含有________、碳源、氮源；在配制从土壤中筛选纤维素分解菌的培养基时，需加入____ ____作为唯一的碳源，该培养基属于________培养基；若将样品接种到鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是________，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生________来筛选纤维素分解菌。

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1。

测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。

2．稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目,但统计结果往往比活菌数目低。

3．为确保结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板上进行计数。

4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作唯一氮源的选择培养基分离该细筛选菌株的思路及计数1．筛选菌株的思路（1)自然界中目的菌株的筛选：①依据：根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。

②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq 细菌中提取出来的。

(2)实验室中目的菌株的筛选：①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等）,同时抑制或阻止其他微生物的生长.②方法：利用选择培养基分离。

a．选择培养基：允许特定微生物生长，同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基.b．实例：选择分解尿素的细菌的培养基，以尿素作为唯一氮源,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。

2．统计菌落数目(1)常用方法:稀释涂布平板法.①原理错误!②计数原则：一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

③结果分析：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

(2）其他方法：利用显微镜直接计数.1．阅读教材P22第一段旁栏中的相关内容，并思考回答下列问题。

(1）从物理性质上划分，此培养基属于哪类培养基？从功能上划分呢？提示：固体培养基，因为加入了凝固剂琼脂.从功能上看属于选择培养基。

（2）在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质?提示:碳源主要是葡萄糖，氮源是尿素。

（3）该培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，是如何进行选择的?提示：该培养基对微生物有选择作用。

该培养基以尿素为唯一氮源，只允许能以尿素作为氮源的微生物生长。

2．阅读教材P22中部楷体字部分，思考：哪位同学的结果更接近真实值？他们的实验需要改进吗?如果需要，如何改进？提示:第一位同学只涂布了1个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。

专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数庖丁巧解牛知识•巧学一、筛选菌株1.PCR技术是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，PCR技术的原理是：如果DNA片段两端的序列是已知的，那么采用PCR就可以很容易地将此DNA片段从整个DNA分子中扩增出来。

进行PCR需要一段寡聚核苷酸链作为引物，它们各自与要扩增的靶DNA片段末端互补，引物与模板DNA相结合并沿模板DNA延伸，以扩增靶DNA序列。

PCR技术需要使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能够忍受93 ℃左右的高温。

深化升华 PCR的过程由三个基本反应组成：（热）变性、复性、延伸，这样构成一个循环的复制，新合成的DNA链又可以作为模板进行下一轮复制，重复3步操作。

DNA片段呈2的指数增长，在1～2小时内可完成25～30次的循环，扩增的DNA片段数可增至106～107倍。

2.选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

二、统计菌落数目1.直接计数法这种方法是指利用特定的细菌计数板或者血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积样品中微生物的数量。

计数板是一块特制的载玻片，上面有一个面积为1 mm2和高0.1 mm的计数室，该计数室又均分成400个小格。

测量时将稀释的样品滴加在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下数出每个小格所含的细菌的平均数，再按下面的公式求出每毫升样品所含的细菌数。

每毫升原液所含的细菌数＝每小格平均细菌数×400×1 000×稀释倍数要点提示此方法的缺点是分不清活菌和死菌。

2.间接计数法稀释涂布平板法，常用来统计样品中的活菌数，此法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个细菌繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落就代表一个细菌。

计数时先将待测样品进行一系列的稀释，再取一定量的稀释菌液接种在固体培养基上，使其较均匀地分布，经过一段时间的培养后，统计菌落数目，即可求出原液中的细菌数。

角顿市安康阳光实验学校课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、选择题1．关于土壤取样的叙述错误的是( C )A．土壤取样，应选取肥沃湿润的土壤B．先铲去表层土3 cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤[解析] 取样用的小铁铲和信封在使用前需要进行灭菌处理，C错误。

2．在分解尿素菌的分离和鉴定中，对先后用到的两种培养基，叙述正确的是( B )A．加入酚红指示剂作为选择培养基，再加入唯一碳源作为鉴别培养基B．加入唯一氮源作为选择培养基，再加入酚红指示剂作为鉴别培养基C．加入唯一氮源作为鉴别培养基，再加入酚红指示剂作为选择培养基D．加入唯一碳源作为选择培养基，再加入酚酞指示剂作为鉴别培养基[解析] 在分解尿素菌的分离和鉴定中，应该先加入尿素作为分解尿素菌的唯一氮源，分解尿素菌合成的脲酶，能分解尿素，产生氨，氨呈碱性；然后加入酚红指示剂培养细菌，指示剂将变为红色。

3．需要在火焰旁操作的有( D )①土壤取样②称取土壤③稀释土壤④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④[解析] 土壤中尿素分解菌的分离和计数中除土壤取样外，其余均需要无菌操作。

4．分离土壤中分解尿素菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是( C )A．制备浸出液的土壤取自土壤的表层B．涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌C．牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源D．接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒[解析] 制备浸出液的土壤取自土壤的表层与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，A错误；涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌可能会造成污染，与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，B错误；该培养基必须以尿素为唯一的氮源，不能使用牛肉膏蛋白胨培养基或在其中添加尿素作为氮源，该操作对实验影响最大，C正确；接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒，可能会造成污染，但与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，D错误。

高中生物专题2微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数练习（含解析）新人教版选修1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数[基础全练]1．土壤中的尿素分解菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成( )A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶D．肽酶解析：土壤中的尿素分解菌体内能够产生脲酶，脲酶能够使土壤中的尿素分解为氨。

答案：B2．用以尿素为唯一氮源加入酚红指示剂的培养基，培养细菌后，指示剂将( )A．变蓝色B．变红色C．变黑色D．变棕色解析：细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，会使培养基的碱性增强，pH升高，加入酚红指示剂将变红。

答案：B3．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是( )A．筛选出能分解尿素的细菌B．对分离的菌种做进一步鉴定C．作细菌的营养成分D．如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素解析：筛选出能分解尿素的细菌用选择培养基即可，不需要加指示剂。

加入指示剂的培养基，目的是对分离的菌种做进一步的鉴定。

答案：B4．用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是( )A．未接种的选择培养基B．未接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基C．接种了的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基D．接种了的选择培养基解析：将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此可用接种了的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。

本实验的变量是培养基种类，其他方面如接种、培养条件等应相同。

答案：C5．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是( )A．采用稀释涂布平板法统计的菌落数目往往少于实际的活菌数B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D．显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法解析：采用稀释涂布平板法获得的菌落有些可能是由两个或多个细菌形成的，所以统计的菌落数目往往少于实际的活菌数，A正确；当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落，B正确；为了保证结果准确，一般选取菌落数在30～300的平板进行计数，C错误；除平板计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法，D正确。

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，指示剂将( ) A．变蓝色B．变红色C．变黑色D．变棕色解析：细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，加入酚红指示剂将变红。

答案：B2．测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是( )A．细菌个体小，真菌个体大B．细菌易稀释，真菌不易稀释C．细菌在土壤中数量比真菌多D．随机的，没有原因解析：土壤中的微生物大约70%～90%是细菌，真菌的数量要比细菌少。

样品的稀释度越高，在平板上生成的菌落数目就越少。

在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。

答案：C3．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。

原因是( )A．平板上的一个菌落就是一个细菌B．菌落中的细菌数是固定的C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同解析：用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个细菌，所以此方法统计的菌落数可能与活菌的实际数不相同。

答案：C4．土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种( )A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶D．肽酶解析：能够分解利用尿素的细菌，其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后进一步利用。

答案：B5．(2016·四川卷)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。

(1)图中选择培养基应以____________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加____________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成____________色。

解密23 微生物的培养与利用A组考点专练考向一培养基及微生物的纯化培养技术1．（2019·福建厦门市·厦门外国语学校高二月考）如表是微生物培养基的成分。

下列有关说法错误．．的是（）A．此培养基可用来培养自养型微生物B．此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源C．若除去①，此培养基可培养圆褐固氮菌D．培养基中若加入氨基酸，则它可充当碳源、氮源2．（2019·河北冀州中学（衡水市冀州区第一中学）高二月考）四环素、链霉素、红霉素等抗生素能抑制细菌的生长，它们有的能阻碍细菌细胞壁的形成，导致细菌在低渗环境下膨胀破裂死亡；有的能干扰细菌核糖体的形成；有的能阻止tRNA和mRNA的结合。

请根据以上事实判断下列说法正确是A．干扰细菌细胞壁形成过程是通过影响高尔基体的作用实现的B．阻止tRNA和mRNA的结合会影响细菌蛋白质的合成，抑制细菌的生长C．细菌培养中为保证细菌的渗透压稳定应在培养液中加入HCO3-等无机盐D．干扰细菌核糖体的形成可以阻止遗传信息的转录3．（2020·大通回族土族自治县第一完全中学高二期中）如表为某培养基的配方，下列有关叙述正确的是A．此培养基是天然鉴别培养基B．能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的基因C．此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中D．此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用水标准4．（2019·静宁县第一中学高二期末）用稀释涂布平板法来统计样品中尿素分解菌的数目时，为了提高实验结果的可信度，往往要设置对照，对于对照组的要求不包括A．对照组培养基也严格灭菌B．对照组和实验组放在相同的条件下培养C．所用培养基成分及pH值大小完全与实验组一致D．培养基的量的大小，与实验组必须绝对相同5．（2020·上海市泾南中学高二期中）下表是培养某种细菌的培养基。

以下叙述错误．．的是（）A．该培养基属于选择培养基B．表中为该细菌提供碳源的只有乳糖C．表中为该细菌提供氮源的只有蛋白胨D．该培养基可以用来鉴定该细菌是否是大肠杆菌考向二微生物的计数方法6．（2020·贵州省思南中学高二期中）下列关于微生物的培养和分离的叙述，正确的是（）A．倒平板操作时，培养基倒好后应立即将其倒过来放置B．菌落的形状、大小、颜色等不能作为鉴别不同微生物的依据C．分离分解尿素的细菌时，应从周围出现透明圈的菌落中挑取菌株D．分离纤维素分解菌时，可在倒平板时加入刚果红染色，然后接种分解菌7．（2020·北京密云区·高三一模）自然界中所有的微生物（）A．都是原核生物B．都必须在显微镜下才能看到C．都可快速繁殖D．在生态系统中都属于分解者8．（2019·山西祁县中学高二月考）下列有关培养基和菌种鉴定的叙述正确的是（）A．制作固体培养基必须加入的物质是琼脂B．可利用液体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型C．菌落的表面光滑与否、有无荚膜是R型和S型菌种鉴定的依据D．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌9．（2020·山西省平遥中学校高二月考）关于微生物的叙述，完全正确的是（）①古细菌的细胞壁与大肠杆菌的细胞壁成分不同②青霉素不能杀灭肝炎病毒③酵母菌通过芽孢进行繁殖④自生固氮菌为自养微生物A．①②B．③④C．①②④D．②③④10．（2014·上海黄浦区·）下列关于微生物的有关叙述正确的是（）A．荚膜是细菌的休眠体，能抗不良环境B．酵母菌通过芽孢体进行繁殖C．黏菌与乳酸菌都属于真核生物D．古细菌通常对利福平不敏感考向三微生物的筛选与鉴别11．（2020·辽宁沈阳市·高二期末）以下有关生物技术实践的叙述中，正确的是A．用稀释涂布平板法测定某土壤浸出液中活菌数目时，测定值可能比实际值大B．以尿素为唯一氮源并加入酚红指示剂的培养基可分离并鉴定土壤中分解尿素的细菌C．制作牛肉膏蛋白胨固体培养基时操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、调pHD．制备果酒过程中，每隔一段时间拧松瓶盖，目的是向瓶中通气保证发酵顺利12．（2020·禄劝彝族苗族自治县第一中学高二期中）关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验的叙述正确的是A．培养基应以尿素为唯一氮源，该细菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B．选择菌落数在30～300间的所有平板进行计数，以平均数为实验结果C．对10mL土样稀释106倍后，取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验，测得的菌落数分别为18、234、276，则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为2.55×108个D．应该设置对照以排除非测试因素对实验结果的干扰，提高可信度13．（2019·全国高三专题练习）下列关于刚果红染色法的说法中，正确的是A．先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，不需用氯化钠溶液洗去浮色B．倒平板时就加入刚果红，可在培养皿中先加入lmlCR溶液后加入100ml培养基C．培养基中出现透明圈的原因是因为纤维素被分解为葡萄糖导致的D．倒平板时就加入刚果红，长期培养刚果红有可能被其他微生物分解形成透明圈14．（2020·甘肃武威市·武威十八中高三月考）测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是A．细菌个体小，真菌个体大B．细菌易稀释，真菌不易稀释C．细菌在土壤中数量比真菌多D．随机的，没有原因15．（2020·邢台市第二中学高二期末）下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，不正确的是A．用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂不变红B．分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氨和二氧化碳C．统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在30—300的平板进行计数D．将实验组和对照组平板倒置，30— 35℃恒温培养24〜48小时考向四微生物的利用16．（2020·山西省平遥中学校高二月考）关于生物技术实践中的有关检验，不正确的是A．在果酒制作实验中，检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸和重铬酸钾的混合液B．在微生物培养中，检验培养基是否被污染的方法是用一组不接种或接种无菌水的培养基与接种培养物的培养基一起培养C．检验以尿素为唯一氮源的培养基是否分离出了分解尿素的细菌，方法是在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，则可初步鉴定该细菌能分解尿素D．鉴定胡萝卜素粗品的可用纸层析法，原理是不同的色素分子在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散速度不同；若样品中有杂质，则会出现不同的色素点17．（2019·四川南充市·阆中中学高二期中）某生物兴趣小组以带有落叶的表层土壤(深5cm左右)为实验材料，研究土壤微生物在适宜温度下的分解作用，对土壤处理情况见下表，与此有关的叙述不正确的是A．探究的问题可以是不同土壤湿度条件下，土壤微生物对落叶的分解作用B．预期结果是1、3 组的落叶不被分解，2、4 组中的落叶被不同程度的分解C．为了控制实验中的无关变量，作为实验材料的落叶也应进行灭菌处理D．该实验的自变量为土壤是否灭菌处理18．（2019·河北冀州中学（衡水市冀州区第一中学）高二月考）下列有关现代生物技术的叙述中，不正确的是A．运用固定化酶和固定化细胞进行生产时，都需要为其提供营养物质B．果酒和果醋制作中利用的微生物，结构上主要差别在于有无核膜C．采用稀释涂布平板法和平板划线法都能分离纯化菌种，得到单细胞菌落D．探究加酶洗衣粉的最适温度时，洗衣粉量、污渍的种类属于无关变量19．（2020·长春市第一中学高二期中）取9个洁净培养皿，均分为三组（℃、℃、℃），各组分别加入等量的不同培养基，每个平板均接种0.1mL大肠杆菌菌液，37℃培养36小时后，统计菌落数（见表），以下相关叙述错误的是（）A．℃组和℃组说明维生素可以促进大肠杆菌生长繁殖B．℃组和℃组说明大肠杆菌正常生长需要葡萄糖C．三组实验均采用了稀释涂布平板法，以便菌落计数D．三组实验所使用的培养基均需62℃、30min灭菌20．（2020·辽宁沈阳市·沈阳铁路实验中学高二期中）幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

2．统计菌落数目(1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M。

C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。

V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。

M：代表稀释倍数。

③统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。

(2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。

3．设置对照(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。

(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

二、实验设计1．土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。

先铲去表层土，在距地表约3～8 cm 的土壤层取样。

2．样品的稀释(1)稀释原因：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目。

(2)稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在 30～300之间，便于计数。

3．微生物的培养与观察(1)培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。

(2)观察：每隔 24_h统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

三、操作提示1．无菌操作(1)取土样的用具在使用前都需要灭菌。

(2)应在酒精灯火焰旁称取土壤，并在酒精灯火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。

(3)在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在酒精灯火焰旁操作。