土壤中微生物的分离

如何从土壤（污水）中分离出微生物把污水加蒸馏水分别稀释10，100，1000倍，然后加入培养基中培养，如果培养出来菌落重合，菌非常多，无法分离，就加大稀释倍数，直至获得清晰可分离的菌落，有时甚至是非常小的菌落，要用倒置显微镜操作。

而培养基则根据要分离的菌的营养类型进行配置，若要获得多种微生物就要配置多种培养基进行如上操作。

对于土壤加水溶解，对溶解液进行如上操作，不溶的部分就不用管了1.取以少许土壤（一地表以下10cm处为宜）与适量无菌水混匀备用2.做浸出液的梯度稀释3 .涂平板4.划线分离5.接平板，接斜面6.检测从土壤中分离微生物环境工程（1）班一、试验目的1..学会土壤微生物的检测方法，了解土壤中微生物的数量和组成。

2初步掌握从土壤中分离细菌的基本技术。

二、实验原理土壤是微生物生活最适宜的环境、它具有微生物所需要为一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条件．所以土壤中微生物的数量和种类都很多。

它们参与土壤的氮、碳、硫、磷等元素的循环作用。

此外，土壤中微生物的活动对土壤形成、土壤肥力和作物生产都有非常重要的作用。

因此，查明土壤中微生物的数量和组成情况，对发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实行定向控制无疑是十分必要的。

三、实验器材(—)培养基肉膏蛋白胨琼脂培养基（培养细菌）高氏一号琼脂培养基（培养放线菌）查氏培养基（培养霉菌）(二)灭菌稀释水、灭菌吸管、灭菌培养皿。

(三)土壤样品、天平、称旦纸。

（四）恒温箱、气体流量计四、试验程序1、倒平板将培养基加热融化，待冷至55—60℃时，混合均匀后倒平板；2、制备土壤稀释液准确称取土样10g，加入装有90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，振荡约20min，使土样与水充分混匀，将细胞分散。

用一支无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、等一系列稀释菌液3、涂布将无菌平板编上10-4、10-5、10-6号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-6稀释液各1ml放入编号10-6的3个平板中，同法吸取10-5稀释液各lml放入编号10-5的3个平板中，再吸取10-4稀释液各lml放入编号10-4的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。

分离土壤中微生物的方法
《分离土壤中微生物的方法》
一、离心分离法
1、离心分离法是一种快速、简便、有效的土壤微生物分离方法，主要用来分离大量的土壤和沉淀物中的微生物。

原理是利用离心力将土壤中的微生物悬浮液中的水分剥离出来，浓缩悬浮液，然后采用制备的高标准分析液（如硫酸铵）搅拌悬浮液，将微生物转移到新的液体中，最终将微生物和悬浮液分离。

2、离心分离的步骤包括：
（1）采集土壤样品
（2）将土壤样品放入备有清水的容器中，并予以搅拌，搅拌时间1-2min。

（3）将搅拌后的样品置于离心机中，用适当速度及时间进行离心分离，离心结束即可得到悬浮液。

（4）将离心后的悬浮液加入制备好的高标准分析液中，并搅拌。

（5）将混合液再次置入离心机中，离心一段时间，即可将高标准分析液和悬浮液分离开来，从而完成土壤中微生物的分离。

二、膜过滤法
1、膜过滤法是一种分离土壤中微生物的有效方法。

原理是将土壤中的微生物悬浮液置于膜滤器上，通过该膜滤器，微生物悬浮液中的水分可以通过滤膜留下，膜滤器上的微生物则由于大小不同而滞留在膜滤器上，最终完成分离。

2、膜过滤分离的步骤包括：
（1）采集土壤样品
（2）将样品放入备有清水的容器中，并搅拌于汤匙，搅拌时间1-2分钟；
（3）将搅拌后的悬浮液置于膜滤器上，以适当的速度滤过，最终完成分离。

（4）完成后，将膜滤器上的微生物收集用来进行后续操作。

王--实验二土壤中微生物的分离与纯化
土壤中是存在大量微生物的，包括细菌、真菌、放线菌等，在生态系统中起着重要作用。

微生物的分离与纯化是微生物学研究的重要方法之一，对于了解土壤微生物多样性、功能和应用具有重要意义。

本实验旨在通过土壤样品进行微生物分离和纯化，了解微生物分离技术和分离纯化菌株的方法。

一、实验方法
1.1 实验设备
实验室常用的分离纯化设备有平板计数器、减压灭菌器、烧杯、移液器、离心机等。

其中，平板计数器是精确测定细菌数量的仪器。

实验材料包括培养基、细菌液、土壤样品等。

1.3 分离纯化细菌的步骤
（1）将土壤样品放入离心管内。

（2）在土壤样品中加入生理盐水，摇晃离心管，使土壤样品和生理盐水充分混合。

（3）将混合物在烧杯内振荡。

（4）利用平板计数器精确测定细菌数量。

（5）从混合物中挑出单个菌落，进行菌株分离和纯化。

（6）将菌落移至培养基上，进行培养、观察和记录。

二、实验结果
通过本实验，我们共采集了5个不同土壤样品，进行菌落计数和菌株分离、纯化、培养等处理。

实验结果显示，不同土壤样品中微生物的数量和种类存在差异。

其中，含有腐殖质较多的土壤样品中微生物数量较多，且种类丰富。

2.2 结果分析
土壤微生物数量和种类的差异主要与土壤样品的营养含量及物理化学性质有关。

白灰土、黄土、红壤等含有较高营养含量和较优地理环境的土壤样品中微生物的数量和种类较多，而贫瘠荒芜的土壤样品中微生物数量和种类较少。

此外，氧分压、pH值、盐分等土壤环境因素的差异也会导致土壤中的微生物数量和种类存在差异。

分离土壤中微生物的方法土壤中的微生物是土壤生态系统中非常重要的组成部分，对土壤的物质循环、生态功能以及农田生产等都有着重要的影响。

因此，分离土壤中的微生物并进行研究是了解土壤微生物群落结构和功能的重要手段。

下面将介绍一些常用的分离土壤中微生物的方法。

1.稀释涂平法：稀释涂平法是最为常用的一种分离培养微生物的方法。

首先，将土壤样品稀释成一定的浓度；然后，将适量的稀释液均匀地涂布在培养基平板上；最后，将培养基平板的菌落进行分离鉴定。

优点是简单易行，适用于常见的土壤微生物；缺点是只适用于可培养的微生物。

2.筛选技术：筛选技术通过筛选和培养特定类型的微生物，实现对土壤微生物的分离。

常用的筛选技术有选择性培养基筛选、酶基因筛选、菌落形态和色素筛选等。

优点是可以选择性培养其中一类型的微生物；缺点是存在选择性偏倚和培养基有限性。

3.海绵法：海绵法通过悬浮土壤样品，利用海绵吸附和负压吸附的原理，分离土壤中的微生物。

首先，将土壤样品加入海绵中；然后，通过一定的操作将海绵中的微生物分离出来；最后，对分离出的微生物进行鉴定。

优点是可以分离植物根际微生物和陆地微生物；缺点是操作复杂。

4.聚合物链式反应（PCR）和16SrRNA基因测序：PCR和16SrRNA基因测序是一种通过分子生物学手段分离和鉴定微生物的方法。

首先，从土壤中提取微生物的DNA；然后，利用PCR方法扩增16SrRNA基因片段；最后，对扩增产物进行测序并分析。

优点是可以快速分离和鉴定微生物，无需进行培养；缺点是依赖于标准数据库的准确性。

5.激光共聚焦显微镜技术：激光共聚焦显微镜技术可以直接观察土壤中的微生物，并通过分析其形态特征对微生物进行分类和分离。

优点是可以快速直观地观察微生物；缺点是无法进行鉴定和培养。

综上所述，分离土壤中微生物的方法有许多种，分别适用于不同的研究目的和需求。

可以根据具体情况选择适合的方法。

同时，需要注意的是，单一的方法可能无法完全反映土壤微生物多样性，因此最好结合多种方法进行研究，以全面了解土壤中微生物的群落结构和功能。

实验三土壤中微生物的稀释分离、纯化及无菌操作技术一、教学目标与基本要求：1、掌握倒平板的技术和分离纯化微生物的基本操作技术。

2、设计实验方案，分离目的菌，并通过后续实验做出初步鉴定。

二、实验内容：1．用稀释法从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌。

2．用平板划线法分离纯化微生物。

3．学习斜宜接种、穿刺接种、平板接种、液体接种等接种方法。

三、实验步骤（一）微生物分离的方法有很多种，但常用的有两种：1.平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，二获得单个菌落，从而达到分离的目的，具体方法如下： 1)倒制平板：将固体培养基熔化，冷却至50-55℃，然后在酒精灯火焰旁，以右手持培养基，左手拿培养皿，以无菌操作将培养基注入培养皿内，约15ml，轻微转动培养基，使培养基均匀分布，然后静置于水平位置，凝固即成平板，并在皿该边贴上标签。

2.稀释平板分离法稀释手段，使样品分散到最低限度，然后吸取一定量注入平皿内，倒入培养基，摇匀静置凝固后培养，这样被分离的细菌被固定在原处而形成菌落，可作为一种记数方法。

1)制备土壤稀释液：（细菌的分离）以无菌操作，称取样品1g，加入装有99ml无菌水的锥形瓶中，振荡10-20分钟，使土样与水充分混合，即成10-2土壤稀释液，然后用无菌移液管吸取9ml无菌水的试管内，制成10-3的稀释液将此移液管在试管内反复吸冲三次，然后取出移液管，并将其通过火焰，再插入原来包移液管的纸套内，以备再用，振荡10-3 的稀释液试管，再从纸套取出原来的移液管插入已混匀的试管内，再吹洗三次，然后吸出1ml10-3的稀释液至另一支装有9ml 无菌水的试管中，制成10-4稀释液。

用同样方法再制成10-5、10-6的稀释液，稀释完毕后，可用原来的移液管，从菌液浓度最小的 10-6的稀释液开始吸取1ml10-6稀释液，加到相应编号10-6的无菌培养皿内，以相同方法分别吸取1ml10-5、10-4的稀释液加到相应编号为10-5、10-4的无菌培养皿内，整个分离过程见下图。