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在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物(culture)，而只有一种微生物的培养物称为纯培养物(pure culture)。
由于在通常情况下纯培养物能较好地被研究、利用和重复结果，因此把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是进行微生物学研究的基础。
一、无菌技术微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且无处不在。
因此，在微生物的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。
在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术(aseptic technique)，它是保证微生物学研究正常进行的关键。
1、微生物培养的常用器具及其灭菌试管、玻璃烧瓶、平皿(culture dish，petri dish)等是最为常用的培养微生物的器具，在使用前必须先行灭菌，使容器中不合任何生物。
培养微生物的营养物质[称为培养基(culture medium)]可以加到器皿中后一起灭菌，也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。
最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。
有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。
为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。
而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。
2、接种操作用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养容器进行培养，是微生物学研究中最常用的基本操作。
由于打开器皿就可能引起器皿内部被环境中的其他微生物污染，因此微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行，其要点是在火焰附近进行熟练的无菌操作，或在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行操作。
微生物分离鉴定步骤
微生物的分离和鉴定是微生物学研究中非常重要的步骤，它可
以帮助我们了解微生物的种类和特性。
通常，微生物的分离和鉴定
包括以下步骤：
1. 样品收集，首先需要收集来自环境、生物体表面或其他来源
的微生物样品。
这可能涉及到采集土壤、水样、食品、空气或生物
体组织等样品。
2. 稀释和接种，将样品进行适当的稀释，然后在培养基上进行
接种。
这有助于分离出单一的微生物菌落，以便进行后续的鉴定。
3. 培养，接种后，将培养皿放入恒温培养箱中进行培养。
不同
类型的微生物可能需要不同类型的培养条件，如温度、氧气含量等。
4. 分离，在培养一段时间后，可以观察到菌落的形成。
选择单
一的菌落，进行分离培养，以获得纯培养物。
5. 形态学特征观察，观察微生物的形态学特征，包括细胞形态、大小、颜色等，可以初步了解微生物的特征。
6. 生理生化特性测试，进行一系列生理生化特性测试，如对不同营养物质的利用、酶活性、氧气需求等，以进一步了解微生物的特性。
7. 分子生物学鉴定，利用分子生物学方法，如16S rRNA序列分析，可以对微生物进行更精确的鉴定，包括确定其属种和种的分类位置。
以上是常规的微生物分离和鉴定步骤，通过这些步骤可以全面地了解微生物的特征和分类位置。
值得注意的是，不同的微生物可能需要不同的鉴定方法，有时可能需要结合多种手段进行鉴定，以确保鉴定结果的准确性。
2020届微生物学期末考试经典题目题库整理问答题1、如何从土壤中分离得到一个微生物的纯培养体?答：首先要根据分离对象选择适宜的培养基。
若要分离真菌应选用马丁-孟加拉红选择培养基；若要分离细菌应选用牛肉膏蛋白胨培养基；若要分离放线菌应选用高氏培养基。
土样采回来后，用常规的十倍稀释分离法进行稀释分离，若分离细菌，一般稀至10-8, 若分离放线菌,一般稀至10-6；若分离真菌，一般稀至10-4。
取最后三个稀释度倒平板获得单个菌落。
将平板上出现的单菌落转接斜面培养，同时镜检菌体的纯度，若不纯，应将培养的单菌落斜面再次进行稀释分离。
倒平板获得单菌落，转接斜面培养，同时镜检菌体的纯度。
反复几次直到得到菌体单一的单菌落方可认为是某一微生物的纯培养体.2、革兰氏染色反应的成败关键是什么?为什么革兰氏染色有十分重要的理论与实践意义?答案：因通过革兰氏染色，可把几乎所有的细菌都分成G＋和G－菌两大类细菌，在细胞结构、成分、形态、生理、生化、遗传、免疫、生态和药物敏感性等方面都呈现出明显的差异。
因此，任何细菌只要通过革兰氏染色，即可提供不少重要的生物学特性方面的信息。
革兰氏染色反应的成败关键是:1). 菌龄:12-24小时的纯培养物。
2）革兰氏染色操作时，要严格控制酒精脱色时间，菌液涂布均匀而薄。
3. 培养基的组成。
3、简述防腐的种类及其应用。
答案：防腐的种类很多，主要有①低温，利用4①以下的温度保藏食物、菌种等；①缺氧，采用在密封容器中加入除氧剂来有效地防止食品和粮食等的腐烂；①干燥，采用晒干、烘干或红外线干燥等方法对食物等进行保藏；①通过盐腌和糖渍等高渗来保藏食物。
①高酸度；①加防腐剂。
4、根据温度、氧、pH可将微生物分为哪些类型？答案：按照微生物的最适生长温度可将微生物分为三种类型：①嗜冷菌；①中温菌；①嗜热菌。
按照微生物与pH的关系，可将微生物分为三种类型：①嗜酸菌；①嗜中性菌；①嗜碱菌。
按照微生物与氧的关系，可将微生物分为两大类：①好氧菌；①厌氧菌。
微生物学实验知识点总结与实践应用微生物学实验知识点总结与实践应用微生物实验知识总结与实践应用经过这学期学习和实验操作，我对《微生物实验》有了一些初步的认识，也从中学习到了有用的知识。
《微生物学实验》是要求我们掌握实验知识的基本操作和技能训练，初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的科学前沿接轨。
微生物：包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活关系密切。
涵盖了有益有害的众多种类，广泛涉及健康、食品、医药、工农业、环保等诸多领域。
我将我这学期学到的微生物学知识，结合生活和工业当中的一些应用，归纳如下：在吾尔恩老师的带领下，我们先从最基本的知识学起。
（1）无菌操作技术：高温对微生物具有致死效应，因此微生物在转接过程中，一般再火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，已达到灭菌的目的。
在做实验时要保持严谨的态度，以后的实验中多数操作都必须再火焰旁进行。
（2）培养基的制备：培养基是人工配置的生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。
自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对PH值的要求一般不同。
（3）消毒与灭菌：灭菌是用理化方法杀死一定物质中的微生物的微生物学基本技术。
灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。
微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。
灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。
是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，使之达到无菌保障水平。
经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。
经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。
（4）平板分离与活菌计数：平板分离计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上。
经培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。
根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。
微生物的分离与培养技术原理及其应用-文档资料
微生物的分离与培养技术是微生物学实验室中最基本、最重要的实验技术之一。
其主要原理是将混合微生物群落分离为单一的微生物菌落，并在适宜的环境条件下使其生长繁殖形成单一菌种培养物，以便进行鉴定和研究。
1.微生物的分离技术
（1）稀释涂布法：将微生物混合液逐渐稀释，然后取一定量的稀释液涂布在富养基平板上，待菌落形成后，挑取单一菌落进行培养和研究。
（2）过滤法：利用微孔膜或滤纸将混合液过滤，将过滤后留在微孔膜或滤纸上的微生物进行培养和研究。
（1）液体培养：将微生物接种在富足的液体富养基中，置于适当的温度、光照和通气条件下进行培养。
（3）混合培养：将两种或以上的微生物同时接种在同一富养基上进行培养，这一技术可同时培养多种微生物，缩短实验时间。
3.技术应用
微生物的分离与培养技术在微生物学研究、医学诊断、生物工程和食品工业等领域都得到广泛应用。
（1）微生物学研究：分离单一菌种进行研究，为微生物学研究提供基础。
（2）医学诊断：从临床样品中分离出致病微生物进行培养与鉴定，有助于快速准确地诊断、鉴定和治疗病原微生物感染。
（3）生物工程：在微生物培养基中添加营养物质，用微生物进行合成、代谢和分泌等反应。
（4）食品工业：将微生物培养在富有营养的富养基中进行发酵，生产出发酵食品。
土壤细菌的分离与纯化土壤细菌是一种普遍存在于土壤中的微生物，它们在土壤生态系统中发挥着重要的角色。
分离和纯化土壤细菌，不仅可以研究其基本特性、生物学功能和代谢途径等，还可以开发其潜在的应用价值，比如生物农药和生物化学制品的生产等。
本文将介绍土壤细菌的分离和纯化过程，以及影响土壤细菌分离的因素和纯化方法。
土壤细菌的分离是指从土壤中分离得到单个细菌菌落的过程。
一般分离方法有以下几种：（一）稀释涂布法该方法是将土壤分别用不同浓度的生理盐水进行稀释，然后将不同浓度的土壤悬液制成平板培养基并涂布在培养基上。
菌落形成后，可再次从菌落上接种单个细菌。
该方法适用于分离数量稀少的细菌。
（二）膜过滤法该方法是将土壤和生理盐水混合后通过孔径为0.22μm的滤膜过滤出微生物体，然后将此滤膜放置于适宜的培养基上进行培养。
该方法适用于分离数量较多的细菌。
（四）毛细管沉淀法该方法是利用毛细管的吸力将土壤中的细菌沉淀到毛细管中，然后将毛细管插入含有适宜培养基的瓷片中，放置在恒温箱中进行分离和培养。
该方法适用于分离数量稀少的细菌。
（五）选择性富集法该方法是通过添加选择性富集剂使特定种类的细菌生长，不同种类的细菌生长受到不同富集剂的影响。
该方法适用于富集数量稀少的特定种类细菌。
（一）单菌落分离法该方法是将分离得到的细菌菌落在新的培养基上进行二次分离和培养，直至获得单一的细菌菌落。
该方法适用于分离数量较多并且形态较为相似的细菌。
（三）挑选法该方法是利用显微镜观察细菌形态和形状，手工用铂丝挑选出单个细菌菌落。
该方法适用于菌落数量较少且形态差异较大的细菌。
该方法是利用滤纸将细菌菌液过筛，分离得到单个细菌颗粒。
该方法适用于分离数量较少的细菌。
土壤细菌的分离受到多种因素的影响，如土壤环境因素、培养基种类和培养方式等。
（一）土壤环境因素土壤的物理化学因素，如土壤温度、pH值、土壤含水量等对土壤细菌的生长有很大影响。
不同种类的土壤中细菌种群差异很大，所以适当选择适宜的土壤样品可以更好的分离得到目标细菌群落。
土壤微生物生态学及其实验技术引言：土壤微生物是土壤生态系统中不可或缺的组成部分，对维持土壤生物多样性、循环养分、促进植物生长等起着重要作用。
土壤微生物生态学研究土壤微生物的多样性、功能和相互作用，探索其在土壤生态系统中的重要功能和生态过程。
本文将介绍土壤微生物生态学的基本概念和研究方法。
一、土壤微生物生态学的基本概念：1. 土壤微生物：土壤中的微生物包括细菌、真菌、放线菌和原生动物等。
它们广泛分布于土壤中，有不同的生理特性和功能。
2. 多样性：土壤微生物的多样性是指土壤中微生物的种类和数量。
多样性越高，土壤生态系统的稳定性越强。
3. 功能：土壤微生物具有多种功能，包括有机物分解、养分循环、固氮、抗病害等。
二、土壤微生物生态学的研究方法：1. 分离培养法：通过分离培养方法，可以获得纯培养的土壤微生物菌株，进一步研究其生理特性和功能。
2. 生物计量学方法：通过测定土壤微生物的生物量和活性，揭示土壤微生物的数量和功能特点。
3. 分子生物学方法：利用分子生物学技术，如PCR、DGGE等，可以研究土壤微生物的多样性和群落结构。
4. 同位素示踪法：通过同位素标记技术，可以追踪土壤微生物在土壤生态系统中的功能和相互作用。
5. 生态学模型：利用生态学模型，可以模拟和预测土壤微生物的分布和功能。
三、土壤微生物生态学的研究内容：1. 土壤微生物多样性：研究土壤微生物的多样性，探索其影响因素和生态功能。
2. 土壤微生物功能：研究土壤微生物的功能特点，如有机物分解、养分循环、固氮等。
3. 土壤微生物群落结构：研究土壤微生物的群落结构和变化规律，揭示其对环境变化的响应。
4. 土壤微生物与植物互作：研究土壤微生物与植物之间的相互作用，探索其对植物生长和健康的影响。
5. 土壤微生物生态功能评价：评价土壤微生物对土壤生态系统功能的贡献和稳定性。
结论：土壤微生物生态学是研究土壤微生物的多样性、功能和相互作用的学科，具有重要的理论和应用价值。
