逆转多药耐药的实验操作步骤

逆转多药耐药的实验操作步骤逆转耐药性的实验步骤: （孵育时间为48h）多柔比星也叫阿霉素1.各种给药组(多柔比星组,多帕菲,空白制剂,多西胶束制剂)对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株的IC50值2.多帕菲组，空白制剂，多西胶束制剂对MCF-7和MCF-7/ADR 细胞株，细胞存活率达到90%以上的剂量3.联合培养：针对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株，多帕菲组，空白制剂，多西胶束制剂加入存活率90%以上的剂量（比如设4个浓度梯度，并固定此浓度，调节多柔比星的浓度，计算多柔比星的IC50值），孵育1h后，加入不同浓度梯度的多柔比星溶液（浓度设定范围应在其IC50值以下，必须包含IC50这一浓度，可以再加一个高一点的浓度）注意：药物联合时，配制终浓度的阿霉素时，要从母药中只取一次，减少取药多次造成误差；每一次筛药，板子上都要设空白组、单独加药阿霉素组、单独加逆转剂药物组。

4.计算耐药倍数和逆转指数。

耐药倍数=耐药细胞IC50/敏感细胞IC50；逆转指数=使用逆转剂前IC50/使用逆转剂后IC50。

耐药倍数，是分析耐药细胞耐药性的。

实验中用到的是逆转倍数（对耐药细胞叫做逆转倍数=使用逆转剂前IC50/使用逆转剂后IC50）；增敏倍数（联合剂与阿霉素联合对敏感细胞的增敏倍数=使用联合剂前IC50/使用联合剂后IC50）。

比较这两个倍数，如果都大于1（我们一般看逆转倍数至少在2以上才有效，越大越好），且逆转倍数更大，说明具有逆转耐药的作用的同时还具有增敏作用。

如果两个倍数一样，说明你的药物只具有增敏作用。

如果增敏倍数为1，逆转倍数大于1（我们一般看逆转倍数至少在2以上才有效，越大越好），说明你的药物具有逆转耐药的作用。

肿瘤多药耐药机制与逆转策略一、引言肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病，其发生和发展是由多种复杂的因素影响而成。

药物治疗是目前肿瘤治疗的主要方法之一，然而，肿瘤细胞对药物的多药耐药现象往往会导致治疗效果不佳，甚至治疗失败。

因此，了解肿瘤多药耐药机制，并探索逆转策略，对于提高肿瘤治疗效果具有重要意义。

二、肿瘤多药耐药机制1. ABC转运蛋白ABC转运蛋白是一类跨膜蛋白，在多药耐药中扮演重要角色。

这些蛋白负责细胞内外的物质转运，包括化疗药物。

当肿瘤细胞中ABC转运蛋白表达增加时，会导致药物从肿瘤细胞内外的迅速流动，减少药物在细胞内的蓄积，从而影响药物的疗效。

2. DNA修复机制DNA修复机制是维持细胞基因组稳定性的重要机制。

肿瘤细胞中DNA修复机制异常活跃，导致化疗药物对DNA的损害被高效修复，从而减少了药物的疗效。

3. 肿瘤干细胞肿瘤干细胞是一种具有自我更新和分化潜能的细胞群，它们对化疗药物具有较高的耐药性。

肿瘤干细胞具有较高的自我更新能力，能够快速恢复并再次形成肿瘤，是肿瘤多药耐药的重要机制之一。

4. 其他机制除了以上几种机制外，肿瘤多药耐药还涉及细胞凋亡逃逸、代谢异常、微环境因素等多种细胞和分子水平的因素。

三、肿瘤多药耐药的逆转策略1. 靶向ABC转运蛋白针对ABC转运蛋白过度表达的现象，可以通过设计靶向这些蛋白的药物来抑制其功能，从而增加化疗药物在肿瘤细胞内的蓄积。

目前，已有多种靶向ABC转运蛋白的药物被应用于临床，取得了一定的疗效。

2. 抑制DNA修复机制通过干扰DNA修复机制的正常功能，可以增加化疗药物对DNA的作用，提高药物对肿瘤细胞的杀伤力。

一些靶向DNA修复机制的药物已经在临床中得到应用，展现出一定的逆转多药耐药效果。

3. 消灭肿瘤干细胞针对肿瘤干细胞的耐药性，可以设计特定的药物或治疗方案来快速清除肿瘤干细胞，遏制肿瘤的再生。

目前，针对肿瘤干细胞的研究正在逐步深入，相关药物也在不断涌现。

复方三根制剂逆转多药耐药的实验研究冯正权;郭勇;朱宁希;吕庆华;沈敏鹤;吴良村;王泽时【期刊名称】《中国肿瘤》【年(卷),期】2003(12)6【摘要】[目的]探讨复方三根制剂逆转K562/ADR、K562/VCR细胞株耐药性的机制。

[方法]细胞K562、K562/ADR、K562/VCR培养于RPMI鄄1640安全培养液中。

MTT法测定两株细胞的抗药性。

RT鄄PCR法测定给药处理后24h、48h、72h后两耐药细胞株MDR1表达量。

[结果]复方三根制剂和维拉帕米对K562/ADR和K562/VCR不同时段表达MDR1的量有显著差异。

[结论]推测复方三根制剂逆转多药耐药机制为在转录水平下调MDR1mRNA,从而降低多药耐药细胞P鄄gp的表达。

【总页数】2页(P370-371)【关键词】中药;三根制剂;多药耐药;逆转录多聚酶链反应【作者】冯正权;郭勇;朱宁希;吕庆华;沈敏鹤;吴良村;王泽时【作者单位】浙江中医学院;浙江省中医院;浙江大学肿瘤研究所【正文语种】中文【中图分类】R73－31【相关文献】1.携多药耐药基因1反义RNA重组腺病毒逆转肝癌多药耐药细胞的实验研究 [J], 梅英;石毓君;丁雄;吴传新;简华刚;龚建平;刘长安2.中药复方肝癌-1号逆转肝癌多药耐药的实验研究 [J], 李起;刘作金;张俊;石毓君;龚建平3.环氧化酶-2选择性抑制剂逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药的实验研究 [J], 韩正祥;刘念龙;杜秀平;高向阳;张敬川4.丁硫氨酸亚砜胺和利尿酸逆转人膀胱癌细胞多药耐药相关蛋白介导的多药耐药实验研究 [J],5.NHE-1特异性抑制剂DMA逆转HL-60/ADM细胞多药耐药的实验研究 [J], 常城;孔佩艳;陈幸华;彭贤贵;刘林;刘红;曾东风;梁雪;王庆余因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

ETS1基因沉默逆转MCF-7ADR多药耐药的实验研究的开题报告一、研究背景与意义多药耐药是肿瘤治疗中常见的问题，也是肿瘤患者治疗失败的主要原因之一。

研究表明，多药耐药与肿瘤细胞中特定基因的表达失调等因素有关。

ETS1基因作为一种转录因子，在多种肿瘤中表达异常，并且与肿瘤细胞的增殖、转移和耐药性等方面密切相关。

因此，探究ETS1基因在多药耐药中的作用机制，对于寻找肿瘤治疗新靶点，提高治疗效果具有重要的意义。

二、研究内容本研究将采用质粒介导的siRNA技术沉默MCF-7ADR细胞中的ETS1基因，观察ETS1基因沉默对MCF-7ADR细胞耐药性以及细胞增殖、转移能力的影响，并研究ETS1基因沉默对多种耐药基因的表达变化及其调控机制。

三、研究方法1、建立沉默ETS1基因的MCF-7ADR细胞株：通过质粒介导的siRNA技术，构建含有ETS1基因特异性siRNA的质粒，并将其转染到MCF-7ADR细胞中，筛选出效果最佳的siRNA序列，建立沉默ETS1基因的细胞株。

2、细胞增殖和转移能力的检测：采用CCK-8法和Matrigel侵袭实验，测定沉默ETS1基因的MCF-7ADR细胞的增殖和转移能力。

3、耐药基因的表达变化：利用qRT-PCR技术，检测沉默ETS1基因的MCF-7ADR细胞中多种耐药基因的表达变化。

四、预期结果我们预计，ETS1基因沉默可逆转MCF-7ADR细胞的多药耐药性，并抑制细胞增殖和转移能力。

同时，ETS1基因沉默可能通过影响多种耐药基因的表达，参与细胞的多药耐药性形成与发展。

五、研究意义本研究有望为肿瘤治疗的新靶点的寻找提供重要线索，为寻找治疗耐药性的新策略提供理论依据，进一步拓展肿瘤治疗的可能性。

肿瘤耐药机制与逆转方法引言：近年来，癌症的发病率逐渐增加，而且在治疗过程中很多肿瘤患者面临着耐药性的问题。

这导致了许多治疗手段失效，因此了解和克服肿瘤耐药机制变得至关重要。

本文将介绍肿瘤耐药机制的原理和一些已知的逆转方法。

一、肿瘤耐药机制1. 多药耐药（MDR）机制多药耐药是指细胞对多种化疗药物的抵抗性发展。

它主要通过以下几种方式实现：a) ABC转运体家族：ABC（ATP-binding cassette）转运体通过使用ATP能量从细胞内向外排泄化学物质，从而减少化疗药物在细胞内积累。

其中P-gp、MRP 和BCRP是三个重要的ABC转运体。

b) 凋亡信号途径：肿瘤细胞常常通过调节Bcl-2家族蛋白、Caspase活性以及Fas/FasL信号路径等来干扰化疗药物诱导的细胞凋亡。

2. 靶向信号通路肿瘤耐药也常与细胞的信号通路异常激活有关。

某些关键的信号通路包括PI3K/Akt、RAS/RAF/MAPK和JAK/STAT等，当这些通路异常激活时，会导致肿瘤细胞对化疗药物的耐受性增加。

二、肿瘤耐药逆转方法1. 组合治疗组合化疗是目前常用的一种逆转肿瘤耐药的方法。

通过同时使用多种具有不同作用机制的抗肿瘤药物，可以减少肿瘤细胞对单一化疗药物产生的抵抗性。

此外，还可以考虑将放射治疗、免疫治疗和靶向治疗与化学治疗相结合，以达到更好的治疗效果。

2. 修饰药物分子结构通过修改已有化学结构或设计出新型小分子化合物，可以提高药物在肿瘤细胞中进入和积累的能力。

例如改变药物理化性质、结构基团调整以及针对特定肿瘤受体进行修饰等，都是常用的逆转耐药方法。

3. 使用多靶点抑制剂由于肿瘤细胞的信号通路异常激活与耐药性增加密切相关，因此使用多靶点抑制剂可以有效逆转肿瘤耐药。

这些抑制剂可以同时或依次作用于不同通路上的关键蛋白，从而干扰肿瘤细胞内的异常信号传导。

4. 基因治疗基因治疗是近年来发展迅速的一种逆转肿瘤耐药机制的方法。

该方法通过操纵和修复细胞内关键基因表达水平，调节自身免疫应答以及恢复凋亡通路等来逆转耐药性。

多药抗药基因的表达实验具体步骤及详细方法大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。

多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测这些特定基因的过度表达。

一、细胞总RNA提取1. 收集约5x107个细胞，冷PBS洗涤。

2. 加入400 ul RNA提取液（含6 mol/l 的异硫氰酸肽，0.5%十二烷基肌酸钠，0.025 mol/l 构橼酸钠pH7.0，0.25 mol/l 乙酸钠，pH4.0，0.5%二疏基乙醇，50%萘酸），混匀。

3. 加入400 ul 氯仿，混匀，以13 000 r/min 于4℃离心15 min。

4. 取上清液加入等体积的异丙醇，4℃放置30 min。

5. 然后以13 000 r/min 离心15 min，吸上清，将RNA成点用75%的乙醇洗涤1次，溶于100 ul 的无菌双蒸馏水中6. 并用紫外分光光度计检测RNA纯度（A260/A280应为1.8~2.0）后备用。

二、反转录及PCR扩增1. 引物2. 取细胞总RNA10 ul 加入20 ul AMV逆转录酶反应体系中，42℃保温30 min 进行反转录，合成cDNA。

3. 然后置95℃，3 min 终止反转录。

4. 接着在Taq酶的作用下，用mdr-1和β2-MG引物，对cDNA上的目的片段进行PCR5. 94℃预变性2 min，然后94℃变性1 min，50℃退火1 min，72℃延伸1 min，扩增35个循环。

6. 最终在60℃保温7 min，以保证产物充分延伸。

7. 取10 ul 扩增产物在3%琼脂糖凝胶电泳后，紫外灯下照相，与mdr-1 cDNA阳性对照，等位的DNA条带为阳性，反之为阴性。

注意事项1. 尽可能在低温下操作；2. 适量斟酌Trizon等的用量；3. 在每一次离心后除尽蛋白质、不溶物提取操作时必须戴手套、口罩等防止DNA酶的影响；4. 注意Trizon带有腐蚀性；5. 最重要的就是防止DNase的污染，手套、口罩必不可少，所用的枪头和EP管等也要RNA提取专用的，无DNA酶的。

瑞香狼毒提取物逆转人肝癌耐药细胞多药耐药的实验研究马健;李永华【期刊名称】《中国中医药科技》【年(卷),期】2004(011)004【摘要】实验材料实验动物：Balh／c小鼠40只，体重18g～22g，SPF级，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

瑞香狼毒水提物(scLA)的制备：将瑞香狼毒(由内蒙医药公司提供，经鉴定为瑞香科狼毒)200g加水400mL，煮沸20min2次，上清液混合后过滤、浓缩，制成口服液，每毫升含生药1．0g。

细胞系：人肝癌细胞系Bel-7402引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库。

主要试剂及仪器：酶联免_疫检测仪，南京华东电子管厂产品。

RPMI1640培养基为Gibeo产品；MTT为Sigma产品；96孔培养板为DEMARK产品；细胞计数板为上海市求精生化仪器厂产品。

阿霉素(Dox)为Pharmacia & Upjohn产品；阿糖胞苷为昆明药业有限公司产品。

【总页数】1页(P223)【作者】马健;李永华【作者单位】黑龙江中医药大学附属第一医院·哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学附属第一医院·哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.瑞香狼毒提取物逆转肺癌细胞耐药的免疫组化研究 [J], 邢立强;李旺;孙黎;李鸿君;王烽2.麝黄消瘤汤对人肝癌细胞多药耐药性逆转作用的实验研究 [J], 张晓丽;黄挺;杨雪飞;黄伶;李勇3.EGCG逆转人耐药肝癌细胞株多药耐药的体内实验研究 [J], 林晓贞;梁钢;黎莉;唐安洲4.美洲大蠊提取物逆转人肝癌细胞HepG2/ADM多药耐药的机制研究 [J], 李彩琳;吴定宇;吕鸿;张鸿翰;王彦权;Najib Mohammerd;彭芳5.苦参碱逆转人肝癌细胞株QGY/CDDP多药耐药性的实验研究 [J], 胥雄阳;何松因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

肿瘤多药耐药的逆转策略肿瘤多药耐药的产生是由多因素、多环节介导的，它的机制包括：ABC转运子超家族成员的异常增多；信号传导通路异常；靶酶质和量的改变；药物的活化障碍；耐药基因的异常表达；修复能力增强等。

MDR是肿瘤化疗失败最主要的原因。

本文就肿瘤多药耐药的发生机制及逆转策略的进展作一全面的综述。

标签：肿瘤；多药耐药；机制；逆转策略肿瘤细胞在首次或再次接受化疗时，对某种化疗药物产生耐药，且对其他非同类型、结构不同、作用机制相异的药物也耐药的广谱耐药现象即为肿瘤多药耐药。

本文就肿瘤多药耐药的发生机制及逆转策略的进展作一全面的综述，整体分析着力于从一条多靶点、高特异性、高效应、毒副作用小的逆转途径。

1 P-糖蛋白（P-gp）介导的MDR及其逆转策略1.1产生机制P-gp是利用ATP水解释放能量主动将疏水亲脂性的化疗药物转运至胞膜外的药物输出泵，由mdr-1基因编码的，其引起MDR的机制是：导致胞内药物未能达到最小有效浓度而产生MDR。

它还抑制Caspase激活，产生凋亡耐受型MDR。

相关的耐药蛋白还包括：多发耐药相关蛋白（MRP）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）、肺耐药相关蛋白（LRP）。

1.2逆转策略上述ABC转运蛋白家族成员，P-糖蛋白介导的机制最常见，关于P-gp抑制剂的作用机制有：①与抗肿瘤药物竞争作用于P-gp上的结合位点；②竞争性作用于P-gp上ATP结合区，阻断ATP水解；③与P-gp上外排功能的变构区域结合，阻断其外排底物。

最初的第一代P-gp的逆转剂由于无特异性作用靶点、使用剂量大、毒副作用大等，未能得到广泛使用；第二代逆转剂虽克服了第一代逆转剂的缺陷，但当其与部分抗肿瘤药物合用时，干扰了化疗药物的代谢，增加了化疗毒副反应；具有广泛应用前景的第三代逆转剂中Tariquidar最为值得关注，它在低浓度范围内即能逆转MDR，且不影响抗肿瘤药物的代谢，非竞争性、高亲和力与P-pg结合，抑制作用明显超过第一和第二代MDR逆转剂。

多重耐药的处理流程及防范措施一、多重耐药的处理流程。

1.1 准确诊断。

当怀疑有多重耐药情况时，那得赶紧准确诊断。

这就好比破案，要找到确凿的证据。

得做各种详细的检测，像细菌培养和药敏试验这些。

不能稀里糊涂就下结论，一定要精准定位到底是哪些病菌在作祟，它们对哪些药物耐药，这是处理多重耐药的第一步，也是关键的一步，所谓“擒贼先擒王”嘛。

1.2 调整治疗方案。

一旦诊断清楚了，就得调整治疗方案。

原来的药要是不管用了，就得果断换。

这就像打仗换战术一样。

要根据药敏试验的结果，选择那些敏感的抗生素。

可不能一条道走到黑，拿着老方子治新病。

而且用药的剂量、疗程这些都得重新规划，务必做到有的放矢，不能瞎猫碰死耗子。

1.3 隔离防护。

对于多重耐药的患者，必须进行隔离防护。

这就如同把危险分子单独关押一样。

防止这些耐药菌传播给其他患者、医护人员或者探视者。

要设立专门的隔离病房，医护人员在接触患者的时候要严格遵循防护措施，穿隔离衣、戴手套、做好手卫生等，这一系列措施就像给病菌设下一道道防线，不能让它们有可乘之机。

二、多重耐药的防范措施。

2.1 合理使用抗生素。

抗生素可不能乱用，这是防范多重耐药的重中之重。

很多时候，大家一有个头疼脑热就吃抗生素，这就像用大炮打蚊子，不仅浪费资源，还容易催生耐药菌。

医生在开药的时候要严格把握指征，能用窄谱的就不用广谱的，能口服的就不打针，能少用就不多用。

民众也要提高意识，不要自己随便买药吃，要听医生的话，这叫“听人劝，吃饱饭”。

2.2 加强医院感染控制。

医院得把感染控制好。

要对医院环境进行定期清洁和消毒，像病房、手术室、诊疗室这些地方，得打扫得干干净净，病菌无处藏身。

医疗器械也要严格消毒，不能让病菌在器械上搭便车。

医护人员的手卫生更是关键，都说“病从口入”，在医院里很多时候是“病从手入”，把手洗干净了，能挡住不少病菌的传播。

2.3 监测与教育。

要建立有效的监测系统，时刻盯着耐药菌的动态。

就像放哨的士兵一样，一旦发现有新的耐药情况，就要及时采取措施。

中药对肿瘤多药耐药的逆转作用研究介绍：肿瘤多药耐药一直是肿瘤治疗中的重要难题，限制着化疗的效果和疗效。

中药作为一种传统的治疗方式，近年来引起了广泛的关注。

本文将对中药对肿瘤多药耐药的逆转作用进行研究探讨。

一、中药的多药耐药逆转机制1. 增加药物的积累：中药中的某些成分可以增加化疗药物在肿瘤细胞内的积累，提高药物的疗效。

2. 抑制耐药基因表达：中药中的某些成分能够抑制肿瘤细胞中耐药基因的表达，降低化疗药物的耐药性。

3. 促进细胞凋亡：中药中的某些成分可以通过促进肿瘤细胞的凋亡，逆转耐药性。

二、中药在肿瘤多药耐药中的应用研究1. 中药在化疗增敏中的应用：中药可以作为辅助治疗药物，提高化疗药物的疗效，减少药物的副作用。

2. 中药在耐药基因调控中的应用：中药中的有效成分可以干预耐药基因的表达，降低肿瘤细胞的耐药性。

3. 中药在促进凋亡中的应用：中药可以通过促进肿瘤细胞的凋亡，逆转肿瘤的耐药性，提高治疗的效果。

三、中药逆转肿瘤多药耐药的研究进展1. 中药的单体成分研究：通过研究中药中的单体成分，发现有些成分具有逆转肿瘤多药耐药的潜力。

2. 中药复方的研究：中药复方是中医传统的治疗方式，研究发现某些中药复方具有明显的逆转肿瘤多药耐药的作用。

3. 中药与化疗药物联合应用的研究：中药与化疗药物联合应用对逆转肿瘤多药耐药具有较好的效果。

总结：中药在逆转肿瘤多药耐药方面具有一定的潜力和应用价值。

通过研究中药的逆转机制以及相关的药理学和临床研究，可以为肿瘤治疗提供新的思路和方法。

然而，中药逆转肿瘤多药耐药的研究还处于初级阶段，还需要进一步的深入研究和临床验证。

相信在未来的研究中，中药将为肿瘤多药耐药的治疗带来新的突破和进展。

参考文献：1. XXXX, et al. 中药对多药耐药的逆转作用. 中医药导报, 20XX,XX(X): XX-XX.2. XXXX, et al. 中药逆转肿瘤多药耐药的研究进展. 中医研究, 20XX, XX(X): XX-XX.3. XXXX, et al. 中药对化疗药物增敏的相关机制研究. 中国药理学通报, 20XX, XX(X): XX-XX.4. XXXX, et al. 中药调控耐药基因表达的研究进展. 药学进展, 20XX, XX(X): XX-XX.。