改良树突状细胞的体外诱导和成熟调控方法

树突状细胞培养方法树突状细胞（Dendritic Cells，DCs）是一类免疫细胞，主要负责识别和激活T细胞，发挥着重要的免疫调节和抗肿瘤等作用。

为了进行树突状细胞的研究，科研人员需要对其进行体外培养。

本文将介绍常用的树突状细胞培养方法。

1.制备树突状细胞前驱细胞：树突状细胞前驱细胞主要存在于外周血和骨髓中。

首先，采集外周血或骨髓，并将其进行红细胞裂解。

然后，用PBS洗涤样品，离心沉淀细胞。

最后，将细胞进行培养。

2.培养基的选择：培养树突状细胞需要选择适宜的培养基。

目前常用的培养基有RPMI1640、DMEM等。

添加10-20%的胎牛血清（FBS）可以提供必要的生长因子和营养物质。

3.添加生长因子：在培养树突状细胞的过程中，可能需要添加一些生长因子来促进细胞的分化和增殖。

常见的生长因子包括GM-CSF（粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）和IL-4（白细胞介素4）。

可以将这些生长因子添加到培养基中，以达到最佳生长条件。

4.细胞培养条件的控制：树突状细胞对培养条件非常敏感。

因此，需要对温度、湿度、CO2浓度等参数进行严格控制。

一般来说，将细胞培养在37摄氏度、5%CO2的培养箱中。

5.细胞的分离和传代：在树突状细胞培养过程中，细胞会不断增殖。

为了保证细胞的活力和稳定性，需要定期分离和传代细胞。

可以使用胰酶等消化酶将细胞从培养瓶中剥离，然后进行细胞计数并按照一定比例进行传代。

6.细胞质量的评估：在培养树突状细胞的过程中，需要对细胞质量进行评估。

可以通过使用流式细胞仪等设备来检测细胞表面标记物的表达情况，以及细胞活力、树突状突起的形态等指标来评估细胞的质量。

7.树突状细胞的激活：树突状细胞的主要功能是激活T细胞。

为了使树突状细胞具备充分的抗原递呈能力，可以使用多种促进细胞激活的方法，如脂多糖、TNF-α等。

总结：树突状细胞培养方法包括制备前驱细胞、培养基选择、生长因子添加、细胞培养条件控制、细胞分离和传代、细胞质量评估以及细胞的激活等步骤。

体外诱导树突状细胞活化的方法
体外诱导树突状细胞活化的方法有多种，以下列举几种常见的方法：
1. 使用细胞因子和调节剂：可以使用细胞因子（如GM-CSF、IL-4等）和调节剂（如LPS、CpG等）刺激树突状细胞。

这些物质能够模拟体内的病原体感染环境，使树突状细胞活化并发生成熟，进而刺激免疫应答。

2. 共刺激分子：共刺激分子是一类能够提供第二信号的分子，通过与树突状细胞上的共刺激受体结合，促进树突状细胞的活化和分化。

常用的共刺激分子包括CD40配体、CD80、CD86等。

3. 电穿孔：通过使用电穿孔技术，将外源性抗原直接导入树突状细胞内部，可以有效激活树突状细胞。

电穿孔技术通过创造临时的细胞膜通透性，使抗原进入细胞质，从而达到活化树突状细胞的目的。

4. TLR激动剂：利用Toll样受体激动剂，如多聚RNA（poly I:C）和脂多糖（LPS）等，可以诱导树突状细胞产生免疫反应。

这些激动剂能够通过模拟细菌和病毒感染，激活Toll样受体信号通路，从而活化树突状细胞。

总之，体外诱导树突状细胞活化的方法主要包括使用细胞因子和调节剂、共刺激分子、电穿孔技术和TLR激动剂等。

这些
方法可以帮助研究者模拟体内的免疫应答过程，进行相关研究或开发免疫治疗方法。

体外诱导树突状细胞活化的方法-回复体外诱导树突状细胞（DC）活化的方法是一种重要的免疫治疗策略，可用于诱导或增强机体免疫应答。

树突状细胞是一类重要的抗原递呈细胞，其在促进免疫应答中起着关键的作用。

体外诱导树突状细胞活化的方法能够激活树突状细胞，使其能够有效地刺激T淋巴细胞，从而提高机体免疫应答的效果。

本文将详细介绍体外诱导树突状细胞活化的各个步骤和方法。

第一步：树突状细胞的获取与分离体外诱导树突状细胞活化的第一步是获取和分离树突状细胞。

树突状细胞可以来源于外周血、骨髓、脾脏等组织。

其中，外周血中的单个核细胞（PBMC）是最常用的来源。

获取PBMC可以通过密度梯度离心法，如Ficoll离心法，将血液样品混合与密度梯度介质，离心分离出PBMC。

而只限于使用糖胶（Dextran）纳米颗粒可以选择短时间分离出PBMC。

得到PBMC后，可以利用磁珠柱、细胞排序术等方法将树突状细胞分离出来。

第二步：树突状细胞的培养与扩增获得树突状细胞后，需要进行培养和扩增，以增加细胞数量，以便进行后续实验。

最常用的培养基是RPMI-1640，其中含有适量的常规培养基、胎牛血清（FBS）和生长因子，如GM-CSF（粒巢集落刺激因子）和IL-4（白细胞介素）。

通过培养基的添加，树突状细胞可以在体外环境中生长和繁殖。

第三步：树突状细胞的活化树突状细胞的活化是体外诱导其活化的关键一步。

目前常用的方法有两种：一种是使用细胞因子刺激，另一种是使用特定的抗原刺激。

第一种方法中，通过添加特定的细胞因子来活化树突状细胞。

最常用的细胞因子包括GM-CSF、IL-4和TNF-α等。

这些因子可以激活树突状细胞，促使其产生更多的树突状突起，并增强树突状细胞的抗原递呈能力。

第二种方法中，使用特定的抗原刺激树突状细胞。

这需要事先知道与所需刺激的免疫应答相关的抗原并进行合成。

抗原可以是蛋白质、肽段或者核酸等，需要装载在适当的载体上。

然后将这些载体与树突状细胞共同培养，使抗原与树突状细胞内的抗原递呈分子结合，从而激活树突状细胞。

奶牛外周血树突状细胞体外诱导培养与鉴定詹康;赵倩明;隋雁南;封飞飞;占今舜;赵国琦【摘要】通过粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM⁃CSF）和白细胞介素－4（IL⁃4）体外诱导外周血单核细胞为树突状细胞，为利用树突状细胞免疫疗法治疗奶牛乳房炎奠定基础和提供细胞模型。

利用淋巴细胞分离液分离获得奶牛外周血单核细胞，在6孔板内培养2h后，弃掉含有大量的T细胞和B细胞上清液，贴壁的基本上是单核细胞，磷酸盐缓冲液清洗5次，加入含有GM⁃CSF和IL⁃4的2 mL培养基进行3 d诱导。

之后，从培养基顶部小心吸弃1．4 mL的培养基，然后再补加含有GM⁃CSF和IL⁃4的1．8 mL培养基继续诱导3 d。

每天通过显微镜观察细胞形态。

第7天经流式检测细胞表面抗原 CD11c、CD14、主要组织相容性复合体Ⅱ（MHCⅡ）、CD40、CD80、CD86的表达。

结果表明：1）第2天，一些细胞表面可以生长出刺突并伴随着伪足的生长。

第3天，细胞表面的刺突和伪足越来越多。

第4、5天，一些带有刺突和伪足的细胞开始聚集和融合。

第6天，单核细胞基本被诱导为树突状细胞，细胞表面含有大量清晰可见的刺突和伪足。

2）经流式检测，CD14、CD11c、MHCⅡ阳性表达细胞分别占诱导细胞的6．8％、65．0％、75．9％，CD80和CD86阳性表达细胞分别占诱导细胞的2．0％和1．2％。

综上所述，采用奶牛外周血单核细胞经体外诱导能够获得一定纯度的奶牛树突状细胞。

%This study aimed to induce bovine peripheral blood monocyte derived dendritic cell by granulocyte⁃macrophage colony stimulating factor ( GM⁃CSF) and interleukin⁃4 ( IL⁃4) cytokines, which could lay founda⁃tion and provide cell model for dairy cow mastitis treatment using cell immunotherapy. The bovine peripheral blood monocyte was acquired by lymphocyte separation medium and seeded in6⁃proe plate to culture for 2 h. Then, suspended cells containing an amount of B and T cells were discarded, and adherent cells were mostly monocyte. The cells were washed for 5 times using phosphate buffer, and 2 mL culture medium containing GM⁃CSF and IL⁃4 cytokines was added to culture for 3 d. After that, 1.4 mL culture medium was discard from medium top, and 1.8 mL culture medium containing GM⁃CSF and IL⁃4 was added to culture for another 3 d. The cell was observed under microscope every day. On days 7, the cells were harvested to detect CD11c, CD14, major histocompatibility complex Ⅱ ( MHCⅡ) , CD40, CD80 and CD86 molecules by flow cytome⁃try. The result showed as follows:1) on days 2, some of the cells started to extend spikes and accompanied by pseudopodia stretching. On days 3, the spikes and pseudopodia grew more and more. On days 4 and 5, cells with spikes and pseudopodia started aggregation and fusion. On days6, most of monocytes were derived to den⁃dritic cells, on which plenty of spikes and pseudopodia could be clearly seen. 2) CD14, CD11c, MHCⅡ, CD80 and CD86 positively expressed cells accounts for 6. 8%, 65. 0%, 75. 9%, 2. 0% and 1. 2% of induced cells by flow cytometry, respectively. In conclusion, bovine peripheral blood monocytes can be derived to den⁃dritic cells with certain purity.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2016(028)007【总页数】7页(P2184-2190)【关键词】细胞免疫治疗;单核细胞;树突状细胞;奶牛乳房炎【作者】詹康;赵倩明;隋雁南;封飞飞;占今舜;赵国琦【作者单位】扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009;扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009;扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009;扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009;扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009;扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009【正文语种】中文【中图分类】S852.2近年来有关树突状细胞的表型、功能及细胞免疫疗法等方面的研究已成为热点[1]。

小鼠树突状细胞的体外扩增培养及形态观察肖景莹;蔡连顺;阎冬梅;毕胜;齐宗春【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2006(029)004【摘要】目的:建立体外诱导和扩增小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的方法,并进行形态学观察.方法:将健康小鼠股骨骨髓细胞分离,去除悬浮细胞,贴壁细胞中加入细胞因子(IL-4和GM-CSF)继续进行培养,2周后,诱导的DC经相差显微镜和透射电镜进行观察.结果:培养的DC表面有几个大而长的突起,具有DC的典型形态学特征.结论:小鼠骨髓细胞经贴壁处理后,加入细胞因子(IL-4和GM-CSF)进行培养是可行的,采用这种方法能获得大量较高纯度的具有典型形态特征的DC.【总页数】2页(P8-9)【作者】肖景莹;蔡连顺;阎冬梅;毕胜;齐宗春【作者单位】佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯,154007;佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯,154007;佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯,154007;佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯,154007;佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯,154007【正文语种】中文【中图分类】Q343.6;R329.2+4【相关文献】1.小鼠脾脏来源树突状细胞的体外扩增培养 [J], 李宗辉;黄军华;刘俊峰;赵要顺2.小鼠脾脏来源树突状细胞的体外扩增培养 [J], 黎辉;曹宇皎;黄军华;刘俊峰3.感染伯氏疟原虫的小鼠树突状细胞体外扩增培养及形态观察 [J], 肖景莹;蔡连顺;代月;车世伟;齐宗春;毕胜4.成熟树突状细胞和转化生长因子β联合体外扩增小鼠调节性T细胞 [J], 范莎莎;罗荣城;段华新;石詠中;袁友红;肖佩玲5.小鼠脾脏树突状细胞的体外扩增与培养 [J], 成建平;黄军华;王杰;韩超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。