重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5+Re-4)免疫鸡和鸭后抗体消长规律
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目前,用于禽流感强制免疫的疫苗主要有三种:禽流感-新城疫重组二联活疫苗(rl-H5)、重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5+Re-4株)、禽流感H5-H9二价灭活疫苗。
不论是活疫苗还是灭活苗,影响禽流感免疫效果的因素很多,实践中应对疫苗种类的选择、防疫程序的制订、接种途径、操作方法给予充分的重视,才能尽量减少免疫失败或不良反应。
1、禽流感疫苗使用前的准备工作1.1制定合理的免疫程序一般在制订禽流感免疫程序时应考虑以下几方面的因素:①当地禽流感疫病的流行情况;②雏鸡的母源抗体水平;③免疫间隔时间;④鸡的免疫应答能力;疫苗的种类;免疫接种的方法;⑤免疫对鸡健康及生产性能的影响等。
鸡禽流感疫苗首免日龄在12~15d,如果日龄太小,鸡免疫系统尚未完全建立,会造成免疫系统损伤,影响免疫效果。
另一方面,母源抗体高滴度时,免疫不仅不能刺激机体产生应有的免疫应答,抗体反而会被中和,结果免疫失败。
最好通过实验室检测禽流感母源抗体水平来确定首免日龄。
说明书中禽流感油乳剂灭活苗免疫保护期为4个月,这是在实验室条件下采用SPF鸡检测得出的数据,而实际生产中影响禽流感疫苗免疫效果的因素很多,如饲养管理、营养水平、日龄大小、健康状况等,导致疫苗的保护期长短不一。
所以,不能机械地照搬说明书中的保护期来推测免疫时间,有条件的,应根据HI抗体检测结果来指导何时免疫。
1.2了解禽流感疫苗要选择合适的疫苗对鸡群免疫接种,由于禽流感病毒血清型众多,不同亚型之间不能完全保护。
在生产实践中应针对当前和本地流行的疫情来选择血清型、病毒株相同的疫苗。
如果疫苗毒株的抗原性与感染病原的差异较大,很难取得良好的防疫效果。
疫苗要妥善保存,禽流感疫苗是生物制品,对温度要求很严格,切忌随便存放,否则对疫苗有直接影响。
灭活疫苗要保存在低温、干燥、阴暗的地方,适宜温度为2~8℃,活疫苗为冻干苗,则在冰箱冷冻室-15℃以下保存,切忌反复冻融。
常见动物疫苗使用方法来源:张掖市动物疫病预防控制中心日期:2015-03-09 作者:李珊李旭蓉【打印本页】【关闭窗口】1、口蹄疫疫苗由于动物种类的不同,口蹄疫疫苗也可分为口蹄疫O型-亚洲I 型二价灭活疫苗、口蹄疫O型-A型二价灭活疫苗、口蹄疫A型灭活疫苗、口蹄疫O型-A型-亚洲I型三价灭活疫苗、口蹄疫O型灭活类疫苗,口蹄疫O型合成肽疫苗(双抗原)等。
仔猪、羔羊:28~35日龄时进行初免。
犊牛:90日龄左右进行初免。
所有新生家畜初免后,间隔1个月后进行一次强化免疫,以后每隔4~6个月免疫一次。
牛每头2ml,羊每只1ml,肌肉注射。
猪耳根后肌肉注射,体重10-25kg 猪,每头1ml(1/2头份),25kg以上的猪,每头2ml(1头份)。
2、猪瘟疫苗猪瘟疫苗有猪瘟脾淋源活疫苗和传代细胞源活疫苗,对所有猪进行猪瘟强制免疫。
商品猪:25~35日龄初免,60~70日龄加强免疫一次。
种公猪:25~35日龄初免,60~70日龄加强免疫一次,以后每6个月免疫一次。
种母猪:25~35日龄初免,60~70日龄加强免疫一次,以后每次配种前免疫一次。
每年春秋两季集中免疫,每月定期补免。
发生疫情时对疫区和受威胁地区所有健康猪进行一次加强免疫,最近1个月内已免疫的猪可以不进行加强免疫。
肌肉或皮下注射,使用时按瓶签注明头份用无菌生理盐水按每头份1毫升稀释,大小猪均1ml。
3、猪繁殖与呼吸综合征疫苗猪繁殖与呼吸综合征又称猪蓝耳病,疫苗有高致病性猪蓝耳病活疫苗、高致病性猪蓝耳病灭活疫苗,对疫病流行地区的猪进行免疫。
商品猪:使用活疫苗于断奶前后进行免疫,可根据实际情况4个月后加强免疫一次。
种母猪:150日龄前免疫程序同商品猪,可根据实际情况,配种前使用灭活疫苗进行免疫。
种公猪:使用灭活疫苗进行免疫。
70日龄前免疫程序同商品猪,以后每隔4~6个月加强免疫一次。
3周龄及以上仔猪,每头2ml,根据当地疫病流行状况,可在首免后28日及加强免疫1次;母猪,配种前接种4ml;种公猪,每隔6个月接种1次,每次6ml。
目前北方地区实行的肉鸭养殖主要有全封闭舍饲、半开放式饲养、舍内网上平养、舍内加运动场饲养等模式。
不论哪种模式,对疾病防控均有利也有弊。
饲养过程中,如果不能很好地执行各项生物安全措施,仍然可以导致多种疾病的发生甚至流行。
目前影响肉鸭健康生长的主要疾病有10种。
一、鸭流感是养鸭的重要疾病之一。
鸭感染H5亚型后食欲减退或废绝,高热,拉白色或黄绿色水样稀粪;精神沉郁,后期常出现神经症状,死亡率极高,种鸭产蛋量迅速下降。
H9亚型感染后可使中枢免疫器官和生殖器官发育受阻,造成免疫抑制,商品鸭易发浆膜炎和大肠杆菌病,种鸭和蛋鸭对产蛋影响显著。
鸭流感H5亚型的病变表现为心肌条纹状坏死、胰腺坏死灶、肠黏膜出血等,禽流感H9亚型在蛋鸭上的病变主要为卵巢出血、卵巢坏死,并产生大量的畸形蛋。
在预防方法上,建议免疫国家供应的禽流感H5RE-4-5疫苗和禽流感H9疫苗,最好能在6~9日龄使用水禽专用的新流(H9)二联。
治疗时多使用中药的抗病毒药,尽可能不用西药抗病毒药,因为大部分抗病毒的西药都是国家违禁药物,且使用效果也不好。
二、雏鸭病毒性肝炎雏鸭肝炎主要由DHV Ⅰ型和Ⅲ型病毒感染所致,3日龄内雏鸭发病较为严重。
该病发病急,病鸭精神沉郁,有神经症状,死后呈角弓反张姿态,雏鸭病死率高。
以雏鸭神经症状(角弓反张)、肝脏肿大出血为主要特征。
雏鸭肝炎可以作被动免疫,在1~3日龄注射鸭肝炎卵黄抗体0.5 ml,同时要做好环境卫生工作,尽量避免雏鸭肝炎早期感染。
三、鸭瘟鸭瘟多发生于1月龄以上鸭,但最近发现20天的肉鸭和肉鹅的鸭瘟发病率很高,病鸭、鹅精神萎顿,体温升高,饮水增多,怕光流泪,眼睑和头部肿胀,严重腹泻,拉绿色稀粪。
该病的主要特征是食道黏膜溃疡、肠道环状出血。
可以在10日龄左右免疫鸭瘟疫苗,使用灭活苗更安全、免疫期更长。
蛋鸭、种鸭需要多次免疫。
四、副粘病毒病不同品种和日龄的鸭均可发生,呈急性经过,发病率和死亡率较高。
鸡鸭混养可使该病发生几率明显增加。
H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗对不同禽群的免疫效果比较陈华;徐鸿;蔺晓月;陈静;田夫林;王贵升;王苗利;孙圣福;马慧玲;孔祥华;李玉杰【摘要】为了摸清H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗对不同禽群的免疫效果,以及时发现、分析免疫中存在的问题,发现免疫不合格的及时进行补免,确保山东省不发生疫情,本研究使用H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗免疫鸡、鸭、鹅等不同家禽,测定其免疫抗体合格率。
结果表明,加强免疫H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗可使鸡群达到100%免疫抗体合格率,但鸭群的免疫抗体合格率不理想。
【期刊名称】《山东畜牧兽医》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P13-14,15)【关键词】山东省;亚型禽流感(Re-4+Re-5株);抗体;监测;分析【作者】陈华;徐鸿;蔺晓月;陈静;田夫林;王贵升;王苗利;孙圣福;马慧玲;孔祥华;李玉杰【作者单位】山东省畜牧兽医信息中心山东济南 250032;山东省动物疫病预防与控制中心山东济南;山东省动物疫病预防与控制中心山东济南;山东省动物疫病预防与控制中心山东济南;山东省动物疫病预防与控制中心山东济南;山东省动物疫病预防与控制中心山东济南;山东省动物疫病预防与控制中心山东济南;山东省动物疫病预防与控制中心山东济南;山东省动物疫病预防与控制中心山东济南;山东省动物疫病预防与控制中心山东济南;山东省动物疫病预防与控制中心山东济南【正文语种】中文【中图分类】S851.33禽流感典型病毒粒子呈球形状,直径80~120nm,平均为100nm[1]。
特别是某些毒株初次分离时,常呈丝状,丝状体长短不一,长者可达数微米,但经鸡胚和细胞培养物连续传代后可变为球形[2]。
禽流感(Avian influenza,AI)是禽流行性感冒的简称,它是指由禽流感病毒引起的一种动物传染病,常发生在禽,有时也发生在低等哺乳类动物,至今在人仅有偶发病例。
禽流感疫苗的使用方法费强(山西省汾阳市动物疫病预防控制中心,山西汾阳032200)禽流感免疫是防控鸡禽流感的重要措施。
目前,用于禽流感强制免疫的疫苗主要有三种:禽流感-新城疫重组二联活疫苗(rl-H5)、重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5+Re-4株)、禽流感H5-H9二价灭活疫苗。
不论是活疫苗还是灭活苗,影响禽流感免疫效果的因素很多,实践中应对疫苗种类的选择、防疫程序的制订、接种途径、操作方法及注意事项给予充分的重视,才能尽量减少免疫失败或不良反应。
下面就禽流感疫苗使用方法的相关问题做简要探讨。
1禽流感疫苗使用前的准备工作1.1制定合理的免疫程序每一个鸡场都要有适合本场特点的免疫程序,一般在制订禽流感免疫程序时应考虑以下几方面的因素:当地禽流感疫病的流行情况;雏鸡的母源抗体水平;免疫间隔时间;鸡的免疫应答能力;疫苗的种类;免疫接种的方法;免疫对鸡健康及生产性能的影响等。
鸡禽流感疫苗首免日龄在12~15天,如果日龄太小,鸡免疫系统尚未完全建立,会造成免疫系统损伤,影响免疫效果。
另一方面,母源抗体高滴度时,免疫不仅不能刺激机体产生应有的免疫应答,抗体反而会被中和,结果免疫失败。
最好通过实验室检测禽流感母源抗体水平来确定首免日龄。
说明书中禽流感油乳剂灭活苗免疫保护期为4个月,这是在实验室条件下采用SPF鸡检测得出的数据,而实际生产中影响禽流感疫苗免疫效果的因素很多,如饲养管理、营养水平、日龄大小、健康状况等,导致疫苗的保护期长短不一。
所以,不能机械地照搬说明书中的保护期来推测免疫时间,有条件的,应根据HI抗体检测结果来指导何时免疫。
1.2了解禽流感疫苗要选择合适的疫苗对鸡群免疫接种,由于禽流感病毒血清型众多,不同亚型之间不能完全保护。
在生产实践中应针对当前和本地流行的疫情来选择血清型、病毒株相同的疫苗。
如果疫苗毒株的抗原性与感染病原的差异较大,很难取得良好的防疫效果。
疫苗要妥善保存,禽流感疫苗是生物制品,对温度要求很严格,切忌随便存放,否则对疫苗有直接影响。
动物疫病防控知识竞赛复习题动物疫病防控知识竞赛复习题一、法律法规及防疫政策篇1、新修订《中华人民共和国动物防疫法》(以下简称新《动物防疫法》)于何时由第十届全国人大常委会第二十九次会议审议通过?答:2007年8月30日。
2、新《动物防疫法》是胡锦涛主席签署的第几号主席令予以发布的?答:第七十一号主席令。
3、《重大动物疫情应急条例》是何时颁布实施的?答《重大动物疫情应急条例》是2005年11月16日国务院113次常务会议通过,自2005年11月18日起施行。
4、新修订《中华人民共和国动物防疫法》何时正式实施?答: 2008年1月1日。
5、新修订《中华人民共和国动物防疫法》(以下简称新《动物防疫法》)与原《动物防疫法》章节和条款上有何差别?答:新修订的《动物防疫法》共十章八十五条。
增加了三章二十四条。
6、《动物防疫法》的制定目的是什么?答:制定目的有5点,加强对动物防疫活动的管理;预防、控制和扑灭动物疫病;促进养殖业发展;保护人体健康;维护公共卫生安全。
7、《动物防疫法》所称动物防疫的含义?答:是指动物疫病的预防、控制、扑灭和动物、动物产品的检疫。
8、动物疫病分为哪几类?答:根据动物疫病对养殖业生产和人体健康的危害程度,动物疫病分为以下三类:一类动物疫病是指对人和动物危害严重,需要采取紧急、严厉的强制预防、控制、扑灭等措施的;二类动物疫病是指可能造成重大经济损失,需要采取严格控制、扑灭等措施,防治扩散的;三类动物疫病是指常见多发、可能造成重大经济损失,需要控制和净化的。
9、《中华人民共和国动物防疫法》所称动物是指哪些动物?答:家畜家禽和人工饲养、合法捕获的其他动物。
10、《中华人民共和国动物防疫法》所称动物疫病仅指动物传染病吗?答:不是,包括动物传染病和寄生虫病。
11、一类动物疫病共有几种,请列举8种以上的动物疫病名称?答:一类动物疫病共有14种,包括:口蹄疫、猪水疱病、猪瘟、非洲猪瘟、非洲马瘟、牛瘟、牛传染性胸膜肺炎(牛肺疫)、牛海绵状脑病(疯牛病)、痒病、蓝舌病、小反刍兽疫、绵羊痘和山羊痘、禽流行感冒(高致病性禽流感)、鸡新城疫。
重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5+Re-4)免疫鸡和鸭后抗体消长规律陈永忠;李俊平;李启红;杨承槐;汪洋;夏业才【摘要】@@ 禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病.根据致病性的不同将禽流感分为高致病性禽流感(HPAI)和低致病性禽流感(IPAI),HPAI被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病,我国将其列为一类动物疫病 [1].近几年来,禽流感在世界各地反复出现,2004年亚洲发生了高致病性禽流感,2006年底和2007年初东南亚又出现疫情,并发现了人感染禽流感.我国养禽业也一直受到禽流感的威胁.因此,它不仅给畜牧业造成了巨大的损失,而且给人们的公共卫生安全带来了严重的威胁.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2010(046)005【总页数】2页(P18-19)【作者】陈永忠;李俊平;李启红;杨承槐;汪洋;夏业才【作者单位】青海省西宁市畜牧兽医站,青海,西宁,810003;中国兽医药品监察所,北京,海淀,100081;中国兽医药品监察所,北京,海淀,100081;中国兽医药品监察所,北京,海淀,100081;中国兽医药品监察所,北京,海淀,100081;中国兽医药品监察所,北京,海淀,100081【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9.5禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病。
根据致病性的不同将禽流感分为高致病性禽流感(HPAI)和低致病性禽流感(IPAI),HPAI被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病,我国将其列为一类动物疫病[1]。
近几年来,禽流感在世界各地反复出现,2004年亚洲发生了高致病性禽流感,2006年底和2007年初东南亚又出现疫情,并发现了人感染禽流感。
我国养禽业也一直受到禽流感的威胁。
因此,它不仅给畜牧业造成了巨大的损失,而且给人们的公共卫生安全带来了严重的威胁。
疫苗免疫仍是预防禽流感的有效手段之一,被一些国家和地区采用[2-4]。
有关禽流感疫苗的免疫效果及抗体消长规律国内学者做了一些研究工作[5-8],但作为我国现阶段使用的主要疫苗,重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株。
以下简称禽流感二价苗)免疫鸡、鸭的抗体动态变化尚未见报道。
本试验取该疫苗3批,按H5N1的免疫方法和程序免疫商品鸡、鸭,定期采血测定血清HI抗体效价,研究禽流感二价苗免疫鸡、鸭后HI抗体消长规律及其差异,以期为该疫苗的推广使用提供科学的试验依据。
1 材料与方法1.1 试验动物 1周龄海蓝褐鸡,购自北京平谷种鸡场;1周龄北京麻鸭,购自北京平谷种鸭场。
1.2 疫苗重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)三批,批号分别为200807、200808 、200809,哈药集团生物疫苗有限公司生产。
1.3 血凝抑制(HI)试验用抗原禽流感病毒H5亚型HI试验抗原(H5,Re-4),批号:200702,哈尔滨维科生物技术开发公司生产;禽流感病毒H5亚型HI试验抗原(H5Re-5),批号:200801,哈尔滨维科生物技术开发公司生产。
1.4 标准阳性血清哈尔滨维科生物技术开发公司生产。
1.5 仪器一次性V型血凝板,微量移液器,微量振荡器,离心机。
1.6 主要试剂 0.1 mol/L PBS(pH 7.2),阿氏液,1%鸡红细胞悬液(现用现配)。
1.7 分组和接种将新购进的1周龄海蓝褐鸡和北京麻鸭分别随机分成4组,每组10只。
待鸡和鸭禽流感母源抗体消失后,将禽流感二价苗免疫接种,每批次一组对应颈部皮下注射0.5 mL/只,鸭首免3周后加强免疫1次,剂量 0.5 mL/只。
1.8 采血鸡鸭免疫后每2周翅静脉采血(1 mL/只)并分离血清。
1.9 HI抗体效价测定按照“重组禽流感病毒H5亚型双价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)制造及检验试行规程”中血凝抑制试验(HI)操作技术进行。
2 结果2.1 疫苗免疫鸡后的HI抗体消长情况禽流感二价苗可有效刺激产生HI抗体,而且不同批次的疫苗所致的HI抗体效价的消长规律基本一致。
免疫后2周,HI抗体效价达到4.1 log2~4.7 log2,第4周各组 HI抗体效价均达到最高值 8.8 log2~10.1 log2。
各组HI抗体效价从第6周开始下降,第8周以后下降相对较缓慢。
第16周内能够维持较高的抗体水平,第20周以后抗体水平衰减到4 log2以下。
不同批次的疫苗免疫组各个采样点的抗体效价t检验差异不显著(P>0.05)。
2.2 疫苗免疫鸭后HI抗体消长情况不同批次的禽流感二价苗均能有效地刺激鸭产生HI抗体,而且HI抗体效价的消长规律一致。
免疫后第2周HI抗体效价达到 2.7 log2~4.0 log2,第 4周达到4.0 log2~5.6 log2,加强免疫(首次免疫后第3周)后,各免疫组鸭HI抗体效价迅速升高,在加强免疫后第3周(首次免疫后第6周)达到最高值9.9 log2~11.0 log2。
HI抗体效价在第8周以后开始下降。
首次免疫后第16周抗体水平5.2 log2~5.9 log2之间,首次免疫后第20周以后抗体水平均在4log2以下。
不同批次的疫苗免疫组各个采样点的抗体效价t检验差异不显著(P>0.05)。
3 分析和讨论3.1 鸡免疫禽流感二价苗后4周HI抗体效价均达到最高值8.8 log2~10.1 log2。
各组HI抗体效价从第6周开始缓慢下降,第20周以后抗体水平衰减到4 log2以下,此时不足以抵御外界病毒侵袭[6],所以对于受威胁地区的鸡,建议每4个月应免疫1次。
这与陈坤永等[7]种鸽免疫禽流感疫苗后抗体维持在保护水平的持续时间相同。
3.2 鸭首次免疫后第2周 HI抗体效价达到2.7 log2~4.0 log2,第 4周达到 4.0 log2~5.6 log2,低于同期免疫鸡的抗体效价。
加强免疫后,免疫组鸭HI抗体效价迅速升高,首次免疫后第6周(加强免疫后3周)达到最高值9.9 log2~11.0 log2。
HI抗体效价在首次免疫后第8周开始下降,第20周后抗体水平均降至4 log2以下,此时不足以抵御外界病毒侵袭[6]。
所以,鸭加强免疫后才能达到较高的抗体水平,而且可靠保护期为4个月。
3.3 同时期内相应免疫组的HI抗体效价Re-4株均稍高于Re-5株,这可能与疫苗在制备过程中的抗原量配比有关。
由于禽流感二价苗对鸡和鸭的免疫程序不同,鸡免疫该疫苗4周后抗体水平达到高峰(8.8 log2~10.5 log2)。
而鸭首免该疫苗4周后抗体水平在4.0 log2~5.6 log2,加强免疫后3周抗体水平达到高峰(8.9 log2~9.4 log2),首次免疫第8周后鸭的免疫抗体水平比鸡的下降得稍快,说明鸡的免疫效果好于鸭,这与何长生等[8]对重组禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1)免疫鸡鸭后所作的调查结果相一致。
3.4 许多人认为禽流感病毒不易引起水禽发病,有一些水禽养殖场对禽流感的防治不太重视,只免疫1次甚至不免疫。
刘超男等[9]的研究表明,禽流感病毒不仅对鸡具有高致病性,而且对鸭也具有高致病性。
因此,水禽养殖场不能忽视对禽流感的防控,加强疫苗免疫注射。
本试验表明,鸭1次免疫禽流感二价苗后,抗体水平难以达到有效保护范围内,只有加强免疫后,抗体才能保持在较高水平。
3.5 由于受国家有关涉及 HPAI研究要求的限制,本次研究未进一步做攻毒保护试验,有关重组禽流感病毒H5亚型双价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)对鸡和鸭HPAI的攻毒保护情况没有继续进行。
关于这种疫苗对鸡和鸭的攻毒保护情况还有待进一步试验研究。
参考文献:[1]世界动物卫生组织.哺乳动物、禽、蜜蜂 A和B类病诊断试验和疫苗标准手册[M].农业部畜牧兽医局,译.北京:中国农业科学技术出版社,2002:197-206.[2]Ellis T M,Leung C Y,Chow M K,et al.Vaccination of chickens against H5N1 avian influenza in the face of an outbreak interrupts virustransmission[J].Avian Pathol,2004,33(4):405-412.[3]Garcia A,Johnson H,Kumar Srivastava D,et al.Efficacy of inactivatedH5N2 influenza vaccines against lethal A/chicken/Queretaro/19/95 infection[J].Avian Disease,1998,42,248-256.[4]Halvorson D A.Strengths and weaknesses of vaccines as a controltool[M]//Proceedings of the Fourth International Symposium on Avian Influenza.Athens Georgia,Swayne D E,Slemons R D,et :Animal Health Association,1998:223-227.[5]靳月生,姚学军,见满振,等.蛋鸡重组高致病性禽流感H5N1(Re-1+Re-4)二价灭活疫苗免疫效果的评价[J].中国畜牧兽医,2008,35(7):92-93.[6]NY/T769-2004.高致病性禽流感免疫技术规范[S].[7]陈坤永,翁良树,张祥解,等.种鸽免疫禽流感疫苗HI抗体水平消长规律的研究[J].养禽与禽病防治,2004(7):12-13.[8]何长生,朱良强,郑举,等.对重组禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1)在家禽免疫效果方面的调研[J].中国兽药杂志,2008,42(7):30-32.[9]刘超男,刘明,张云,等.H5N1亚型禽流感病毒的亚致病性研究[J].中国农业科学,2006(2):412-417.。