酶联免疫吸附试验(ELISA)法和免疫印迹试验(WB)两种方法检测HIV抗体的准确性研究
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化验室艾滋病检测流程制度
化验室艾滋病检测流程制度简要概括如下:
1.初筛检测:样本首先经过酶联免疫吸附试验(ELISA)、金标快速法
或化学发光法等高灵敏度筛查,检测HIV抗体。
结果阴性,可直接报告;若阳性,则需进一步确认。
2.确证试验:筛查阳性样本送至具备资质的实验室,通常为疾控中
心(CDC),采用免疫印迹(Western Blot)等更为精确的方法进行确证。
确证阳性,才可判定为HIV感染。
3.生物安全:涉及样本处理与运输均需遵循严格生物安全规范,专
人、专车、专用容器操作,以防交叉污染和生物危害。
4.隐私保护:阳性结果报告必须通过安全途径送达,严禁电话、网
络等非安全方式传递,确保患者隐私。
5.信息上报:医院接获确证阳性结果后,应立即通知医生及患者,
详细询问病史,填写相关表格,上报卫生部门。
6.后续咨询与转介:提供阳性患者心理支持和咨询服务,引导其进
行进一步的医疗管理和治疗。
整个流程强调准确性、安全性及对患者的尊重与关怀。
四种HIV抗体检测方法的对比分析高平【摘要】目的:采用化学发光法(CLIA)、乳胶层析法、酶联免疫法(ELISA)和免疫印迹法(WB)进行HIV抗体检测,探讨不同方法学的敏感性和特异性.方法:采用化学发光法对2016年12月—2017年10月门诊和住院患者19090例血清标本进行检测,筛查阳性标本根据《全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)》要求,再用ELISA法和乳胶层析法进行复检,如均有反应或一个有反应一个无反应,则送疾病预防控制中心(CDC)进行抗体WB试验.结果:化学发光法检测出的150例阳性标本中,乳胶层析法检出阳性96例,阴性54例;ELISA检出阳性99例,阴性51例;WB试验检出阳性105例,阴性45例;前三种方法与WB试验符合率分别为70%、91%和94%.结论:初筛方法均具有假阳性和假阴性,HIV抗体先筛查,后WB试验有利于提高HIV抗体检测结果的准确性.化学发光法检测人血清HIV具有较高的灵敏度,自动化程度高,能够及时为临床送检标本进行HIV筛选;乳胶层析法符合率较高,操作简单,检测时间快,可用于急诊等快速检测;ELISA法灵敏度和特异性均较高,可作为HIV批量筛查.【期刊名称】《临床医药实践》【年(卷),期】2019(028)005【总页数】4页(P369-371,375)【关键词】HIV抗体;化学发光法;乳胶层析法;酶联免疫法;免疫印迹法【作者】高平【作者单位】内江市第一人民医院,四川内江 641000【正文语种】中文【中图分类】R446艾滋病(AIDS)是由于感染人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的人类免疫功能受损的疾病,可通过性接触、血液及血制品和母婴垂直传播[1]。
近年来,在国际范围内传播和发病率呈上升趋势,在我国感染人数也在逐年增多。
由于艾滋病患者感染HIV后破坏人体内CD4+T淋巴细胞,使人体免疫力降低甚至丧失,最终患者机体在缺乏免疫保护下走向死亡。
因此,艾滋病的防治正成为全世界各个国家和民族所面临的严峻卫生问题和社会难题。
艾滋病抗体检测方法
艾滋病抗体检测方法是通过检测人体血液中是否存在艾滋病病毒(HIV)的抗体来确定是否感染了艾滋病病毒。
常见的艾滋病抗体检测方法包括:
1. 酶联免疫吸附试验(ELISA):此测试是最常用的艾滋病抗体检测方法之一。
它可以检测人体血液中是否存在艾滋病病毒抗体。
2. 免疫荧光抗体法(IFA):这是另一种检测艾滋病病毒抗体的方法。
它使用荧光标记的抗体来检测人体中的抗体。
3. 同时酶联免疫吸附试验(EIA)和免疫印迹分析(Western Blot):EIA是首先进行的筛选测试,然后使用Western Blot进行确认。
Western Blot可以检测特定的蛋白质,以确定是否感染了艾滋病病毒。
4. 快速抗体检测(Rapid Test):这是一种简单、快速的方法,可以在医疗机构外部进行。
这种测试通常使用血液、唾液或尿液作为样本,并且可以在30分钟内得到结果。
如果初步抗体检测结果为阳性,通常需要进行进一步确认测试,如多次重复抗体检测、核酸检测或抗原测定。
医生或专业机构应该进行解读结果并给出确诊。
测hiv有哪些方法
HIV检测是通过检测的人体中是否存在艾滋病病毒来判断是否感染HIV。
以下是常用的HIV检测方法:
1. ELISA检测:ELISA(酶联免疫吸附试验)是目前最常用和普及的HIV检测方法之一。
它能够检测到人体血液中的抗体反应,确定是否感染HIV。
2. 免疫印迹法(Western Blot):这种方法用于确认ELISA检测结果的,通过对阳性ELISA结果进行进一步的确认。
它可以检测血液中的有关艾滋病病毒的蛋白质。
3. 抗原检测:抗原检测可以直接检测体内的艾滋病病毒抗原,而不是检测人体的免疫反应。
抗原检测方法通常用于早期HIV感染的检测,因为在感染后早期,抗原会很快出现在血液中。
4. 核酸检测(PCR):核酸检测是一种能够检测到DNA或RNA的方法。
它可以通过检测血液中的病毒核酸来确认是否感染HIV。
PCR方法可以在感染后的早期就能够检测到病毒存在。
需要注意的是,这些方法都需要在专业的医疗机构进行操作,不能在家中进行。
如果有HIV感染的疑虑,请及时咨询医生或到专业机构进行测试和咨询。
酶联免疫吸附测定与酶联免疫印迹技术1. 引言酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,简称ELISA)和酶联免疫印迹技术(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,简称Western blot)是两种常用的免疫学实验技术。
它们在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用。
本文将对这两种技术进行详细介绍,并比较它们的优势和局限性。
2. 酶联免疫吸附测定(ELISA)2.1 原理ELISA是一种通过酶标记的抗体与待测物相互作用来检测目标分子的方法。
它主要包括固相吸附、特异性抗体结合、酶标记抗体结合和底物反应四个步骤。
首先,将待测物固定在微孔板上,形成固相吸附。
然后,加入特异性抗体与待测物结合。
接着,加入酶标记的二抗与特异性抗体结合,形成抗原-抗体-酶标记抗体复合物。
最后,加入底物反应,酶催化底物反应产生可测量的信号。
根据信号的强度可以定量测定待测物的浓度。
2.2 应用ELISA技术在生物医学研究和临床诊断中有广泛的应用。
它可以用于检测病原微生物、肿瘤标志物、激素、抗体等多种生物分子。
在临床诊断中,ELISA可以用于早期筛查、疾病诊断和疫苗效果评估等方面。
在研究中,ELISA可以用于分析蛋白质相互作用、药物筛选和基因表达分析等。
2.3 优势和局限性ELISA的优势在于其灵敏度高、特异性强、操作简单、结果可定量等特点。
它可以同时处理多个样本,适用于大规模实验。
此外,ELISA的结果可以通过光学密度或荧光强度来定量,结果可靠。
然而,ELISA也存在一些局限性。
首先,ELISA只能检测已知的目标分子,无法发现新的生物标志物。
其次,ELISA的结果受到固相吸附和抗体选择的影响,可能存在交叉反应和误差。
此外,ELISA对样本的处理和保存要求严格,操作不当容易导致误差。
3. 酶联免疫印迹技术(Western blot)3.1 原理Western blot是一种通过检测目标蛋白在蛋白电泳分离后的特异性抗体结合来定性和定量目标蛋白的方法。
测抗体的方法
1. 免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC):将标记有特定抗体的染色剂与组织样本中的目标抗原结合,通过显色或荧光等方式观察抗原的存在和定位。
2. 免疫荧光法(Immunofluorescence,IF):使用荧光标记的
抗体与组织样本中的抗原结合,通过荧光显微镜观察抗原的存在和定位。
3. 酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA):将目标抗原与固相载体结合后,使用特异性抗体进
行检测,通过底物的酶反应生成显色或荧光信号来定量测定抗体的含量。
4. 免疫印迹法(Western Blot,WB):通过将蛋白质样本经SDS-PAGE电泳分离后,将目标蛋白迁移到膜上,然后使用特异性抗体与目标蛋白结合,通过显色剂检测抗体和蛋白质的结合情况。
5. 流式细胞术(Flow Cytometry):将荧光标记的抗体与单个
细胞或细胞悬液中的目标抗原结合,通过流式细胞术仪器检测细胞的荧光强度和分布,分析抗体的亲和力和细胞表面蛋白的表达情况。
6. 中和试验(Neutralization Assay):用抗体与病原微生物进
行体外中和反应,观察抗体对病原微生物感染能力的抑制作用。
以上仅为常用的几种测量抗体的方法,具体的方法选择要根据研究目的和实验条件来确定。
HIV抗体检测及检测要点HIV(人类免疫缺陷病毒)是一种导致艾滋病的病原体。
为了及早发现感染者并采取相应的预防和治疗措施,HIV抗体检测成为了至关重要的手段。
本文将讨论HIV抗体检测的原理、方法以及检测要点。
一、HIV抗体检测的原理HIV抗体检测是利用抗体与抗原之间的特异性反应进行的。
一般情况下,人体在感染HIV后会产生针对该病毒的特异性抗体。
通过检测这些抗体的存在与否,可以确定个体是否感染了HIV。
二、HIV抗体检测的方法1. 酶联免疫吸附法(ELISA)酶联免疫吸附法是目前常用的HIV抗体检测方法之一。
该方法通过将HIV抗体和酶标记物反应,并利用酶的底物产生可见的颜色变化,从而确定抗体的存在与否。
2. 免疫荧光法(IFA)免疫荧光法是一种检测HIV抗体的高特异性方法。
它利用荧光标记的试剂与HIV抗体结合,并通过荧光显微镜观察荧光信号的存在与否。
3. 免疫层析法(IC)免疫层析法是一种便捷的HIV抗体检测方法。
该方法利用试纸条或膜片对样本中的抗体进行特异性的分离和检测。
三、HIV抗体检测的要点1. 检测时机HIV感染后,人体需要一定时间来产生抗体。
因此,在感染后的早期阶段进行抗体检测可能会得到假阴性结果。
通常建议在疑似感染HIV后的窗口期结束后再进行抗体检测,以确保结果的准确性。
2. 检测方法选择根据实际情况,可以选择不同的HIV抗体检测方法。
ELISA方法对大规模筛查和初筛适用,而IFA和IC方法则更适合用于确认检测结果。
3. 检测机构选择在进行HIV抗体检测时,选择正规、有资质的医疗机构或检测点进行更加可靠和准确的结果。
4. 遵循检测原则在进行HIV抗体检测时,应遵循检测的基本原则,包括保护个人隐私、知情同意和防止结果泄露等。
5. 配合其他检测方法HIV抗体检测虽然是常用的方法,但并不能独立诊断HIV感染。
如果初次检测结果呈阳性,应进一步进行其他确认性检测,如核酸检测等,以确保结果的准确性。
艾滋病检测方法有什么艾滋病这种传染病一般是通过血液啊,母乳啊或者是性传播的方式传染来的,得了这种疾病的患者一般是治愈率还是比较低的,那么我们从生活中是否也对这方面的疾病有所了解呢,多了解一些关于艾滋病的知识可以更好的进行了解,也可以减少疾病的发生,而艾滋病检测方法有什么呢,很多人都不知道,我们来了解一下啊。
一、酶联免疫吸附试验(ELISA)目前应用的ELISA法有8种之多。
它们的特异性和敏感性超过99%。
二、颗粒凝集法(PA)PA为快速、简便的一种筛选方法。
如属阳性,应经WB 证实。
PA不需任何特殊仪器,其结果用肉眼可判别。
全过程仅需5分钟。
缺点有假阳性,且价格昂贵。
三、快速试剂(一)人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体诊断试剂(胶体硒法)雅培人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂(胶体硒法)是用于体外,肉眼观察,定性的免疫分析,检测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体,用于帮助受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。
本品仅用于无偿献血员现场初筛及临床紧急情况的使用,本品检测阳性者,需进行进一步筛查确认。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金标快速诊断试剂InstantCHEKTM-HIV1+2是一种快速、简单、灵敏的检验方法,用以检测艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗体。
该方法适用于初筛检测,凡由该试剂测定为阳性者,需用另一种方法检测如ELISA或用蛋白印记法确定。
四、HIV-抗体确认实验免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEK HIVⅢ)、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。
国内常用的确认试验方法是WB。
(一_免疫印迹实验(westernblot,WB)是广泛用于许多传染病诊断的实验方法,就HIV的病原学诊断而言,它是首选的用以确认HIV抗体的确认实验方法,WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。
上面就是关于艾滋病检测方法了,是不是对大家都有所认识了呢,很多知识我们都是需要了解的,认识了这些我们就可以及时的预防,而且定期的去检查自己的身体,也是对自己的健康负责,有了好的身体才能有金钱和美好的生活。
艾滋病的病检测技术有哪些艾滋病的检测技术有哪些艾滋病,一个令人闻之色变的名词。
它是一种严重威胁人类健康的传染病,由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起。
及时准确的检测对于艾滋病的诊断、治疗和预防至关重要。
那么,目前都有哪些艾滋病的检测技术呢?首先,我们来了解一下酶联免疫吸附试验(ELISA)。
这是一种常见的血清学检测方法。
它的原理是利用酶标记的抗体与待检测样品中的 HIV 抗原或抗体发生特异性结合,然后通过检测酶的活性来判断结果。
ELISA 检测方法具有较高的敏感性和特异性,能够大规模筛查艾滋病病毒感染。
接着是免疫印迹试验(Western Blot,WB)。
它被认为是艾滋病检测的“金标准”。
在这个检测中,通过电泳将 HIV 蛋白分离,然后将其转移到膜上,再与患者的血清进行反应。
如果血清中存在 HIV 抗体,就会在膜上形成特定的条带。
WB 检测能够准确地确认 HIV 抗体的存在,但操作相对复杂,成本也较高。
快速检测试剂也是常用的检测手段之一。
这种检测方法操作简便、快捷,通常在 15 到 30 分钟内就能得出结果。
常见的有胶体金法和免疫层析法。
快速检测试剂适用于现场检测和初步筛查,比如在一些不具备复杂检测条件的基层医疗机构或紧急情况下使用。
核酸检测技术在艾滋病的诊断中也发挥着重要作用。
核酸检测主要是检测 HIV 的 RNA 或 DNA。
这种检测方法能够在感染后的早期就检测出病毒,大大缩短了检测的“窗口期”。
对于急性期感染、晚期艾滋病患者、婴儿感染诊断以及监测治疗效果等方面具有重要意义。
病毒培养法是一种直接检测病毒的方法,但由于其操作难度大、成本高、对实验条件要求苛刻,一般不作为常规的检测手段。
不过,在一些特殊的研究和疑难病例的诊断中,病毒培养法仍有其不可替代的作用。
除了以上这些实验室检测技术,还有一些基于唾液、尿液等样本的检测方法正在不断发展和完善。
唾液检测相对方便,患者的接受度较高。
尿液检测则具有无创、易于采集的优点。
酶联免疫吸附测定与酶联免疫印迹技术酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和酶联免疫印迹技术(Western blotting)是生物医学领域中常用的实验方法,用于检测和分析生物样本中的蛋白质。
首先,我们来介绍酶联免疫吸附测定。
ELISA利用抗体的高度特异性结合能力来检测样本中特定蛋白质的存在量。
ELISA的原理可以简单概括为以下几个步骤:首先,在试验板上固定一种已知抗原或抗体,形成特异性吸附层;接着,加入待测样本,样本中的目标蛋白质会与固定在板上的抗体结合;然后,加入与目标蛋白质结合的二抗与酶偶联物,形成免疫复合物;随后,加入底物,底物与酶发生反应产生颜色变化;最后,通过光谱仪或显微镜测量底物的颜色强度,从而确定目标蛋白质的存在量。
ELISA具有灵敏度高、特异性强、操作简便、样本量要求较小等优点,广泛应用于临床诊断、药物研发、生物学研究等领域。
例如,ELISA可以用来检测血液中的抗体,从而快速确诊某些传染病;还可以用于监测患者对药物治疗的反应情况。
接下来,我们来介绍酶联免疫印迹技术,即Western blotting。
Western blotting是一种通过检测特定蛋白质在混合蛋白质中的存在量和分子量的方法。
它可以检测蛋白质的表达、翻译后修饰和空间构象等信息。
Western blotting实验包括以下几个步骤:首先,将待测样品中的蛋白质经过SDS-PAGE电泳分离,然后将分离的蛋白质转移到聚丙烯酰胺凝胶膜上;接着,用一种与待测蛋白特异性结合的抗体与膜上蛋白结合;然后,加入与抗体结合的二抗,二抗通常与酶偶联,可以通过底物反应产生可见的色带;最后,使用影像系统或暗室摄影测量带上的色带强度,并进一步分析目标蛋白的分子量与表达量。
Western blotting技术具有高分辨率、能同时检测多个蛋白质、对蛋白质分子量和修饰提供直接信息等优点。
酶联免疫吸附试验(ELISA)法和免疫印迹试验(WB)两种方法检测HIV抗体的准确性研究
作者:邢采君熊凤玲
来源:《健康周刊》2017年第37期
【摘要】目的:研究酶联免疫吸附试验(ELISA)法和免疫印迹试验(WB)两种方法检测HIV抗体的准确性。
方法:使用ELISA法检测样本(5000例),对其中50例复测阳性的标本使用WB的方式进行临床检测,研究分析ELISA法与WB法之间的检测结果关系。
结果:50例复测阳性的标本使用WB的方式进行临床检测,共计15例阳性样本检出,阴性结果检出16例,19例不确定结果。
结论:为了有效提高HIV抗体的检测结果准确性,对于存在假阳性的筛查试验中,需要先筛查HIV抗体后再进行确证。
【关键词】酶联免疫吸附试验法;免疫印迹试验;HIV抗体;准确性
艾滋病在近年来具有十分高的发病率,并且,该病症的传染性极强,具有较广的传播范围;HIV感染一般在相对欠发达的地区中流行,血源性传播是HIV感染的主要途径之一,其中,临床输血是十分常见的HIV传播的常见途径,因此,为了有效保证临床输血的安全性,不断降低由于输血而造成的风险是十分关键的临床步骤;为了有效防止经血液传播途径而发生HIV感染,供血机构必须按照严格的标准进行流程实施,而为了有效将HIV感染患者诊断出来,进行试验筛查也是十分有必要的,但是就目前的筛查工作中,发生假阳性结果的概率依然较高,因此,大大增加了临床筛查的困难性。
检测人体标本中的HIV抗体浓度是目前检测HIV的基本方式,其中,酶联免疫吸附试验(ELISA)法和免疫印迹试验(WB)是前检测HIV抗体含量的常用方式,一般而言,ELISA是首选筛查HIV抗体的检测方式,而WB法是确证HIV抗体的确证试验方式;ELISA与WB法在临床检测中各自存在不同的优势性和缺点,本文主要研究酶联免疫吸附试验(ELISA)法和免疫印迹试验(WB)两种方法检测HIV 抗体的准确性;现将相关研究资料整理如下:
1 材料与方法
1.1 标本来源
选择医院的住院患者HIV抗体的血液标本进行筛查,选取时间在2016年9月~2017年9月期间,检测样本有5000例。
1.2检测试剂
初筛试验中使用由英科新创厦门科技有限公司所提供的成品试剂盒,使用抗HIV抗体-1/2 ELISA法;而复检试剂使用由北京金豪生物技术有限公司所提供的抗HIV抗体-1/2酶联免疫吸附试验盒,确证试验将其送往省疾病控制中心的HIV实验实进行确认。
1.3方法
第一次样本按照《全国艾滋病检测技术规范(2009版)》中的操作进行,检测采用ELISA法试剂盒进行,阴性结果代表抗-HIV抗体为阴性,反之为阳性,复查结果中同种试剂双孔的结果代表为阳性;复检采用ELISA法进行试剂盒检测,均由北京万泰生物技术有限公司、珠海丽珠生物技术有限公司所提供研究中的试剂盒;复检结果经2次后,发现一次为阳性但一次结果为阴性,则予以WB法确诊[1]。
1.4观察项目
研究分析ELISA法与WB法之间的检测结果关系。
2 结果
50例复测阳性的标本使用WB的方式进行临床检测,共计15例阳性样本检出,阴性结果检出16例,19例不确定结果。
详见表1、表2
3 讨论
在筛查HIV抗体的实验中,使用ELISA法出现假阳性反应的原因在于:(1)有些传染病病原体和HIV某些抗原决定簇之间发生了交叉反应,影响了实验结果的准确性[2]。
(2)有些标本本就存在污染现象,进而影响了检验最终结果,大大增加了检测结果假阳性率的发生率。
由此可见,HIV实验室人员必须要按照标本相关的流程进行标本采集和保存,对不合格的标本不应接受检测,以此在最大程度上降低发生假阳性率的风险率[3]。
据相关的研究资料显示,WB法具有极高的检测特异性,确证试验结果中显示的不确定结果在通常情况下与进展终末期、生物学假阳性期等因素有密切的相关性,而不确定结果中,WB法对筛查试验的判定还是会存在一定程度上的检测问题。
除此之外,导致检测结果呈现不确定的原因主要是:HIV早期感染与非特异反应,其中,主要以非特异反应所导致的例数最为显著。
在ELISA法检测的基础之上加用核酸检测,能大大提高HIV抗体检测的灵敏度,可以将窗口期有效缩短,以此提高检测的准确性[4]。
此次研究结果显示,50例复测阳性的标本使用WB的方式进行临床检测,共计15例阳性样本检出,阴性结果检出16例,19例不确定结果;上述研究结果与吴斌学者在《中国皮肤性
病学杂志》杂志中所发表的《金华市HIV抗体筛查试验阳性样本确证结果分析》[5]里研究结论相似,该研究将7291例样本进行了酶联免疫吸附试验(ELISA)法和免疫印迹试验(WB)方法检测,发现HIV抗体先筛查后确证能够大大提高HIV抗体检测结果的准确性;由此可见,为了有效提高HIV抗体的检测结果准确性,对于存在假阳性的筛查试验中,需要先筛查HIV抗体后再进行确证。
参考文献
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[2] 周以华.HIV抗体初筛试验阳性结果分析[J].国际检验医学杂志,2016,37(17):2475-2476.
[3] 张明洪,余倩.研究免疫印迹试验检测HIV抗体不确定结果与确证策略[J].预防医学情报杂志,2015,31(8):627- 630.
[4] 马永娟,王红,周迪.HIV抗体检测确证试验结果分析[J].黑龙江医药科学,2016,39(4):79-80.
[5] 吴斌.金华市HIV抗体筛查试验阳性样本确证结果分析[J].中国皮肤性病学杂志,2016,30(11):1188-1189.。