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瘦肉精快速检测方法
瘦肉精（俗称瘦肉精）是一种被禁止在食品中使用的药物残留物，它用于提高牲畜肌肉生长速度和提高养殖效益。
由于其严重的健康风险，瘦肉精的使用和检测成为全球范围内食品安全的关注焦点之一。
为了保障食品中瘦肉精残留量的安全，各国纷纷制定了严格的检测标准，并研发了多种快速检测方法。
以下是一些常见的用于快速检测瘦肉精残留的方法：
1. 酶联免疫吸附法（ELISA）：该方法利用酶标技术，在试剂盒中固定抗体，使其与瘦肉精结合，形成固定复合物。
通过比色或发光的底物反应，来间接检测瘦肉精的存在。
该方法具有操作简单、快速、灵敏度高等优点。
2. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法利用高效液相色谱仪分离和定量瘦肉精。
通过样品的提取、净化和色谱分析等步骤，可以达到高灵敏度和高精确度的检测效果。
该方法需要使用复杂的设备和试剂，操作相对复杂，但具有准确度较高的优点。
3. 荧光免疫分析法（FIA）：该方法集成了免疫学和荧光检测技术，具有高灵敏度、快速性和自动化程度高的特点。
它利用荧光素标记的抗体与瘦肉精结合，并通过荧光检测器来定量测定瘦肉精的含量。
总的来说，这些快速检测方法都在不同程度上提高了瘦肉精检测的速度和准确度。
然而，由于检测方法和设备的不同，结果
可能有所差异，因此在实际应用中需要选择合适的方法，并参照相关标准制定严格的监管措施。
这样才能保证食品中瘦肉精残留量的安全，保障消费者的健康。
品检中的兽药残留检验方法兽药残留是指兽药在兽体内或畜禽产品中残留的化学物质。
合理使用兽药可以预防和治疗动物疾病，提高畜禽养殖效益。
然而，如果兽药残留超过安全标准，可能对消费者健康造成潜在风险。
因此，兽药残留的检验方法在品检中显得尤为重要。
兽药残留检验方法是确定畜产品中兽药残留水平的关键步骤。
本文将介绍一些常用的兽药残留检验方法，并讨论其原理和应用。
高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS）是目前应用广泛的兽药残留检验方法之一。
该方法基于高效液相色谱（HPLC）和质谱联用仪（MS），通过对样品进行分离和定性分析，可以快速、准确地检测多种兽药残留物。
HPLC-MS方法具有高选择性、高灵敏度和高分辨率的特点，适用于不同类型的兽药残留物检测。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于免疫学原理的兽药残留检测方法。
该方法利用特异性抗体与兽药残留物结合，形成特异性抗原-抗体复合物，并通过酶作用产生颜色反应，从而定量检测兽药残留物的含量。
ELISA方法具有简单、快速、便捷的特点，适用于大规模的兽药残留检测。
气相色谱-质谱联用法（GC-MS）也是常用的兽药残留检验方法之一。
该方法利用气相色谱和质谱联用仪对样品进行分离和定性分析，可以检测挥发性兽药残留物和半挥发性兽药残留物。
GC-MS方法具有高分辨率、高灵敏度和高准确性的特点，适用于多种兽药残留物的分析。
快速液相色谱法（UPLC）也是兽药残留分析中常用的检测方法之一。
与传统的液相色谱相比，UPLC具有更高的分离效率、更短的分析时间和更低的溶剂消耗量。
因此，UPLC是一种高效、准确和经济的兽药残留检验方法。
综上所述，兽药残留检验方法在品检中起着重要的作用。
通过合理选择和应用适当的检验方法，可以快速、准确地检测畜产品中的兽药残留物。
这有助于确保畜产品的质量安全，保护消费者的健康。
未来，随着科技的进步，兽药残留检验方法还会不断发展和完善，以应对不断变化的兽药种类和畜产品需求。
酶联免疫吸附法检测鸡蛋中三聚氰胺的残留作者：赵庆文等来源：《现代农业科技》2010年第08期摘要将三聚氰胺与琥珀酸酐反应以合成半抗原,再采用混合酸酐法合成人工完全抗原,然后免疫新西兰白兔获得针对三聚氰胺的特异性抗体(IC50为42 ng/mL),以此抗体为核心建立了检测三聚氰胺的间接竞争酶联免疫吸附检测法,检测限为8.5 ng/mL。
鸡蛋样品以氨化乙腈提取,正己烷去脂,微孔滤膜过滤后检测;在空白样品中添加不同浓度的三聚氰胺,回收率范围为88.9%～96.1%,变异系数小于11.6%。
表明:酶联免疫吸附法,快速、简便且灵敏,可作为鸡蛋或其他动物性食品中三聚氰胺残留的常规筛选方法。
关键词三聚氰胺;酶联免疫检测法;鸡蛋;残留中图分类号TS251.7文献标识码A文章编号 1007-5739(2010)08-0361-03DeterminationofMelamineResiduesinEggswithEnzymeLinkedImmunosorbentAssayZHAO Qing-wen 1XU Feng-min 2ZHONG Yong-ben 3ZHANG Hui-cai 3WANG Jian-ping 3 *(1 Pingquan Animal Hygiene Control Station,Pingquan Hebei 067500; 2 Luanping Agriculture Herding Bureau;3 College of Animal Science and Technology,Hebei Agricultural University)AbstractIn this paper,the hapten of melamine was synthesized by coupling melamine with succinic anhydride,and the immunogen was prepared with mixed anhydride method. New Zealand rabbits were immunized with the immunogen to obtain the specific antibody toward melamine(IC50 42 ng/mL). Then,enzyme linked immunosorbent assay based on the antibody was developed with a limit of detection at 8.5 ng/mL. Egg samples were extracted with ammoniac acetonitrile,defatted with hexane and filtered with millipore filter to be determined by the method. Recoveries from the melamine fortified blank samples were in the range of 88.9%～96.1% with coefficients of variation lower than 11.6%. The result showed that ELISA could be the routine method to determinate and screen the resdues in eggs and any other aninal food rapidly,simply and sensitivey.Key wordsmelamine;enzyme linked immunosorbent assay;egg;residue三聚氰胺(Melamine,MA)是建筑业中常用的一种防火化工材料,常用于制造三聚氰胺-甲醛树脂。
畜禽产品兽药残留的免疫学检测方法探讨作者：张思瑜来源：《畜牧兽医科学》 2018年第10期畜禽产品兽药残留的免疫学检测方法探讨张思瑜（广东省佛山市禅城区祖庙街道农产品检测和动物防疫检疫站，佛山 528000）摘要：畜禽和人类在大自然界中相互依存生活，构成了一个完整的生物圈。
越来越多的人们关心畜禽产生问题，这其中产品兽药残留问题便得到了重视，兽药残留检测方法也逐渐增多。
文章介绍了畜禽产品中兽药残留的主要免疫学检测方法，包括酶联检测法、胶体检测、荧光的检测、化学发光的检测、放射免疫检测分析及生物芯片检测技术，对每种方法都做了详细的说明解释，为畜禽产品中兽药残留的问题提供一些参考解决方法。
关键词：畜禽；免疫学；兽药残留；检测方法中图分类号：S859.84 ???文献标识码：B ???doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2018.10.0990?引言在我国社会发展的进程中，由于畜禽产品用药制度不完整性，及其一些畜禽养殖机构检测监管体系比较薄弱，使得畜禽产品兽药的滥用现象非常严重，这也使得畜禽产品中兽药的后发性疾病常有发生。
在这些兽药残留中的产生的患癌、兽体畸形化等副作用引起了我国乃至全世界的普遍关注。
文中着重介绍了畜禽产品中兽药残留的主要免疫学检测方法，为畜禽产品中兽药残留的问题提供一些参考解决方法[1]。
1?畜禽产品药残留检测方法的特点1.1?产品种类多、其中所含有的成分比较复杂多样畜禽产品中包括：肉、蛋白质、牛奶等许多制作品。
畜禽产品种类繁多，检测的过程中清理不充分导致检测过程中干扰性较大。
1.2?检测过程中有害物的成分较多畜禽产品兽药残留是在养殖人在养殖畜禽产品的过程中，为了省下费用，而去使用人使用的药品，这些药品在畜禽产品内不能进行完整的新陈代谢而滞留在畜禽产品体内。
现如今，我国畜禽产品中残留比较严重的药品类有抗生素，镇静产品和激素类等许多类型，而这些所含有的有害物成分较多，会对检测过程有一定的干扰[2]。
兽药残留检测(1)兽药残留检测是对肉类、蛋类及奶类产品中的兽药残留进行快速、准确检测的一种方法。
随着现代畜牧业的发展，兽药的使用量也在不断增加，但大量滥用兽药会对人体健康造成潜在的威胁，因此兽药残留检测显得尤为重要。
一、兽药残留的危害1.1 对人体健康的危害兽药残留是指在养殖动物生产中，通过投药、混合饲料等方式使用的兽药，由于代谢不完全，部分成分会留存在动物体内，进入到肉类、蛋类、奶类等食品中，对人体健康造成危害。
长期食用含有兽药残留的肉类、蛋类及奶类产品，可能导致肝、肾等器官功能受损，繁殖能力下降、致畸和肿瘤，严重影响人体健康。
1.2 对环境的危害兽药的大量使用会造成环境的污染，如污染水源和土壤，影响环境质量和生态平衡。
二、兽药残留检测的意义2.1 加强养殖管理通过定期进行兽药残留检测，可以追踪肉类、蛋类、奶类产品的兽药残留情况，及时发现问题并采取回收或加强养殖管理措施，减少兽药残留的风险。
2.2 保障人体健康安全兽药残留检测能够确保产生的肉类、蛋类、奶类产品符合食品安全要求，保障人体健康安全。
2.3 促进出口贸易在国际贸易中，兽药残留检测已成为重要的标识。
只有通过合法的兽药使用和科学的检测才能满足国际市场对食品安全和质量的要求，增强我国在国际市场上的竞争力和优势。
三、兽药残留检测常用方法3.1 高效液相色谱法高效液相色谱法是目前常用的兽药残留检测技术，其准确性高，可同时检测多种兽药及代谢物。
3.2 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法是利用抗体特异性识别兽药残留的检测方法，其检测速度快，同时具有高灵敏度、高特异性和高重复性等优点。
3.3 质谱法质谱法是一种高灵敏度的检测方法，可以检测到极小量的兽药残留，具有高度准确性和可靠性，但成本较高。
四、兽药残留检测的应用前景随着科技的不断进步和消费者对食品安全要求的提高，兽药残留检测技术也在不断的完善与发展。
未来兽药残留检测技术将更加普及化、快速化、高效化，为食品安全的保障提供更科学、更可靠的技术手段。
畜产品中常用兽药残留危害及检测方法兽药残留对人体健康的危害有多个方面。
首先，兽药残留可能导致抗药性菌株的产生。
长期暴露于兽药残留的情况下，细菌、寄生虫等会逐渐形成抗药性，从而降低了抗生素的疗效。
其次，兽药残留可能导致人体免疫力下降。
人类消费含有兽药残留的畜产品后，兽药残留会进入人体，影响人体的免疫系统，使身体对其他疾病产生抵抗力下降。
此外，一些兽药残留还可能对人体的内分泌系统产生影响，导致激素失衡。
目前，针对兽药残留的检测方法主要包括生化方法、免疫学方法和分析化学方法。
生化方法是通过测定畜产品中特定兽药的生物活性来进行检测。
常用的方法包括抗生素菌落呈阴性检测法、抗生素抑菌法等。
这些方法通过将畜产品与感受器混合，观察感受器是否发生生理变化，从而判断兽药残留是否超标。
免疫学方法是通过检测畜产品中与兽药相关的抗体或免疫反应来进行检测。
常用的方法有ELISA(酶联免疫吸附测定法)、免疫层析法等。
这些方法通过检测样本中抗体和兽药之间的免疫反应，来判断兽药残留是否超标。
分析化学方法是通过分析畜产品中兽药的化学成分来进行检测。
常用的方法有气相色谱法、液相色谱法等。
这些方法通过将畜产品中的兽药提取出来，然后使用化学试剂进行分析，从而判断兽药残留是否超标。
综上所述，畜产品中常用兽药残留对人体健康构成潜在风险。
为了保证畜产品的质量安全，必须使用科学合理的方法进行兽药残留的检测。
目前生化方法、免疫学方法和分析化学方法是常用的检测方法。
这些方法在实际应用中，可以互相结合，提高检测的准确性和可靠性。
未来的研究还可以进一步改进和发展更加高效和灵敏的兽药残留检测方法，确保畜产品的质量安全。
鸡蛋中兽药残留的检测方法及其防治措施
为了确保食品安全，监测和控制鸡蛋中兽药残留成为一项重要任务。
下面将介绍鸡蛋中兽药残留的检测方法及其防治措施。
检测方法：
1. 高效液相色谱法：该方法是目前常用的鸡蛋中兽药残留检测方法之一。
通过样品制备、色谱分离和检测器测定，可以快速、准确地检测出鸡蛋中的兽药残留成分。
2. 气相色谱法：该方法适用于检测挥发性兽药的残留。
将样品经过处理后，用气相色谱仪进行分离和检测，可以得到准确的分析结果。
3. 酶联免疫吸附测定法：该方法基于酶标记的抗体与兽药残留物结合反应产生颜色变化，通过光度计测定颜色的变化程度，可以得到兽药残留物的浓度。
防治措施：
1. 加强养殖管理：合理使用兽药，按照兽药的使用说明和剂量进行使用，避免过度使用或滥用兽药。
养殖过程中要注意饲料和水源的卫生安全，避免污染饲料和水源。
2. 定期监测：建立完善的兽药残留监测机制，定期对鸡蛋进行兽药残留的检测，及时发现问题，并采取相应的措施进行处理。
3. 完善法律法规：加强对鸡蛋中兽药残留的监管，制定相关的法律法规，对违规行为进行严厉处罚，提高对养殖企业和个人的违法成本，增加违法的风险。
4. 提高消费者的食品安全意识：加强对消费者的食品安全宣传教育，提高消费者的食品安全意识，增强他们的选择能力，选择没有兽药残留的鸡蛋。
对于鸡蛋中兽药残留的检测方法可以通过高效液相色谱法、气相色谱法和酶联免疫吸附测定法进行检测。
为了控制和防治兽药残留，需要加强养殖管理、定期监测、完善法律法规和提高消费者的食品安全意识。
这些措施的实施将有助于保障鸡蛋质量和食品安全。
食品安全问题已经成为全球关注的焦点问题之一。
近年来,兽药残留致使食物中毒的报道屡见报端,严重损害了人们的健康，而且造成了巨大的经济损失。
传统的检测方法主要采用高效液相色谱（HPLC ）、气相色谱一质谱法（GC-M S ）等分析法检测兽药残留，需要昂贵的仪器设备和专业人员，费时、费力、成本高，难以在基层推广。
酶联免疫吸附试验（ELISA ）具有操作简便、灵敏度高、样品容量大、仪器化程度和分析成本低的优点，已成为目前畜产品药物残留检测中使用最普遍的方法之一，几乎所有重要的畜产品药残检测都已建立或试图建立ELISA ，如“瘦肉精”、莱克多巴胺、磺胺类、沙丁胺醇等。
尽管酶联免疫吸附试验具有操作简便的优点，但在实践中很容易出现各种各样的问题，影响因素较多，易出现假阴性、假阳性结果等缺点。
现将常出现问题的可能原因和解决方法以及影响因素作如下探讨。
一、酶联免疫吸附试验原理ELI SA 方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。
此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。
因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。
此种显色反应可通过ELISA 检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA 方法成为一种既特异又敏感的检测方法。
二、常出现问题的可能原因及解决方法目前酶联免疫法检测用试剂盒种类繁多，有国外进口的，有国内自行研制生产的，如盐酸克仑特罗的检测用试剂盒就有德国拜发、美国IDS 、英国朗道、北京望尔、杭州迪恩等。
如何在众多的品牌中选择既能满足检测要求又价格低廉的试剂盒是一个问题。
在实际检测中可以根据最低检测限、回收率、交叉反应率、变异系数、标准曲线图谱及数据进行选择。
畜禽产品兽药残留的免疫学检测方法探讨作者：苏茂来源：《南方农业·下旬》2016年第04期摘要随着人们对畜禽产品兽药残留问题的日益重视，兽药残留检测方法逐渐增多。
介绍畜禽产品中兽药残留的主要免疫学检测方法，包括酶联免疫法、胶体金检测技术、荧光定量检测、化学发光检测、放射免疫分析法及生物芯片检测技术，对每种方法特点及应用现状做一简介。
希望为兽药残留检测的深入研究提供一些参考。
关键词畜禽产品；兽药残留；免疫学检测方法中图分类号：S859.84 文献标志码：B 文章编号：1673-890X（2016）12--02兽药是畜禽生成中必不可少的一部分，能够降低发病及死亡率，提高养殖效益。
但随着兽药种类及数量的持续上升，兽药滥用现象日趋严重。
兽药在畜禽体内持续积累造成了兽药残留，残留超标会使消费人群中毒、过敏等；同时，也会引起耐药性、生态环境毒性等其他问题[1]。
近年来，因兽药残留问题导致的食品安全信任危机逐步加剧，使之成为制约畜牧业发展的重要因素。
兽药残留的控制离不开检测标准的制定及检测技术的发展。
免疫学检测技术以抗原抗体的结合为基础，具有特异性强、灵敏度高、筛选速度快、操作简单等特点。
随着免疫学技术的日趋完善，免疫学检测方法在众多兽药残留检测手段中脱颖而出，其应用越来越广泛。
本文就近年来用于兽药残留的免疫学手段做一简要综述，以期为兽药残留检测提供参考。
1 酶联免疫测定法（ELISA）ELISA方法是一种将抗原-抗体特异性反应与酶高效催化反应相结合的检测方法，是酶免疫测定法中应用最广的一种方法，具有操作简单、灵敏度高、批量检测等优势。
检测时首先将抗原或抗体吸附于固相载体表面，后加入待测抗体或抗原，再加入酶标记的抗原或抗体，最后通过底物显色生成有色物质，根据吸光值对样品进行定性及定量分析。
该方法对动物产品中的磺胺类、四环素类、己烯雌酚、苯巴比妥、氯霉素和黄曲霉素等兽药残留具有高灵敏度及准确度[2]。
自ELISA方法首次用于兽药残留检测至今几乎所有常用兽药均建立了酶联免疫检测系统，大部分已应用于兽药残留的快速检测中。
悬浮芯片法与常规酶联免疫吸附法检测3种兽药残留的比较作者：刘楠苏璞高志贤朱茂祥杨陟华潘秀颉晁福寰【摘要】建立氯霉素，克伦特罗和雌二醇 3种兽药残留同时检测的悬浮芯片法。
通过将3种兽药的BSA蛋白结合物偶联于悬浮芯片的固相载体——聚苯乙烯荧光微球上作为检测探针，采用间接竞争法，在液相反应体系中，3种小分子兽药抗原和微球上的兽药结合物共同竞争液相中各自特异性的生物素化单抗，再加入藻红蛋白标记的链霉亲和素，反应后检测获得荧光信号，绘制出3种兽药残留检测的标准曲线。
同时进行3种兽药的常规酶联免疫吸附法标准曲线的测定。
在检测技术、检出限、检测区间、特异性、盲样测定和多元分析等方面对两种方法进行比较。
除了特异性外的其它指标的比较中，悬浮芯片法均具有明显优势。
两种方法的特异性检测具有良好的一致性。
高通量悬浮芯片技术，具有操作简单、灵敏快速和成本低廉等优点，为多种兽药残留的快速检测提供了新方法。
【关键词】悬浮芯片，酶联免疫吸附法，残留，微球，中位荧光强度值Abstract A novel suspension array technology was established for the detection of three kinds of veterinary drug residues: chloramphenicol, clenbuterol and 17βestradiol. The three conjugates in which veterinary drugs coupled with BSA were immobilized on the solid carrier of the suspensionmicroarray polystyrene fluorescent microspheres/beads as detective probes. Indirect competitive technology was employed. Competitive reactions between the veterinary drugs in the aqueous phase and the veterinary drugs BSA conjugates on the beads for coupling with their complimentary specific biotinylated monoclonal antibodies were carried out. And then, straptavidin phycoerythrin was added for coupling and the fluorescent signals were captured. Afterwards the detective standard curves were plotted. The regular ELISA standard curves of the three veterinary drugs were also plotted. Comparison between suspension array and regular enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) was in the respects of the detective technology, the detection limits, the detective ranges, the samples detection and the multi analysis. Suspension array technology is distinct advantageous except for specificity. There was well consistent performance between the two methods. The high throughput suspension array provides a novel method for multi analysis of veterinary drugs with simple operation, sensitive, rapid and low costing.Keywords Suspension microarray, Enzyme linked immunosorbent assay, residue, microspheres beads, median fluorescent intensity1 引言近年来，食品安全已成为社会共同关注的公共卫生问题，而兽药残留成为食品安全监管的重要问题。
兽药残留如克伦特罗(clenbuterol, CL)、氯霉素(chloramphenicol, CAP)和雌二醇 (17βestradiol, E2)的滥用和食用可导致多种健康损害[1～6]。
加强兽药残留检测分析是监管和控制兽药残留的重要手段。
因此，简单、快速和灵敏的微痕量检测技术的研究和创新尤为重要。
目前，酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)[7,8]是兽药残留的主要检测方法之一具有简单、快速、灵敏度高和特异性强等诸多优点[9]。
悬浮芯片技术是一种多功能的液相芯片分析平台，既具有固态片膜芯片的高通量特性，又具有操作简便、重复性好、灵敏度高等优点。
目前，对该技术的研究多集中于大分子蛋白质和核酸的检测[10～12]，并未见应用悬浮芯片同时检测多种兽药CAP、CL和E2的报道。
本研究采用悬浮芯片法和常规ELISA法对3种兽药进行同时检测，并在灵敏度、特异性、检出限等方面进行比较。
2 实验部分2.1 仪器和试剂Bio Plex悬浮系统，Model 680型酶标仪(美国Bio Rad公司)；MALDI TOF MS REFLEXⅢ型质谱仪(德国Bruker公司)，DU530型紫外可见分光光度计 (美国Beckman公司);6930型冷冻离心机(日本Kubota公司)；MS3型旋涡混匀器(德国IKA公司)，YM10过滤柱(孔径1.2 μm，美国Millipore公司)，Costar96孔酶标板 (美国Corning公司)；日立S4500型扫描电镜 (日本Hitachi公司)。
3种不同编码的荧光微球(beads，Φ=5.6 μm)和蛋白氨基偶联试剂盒（包括激活缓冲液和储备缓冲液）购自美国Bio Rad公司;CAP 单克隆抗体和E2单克隆抗体(美国Biodesign公司)；CL单克隆抗体(英国Abcam公司)；3种单抗的生物素化由本实验室完成；CAP、CL、E2、EDC、Sulfo NHS、沙丁胺醇、莱克多巴胺、N,N二甲基甲酰胺(DMF)、邻苯二胺(OPD)和E2BSA结合物(美国Sigma公司)；链霉亲和素藻红蛋白(Straptavidin phycoerythrin, SA PE，美国Invitrogen公司)；BSA(德国Roche公司)； CAP BSA和CL BSA为本实验室合成。
其它试剂均为国产分析纯。
2.2 实验方法2.2.1 悬浮芯片检测微球的制备参照试剂盒说明书，取3种荧光微球 (1.25×107 个/mL)，磷酸盐缓冲液 (PBS) 重悬后，加入到激活缓冲液中，并立即加入新鲜配制的偶联试剂EDC和Sulfo NHS(浓度均为50 g/L)，室温下搅拌20 min使其活化；活化后，分别加入3种兽药的BSA结合物5 μg，并用PBS缓冲液（pH 7.4）定容至500 μL，室温下中速旋涡振荡混匀2 h，14000 g离心4 min，弃去上清液，封闭，清洗，加入储备缓冲液， 4 ℃储存。
上机进行偶联确证，以便用于下一步测试。
2.2.2 3种兽药的悬浮芯片多元分析标准曲线的测定实验采用间接竞争法，在96孔反应板的每个反应孔中分别加入优化后的3种靶标物对应的生物素化单抗5、1和16 ng，分别将CAP、CL和E2的标准品(以下涉及到3种兽药均按此顺序)按照5×、5×和3×梯度分别稀释成7个梯度加入。
将3种荧光微球等比例混合，每孔加入3种荧光微球各2000个，并用PBS补足至50 μL/孔，同时再各准备一个不加标准品的阳性对照孔。
37 ℃中速漩涡振荡2 h，使荧光微球上的兽药BSA结合物与溶液中相应的标准品共同竞争生物素化的单抗，然后加入1∶100的SA PE 50 mL/孔，37 ℃中速振荡反应30 min。
悬浮芯片读取每孔100个荧光微球，获得中位荧光强度值(MFI)。
以各种靶标标准品的浓度为X轴，以检测得到的MFIs为Y轴，绘制3种兽药小分子的悬浮芯片检测标准曲线。
2.2.3 3种兽药的常规ELISA标准曲线的测定采用间接竞争法[13～15]，在酶标板上包被小分子兽药的BSA结合物，以方阵滴定法筛选和优化3种兽药常规ELISA的包被原量(分别是2、0.2和0.25 μg)和单抗工作浓度 (稀释度分别为1∶80000、1∶20000和1∶80000)，确定反应条件后，选择3种兽药标准品的浓度，绘制各自的标准曲线。
2.2.4 两种方法对3种兽药残留的特异性测试准备3组沙丁胺醇、莱克多巴胺、庆大霉素和红霉素测试品，终浓度达到50、 1250和31250 ng/L，每个浓度平行做3个样，同时准备一个阳性对照样，悬浮芯片读数并与阳性对照样比较。
以交叉反应率(CR%)测试常规ELISA检测的特异性。
2.2.5 3种兽药盲样的检测比较准备3个浓度的3种兽药盲样，交由测试者进行检测，每个盲样平行测试3次。
根据得到的标准曲线计算盲样的浓度，并与实际浓度进行比对。
3 结果与讨论3.1 悬浮芯片法对3种兽药检测标准曲线的测定按优化的比例加入相应的抗体和SA PE，使反应充分进行，可省去真正的悬浮芯片反应所需的抽滤步骤。
因此，检测更加简单快速。
在优化条件下，绘制标准曲线方程（见图1和表1）。
由于每次检测取100个荧光微球，每个荧光微球都有1个独立的检测值，也即每个样品 (包括标准品)被重复测试了100次，样本量有足够的代表性。
由于E2难溶于水，加入少量DMF可增加其溶解度，实验发现，抗体活性并未受影响。
CAP、CL和E2悬浮芯片的检测区间分别为50～6.25×105 ng/L, 56～7.81×105 ng/L和1×103～7.29×105 ng/L; 它们的检出限分别为50、56和1000 ng/L，检测范围跨2～4个数量级。
