真菌的微生物检验

第七章食品中真菌的检验（酵母菌和霉菌的检验）目的要求：掌握食品中霉菌、酵母菌总数的测定方法重点难点：菌落计数课时安排：2教学过程：一、检验程序检样→处理→稀释→平板分离培养→菌落计数→报告二、操作要点（一）采样1、粮食(包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮)样品的采集，可根据粮囤或粮垛的大小和类型，分层定点取样，一般可分三层五点，或分层随机采取不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检。

小量存粮可使用金属小勺采取上、中、下各部位的混合样品。

2、海运进口粮的采样：每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如船仓盛粮超过10000t，则应加采一个样品。

必要时采取有疑问的样品送检。

3、谷物加工制品(包括熟饭、糕点、面包等)、发酵食品、乳及乳制品以及其他液体食品，用灭菌工具采集可疑霉变食品250g，装入灭菌容器内送检。

（二）样品处理（稀释）1、以无菌操作称取检样25g(或25mL)，放人含有225mL灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液。

2、用灭菌吸管吸取1∶10稀释液10mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。

3、取1mL1∶10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1∶100稀释液。

（三）培养倒置于25～28℃温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。

（四）、计数报告选取菌落数10～150之间的平板进行计数。

（稀释度选择和菌落报告方式参考菌落总数的测定）小结：主要介绍了食品中酵母菌和霉菌总数的测定方法思考题：列表说明霉菌、酵母菌数的测定与菌落总数的测定有什么相同的地方和不同的地方。

深部感染真菌种类鉴别的微生物检验白色假丝酵母菌通常存在于人的口腔、上呼吸道、肠道和阴道黏膜上，当机体发生正常菌群失调或抵抗力降低时，可引起各种念珠菌病。

1.1 生物学特性白色假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径3～6μm。

革兰阳性，着色不均匀。

出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。

1.2 微生物检验(1)标本直接检验1)直接镜检取脓汁、痰和局部炎性分泌物直接涂片，革兰染色后镜检。

显微镜下见到革兰阳性、圆形(或卵圆形)菌体或孢子及假菌丝，即可确认假丝酵母菌感染。

2)抗原检测取病人血清做ELISA、免疫印迹等法检测白色假丝酵母菌抗原。

3)核酸检测用PCR法将假丝酵母菌DNA分子扩增后以分子探针检测，具有较好的敏感性和特异性。

(2)分离培养与鉴定1)普通培养将标本接种于沙氏培养基上25℃或37℃培养1～4天后，培养基表面可出现奶油色类酵母型菌落。

镜检可见假菌丝和芽生孢子。

2)芽管形成试验将假丝酵母菌接种于0.2～0.5ml人或动物血清中，37℃孵育1.5～4h，镜检观察有无芽管形成。

白色假丝酵母菌可形成芽管，但并非所有假丝酵母菌都形成芽管，其他假丝酵母菌一般不形成芽管。

试验时应设置阴性对照(热带假丝酵母菌)和阳性对照(白色假丝酵母菌)。

3)糖同化或发酵试验假丝酵母菌，凡能发酵某种糖，一定能同化该种糖，故只需做那些不被发酵糖的同化试验。

将培养物接种于糖发酵管，25℃孵育，一般观察2～3天，对不发酵管或弱发酵管可延长至10天或2～4周。

同化试验所有的基础培养基含有(NH4)2 SO4、KH2PO4、MgSO4?7H2O、CaCl2?2H2O、NaCl和酵母浸膏，试验时分别加入各种糖。

同时以葡萄糖和基础培养基作对照。

观察结果时要观察有无酵母生长或液体培养基是否变混浊。

2 热带假丝酵母茵热带假丝酵母菌广泛分布于自然界，在人体表和外界相同的腔道中也存在，它可引起皮肤、黏膜和内脏假丝酵母菌病，而且其产生的毒素可引起过敏反应及组织损伤。

常用的微生物检验方法1. 菌落计数法：通过将微生物样品接种在固体培养基上，经过一定时间的培养，形成可见的菌落，通过计算菌落数量来估计微生物浓度。

这种方法适用于细菌和真菌的定量分析。

2. 涂片染色法：将微生物样品涂在载玻片上，经过固定、染色、清洗等步骤，可以在显微镜下观察到微生物的形态和结构。

这种方法常用于细菌的形态观察和分类鉴定。

3. 荧光染色法：利用荧光染料对微生物细胞进行染色，通过荧光显微镜观察。

荧光染色法具有灵敏度高、分辨率高、专一性强等优点，适用于微生物快速检测和定量分析。

4. 核酸分子检测法：通过提取微生物的核酸（DNA或RNA），利用聚合酶链式反应（PCR）等分子生物学技术进行扩增、检测和分析，可实现微生物的定性和定量检测。

这种方法具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等优点。

5. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：通过检测微生物特异性抗原或抗体，实现微生物的定性和定量检测。

ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，广泛应用于微生物感染病的诊断和监测。

6. 生物发光法：利用微生物产生的生物发光反应进行检测，可以实现微生物的快速定性和定量分析。

生物发光法具有灵敏度高、检测速度快、可线性范围宽等优点，适用于对微生物污染的快速检测。

7. 侵袭性检测法：通过无菌操作将微生物接种至实验动物体内，通过观察动物的病理变化和死亡情况来评价微生物的毒力和致病性。

这种方法适用于对微生物的生物学特性进行研究。

8. 培养法：通过将微生物样品接种在适宜的培养基中，进行一定时间的培养，通过观察培养物的生长情况和变化来判断微生物的种类和数量。

这种方法适用于多种微生物的检测和鉴定。

检验科常见病原微生物检测方法在检验科工作中，常见的病原微生物检测方法是非常重要的。

通过准确、快速地检测出病原微生物，可以帮助医生进行更精准的诊断，从而有效地指导治疗措施。

本文将从细菌、病毒和真菌三个方面介绍检验科常见病原微生物的检测方法。

一、细菌检测方法1. 细菌培养法细菌培养法是最常用的细菌检测方法之一。

通过在富含营养物质的培养基上培养样本，观察细菌的生长情况，可以初步确定感染的细菌种类。

细菌培养法可以对细菌进行鉴定和药敏试验，为抗生素的选择提供参考依据。

2. 快速细菌检测方法为了缩短检测时间，提高诊断效率，现代医学发展了多种快速细菌检测方法，如PCR法、质谱法等。

这些方法可以在较短的时间内准确地鉴定出致病细菌，为临床治疗提供更及时的支持。

二、病毒检测方法1. 病毒抗体检测病毒感染后，机体会产生相应的抗体。

通过检测患者血清或其他体液中的病毒抗体水平，可以确定是否感染了某种病毒。

常用的方法包括ELISA法、免疫荧光法等。

2. 核酸检测病毒的核酸检测是一种非常敏感和特异性的检测方法，可以在感染初期就能够检测到病毒的存在。

PCR法是应用最广泛的核酸检测方法，可以快速准确地鉴定出病毒种类。

三、真菌检测方法1. 真菌培养法真菌培养法是检测真菌感染的常规方法之一。

通过在含有真菌营养物质的培养基上培养样本，观察真菌的生长情况，可以确定感染的真菌种类，并进行药敏试验。

2. 真菌抗体检测真菌感染后，机体会产生相应的抗体。

通过检测患者血清中的真菌抗体水平，可以确定感染的真菌种类。

免疫荧光法、免疫印迹法等是常用的检测方法。

综上所述，检验科常见病原微生物的检测方法包括细菌、病毒和真菌三个方面，每一种方法都有其独特的优势和适用范围。

在实际工作中，应根据具体情况选择合适的检测方法，以确保诊断的准确性和迅速性。

希望本文能对您有所帮助。

微生物限度检查微生物限度检查是一种常见的检验方法，用于评估制药产品、食品和环境的微生物质量。

微生物限度检查主要包括总大肠菌群、总菌落计数、霉菌和酵母菌的检验。

总大肠菌群是一类常见的微生物群体，其检验结果可以反映样品中可能存在的致病性微生物的数量。

在微生物限度检查中，常用的方法是将样品置于适当的培养基上进行培养，然后通过观察菌落形态和计数来确定总大肠菌群的数量。

在制药产品和食品领域，总大肠菌群的检验结果必须符合相关法规的要求，以确保产品的安全性和质量。

总菌落计数是评估样品中细菌和真菌总数量的常用方法。

在微生物限度检查中，常用的方法是将样品进行适当的稀释，然后将稀释液均匀涂布或点接到琼脂平板上进行培养。

经过一定时间的培养后，通过观察菌落形态和计数来确定总菌落计数。

总菌落计数的结果可以反映样品中微生物的总数量，是评估样品微生物质量的重要指标。

霉菌和酵母菌是常见的真菌类微生物，其检验结果可以反映样品中可能存在的霉变和腐败情况。

在微生物限度检查中，常用的方法是将样品进行适当的稀释，然后将稀释液均匀涂布或点接到含有抑制剂的琼脂平板上进行培养。

经过一定时间的培养后，通过观察菌落形态和计数来确定霉菌和酵母菌的数量。

霉菌和酵母菌的检验结果可以帮助评估样品的质量，并采取相应的控制措施。

在微生物限度检查中，还有其他一些常用的检验项目，如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等。

这些项目的检验方法与总大肠菌群和总菌落计数类似，通过培养和观察菌落形态和计数来确定微生物的数量。

这些检验项目主要用于评估样品中可能存在的致病性微生物的数量，以确保制药产品和食品的安全性。

总之，微生物限度检查是一种重要的质量控制方法，可以评估样品中微生物的数量和质量。

通过采用适当的培养和观察方法，可以得到准确的微生物检验结果，为制药产品、食品和环境的质量控制提供科学依据。

微生物检验
微生物检验是一种检测和鉴定微生物（如细菌、真菌、病
毒等）存在和数量的方法。

这种检验可以用于各种领域，
包括环境监测、食品安全、药品生产、医疗卫生等。

在微生物检验中，常用的方法包括：
1. 培养法：将样品接种在含有适合生长微生物的培养基上，通过观察和计数培养基上的菌落来鉴定和计算微生物的数量。

2. PCR法：使用聚合酶链反应（PCR）技术，通过放大特
定的微生物DNA片段来检测和鉴定微生物的种类和数量。

3. 免疫学方法：利用抗体和抗原的特异性结合，通过免疫
学试剂盒或免疫染色法来检测和鉴定微生物。

4. 流式细胞术：利用激光流式仪对微生物进行单个细胞的
鉴定和计数。

5. 蛋白质检测：通过检测微生物产生的特定蛋白质来判断
其存在和数量。

微生物检验的结果可以帮助判断环境卫生状况、食品的卫生安全、药品的纯度和无菌性等。

这对于保障公共卫生和产品质量具有重要意义。

9-微生物学检验技术-第二章-真菌检验基本技术做真菌实验注意事项
1、孢子具有空气散播等特性，所以真菌的检验操作应在生物安全柜中进行
2、每天工作前后应对工作区域进行消毒
3、不可直接嗅闻培养基上培养物产生的气味
4、不可对组织包浆菌、球孢子菌进行玻片培养，因为其孢子可在空气中播散
真菌的形态学检查
直接镜检
若发现有真菌菌丝或孢子存在时，可初步判定为真菌感染
标本制备处理液
KOH溶液，用于毛发、指甲及鳞屑，必要时可加入二甲基亚砜
生理盐水、
水合氯醛-苯酚-乳酸封固液
染色镜检革兰染色各种真菌均为阳性。

真菌的培养与鉴定技术
分离培养
鉴定试验
药物敏感试验
其他非培养检验技术
免疫学检验技术
分子生物学检验技术
G试验和GM 试验
目前临床常用的诊断侵袭性真菌感染的方法
G实验，不能用于隐球菌和结合菌的感染
GM试验，该实验能作为侵袭性曲霉菌感染的早期依据，国际公认的曲霉菌诊断
方法。

常用的微生物检验方法
微生物检验是一种常用的检验方法，可以用于检测食品、药品、环境等领域中的微生物污染。

常用的微生物检验方法包括菌落计数法、涂片法、培养方法、PCR等。

1. 菌落计数法
菌落计数法是一种基于细菌在培养基上生长形成菌落的方法。

该方法可以用于检测食品、饮料、水等中的微生物数量。

菌落计数法的优点在于可以定量检测微生物数量，但缺点是需要时间较长，且对于某些菌种可能不适用。

2. 涂片法
涂片法是将样品在玻片上涂抹后在显微镜下观察细菌形态、数量、分布等特征的方法。

该方法常用于病原微生物的检测，如细菌、真菌、病毒等。

涂片法的优点是快速、简便，但可能存在假阳性和假阴性的问题。

3. 培养方法
培养方法是将样品放置在含有适宜营养成分的培养基上进行培养，观
察细菌在培养基上的生长情况。

该方法适用于各类微生物的检测，但需要时间较长。

同时，培养方法还可以用于微生物的分离、鉴定和纯化。

4. PCR
PCR是一种基于DNA扩增的方法，可以在短时间内检测微生物的存在。

该方法的优点在于高度敏感、快速、准确，但存在样品的预处理和设备的昂贵问题。

总之，不同的微生物检验方法各有优缺点，选用合适的方法可以提高检测的准确性和可靠性。

微生物室检验的项目微生物室检验是现代医学中重要的一项检验项目，它通过对患者样本中的微生物进行分离、鉴定和敏感性测试，为临床诊断和治疗提供重要依据。

微生物室检验可以帮助医生确定感染病原体的种类和药物敏感性，从而指导临床用药和预后判断。

微生物室检验的项目包括了多种微生物的检测，下面将分别介绍几个常见的项目。

1. 细菌培养和鉴定：细菌培养是微生物室检验中最基本的项目之一。

通过将患者样本（如血液、尿液、呼吸道分泌物等）接种到培养基上，可以使细菌在适宜的条件下繁殖生长。

然后，通过观察菌落的形态、颜色、气味等特征，以及进行生化试验和药敏试验，可以确定细菌的种类和药物敏感性。

2. 真菌培养和鉴定：真菌是常见的病原微生物之一，引起多种感染性疾病。

真菌培养和鉴定的方法与细菌类似，但由于真菌的生长速度较慢，培养时间可能需要较长。

通过观察真菌的菌落形态、产孢器等特征，以及进行生化试验，可以确定真菌的种类。

3. 抗生素敏感性测试：抗生素敏感性测试是判断微生物对不同抗生素药物的敏感性和抗药性的重要方法。

常见的抗生素敏感性测试方法包括纸片扩散法（如Kirby-Bauer法）和微量稀释法（如E-test法）。

通过在培养基上放置含有不同抗生素的纸片或试剂，观察抑菌圈的直径或最低抑菌浓度，可以判断微生物对不同抗生素的敏感性。

4. 病毒检测：病毒是引起多种传染性疾病的重要病原体。

病毒检测的方法包括直接检测和间接检测。

直接检测方法包括病毒核酸检测（如PCR法）和病毒抗原检测（如ELISA法）；间接检测方法包括病毒血清学检测（如补体结合试验和中和试验）。

通过这些方法可以检测患者体内是否存在特定的病毒，并确定感染的种类和程度。

5. 寄生虫和蠕虫检测：寄生虫和蠕虫是引起多种寄生虫病的病原体。

寄生虫和蠕虫检测的方法包括直接检测和间接检测。

直接检测方法包括寄生虫卵囊检测、寄生虫幼虫检测和寄生虫成虫检测等；间接检测方法包括血清学检测和分子生物学检测等。

二相性真菌的微生物学检验1．组织胞浆菌属(1)标本直接检查1)显微镜检查：大多数真菌病通过KOH制备标本直接镜检观察。

但对于组织胞浆菌病来说，这种检查很难确定是否找到真菌细胞，应涂片染色后检查。

痰液等标本涂片后先用甲醇固定10分钟，再用吉姆萨染色镜检，如在油镜下发现典型菌体结构，通常在大单核细胞或多形核细胞，有时在组织细胞外，多聚集成群，应怀疑为荚膜组织胞浆菌。

皮损、脓液等标本用20％KOH涂片后镜检，可见12～15μm直径的厚壁酵母细胞，细胞内可见脂肪小滴，可疑为杜波组织胞浆菌。

2)抗原检测：取患者痰液作免疫荧光法染色后镜检，可快速检测其抗原，但特异性差，仅作组织胞浆菌初筛试验。

现有学者提出用一种巢氏PCR检测组织胞浆菌中特异性100-KD蛋白质以诊断组织胞浆菌病。

(2)分离培养：将临床标本接种于含抗菌药物的沙保弱培养基上，25℃培养，生长缓慢，有时需4～6周才开始生长，逐渐形成白色至棕色绒毛状菌落。

当转种于血琼脂培养基上，37℃培养，很快形成酵母型菌落，形态特征与直接镜检所见相同。

(3)鉴定：取可疑菌落涂片染色镜检，并做脲酶试验和明胶液化试验。

荚膜组织胞浆菌能分解尿素，而杜波组织胞浆菌则不分解尿素；杜波组织胞浆菌在24～96小时内可液化明胶，而荚膜组织胞浆菌则不能液化明胶=另外，可用补体结合试验、免疫扩散、乳胶凝集试验等检测血清中组织胞浆菌抗体，其中以补体结合试验的敏感性和特异性最高。

2．马尔尼菲青霉(1)标本直接检查1)涂片染色镜检：取骨髓涂片、皮肤印片或淋巴结活体组织瑞氏染色后镜检，可见到典型圆形或卵圆形有明显横隔的孢子，常在巨噬细胞内(图23-20)。

2)抗原检测：用荧光素标记纯化的兔超免疫球蛋白G，通过ELISA定量检测患者尿中马尔尼菲青霉抗原，可为患者提供有价值的快速诊断方法，并可作为该病流行的常规诊断方法。

(2)分离培养：将标本直接接种在4％沙保弱培养基上，约3～4天开始生长。

茵落最初呈浅灰褐色膜样或淡黄色绒毛状，中央气生菌丝呈白色绒毛状，向周围扩展，逐渐形成淡灰褐色微带淡红色绒毛状。