网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)

网状纤维染色的影响因素分析摘要】网状纤维是网状结缔组织的一种纤维，为分支交织成网的纤细纤维，由含有糖蛋白的胶原蛋白组成。

在一定病理条件下，可能转变为胶原纤维。

网状纤维染色在病理诊断中意义显著，染色方式诸多，极易受到多种因素影响，结合实际情况，本文首先阐述了网状纤维染色在病理诊断中的意义，后对影响网状纤维染色的相关因素以及解决方式进行全面分析，旨意为相关人员的研究工作提供参考资料。

【关键词】网状纤维染色；影响因素；解决方式；质量提升【中图分类号】R73 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）25-0134-02在对患者开展临床病理检查过程中，切片内网状纤维（下称纤维）以及糖类物质显示对于癌瘤组织来源以及多种疾病鉴别诊断有着相当重要的现实意义。

在通常情况下，除了要进行嗜银染色以显示网状纤维以外，也要开展PAS染色，以显示出糖类物质。

流程相对繁琐、费时费力，这在很大程度上影响了诊断时间[1]。

结合实际情况，本文全面分析了影响网状纤维染色的因素，以寻求合适染色方式，提升工作效率。

现将具体结果汇报如下。

1.网状纤维染色在病理诊断中的意义网状纤维染色应用广泛，在病理诊断中意义显著，组织内的网状纤维多寡以及分布特征，预示着不同的病理诊断结果。

网状纤维染色基本原理[2]为组织内的蛋白质和银化合物结合，再经过还原成为金属银沉淀于组织内及其表面，因此得以着色，该染色能够全面显示病理组织网状支架受损详情。

纤维多寡、疏密、是否存在断裂等，对于判别疾病性质以及病情发展、预后来讲，均存在相当重要的现实意义[3]。

这一点重点体现在肿瘤疾病诊断中，如用此染色方法鉴别上皮性还是非上皮性来源恶性肿瘤、血管内皮细胞瘤或外皮细胞瘤、恶性淋巴瘤或组织细胞肉瘤、粘液纤维瘤与粘液肉瘤、脑膜瘤与星形细胞瘤等，还可用于判断肝组织的网状支架塌陷破坏或增生情况。

2.影响网状纤维染色的相关因素以及解决方式2.1 切片厚度我们科室切片厚度为3～5微米。

乳腺纤维上皮肿瘤性病变中不同纤维分布特点丁桂龄;章亚琴;邢宏宇;徐光;郑唯强【摘要】目的探讨乳腺纤维上皮性肿瘤间质中不同纤维成分的分布特点.方法利用组织学三联特殊染色法检测26例乳腺纤维腺瘤和14例乳腺分叶状肿瘤中不同纤维的染色分布.结果乳腺纤维腺瘤和分叶状肿瘤中肿瘤间质均以网状纤维与胶原纤维两种成分为主,前者主要分布于导管的基膜,后者在导管周围间质中最丰富,二者在不同肿瘤中的分布有明显差异.结论乳腺纤维上皮性肿瘤中纤维分布的特点及其不同纤维的分布差异,为探索乳腺纤维上皮性肿瘤的发生、发展、鉴别诊断提供基础理论依据.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2013(029)011【总页数】3页(P1184-1186)【关键词】乳腺纤维上皮性肿瘤;胶原纤维;网状纤维;弹力纤维;特殊染色【作者】丁桂龄;章亚琴;邢宏宇;徐光;郑唯强【作者单位】第二军医大学附属长海医院病理科,上海200433;第二军医大学附属长海医院病理科,上海200433;第二军医大学附属长海医院病理科,上海200433;第二军医大学附属长海医院病理科,上海200433;第二军医大学附属长海医院病理科,上海200433【正文语种】中文【中图分类】R737.9正常乳腺导管的周围间质中主要由纤维母细胞、颗粒状基质、胶原纤维束和偶见的弹力纤维构成，从内向外作交替同心层状排列[1]。

最常见的乳腺纤维上皮性肿瘤包括乳腺纤维腺瘤和乳腺分叶状肿瘤。

乳腺纤维腺瘤是由乳腺上皮和纤维组织按不同比例增生构成;乳腺分叶状肿瘤有良恶性之分，也是由纤维、上皮两种成分共同组成的一型肿瘤。

二者基本组织相似，除分叶状肿瘤因良恶性不同而其纤维含量的丰富程度不同外，其间质的纤维成分是否相似，尤其是不同纤维成分的比例分布情况，尚未见文献报道[2]。

目前对弹力纤维和网状纤维的染色有不同的改良方法[3，4]。

本文现利用三联染色法观察[5]乳腺纤维腺瘤和分叶状肿瘤中胶原、网状和弹力纤维的分布情况。

病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色，其中蓝色代表胶原和网状纤维，淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质，红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒，橘红色代表髓鞘和红细胞。

图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果，其中A组排列规则。

1.2 Masson三色染色法Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色，其中绿色代表胶原纤维，红色代表肌纤维，橘红色代表红细胞。

图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。

1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维，其中红色代表胶原纤维，黑色代表网状纤维，绿色代表弹性纤维，淡黄色代表肌肉和红细胞。

图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。

胶原纤维染色法2.1 天狼星红苦味酸染色法天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色，其中红色代表胶原纤维，绿色代表细胞核，黄色代表其他物质。

天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察，Ⅰ型呈强双折光性，呈黄色或红色纤维，Ⅱ型呈弱双折光，呈多种色彩疏网状分布，Ⅲ型呈弱双折光，呈绿色的细纤维，Ⅳ型呈弱双折光的基膜，呈淡黄色。

图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。

2.2 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色，其中鲜红色代表胶原纤维，黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞，蓝褐色代表胞核。

图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。

三、网状纤维染色3.1 XXX-Sweets银氨染色法XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色，其中黑色代表网状纤维，红色代表胞核（核固红复染），黄棕色代表胶原纤维，淡红色代表细胞质（红液复染）。

病理学1. 优质切片的先决条件是（） [单选题] *A. 固定(正确答案)B. 染色C. 透明D. 切片E. 脱水2. 下列哪种溶液被推荐为病理标本的首选固定液（） [单选题] *A. 10%福尔马林液B. 10%中性缓冲甲醛液(正确答案)C. 酒精D. Zenker固定液E. 甲醇3. 脂肪染色最好的标准封固剂是什么？（） [单选题] *A. 中性树脂B. 甘油明胶封固剂(正确答案)C. 液体石蜡D. 松节油E. 二甲苯4. 以下哪种是幽门螺杆菌的染色法（） [单选题] *A. PAS染色法B. Warthin-starry染色法(正确答案)C. 过碘酸雪夫反应法D. Gridley染色法E. 奥辛蓝染色法5. 固定的目的下列哪项正确（） [单选题] *A. 增加组织硬度B. 防止细胞自溶C. 凝固细胞内物质D. 以上都对(正确答案)E. ABC都不对6. 最常用的石蜡切片机是（） [单选题] *A. 骨组织切片机B. 冰冻切片机C. 旋转式切片机(正确答案)D. 超薄切片机E. 螺旋式切片机7. 具有剧毒作用的固定剂是（） [单选题] *A. 重铬酸钾(正确答案)B. 四氧化锇C. 铬酸D. 苦味酸E. 高锰酸钾8. 常用于脱钙的酸类是（） [单选题] *A. 硝酸(正确答案)C. 醋酸D. 磷酸E. 甲酸9. 以下哪种不是细胞质染料?（） [单选题] *A. 美蓝(正确答案)B. 橙黄-GC. 伊红D. 苦味酸E. 光绿SF(lght green SF)10. HE染色中呈蓝色的成份是（） [单选题] *A. 红细胞B. 细胞核(正确答案)C. 嗜酸性颗粒D. 细胞质E. 细胞膜11. 常规HE制片固定的目的？（） [单选题] *A. 保持离体组织细胞与生活时的形态相似B. 保持细胞内组织抗原，DNA及RNA，便于进一步的特殊检查。

C. 硬化组织有利于切片D. 有利于染色反应，便于光镜下对细胞内不同成分进行区别。

各种组织染色方法大全主要内容：结缔组织多色染色法胶原纤维染色法网状纤维染色法弹力纤维染色法第一节结缔组织多色染色法一、Mallory三色染色法1. 试剂配制（1）重铬酸钾液重铬酸钾2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml （2）苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g，蒸馏水100ml（3）酸性复红液酸性复红0.5g，蒸馏水100ml2.染色步骤（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。

（2）重铬酸钾液10min。

（3）蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。

（4）酸性复红液2min，蒸馏稍洗。

（5）苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。

（6）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

3.结果胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。

4.注意事项（1）酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。

（2）苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。

（3）对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。

（4）另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。

二、Masson三色染色法1.试剂配制（1）Masson复合染色液酸性复红1g，丽春红2g，桔黄G2g，0.25%醋酸300ml。

（2）亮绿染色液高绿SF0.1g，0.2%醋酸100ml。

2.染色步骤中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。

（1）Masson复合染色液5min。

（2）0.2%醋酸水溶液稍洗。

（3）5%磷钨酸5-10min。

（4）0.2%醋酸水溶液浸洗2次。

（5）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次。

（6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

3.结果胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。

4.注意事项（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。

（2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。

钙盐染色液，钙盐染色产品编码产品名称产品规格保存条件北京华越洋5NF061 钙盐染色液(茜素红S法) 2×50ml 室温,避光,6个月北京华越洋5NF062 钙盐染色液(改良茜素红S法)3×50ml 4℃,避光,6个月北京华越洋5NF063 钙盐染色液(硝酸银法) 2×50ml 4℃,避光,6个月用途：钙盐染色注意事项：钙沉积物成橘红色,染色时间取决于钙的含量,检测少量钙时更有效。

复染液为固绿。

MTT溶液过碘酸-雪夫（AB-PAS）染色试剂盒过碘酸-雪夫（快速）染色试剂盒糖原PAS过碘酸雪夫染色试剂盒Bennhold刚果红染色试剂盒钙盐染色液（FeH）染色试剂盒Gordon-Sweets银氨溶液100ml 结缔染色网状纤维染色,可区分胶原纤维网状纤维染色试剂盒(改良Gomori氨银法) 5×100ml 结缔染色网状纤维染色,可区分胶原纤维网状纤维染色试剂盒(改良Gomori氨银法) 5×50mlGomori氨银溶液500ml 结缔染色网状纤维染色,可区分胶原纤维羟胺溶液(1.5mol/L,pH8.5) 100ml 135 室温,3个月细胞其他青霉素-链霉素混合溶液(100×双抗) 100ml 68 —20℃,12个月抗生素青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液(100×三抗) 100ml 195 —20℃,12个月抗生素秋水仙碱溶液(Colchicine,10mg/ml) 5ml 143 4℃,避光,6个月药物去离子甲酰胺100ml 120 4℃,避光,12个月RNA溶液任氏液500ml 128 4℃,3个月细胞其他溶菌酶(Lysozyme,10mg/ml) 5ml 90 —20℃,12个月核酸提取鞣酸/单宁酸水溶液(5%) 100ml 68 室温,12个月结缔染色乳酸酚棉蓝染色液100ml 180 室温,避光,12个月微生物染色乳酸脱氢酶染色液(H型,四唑盐法) 2×50ml 375 4℃,避光,6个月酶类染色乳酸脱氢酶染色液(M型,四唑盐法) 2×50ml 375 4℃,避光,6个月酶类染色乳酸脱氢酶染色液(四唑盐法) 2×50ml 360 4℃,避光,6个月酶类染色乳酸银显影液100ml 105 室温,避光,6个月免疫组化瑞氏-姬姆萨复合染色液2×100ml 188 室温,12个月微生物染色瑞氏-姬姆萨复合染色液2×500ml 630 室温,12个月微生物染色瑞氏染色液(Wright stain) 2×50ml 75 室温,12个月微生物染色瑞氏染色液(Wright stain,) 2×100ml 113 室温,12个月微生物染色瑞氏染色液(Wright stain,) 2×500ml 390 室温,12个月微生物染色瑞氏染色液(Wright stain,即用型) 100ml 105 室温,12个月微生物染色瑞氏染色液(Wright stain,即用型) 500ml 375 室温,12个月微生物染色弱磷酸盐缓冲液(LoPBS,pH7.0) 100ml 120 4℃,12个月蛋白其他噻嗪红染色液(0.1%) 100ml 90 室温,避光,12个月染色其他噻嗪红染色液(0.2%) 100ml 105 室温,避光,12个月染色其他三磷酸腺苷溶液(ATP,10mmol/L) 10ml 75 —20℃,12个月PCR相关三氯化铁水溶液(10%) 100ml 53 室温,12个月常规其他三羟甲基甘氨酸加样缓冲液(2×) 10ml 75 4℃,6个月蛋白电泳沙黄/藏红T水溶液(2%) 100ml 83 室温,避光,6个月微生物染色山梨醇-磷酸盐溶液(1.2mol/L,pH7.5) 100ml 68 室温,6个月细胞组分分离山梨醇-磷酸盐溶液(1.2mol/L,pH7.5,无菌) 100ml 128 室温,6个月细胞组分分离山梨醇溶液(1.1mol/L,无菌) 100ml 113 室温,6个月细胞组分分离山梨醇溶液(1mol/L) 100ml 60 室温,6个月细胞组分分离山梨醇溶液(1mol/L,无菌) 100ml 105 室温,6个月细胞组分分离神经HRP示踪显色液(DAB法) 50T 165 4℃,避光,6个月神经染色神经HRP示踪显色液(TMB法) 50T 165 4℃,避光,6个月神经染色生理盐水(1×NS,无菌) 500ml 45 室温,12个月常规其他生理盐水(10×NS,无菌) 500ml 53 室温,12个月常规其他石碳酸复红染色液100ml 135 室温,避光,18个月微生物染色双链DNA变性缓冲液100ml 75 室温,12个月核酸杂交双缩脲法蛋白定量试剂盒500T 150 4℃,12个月蛋白检测双缩脲法蛋白定量试剂盒1000T 255 4℃,12个月蛋白检测双缩脲总蛋白试剂100ml 75 4℃,12个月蛋白检测水饱和酚(Phenol Water) 100ml 90 4℃,避光,3个月核酸提取顺丁稀二酸缓冲液(MAB,pH7.5) 500ml 90 室温,36个月核酸电泳苏丹Ⅲ酒精饱和溶液100ml 120 室温,避光,12个月脂类染色苏丹Ⅲ脂肪染色液3×50ml 240 室温,避光,12个月脂类染色苏丹Ⅳ染色液3×50ml 225 4℃,避光,12个月脂类染色苏丹Ⅳ染色液-A液100ml 120 室温,避光,12个月脂类染色酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 2×50ml 885 4℃,避光,6个月酶类染色酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法) 2×50ml 300 4℃,避光,6个月酶类染色酸性乙醇分化液(0.5%) 500ml 75 室温,12个月染色其他。

组织学技术Gomori染色法醛品红染色法（弹性纤维）⑴组织用10%甲醛液、甲醛酒精液或Bouin液，避免用含铬盐的固定液。

常规脱水，石蜡包埋、切片。

⑵切片脱蜡，经酒精下行至蒸馏水。

⑶0.5%高锰酸钾（Potassium permanganate）水溶液1~2分钟，流水洗。

⑷1%草酸（Oxalic acid）水溶液1分钟，水洗1分钟。

⑸50%酒精1~2分钟。

⑹醛品红液染色5~15分钟（冬天37℃温箱染10分钟），蒸馏水速洗。

醛品红液：碱性品红（Basic fuchsin）0.5克溶于蒸馏水100毫升，加热煮沸过滤。

取滤液加浓盐酸（hydrochloric acid）1毫升和三聚乙醛（Paraldehyde）1毫升，将溶液倒入锥形瓶加塞，放室温3~4天，经常摇动，再过滤，将滤纸和沉淀物置温箱烘干。

将烘干的沉淀染料粉0.5克加70%酒精100毫升。

醛品红的配制另一法：碱性品红0.5克溶于70%酒精100毫升，加浓盐酸及三聚乙醛各1毫升，静置24小时，溶液呈深紫色，保存于冰箱备用。

⑺95%酒精分色至背景无色。

⑻蒸馏水洗30~60秒。

⑼1%亮绿（Brilliant green）水溶液染2~5分钟，蒸馏水速洗。

⑽95%酒精分色至纤维颜色分明，无水酒精脱水。

⑾二甲苯透明，中性树胶封片。

结果：弹性纤维紫色，胶原纤维绿色，核紫红色。

本法能很好显示血管壁、肺泡壁和皮肤等组织中的弹性纤维。

醛品红染色不能过染，否则不易分色。

Gomori染色法（网状纤维）方法：⑴新鲜组织固定于10%甲醛液、Zenker液或Susa液，常规脱水、石蜡包埋切片。

可作冰冻切片。

⑵石蜡切片经二甲苯脱蜡，各级酒精下行至蒸馏水。

⑶0.5%或1%高锰酸钾水溶液2分钟，流水洗。

⑷3%亚硫酸钾（Potassium sulfite）或草酸2分钟，流水洗。

⑸2%铁明矾（Ammonium iron (III) sulfate dodecahydrate）水溶液3分钟，蒸馏水洗2~3次约2分钟。