孕酮(Prog)测定试剂盒(光激化学发光法)产品技术要求kemei

附件2孕酮检测试剂（化学发光免疫分析法）注册审查技术指导原则(征求意见稿)2017年7月本指导原则旨在指导注册申请人对孕酮测定试剂盒(化学发光免疫分析法）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。

本指导原则是对孕酮测定试剂盒(化学发光免疫分析法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、适用范围从方法学考虑，在本文中孕酮测定试剂是指采用化学发光免疫分析技术，以竞争法为基本原理，利用全自动、半自动化学发光免疫分析仪，在医学实验室对人体样本中孕酮的含量进行体外定量分析的试剂，临床上主要用于先兆流产的辅助诊断。

依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号），孕酮测定试剂盒管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。

本指导原则不适用于：（一）单独申请注册的孕酮校准品和质控品。

（二）化学发光免疫分析法原理之外的其他孕酮测定试剂盒。

二、注册申报材料要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、生物安全性方面的说明、产品主要研究结果的总结和评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求，下面着重介绍与孕酮测定试剂预期用途有关的临床背景情况及检测方法学。

促黄体生成素（LH）测定试剂盒（光激化学发光法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中促黄体生成素（LH）的含量。

说明：1. 校准品靶值批特异，详见定值单。

2. 质控品质控范围批特异，详见定值单。

2.1 外观试剂盒组分齐全，内外包装均完整，标签清晰，液体试剂无渗漏。

2.2 最低检出限试剂盒最低检出限应不高于1.0 IU/L。

2.3 准确性试剂盒内校准品与相应浓度的国家标准品150531同时进行测定，用三次样条插值模型拟合，要求两条剂量-反应曲线不显著偏离平行；以LH国家标准品为对照品，试剂盒内校准品的实测值与标示值的效价比应在0.900～1.100之间。

2.4 剂量-反应曲线的线性在[2.0，200 ]IU/L区间内，用三次样条插值模型拟合，剂量-反应曲线线性相关系数（r）应不小于0.9900。

2.5 精密度2.5.1 分析内精密度质控品测定结果的变异系数（CV）应不大于8.0%。

2.5.2 批间精密度在3批产品之间，质控品测定结果的变异系数（CV）应不大于15.0%。

2.6 质控品测定值同一套质控品的测定结果应在试剂盒规定的范围内。

2.7 特异性2.7.1 与促卵泡生成素（FSH）浓度为200IU/L的FSH，在本试剂盒上的测定结果应不高于最低检出限。

2.7.2 与促甲状腺素（TSH）浓度为200mIU/L的TSH，在本试剂盒上的测定结果应不高于最低检出限。

2.7.3 与人绒毛膜促性腺激素（hCG）浓度为1000 IU/L的hCG，在本试剂盒上的测定结果应不高于最低检出限。

2.8 稳定性试剂盒在2℃～8℃保存至效期末后3个月内，检验结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1、2.6 规定。

2.9 溯源性依据GB/T 21415-2008及有关规定提供所用校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，校准品溯源至国家标准品150531。

犬孕激素/孕酮（PROG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究研究使用预期应用ELISA法定量测定犬血清、血浆、或其它相关液体中孕激素含量。

概述孕激素主要由黄体产生，故又叫黄体酮。

孕激素通常要在孕激素作用的基础上才能发挥其作用。

孕激素的主要作用，是促进子宫内膜特别是腺体的增长，为接纳受精卵做好准备，如受精卵着床后，使胚胎继续发育。

对子宫内膜癌及增生过度的内膜腺体，孕激素则能使之萎缩退化。

此外还能抑制子宫收缩，并减弱子宫对催产素的敏感性，使子宫活动减少，而起保胎作用。

同时还与孕激素一起使乳腺发育，为产乳作好准备。

实验原理本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中孕激素水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，固相抗体与一定量的生物素标记的孕激素和非标记抗原（标本或标准品）进行竞争抑制反应，待测定的标本量越多，抗体与生物素标记的孕激素结合就越少，反之结合就多。

最后再加入HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的孕激素呈负相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成1．酶联板：一块（96孔）2．标准品：0.5ml/瓶×6瓶。

其浓度依次为100ng/mL，20ng/mL，5ng/mL，1ng/mL和0.2ng/mL，0ng/mL。

3．检测溶液A：1×6ml4．检测溶液B：1×6ml5．底物溶液A：1×7ml6．底物溶液B：1×7ml7．浓洗涤液：1×15ml，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。

8．终止液：1×7ml标本的采集及保存1．血清：采集病人空腹血，标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．血浆：采集病人空腹血，可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C 1000x g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

1性能指标
2.1外观和性状
试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；中文包装标签应清晰，准确、牢固；Ra试剂应为棕色含固体微粒的液体，无板结、无絮状物；Rb试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物；Rc试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。

2.2净含量
应符合表2的要求。

表 2 净含量误差要求
2.3准确度
对具有溯源性的两个浓度水平的正确度控制品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差应在±10%范围内。

2.4最低检测限
应不大于0.1 ng/mL。

2.5线性
试剂盒在0.2 ng/ml～40 ng/ml范围内，其相关系数（r）应不低于0.9900。

2.6重复性
变异系数CV应≤10%。

2.7批间差
变异系数CV应≤10%。

2.8分析特异性
当样品中甘油三酯浓度≤450mg/dL，胆红素浓度≤10mg/dL，血红蛋白浓度≤500mg/dL时，测试结果的干扰偏差在±10%范围内。

当样品中孕烯醇酮浓度为200 ng/mL、皮质醇浓度为600 ng/mL、17-β雌二醇浓度为10 ng/mL、雌三醇浓度为10 ng/mL、睾酮浓度为10 ng/mL、雄烯二酮浓度为1000 ng/mL、11-脱氧皮质酮浓度为250 ng/mL时，交叉反应率应≤3%；当样品中甲孕酮浓度为100 ng/mL时，交叉反应率应≤6%。

医疗器械产品技术要求编号：孕酮测定试剂盒（化学发光免疫分析法）2性能指标2.1外观试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰、准确、牢固；试剂盒内组分（磁性微球除外）应为澄清的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物；磁性微球悬浮液应可均匀分布，无肉眼可观察到的团聚颗粒，无异物，无块状沉淀。

2.2装量100测试/盒和50测试/盒规格各组分应不少于声称的额定装量（见表1）。

表1100测试/盒和50测试/盒两种规格各组分额定装量变异系数(CV)应≤5%。

2.4批间差批间变异系数(CV)应≤10%。

2.5准确度回收率应在（85%~115%）范围内。

2.6线性区间在[0.200，80.000]ng/mL浓度范围内，线性相关系数(r)应>0.9900。

2.7空白限空白限应≤0.025 ng/mL。

2.8检出限检出限应≤0.100 ng/mL。

2.9特异性1)添加皮质酮于孕酮样本中，获得待测样本中孕酮目标浓度为20.100ng/mL（允许相对偏差为±15%），皮质酮的浓度为10.000 ng/mL，测定结果的均值应在目标浓度平均值（M）±2倍标准差（SD）范围内。

2)添加17α-羟孕酮于孕酮样本中，获得待测样本中孕酮目标浓度为20.100 ng/mL（允许相对偏差为±15%），17α-羟孕酮的浓度为10.000 ng/mL，测定结果的均值应在目标浓度平均值（M）±2倍标准差（SD）范围内。

2.10产品校准品准确度相对偏差应在±10%范围内。

2.11产品校准品均匀性)应≤5%。

产品校准品均匀性(CV瓶间2.12质控品预期结果质控品1每次测定结果应在[0.700，1.300]ng/mL范围内，质控品2每次测定结果应在[14.000，26.000]ng/mL范围内。

2.13质控品均匀性质控品均匀性(CV)应≤5%。

瓶间。

鸡孕激素/孕酮(PROG)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12012C检测范围：15.6 pg/ml - 1000 pg/ml最低检测限：3.9 pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的鸡PROG，且与其他相关物质无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定鸡血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中PROG 含量。

说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

概述孕酮，又称“黄体酮”，是天然的孕激素，由卵巢和胎盘分泌，分子量为314D。

它具有促进子官内膜的组织变化，接纳受精卵并使胚胎正常发育，以及促进乳腺发育等功能，缺乏时可导致流产。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗PROG抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PROG抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的PROG呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。

3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120ul/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120ul/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

孕酮测定试剂盒(化学发光免疫分析法)1.性能指标2.1 试剂性能指标2.1.1外观和物理检查试剂盒应组分齐全，内外包装均应完整，标签清晰，液体试剂无渗漏。

其中：酶标记物应为清澈均匀的液体，无沉淀，无絮状物；磁微粒应无板结，液体内无絮状物，无异物；2.1.2装量试剂盒各组分装量应不少于标示量。

2.1.3 检出限检出限应不高于0.48nmol/L；空白限应不高于0.32nmol/L。

2.1.4 准确度相对偏差应在±10%范围内。

2.1.5 线性范围在[0.48，127] nmol/L，相关系数r应不小于0.99002.1.6 重复性使用同一批试剂盒测试浓度[2，14]nmol/L和[46，85]nmol/L的样品，其测试结果的变异系数（CV）应不大于8.0 %。

2.1.7 批间差用三批试剂盒测试浓度[2，14]nmol/L和[46，85]nmol/L的样品，其测试结果的变异系数（CV）应不大于15.0 %。

2.1.8 质控品测定值测试试剂盒内高低值质控品，其测定结果应均在质控品靶值范围内。

2.1.9 特异性分别添加潜在干扰物于含有孕酮的样本中，获得待测样本中孕酮目标浓度为64nmol/L（允许相对偏差为±15%），干扰物浓度如下，各个样本测量结果的均值应在M±2SD范围内。

（M为目标浓度平均值，SD为标准差）干扰物配制浓度分别为11-去氧皮质酮600ng/mL、孕烯醇酮200ng/ mL、皮质酮1000ng/mL、17a-羟基孕酮50ng/ mL、17β-雌二醇10ng/ mL、雌酮为0.1ug/mL、雌三醇10ng/ mL、醛甾酮50ng/ mL、丹那挫100 ng/ mL、11-脱氧皮质醇100 ng/ mL、强的松龙200ng/ mL、皮质醇为1ug/mL、睾酮为1μg/mL、克罗米酚为25μg/mL、保泰松为25μg/mL2.2校准品性能指标2.2.1外观和性状校准品应为澄清液体，无肉眼可见杂质。

孕酮检测试剂盒（化学发光法）审评要点（江苏省药品监督管理局）一、申请表1、主要成分：浓度表述为“＞...”过于笼统，应明确浓度；明确抗体属性；明确射频卡的作用。

2、（1）首次注册、适用机型变更及其他涉及机型变化的注册，需提供适用机型的注册证复印件并加盖企业章。

（2）产品规格型号应与实际生产的规格型号完全一致。

（3）全部申报资料随申请表统一修改。

三、综述资料1、根据国家总局公布的2014年第44号文修改。

2、提供生物来源的原材料的出厂检验报告。

四、主要原材料的研究资料1、（1）根据国家总局公布的2014年第44号文修改。

（2）研究过程建议按照以下思路表述：试剂（批号）和质控品及校准品（如用到）、仪器、样本→方案→数据→数据的统计分析过程→结果→判定依据及结论。

2、应提供。

描述产品所采用的技术原理，主要原材料的来源及制备方法，主要生产工艺过程，质控品、校准品的制备方法及溯源（定值）情况。

五、主要生产工艺及反应体系的研究资料1、（1）根据国家总局公布的2014年第44号文。

（2）研究过程建议按照以下思路表述：试剂（批号）和质控品及校准品（如用到）、仪器、样本→方案→数据→数据的统计分析过程→结果→判定依据及结论。

2、应提供。

主要生产工艺包括：工作液的配制、分装和冻干，固相载体的包被和组装，显色/发光系统等的描述及确定依据等，反应体系包括样本采集及处理、样本要求、样本用量、试剂用量、反应条件、校准方法（如有）、质控方法等。

六、分析性能评估资料1、根据国家总局公布的2014年第44号文修改。

补盖骑缝章。

3、该产品是否存在钩状效应的问题？如有，应有相应的研究。

4、应说明不同包装规格是否存在差异。

5、技术要求修改的的内容应重新提供研究资料。

七、阳性判断值或参考区间确定资料1、补盖骑缝章。

2、所用的试剂为“雌二醇检测试剂盒”，是否有误？八、稳定性研究资料1、补盖骑缝章。

2、提供试剂和质控品的检测数据。

3、技术要求修改的内容应重新提供研究资料。

孕酮测定试剂盒（磁微粒化学发光法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人体血清或血浆中的孕酮（P）含量。

1.1包装规格10人份/盒；40人份/盒；60人份/盒。

1.2主要组成成分试剂盒由检测试剂条、质控品（两水平）、校准品（两水平）组成。

2.1外观试剂盒组分应齐全、完整；检测试剂条应无漏液、无破损、无污染；中文包装标签应清晰，易识别。

2.2 校准品溯源性根据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，该校准品溯源至本公司的工作校准品。

2.3准确度将已知浓度的孕酮（P）加入到低值样品中，其回收率应在85%~115%范围内。

2.4检出限应≤0.64nmol/L （0.2ng/mL）。

2.5线性范围在[0.64-127.20]nmol/L（[0.2,40]ng/mL）的线性范围内，相关系数r 应≥0.9900。

2.6重复性CV≤10%。

2.7批间差CV≤15%。

2.8质控品赋值有效性测定值在质控品质控范围内。

2.9 特异性分别添加潜在干扰物于含有孕酮的样本中，获得待测样本中孕酮目标浓度为64nmol/L （20.1ng/mL）（允许相对偏差为±15%），潜在干扰物浓度分别为10ng/mL的皮质酮和10ng/mL的17α-羟孕酮。

各个样本测量结果的均值应在目标浓度平均值（M）±2标准差（SD）范围内。

2.10校准品和质控品瓶间差校准品瓶间差CV≤10%。

质控品瓶间差CV≤10%。

2.11稳定性2.11.1效期稳定性取效期后的试剂盒检测外观、准确度、检出限、线性范围、重复性、质控品赋值有效性和特异性，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8和2.9的要求。

2.11.2 质控品开瓶稳定性质控品开瓶后，在2℃~8℃密封避光保存，在7天后检测质控品重复性和质控品赋值有效性，应符合2.6和2.8的要求。

科美光激发化学发光试剂说明书光激化学发光法光激化学发光法（Luminescence）是一种测量化学反应释放的能量或激发的光的方法。

科美光激发化学发光试剂通常用于生物检测、化学分析、环境监测等领域。

以下是关于科美光激发化学发光试剂的一般说明：1. 原理：光激化学发光法基于化学反应释放的能量或激发的光。

这些能量或光可以通过特定的检测器进行测量，以确定反应是否发生或反应的程度。

2. 试剂组成：科美光激发化学发光试剂通常包含反应所需的化学物质、激发剂和可能的缓冲液。

这些试剂被设计成在特定的光激发下产生化学发光。

3. 使用方法：根据具体的应用和实验设计，使用科美光激发化学发光试剂的方法可能会有所不同。

一般而言，用户需要按照试剂说明书进行操作，将试剂与待测样品混合，然后通过测量产生的光来确定待测样品的浓度或活性。

4. 注意事项：使用科美光激发化学发光试剂时，需要注意避免直接接触试剂，以免可能对皮肤或眼睛造成刺激。

此外，应确保试剂储存于避光、干燥的地方，并按照说明书规定的温度和条件进行保存。

5. 优点与局限性：光激化学发光法的优点包括高灵敏度、高特异性以及相对较低的成本。

然而，这种方法可能受到背景噪声和其他潜在干扰的影响，因此在使用前应进行充分的验证和优化。

6. 应用范围：科美光激发化学发光试剂广泛应用于各种领域，如生物学、医学、环境科学等。

它们可用于检测生物标记物、药物、污染物以及其他目标物质。

由于不同版本的试剂说明书可能会有所不同，建议在具体使用前仔细阅读科美光激发化学发光试剂的说明书，并遵循制造商提供的操作建议和注意事项。

如有任何疑问，建议咨询相关领域的专家或与制造商联系以获取更多指导。

孕酮(P)测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中孕酮的浓度。

1.1规格50测试/盒、100测试/盒、200测试/盒。

1.2主要组成成分表1 试剂盒装量及组成2.1 外观2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；2.1.2磁分离试剂摇匀后为均匀悬浊液，无明显凝集；2.1.3液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；2.1.4包装标签应清晰，无磨损。

2.2准确度测试浓度为10ng/mL（允许偏差为±20%）的国家药品标准物（编号：100027），其测量结果的相对偏差应在±10%范围内。

2.3空白检测限不大于0.15ng/mL。

2.4线性在（0.15，40）ng/mL测量范围内，应满足相关系数r≥0.99。

2.5重复性用两个质控品作为样本各重复检测10次，其变异系数（CV）应≤10%。

2.6质控品测值质控品测值在质控范围内。

2.7批间差用三个批号试剂盒分别检测质控品1和质控品2，两个质控品测定结果的批间变异系数（CV）应≤15.0%。

2.8分析特异性用E2校准品缓冲液将潜在交叉反应物配制成一定浓度（见下表），在本试剂盒上测定的结果符合下表要求。

表2 潜在交叉反应物浓度及交叉率要求2.9溯源性根据GB/T21415-2008及有关规定提供所用孕酮(P)校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，溯源至孕酮（P）国家药品标准物质（编号：100027）。

2.10稳定性试剂盒2℃～8℃储存，避免阳光直射，有效期为12个月，取失效期两个月内的样品进行检测，应符合2.1～2.6相应要求。

孕酮测定试剂盒（化学发光免疫分析法）性能指标1.1试剂条性能指标1.1.1外观和性状试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰、准确、牢固；试剂条中第7孔内组分应为棕色含固体微粒的液体或含棕色固体沉淀的透明液体；第12孔内化学发光底物应为无色或淡绿色液体；其余皆应为无色透明液体，无悬浮物、无沉淀、无絮状物。

1.1.2检出限不大于0.64nmol/L1.1.3准确度-相对偏差采用企业参考品进行检测，其相对偏差应在±10%以内1.1.4线性区间试剂盒在0.64nmol/L～127.2nmol/L区间内，其线性相关系数（r）应不小于0.9900。

2.1.5 重复性用同一批次的试剂盒测定两份不同浓度的样本，重复检测10次，其变异系数（CV）应不大于10.0%。

1.1.6批间差用3个批号试剂盒测定两份不同浓度的样本，重复检测10次，测定结果的变异系数（CV）应不大于15.0%。

1.1.7特异性分别添加潜在干扰物于含有孕酮的样本中，获得待测样本中孕酮目标浓度为64nmol/L (允许相对偏差为±15%)，潜在干扰物质浓度为10ng/mL的皮质酮和10ng/mL的17α-羟孕酮。

各个样本测量结果的均值应在目标浓度平均值（X ）±2SD 范围内。

1.2校准品性能指标1.2.1外观校准品应为白色或浅黄色粉状冻干块。

校准品复溶液应为淡蓝色液体，无悬浮物、无沉淀、无絮状物。

1.2.2装量校准品复溶液装量偏差应在±10%之内。

1.2.3准确度孕酮校准品，测试结果偏差应在±10%之内。

1.2.4均一性对同一瓶校准品1、校准品2分别重复10次检测，对同一批次10瓶校准品1、校准品2进行检测，检测校准品1、校准品2瓶内差CV应≤10%，批内瓶间差CV应≤10%。

1.3质控品性能指标1.3.1外观质控品应为白色或浅黄色粉状冻干块。

1.3.2准确度孕酮质控品，测试结果应在靶值范围内。

孕酮化学发光法标准
（Progesterone）浓度的分析方法，该方法基于孕酮与化学发
光底物反应产生荧光发射。

以下是孕酮化学发光法的标准操作流程：
1. 样品制备：将待测样品（如血清、尿液等）离心分离得到清澈的上清液或加入适当的稀释液进行稀释。

2. 准备化学发光底物：根据实验室提供的试剂说明书准备化学发光底物，可根据底物种类和品牌选择适当的工作浓度。

3. 混匀体系：将一定体积的样品或标准溶液与化学发光底物混合均匀。

4. 反应体系：将混匀的体系转移到荧光测定仪器中，在适当的温度下保持反应体系的恒定温度。

5. 荧光测定：在适当的时间间隔内，通过化学发光底物的荧光发射测定孕酮浓度。

荧光强度与孕酮浓度呈正相关。

6. 标准曲线绘制：使用已知浓度的孕酮标准溶液进行多点标定，绘制标准曲线，并通过标准曲线拟合计算待测样品的孕酮浓度。

需要注意的是，孕酮化学发光法的具体操作步骤会根据实验室试剂和仪器的不同而有所差异，因此在进行实验前应详细阅读试剂和仪器的说明书，并按照说明书提供的操作步骤进行操作。

另外，为确保实验结果的准确性和可靠性，需要遵循实验室的质控标准和实验操作规范。

孕酮（Prog）测定试剂盒（磁微粒化学发光免疫分析法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中的孕酮（Prog）的含量。

1.1包装规格100测试/盒，200测试/盒1.2主要组成成分注：1.不同批号试剂盒中各组分不可以互换使用。

2. 校准品和质控品具有批特异性，具体浓度见瓶签。

2.1外观试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；磁微粒试剂摇匀后为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集；其他液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；包装标签应清晰，易识别。

2.2 装量各组分装量应不低于标示体积。

2.3溯源性根据GB/T21415-2008及有关规定，提供试剂盒内校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，溯源至企业一级校准品，一级校准品用纯品质量赋值，与已上市产品比对验证。

2.4线性在[0.2，40.0]ng/mL范围内，相关系数r应不低于0.9900。

2.5空白限应不高于0.10 ng/mL。

2.6准确度回收率应在85.0%~115.0%范围内。

2.7重复性重复测试高低两个水平浓度的质控品，变异系数（CV）应不大于8.0%。

2.8质控品的测定值质控品的测定结果均应在规定的质控范围内。

2.9特异性检测含10ng/mL皮质酮的孕酮样本和含10ng/mL 17α-羟孕酮的孕酮样本，测量结果的均值应在孕酮目标浓度平均值(M)±2标准差（SD）范围内。

2.10批间差在三个批次产品之间，质控品测定结果的变异系数（CV）应不大于15.0%。

2.11稳定性试剂盒在2~8℃保存，有效期为12个月，在有效期结束的前后两个月内，检测试剂盒的线性、空白限、准确度、重复性、质控品的测定值，应符合相应的规定。

孕酮(Prog)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)
适用范围：用于体外定量测定人血清中孕酮(Prog)的含量。

本试剂盒由7种组分、封板膜和自封袋组合而成，由硬纸板包装盒进行包装。

7种组分中除孕酮包被板组分为真空包装的微孔板外，其他6种组分均为塑料瓶包装的液体组分。

试剂盒包装规格为96人份/盒，具体组成见表1：
表1 试剂盒主要组成成分
2.1外观和物理检查
试剂盒组分齐全，液体组分澄清，无渗漏，内外包装完整，标签清晰。

各组分装量不少于表1中要求。

2.2准确性
平均回收率应在90.0~110%范围内。

2.3线性
用Log-Logit数学模型拟合，在0.2~32ng/ml范围内，剂量-反应曲线相关系数（r）的绝对值应不低于0.9900。

2.4精密度
2.4.1批内精密度（CV%）应不高于15%。

2.4.2批间精密度（CV%）应不高于20%。

2.5最低检出限
应不高于0.1ng/ml。

2.6质控血清测定值
每次检测结果均应在允许范围内。

2.7特异性
2.8稳定性
2～8℃放置12个月，测定结果应符合上述2.1，2.2，2.3，2.4.1，2.5项要求。

猪孕激素/孕酮(PROG)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E0459pUSCNLIFE TM本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定猪血清、血浆或其它相关生物液体中PROG含量。

实验原理用纯化的PROG抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的PROG抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的PROG呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。

每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，样品稀释液直接作为空白孔 0 ng/ml。

如配制50 ng/ml标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）100 ng/ml 的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、样品稀释液：1×20ml。

4、检测稀释液A：1×10ml。

5、检测稀释液B：1×10ml。

6、检测溶液A：1×120/瓶（1:100）。

临用前以检测稀释液A 1:100稀释（如：10 检测溶液A / 990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。

7、检测溶液B：1×120/瓶（1:100）。