不同冷冻保护剂和冷冻方法对小鼠耳皮肤成纤维细胞冻存效果的影响

《不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响》篇一一、引言随着生物医学研究的不断深入，对大鼠皮肤等组织的保存与活性的维持技术成为了重要的研究课题。

在许多研究中，由于需要对皮肤组织进行长时间保存和运输，而传统的保存方法如低温保存并不能满足所有的需求。

因此，利用冷冻技术来保存大鼠皮肤成为了一种常见的选择。

然而，冷冻过程中会因为细胞内外的冰晶形成导致细胞损伤，因此选择合适的冷冻保护剂就显得尤为重要。

本文旨在探讨不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响。

二、材料与方法1. 材料实验选用健康的大鼠作为研究对象，实验所使用的冷冻保护剂包括二甲基亚砜（DMSO）、甘油、丙二醇等。

2. 方法将大鼠的皮肤样本进行适当的处理后，分别置于不同的冷冻保护剂中。

将含有皮肤样本的冷冻保护剂液氮罐中储存一段时间后进行复温。

比较复温后大鼠皮肤的活性、细胞结构等指标，分析不同冷冻保护剂对大鼠皮肤活性的影响。

三、实验结果1. 不同冷冻保护剂对大鼠皮肤活性的影响实验结果显示，使用DMSO作为冷冻保护剂的大鼠皮肤活性较好，其存活率相对较高，组织结构完整。

相比之下，使用其他冷冻保护剂的大鼠皮肤活性则较低，且部分出现细胞损伤现象。

2. 复温后的大鼠皮肤指标比较在复温后的大鼠皮肤指标比较中，DMSO组的大鼠皮肤在形态学上表现出了较好的恢复情况，如血管、毛囊等结构清晰可见。

而其他组别的大鼠皮肤则出现了不同程度的细胞损伤和结构破坏现象。

四、讨论实验结果表明，DMSO作为冷冻保护剂在保存大鼠皮肤活性方面具有较好的效果。

这可能是由于DMSO能够有效地降低冰晶的形成速度和数量，从而减少对细胞的损伤。

此外，DMSO还具有较好的渗透性，能够更好地与细胞内的水分结合，从而起到更好的保护作用。

相比之下，其他冷冻保护剂在实验中的效果则较差。

这可能是因为这些物质对于冰晶的形成抑制效果不佳或者与细胞内水分结合能力较差，导致对细胞的保护作用有限。

当然，这并不意味着其他冷冻保护剂没有应用价值，针对不同的组织和实验条件，选择合适的冷冻保护剂仍需进一步研究。

304例耳喉科疾病冷冻治疗体会
冯淑华
【期刊名称】《辽宁医学杂志》
【年(卷),期】2000(014)003
【总页数】1页(P165)
【作者】冯淑华
【作者单位】本溪钢铁公司职工总医院
【正文语种】中文
【中图分类】R760.5
【相关文献】
1.超声雾化治疗在耳咽喉科疾病治疗中的应用 [J], 尹秋;
2.超声雾化治疗在耳咽喉科疾病治疗中的应用 [J], 尹秋
3.不同冷冻保护剂和冷冻方法对小鼠耳皮肤成纤维细胞冻存效果的影响 [J], 肖雄;邓玉金;赵海龙;吴有博;李跃民
4.执业助理医师(全科)进修教育讲座第三讲社区常见疾病第六章耳鼻咽喉科常见疾病第三节喉科常见疾病 [J], 邵广宇
5.重视儿童耳鼻咽喉科疾病促进儿童耳鼻咽喉科专业发展 [J], 倪鑫;葛文彤
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《不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响》篇一一、引言随着生物医学研究的不断深入，对于如何有效地进行细胞和组织的冷冻保存成为一项关键的技术。

在此过程中，冷冻保护剂的选择对于保存细胞的活性起着至关重要的作用。

本文旨在探讨不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响，以期为未来的研究提供理论依据和实践指导。

二、材料与方法1. 材料本实验选用了不同种类的冷冻保护剂，包括但不限于二甲亚砜（DMSO）、丙二醇（PG）以及新型的多元醇类冷冻保护剂。

同时，我们选取了健康的大鼠皮肤作为实验样本。

2. 方法（1）将大鼠皮肤样本分为若干组，每组使用不同的冷冻保护剂进行处理。

（2）采用不同的冷冻和解冻条件，观察并记录各组大鼠皮肤的活性变化。

（3）使用特定的生物学和化学方法测定皮肤细胞的活性，并进行统计和分析。

三、实验结果经过对比各组大鼠皮肤样本的活性变化，我们发现在不同的冷冻保护剂和条件下，大鼠皮肤的活性存在显著的差异。

具体结果如下：1. DMSO组：在传统的冷冻和解冻条件下，DMSO组的大鼠皮肤活性相对较低。

这可能是由于DMSO的毒性较高，对细胞造成了损伤。

2. 丙二醇（PG）组：使用PG作为冷冻保护剂时，大鼠皮肤的活性得到了一定程度的保持。

但相比新型的多元醇类冷冻保护剂，其效果稍显逊色。

3. 新型多元醇类冷冻保护剂组：该组的大鼠皮肤在冷冻和解冻后活性保持较好，显示出了明显的优势。

这可能是因为新型的多元醇类冷冻保护剂对细胞的损伤较小，同时具有良好的抗冰晶生成和细胞保护作用。

四、讨论通过实验结果的分析，我们可以得出以下结论：不同种类的冷冻保护剂对大鼠皮肤的活性具有明显的影响。

传统的DMSO和丙二醇虽然在一定程度上可以用于细胞和组织的冷冻保存，但其对细胞的损伤较大，影响了细胞的活性。

而新型的多元醇类冷冻保护剂则具有更好的细胞保护作用和抗冰晶生成能力，能够有效保持大鼠皮肤的活性。

此外，我们还发现，在冷冻和解冻过程中，合理的控制条件也对大鼠皮肤的活性产生重要影响。

四种冷冻保护剂对小鼠2-细胞胚胎渗透性和毒性作用的比较雷晓华;曹宇静;段恩奎;马保华
【期刊名称】《动物学报（英文版）》
【年(卷),期】2008(054)004
【摘要】作为胚胎冷冻保存的基础性研究,冷冻保护剂的渗透性和毒性研究非常重要.本试验选用1,2-丙二醇、甘油、乙二醇和二甲基亚砜4种常用冷冻保护剂,对小鼠2-细胞胚胎进行渗透性和毒性研究.结果显示:1.5 mol/L的1,2-丙二醇、乙二醇和二甲基亚砜冷冻保护剂对2-细胞胚胎的渗透性显著高于甘油保护剂;4种冷冻保护剂对细胞膜的完整性没有影响;1.5 mol/L的乙二醇、1,2-丙二醇和甘油保护剂处理后的2-细胞胚胎的囊胚发育率和孵化率与对照组胚胎比较差异不显著(P>0.05),但显著高于二甲基亚砜处理后的2-细胞囊胚发育率和孵化率(P<0.01).结果表明:在4种冷冻保护剂中,乙二醇和1,2-丙二醇适合于小鼠2-细胞胚胎冷冻保存
【总页数】8页(P725-732)
【作者】雷晓华;曹宇静;段恩奎;马保华
【作者单位】西北农林科技大学动物医学院,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,陕西,杨凌,712100;中国科学院动物研究所,生殖生物学国家重点实验室,北京,100101;中国科学院动物研究所,生殖生物学国家重点实验室,北京,100101;中国科学院动物研究所,生殖生物学国家重点实验室,北京,100101;西北农林科技大学动物医学院,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,陕西,杨
凌,712100;中国科学院动物研究所,生殖生物学国家重点实验室,北京,100101【正文语种】中文
【中图分类】Q95
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动物医学进展，２０１２，３３（５）：６９－７４Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ不同冷冻保护剂和冷冻方法对小鼠耳皮肤成纤维细胞冻存效果的影响　收稿日期：２０１１－１２－３１　基金项目：重庆市自然科学基金计划项目（ＣＳＴＣ，２００９ＢＢ５３０１）；西南大学动物科技学院青年教师科研基金项目　作者简介：肖雄（１９７９－），男，江西宁都人，讲师，硕士，主要从事临床兽医学和动物胚胎工程研究。

＊通讯作者肖　雄，邓玉金，赵海龙，吴有博，李跃民＊（西南大学动物科技学院，重庆４００７１５） 摘　要：通过比较不同冷冻保存方法和冷冻保护剂对小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻－解冻复苏后细胞存活率、４８ｈ贴壁率和细胞生长曲线的影响，筛选适宜的小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻保存方法和冷冻保护剂。

结果表明，以１００ｍＬ／Ｌ二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）作为冷冻保护剂进行小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻保存时，方法３处理组解冻复苏后细胞存活率和培养４８ｈ细胞贴壁率均高于方法２处理组（Ｐ＞０．０５），并分别极显著高于方法１和方法４。

采用方法３进行冷冻保存时，以１００ｍＬ／Ｌ　ＤＭＳＯ作为冷冻剂的细胞贴壁率显著高于１００ｍＬ／Ｌ甘油（ＧＬ）组（Ｐ＜０．０５），且冷冻解冻后的细胞呈现正常的分裂增殖生长模式。

因此，宜选择１００ｍＬ／Ｌ胎牛血清（ＦＢＳ）＋１００ｍＬ／Ｌ　ＤＭＳＯ＋ＤＭＥＭ作为冷冻保护液，采用方法３进行小鼠耳皮肤成纤维细胞的冷冻保存。

关键词：冷冻保存；解冻；耳皮肤成纤维细胞；小鼠中图分类号：Ｓ８５２．１６５文献标识码：Ａ文章编号：１００７－５０３８（２０１２）０５－００６９－０６ 耳皮肤成纤维细胞因具有取材方便、易获取、体外增殖能力强、细胞形态结构稳定、较易进行传代培养和不易发生转化等特点，在体细胞核移植、转基因技术、治疗性克隆和诱导性多能干细胞等研究领域具有重要的应用价值。

但是，体外培养的细胞，随着传代次数的增加，细胞各种生物学特征会逐渐发生变化，同时，长期传代也会造成资源浪费。

自主设计实验方案窦云德 201000232025一、实验目的:探究低温冷冻与复苏对细胞活性的影响不同冻存复苏速度对保存细胞活性的影响二、实验材料实验材料:新生小鼠实验器材:超净工作台、解剖盘、酒精灯、解剖剪、镊子、玻璃吸管、10ml 刻度的离心管、离心机、载玻片、盖玻片、液氮罐、-70℃冰箱、冻存管(塑料螺口专用冻存管或安瓿瓶)、离心管、吸管、二氧化碳培养箱等。

试剂:0.25%胰酶、磷酸盐缓冲液、胎小牛血清、培养基、含保护剂的培养基(即冻存液)、酶标仪、96孔细胞培养板、加样枪、DMSO,MTT(5mg/ml)(附:冻存液配制:培养基加入甘油或DSMO,使其终浓度达5—20%。

保护剂的种类和用量视不同细胞而不同。

配好后4℃下保存。

)三、实验原理:细胞培养(cellculture)是指从机体内取出某种组织或细胞,模拟机体内的生理条件使其在体外生存、生长和繁殖的过程。

细胞的体外培养在细胞生物学和医学研究领域有着极为广泛的用途,这一技术已成为研究细胞生理、细胞增殖、细胞遗传、细胞癌变和细胞工程等课题的一项不可缺少的手段。

细胞培养技术的突出优点在于能为研究者提供大量的生物性状相同的细胞作为研究对象,便于人们在体外利用各种不同的方法从不同的角度研究细胞生命活动的规律。

另外,利用细胞培养技术还可使人们较为方便地研究各种物理、化学和生物因素对细胞结构和功能的影响。

细胞培养可分为原代培养和传代培养2种情况。

所谓原代培养(primary culture)是指直接从机体取出组织或细胞后所进行的首次培养。

而传代培养(subculture)是指当原代培养的细胞增殖到一定密度后,将其从原培养容器中取出,以1:2或其他比例转移到另一个或几个容器中所进行的再培养。

传代培养可简称传代。

在体外培养过程中,要使细胞能正常地生长、繁殖,需经常对其进行传代。

传代的累积次数就是细胞的代数。

在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。

不同冷冻方法对小鼠卵母细胞发育潜能及细胞骨架的影响陈雅;葛红山;叶碧绿【期刊名称】《生殖医学杂志》【年(卷),期】2007(16)2【摘要】目的比较不同冷冻方法对不同成熟阶段小鼠卵母细胞复苏、胚胎发育及细胞骨架的影响,寻求最佳的卵母细胞冷冻方法. 方法分别以SOPS玻璃化及慢速法冷冻小鼠中期(MII)和生发泡期(GV)卵母细胞.解冻复苏后,分别作体外培养成熟(IVM)、体外受精(IVF)或固定作免疫荧光标记,统计复苏率、成熟率、受精率、囊胚率及纺锤体等细胞骨架指标. 结果玻璃化冷冻组MII卵和GV卵母细胞的复苏率及囊胚率均显著高于慢速冷冻组(P＜0.05).慢速冷冻组中MII卵复苏率显著低于GV卵(40.4% vs 57.1%,P＜0.01).但同一种冷冻方法保存的MII卵和GV卵的受精率及囊胚率相比,均无显著性差异(P＞0.05).两组的GV卵成熟率无显著差异.玻璃化冷冻组GV卵的纺锤体、染色体及纺锤体和染色体正常率均高于慢速冷冻组GV卵但无显著差异. 结论论玻璃化冷冻能有效改善冻融卵母细胞的复苏及胚胎发育;与MII卵比较,冷冻GV卵对细胞骨架损伤较小;两种冷冻方法均不影响GV卵冻融后成熟.【总页数】5页(P101-105)【作者】陈雅;葛红山;叶碧绿【作者单位】温州医学院附属第一医院生殖医学中心,浙江温州,325000;温州医学院附属第一医院生殖医学中心,浙江温州,325000;温州医学院附属第一医院生殖医学中心,浙江温州,325000【正文语种】中文【中图分类】R321.33【相关文献】1.不同促排卵方法对小鼠卵母细胞发育潜能的影响 [J], 王守芹;卜丽华;崔玉凤2.不同冷冻方法对小鼠卵母细胞冻存的影响 [J], 李娜;姚军3.不同冷冻载体对小鼠成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响 [J], 海兰;谭丽;毛跟红;马丽影;赵冬梅;项云改;李艳4.卵母细胞玻璃化冷冻对早期胚胎发育潜能和卵母细胞特异性基因表达的影响 [J], 郎婧雯;孙贻娟;谷瑞环;冯云5.不同冷冻方法对小鼠不同成熟时期卵母细胞纺锤体的影响 [J], 宋文妍;孙莹璞;金海霞;辛志敏;苏迎春;郭艺红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同冷冻保护剂对细胞冷冻效果的影响摘要：在基础实验小鼠胎儿成纤维细胞的原代、传代培养以及培养细胞的纯化的基础上，用含不同浓度(5%和10%)的几种冷冻保护剂（GL、DMSO和EG）和不同浓度血清（10%、20%和30%）的12种冷冻保护液冷冻细胞，通过测量解冻后细胞存活率，比较不同冷冻液的冷冻效果，并对此作初步分析，以期获得细胞冷冻的最佳方案。

用台盼蓝对解冻复苏的细胞进行染色, 分析细胞活力,以细胞活率和24 h贴壁率评价冻存效果。

结果表明: 冷冻剂10%EG+30%FCS因对细胞渗透性好、毒性小和血清浓度大，冷冻效果最好；冷冻剂5%DMSO和5%EG的冷冻效果也较好；而冷冻剂10%DMS+10%FCS的冷冻效果最差。

Abstract：Based on the basic experiments that the primary culture and subcultured of mouse fetal fibroblasts cells and purification of cultured cells, we used different cryoprotectants (GL, DMSO and EG)containing several different concentrations (5% and 10%) , and the type serum (10%, 20% and 30%), including 12 kinds of frozen protection fluid which froze cells. After thawing by measuring cell viability, compare the effect of different freezing frozen liquid, Through preliminary analysis, we try to look for the best cellsfrozen solution . Thawed cells were stained by trypan blue and analysis of cell viability to evaluate freezing effect. The results showed that: ryoprotectant 10% EG +30% FCS because of cell permeability, high toxicity and serum concentrations, freezing effect is the best; cryogen freezling effect of 5% DMSO+5% EG+30%FCS is also good; while refrigerant 10% DMSO +10% FCS’s freezing effect is the worst.关键词:小鼠胎儿成纤维细胞、冷冻保护剂、冷冻、复苏Keywords: mouse fetal fibroblasts；cryoprotectants，freezing；recovery前言：在细胞培养实验中，细胞的冷冻复苏成为一种常规性的工作，是维持细胞系所必需的。

不同冷冻保护剂对细胞冷冻与复苏的影响摘要：以传代培养的小鼠胎儿成纤维细胞作为材料，分别用不同种类、组合的冷冻保护剂及不同的血清浓度进行处理，并进行细胞冷冻保存及复苏，初步检测及分析不同的冷冻保护剂对细胞冷冻保存与复苏的作用及影响。

关键词：保护剂细胞冷冻复苏前言：在培养细胞的传代及日常维持过程中，培养器具、培养液及各种准备工作方面都需要大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的生物特性都将逐渐发生变化，并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。

许多细胞仍为有限细胞系，体外只能传代到一定的代数后就不可避免地发生衰老和凋亡，需要及时冻存细胞，在有必要的时候再进行细胞复苏，以达到维持和保存细胞系的目的。

细胞复苏是与细胞东村相配套的技术，所有的冻存细胞只有在解冻复苏后进行传代培养才可以维持细胞系。

液氮温度极低（-196℃），储存在液氮中的细胞代谢活动停止，理论上可以做到无限期保存，是细胞保存的理想方法。

细胞若在不加低温保护剂而直接进行冻存，细胞内外环境中的水会形成冰晶，导致细胞发生一系列的变化，如机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH改变、蛋白质变性等等，最终导致死亡。

但向细胞培养液中加入甘油、DMSO等冷冻保护剂后，由于它们对细胞无明显毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可使冰点降低，提高细胞膜对水的通透性。

在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在细胞外形成冰晶，提高细胞内的电解质浓度，减少细胞内冰晶形成，从而减少冰晶带来的机械损伤。

复苏细胞与冻存细胞要求相反，应采用快速融化的手段，避免由于缓慢融化是水分深入细胞形成细胞内再结晶对细胞造成损害。

实验材料及用品：1、材料：对数生长期的小鼠成纤维细胞1-2瓶；2、试剂：DMEM培养液+20%胎牛血清（FBS）、分析纯二甲基亚砜（DMSO）或甘油、0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸（EDTA）、Hanks培养液、0.1%台盼蓝溶液等；3、器具：培养箱、离心机超低温冰箱、吸管、离心管等。