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西安源森生物试验室: 复方当归提取物对D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤抗氧化作用最新调查结果显示, 在含有抗氧化作用化妆品中, 含复方当归提取物产品显著更受女性消费者欢迎, 其原因在于, 当归本身所含有除皱、祛斑和美白功效在传统中医药领域已深受认同。
然而, 复方当归提取物可用作皮肤抗氧化具体原理是什么呢？此次试验, 西安源森生物试验室将针对此疑问, 选择优质含复方当归提取物乳、面膜等多个类型护肤品, 共同作用于D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤, 测定其对小鼠皮肤超氧化物和含水量影响。
一、试验目、材料和方法【试验目】: 含复方当归提取物护肤品对皮肤抗氧化作用。
【试验方法】: 测试含复方当归提取物护肤品对D- 半乳糖衰老模型小鼠皮肤羟脯氨酸（Hyp）、超氧化物歧化酶（SOD）以及皮肤含水量影响。
【试验对象】: ICR 3 月龄小鼠30 只。
【试验仪器】: FA/JA型电子天平, DY89-1 型电动玻璃匀浆机, 752N 型紫外分光光度计。
【试验用试剂】: 超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒, 羟脯氨酸（Hyp）试剂盒, 考马斯亮蓝蛋白测试盒, D- 半乳糖。
【受试药品】: 复方当归提取物由西安源森生物制剂中心制备。
DGCC为清洁乳、按摩霜、成型面膜及滋润霜, 由西安源森广州产品研究中心监制。
【试验步骤】:1. 动物分组、造模及给药:将30只小鼠随即分为三组, 每组10只。
正常对照组: 天天小鼠颈背部皮下注射等容量生理盐水;D-半乳糖组: 天天给小鼠颈背部皮下注射12.5% D- 半乳糖（1 000mg/kg）;DGCC 组: 天天小鼠颈背部皮下注射12.5% D- 半乳糖（1000mg/kg）, 并用剃毛器剃去背部被毛, 暴露大小约2cm×3cm 皮肤, 用DGCC 清洁乳涂抹和清水清洗, 再用DGCC面膜敷贴于暴露部位30min, 然后用DGCC 按摩膏按摩1min, 最终外涂DGCC 滋润霜。
2. 衰老小鼠皮肤SOD 活力和皮肤总羟脯氨酸含量测定:42天后, 将各组小鼠同时处死, 取背部脱毛部位皮肤组织块, 经预冷生理盐水漂洗, 除去皮下脂肪及结缔组织, 用滤纸拭干, 取0.5g置10ml 烧杯, 加预冷生理盐水, 眼科剪剪碎组织块后, 倒入匀浆管中, 加预冷生理盐水至5ml, 用电动玻璃匀浆机制成10%组织匀浆（在冰水中进行）, 然后反复冻融3 次, 其完全破碎, 细胞内容物完全游离液相中。
脐带间充质干细胞对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老实验研究王翔;海泉;郑榆坤;赵令卉;申重阳;冯利娟;王小燕;张蓉【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2012(22)3【摘要】目的研究人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对D-半乳糖所致的亚急性衰老小鼠的抗衰老作用.方法对模型对照组和治疗组连续8周颈部皮下注射D-半乳糖(0.25 mg/10 g)以建立衰老模型,两周之后治疗组注射脐带间充质千细胞.检测脐带间充质干细胞治疗前后衰老相关指标:包括小鼠血清、肝组织、脑组织中的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的变化.结果模型对照组与治疗组相比,SOD、CAT偏低,MDA含量偏高并且存在显著性差异(P≤0.05),与空白对照组相比,则存在极显著性差异(P≤0.01).结论脐带间充质干细胞能够显著改善D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠的相关衰老指标,具有抗衰老作用.【总页数】5页(P21-25)【作者】王翔;海泉;郑榆坤;赵令卉;申重阳;冯利娟;王小燕;张蓉【作者单位】成都清科生物科技(集团)有限公司,四川成都610094;成都清科生物科技(集团)有限公司,四川成都610094;成都清科生物科技(集团)有限公司,四川成都610094;成都清科生物科技(集团)有限公司,四川成都610094;成都清科生物科技(集团)有限公司,四川成都610094;成都清科生物科技(集团)有限公司,四川成都610094;成都清科生物科技(集团)有限公司,四川成都610094;四川大学基础医学与法医学院,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.茶氨酸对D-半乳糖衰老模型小鼠抗衰老作用的实验研究 [J], 刘显明;李月芬;李国平2.深海鲣鱼鱼油对D-半乳糖致衰老模型小鼠抗衰老的作用 [J], 郑霖波;白冬;虞舟;张海玲;谢超3.草还丹、人参固本丸和二至丸对D-半乳糖\r致衰老模型小鼠抗衰老作用的研究[J], 方哲;陈素红;方慧;苏洁;吕圭源4.姬松茸多糖对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠的抗衰老作用及其Keap1/Nrf2/ARE信号转导途径机制 [J], 段懿涵; 盛瑜; 徐健; 卢学春; 杜培革; 安丽萍5.富锗金针菇菌丝体对D-半乳糖致衰老模型小鼠抗衰老作用研究 [J], 朱蕴兰;李亚楠;陈学红;陈宏伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2024年注射D―半乳糖致大鼠衰老效应的评价D-半乳糖是一种广泛应用于动物衰老研究的试剂，通过注射D-半乳糖可以诱导实验动物产生类似自然衰老的生理和生化变化。
在本研究中，我们采用了连续注射D-半乳糖的方法，以制造大鼠衰老模型。
具体方法如下：首先，选择健康成年大鼠作为实验对象，并将其随机分为实验组和对照组。
实验组大鼠每天接受一定量的D-半乳糖溶液注射，而对照组则注射等量的生理盐水。
注射时间持续数周至数月不等，以便充分诱导衰老效应。
在注射过程中，我们严格控制了注射剂量和频率，以确保实验结果的可靠性和可重复性。
同时，我们还密切观察了大鼠的生长状况、体重变化以及行为表现，以便及时发现并处理可能出现的异常情况。
二、大鼠衰老指标评估为了评估D-半乳糖注射对大鼠衰老的影响，我们选取了一系列衰老指标进行测定。
这些指标包括体重、毛发状况、皮肤弹性、肌肉力量、运动能力、记忆力和学习能力等。
通过定期测量大鼠的体重，我们发现实验组大鼠的体重增长速度明显减缓，甚至出现了体重下降的情况。
此外，实验组大鼠的毛发变得稀疏、干燥且失去光泽，皮肤弹性也显著下降。
这些外观上的变化表明D-半乳糖注射对大鼠的衰老产生了明显的影响。
在评估肌肉力量和运动能力方面，我们采用了抓握力测试和跑步机测试等方法。
结果显示，实验组大鼠的抓握力和运动能力均较对照组明显降低，表明其肌肉力量和运动能力受到了损害。
在记忆力和学习能力方面，我们使用了迷宫测试和条件性反射等方法进行测定。
实验组大鼠在迷宫测试中的表现较差，需要更长的时间才能完成任务；而在条件性反射测试中，实验组大鼠的反应速度和准确性也低于对照组。
这些结果表明D-半乳糖注射对大鼠的神经系统功能产生了负面影响。
三、组织病理学检查为了更深入地了解D-半乳糖注射对大鼠衰老的影响，我们进行了组织病理学检查。
通过采集大鼠的肝脏、肾脏、心脏和脑组织等样本，我们观察了这些器官的组织结构和细胞形态变化。
结果显示，实验组大鼠的肝脏和肾脏出现了明显的病理变化，如肝细胞脂肪变性、肾小球硬化等。
D-半乳糖动物模型构建技术原理
转基因动物指的是转基因工程培育的动物。
遗传的基本物质是DNA，基因则是位于染色体上有遗传效应的DNA片段，对于储存在生物全套染色体中的全部遗传信息，可称其为基因组。
由于不同种类、不同个体的生物基因组成是不同的，因此对动物个体来说，非自身的基因成分属于外源基因，如果把外源基因整合或导入动物染色体基因中，那么这个外源基因就被称为转基因(transgene)（即转移来的基因），这种动物就是转基因动物（transgenic animals）。
转基因动物表达系统，包括外源基因、表达载体和受体细胞等，基因组的转移则是细胞核移植和动物克隆技术，人工合成与设计基因、全基因乃至基因组的转基因技术是合成生物学。
D-半乳糖模型
D-半乳糖（D-galactose，D-gal）是一种还原单糖，使组织渗透压升高、产生氧化应激和炎症反应，促进神经衰老的发生和发展。
通过皮下连续注射D-gal 建立亚急性衰老动物模型，导致认知功能和胆碱能功能障碍，产生氧化应激和神经炎症反应，海马区 tau 蛋白过度磷酸化。
D-gal 衰老模型与自然衰老模型相比造模时间短、与SAM 模型相比具有价格低、结果可靠稳定，有自然衰老动物模型在氧化损伤、神经行为学以及病理形态方面的病理特征等的优点，在实验研究中应用较多。
但其缺点是在生化分析中与自然衰老动物模型具有一定的差异，现在多与铝中毒诱导模型联合应用。
益气聪明汤对D-半乳糖衰老小鼠免疫功能影响的实验研究肖政华;张光奇
【期刊名称】《贵阳中医学院学报》
【年(卷),期】2011(033)004
【摘要】目的:观察益气聪明汤对老小鼠D-半乳糖鼠免疫功能的影响.方法:采用D-半乳糖皮下注射建立小鼠衰老模型.观察益气聪明汤其IL -2量,胸腺、脾脏指数,脾T、B淋巴细胞增值活性的影响.结果:益气聪明汤三个治疗组均不同程度升高小鼠免疫器官指数、IL-2量、脾淋巴细胞增值活性,升高与其剂量基本呈正相关.结论:益气聪明汤有良好的延缓衰老作用,其机理可能与增强机体的免疫功能有关.
【总页数】3页(P154-156)
【作者】肖政华;张光奇
【作者单位】贵阳中医学院第一附属医院消化内科,贵州贵阳550001;贵州省毕节地区行署,贵州毕节551000
【正文语种】中文
【中图分类】R965.1
【相关文献】
1.苦荞茶对D-半乳糖所致衰老小鼠MDA和MAO影响的实验研究 [J], 邓洋;张利霞
2.人参茎叶总皂苷对D-半乳糖致衰老小鼠免疫功能的影响 [J], 刘佳;张敬敬;李明阳;石高星;曾志能;魏珊珊
3.益气聪明汤对D-半乳糖衰老小鼠抗自由基作用的实验研究 [J], 肖政华;张光奇
4.大黄(庶虫)虫丸、当归补血汤对D-半乳糖致衰老小鼠血清中SOD和MDA影响的实验研究 [J], 郭晓峰;冯玉华;赵延龙;张晓薇;周志强;李艳彦;李俊莲
5.桑葚提取液对D-半乳糖致衰老小鼠血液生化指标影响的实验研究 [J], 罗姮;邓秀婷;李彦彬;徐远超;杨高群;林秀澄;李朝敢
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D-半乳糖剂量及小鼠性别对衰老模型的影响林映雪;庄朋伟;张金保;张凤奇;张艳军【期刊名称】《天津中医药大学学报》【年(卷),期】2013(32)3【摘要】[目的]考察D-半乳糖剂量以及实验小鼠性别对衰老模型形成的影响。
[方法]实验选用不同性别的ICR小鼠,分别采用随机数字表法分为正常对照组、D-半乳糖低(100 mg/kg)、中(300 mg/kg)、高(1 000 mg/kg)剂量组。
每日将D-半乳糖于颈背部皮下注射,对照组注射等量生理盐水,连续注射10周,采用Morris水迷宫考察模型小鼠学习记忆能力,取血检测血中生长因子及氧化相关指标,取脑组织进行苏木-伊红(HE)染色,考察脑组织病理形态变化。
[结果]与正常对照组比较,不同剂量D-半乳糖对小鼠学习记忆能力均有不同程度的损伤,但雌雄小鼠无明显差别,尤其高剂量组平均潜伏时间明显延长(P<0.05);D-半乳糖中、高剂量组小鼠血中血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)均呈不同程度降低(P<0.05或P<0.01),雌雄间无明显差异;D-半乳糖中、高剂量组小鼠血中丙二醛(MDA)浓度较正常对照组明显升高(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活力较正常对照组明显下降(P<0.05或P<0.01)。
[结论]ICR小鼠皮下注射300-1 000 mg/kg剂量的D-半乳糖连续10周可以不同程度的引起小鼠学习记忆能力明显下降,并且可能与氧化反应升高和血中生长因子水平降低有关,实验小鼠性别对D-半乳糖致衰老模型无明显影响。
【总页数】4页(P144-147)【关键词】D-半乳糖;衰老;学习记忆能力;性别;生长因子【作者】林映雪;庄朋伟;张金保;张凤奇;张艳军【作者单位】天津中医药大学【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.鲣鱼内脏中鱼油对D-半乳糖制衰老模型小鼠抗衰老的影响 [J], 虞舟;白冬;张海玲;谢超2.实验性铅中毒对大鼠海马p75基因表达的影响/神经生长液对D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响/周围神经损伤后相关结构组织学变化的实验研究/神经再生素对PC12细胞凋亡的影响 [J],3.二苯乙烯苷对D-半乳糖衰老模型小鼠衰老指征的影响 [J], 宋士军;李欣;刘纪钊;李芳芳4.鲣鱼内脏中鱼油对D-半乳糖制衰老模型小鼠抗衰老的影响 [J], 虞舟;白冬;张海玲;谢超;;;;5.高剂量D-半乳糖复制C57BL/6J衰老小鼠模型的研究 [J], 赵焕东; 胥洪鹃; 李坚; 任彩萍; 陈玉祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
现代医药卫生2018年11月第34卷第21期JModMedHealth，November2018，Vol.34，No.21·论著·D⁃半乳糖诱导小鼠原代皮肤成纤维细胞衰老模型的建立*张鑫，黎静，鲁晴，黄华生，林毓君，唐春女，潘璐璐，莫书荣△（广西医科大学生理教研室，广西南宁530021）【摘要】目的构建D⁃半乳糖诱导小鼠皮肤成纤维细胞（MSF）衰老模型。方法取5~7d昆明乳鼠背部皮肤，采用Ⅰ型胶原酶消化法分离获得MSF，通过形态学观察及Vimentin免疫组织化学法鉴定MSF细胞。分别用不同浓度D⁃半乳糖诱导MSF细胞0、24、48h，采用β⁃半乳糖苷酶衰老染色、逆转录⁃聚合酶链反应（RT⁃PCR）检测衰老相关基因p53、细胞免疫荧光法分析Sirt1基因表达水平，并分析细胞衰老情况。结果光学显微镜下细胞呈多突的梭形或星形的扁平细胞，Vimentin蛋白免疫组织化学分析呈阳性。β⁃半乳糖苷酶衰老染色实验结果显示，不同浓度D⁃半乳糖诱导后染色阳性细胞数量较对照组显著增多，差异有统计学意义（P<0.01）。在D⁃半乳糖（20g/L）诱导24、48h后，与对照组比较，衰老MSFp53基因表达水平显著升高，差异有统计学意义（P<0.01）；细胞免疫荧光结果显示，D⁃半乳糖诱导48h后Sirt1蛋白表达水平明显降低。结论通过Ⅰ型胶原酶消化法及D⁃半乳糖诱导法成功建立了衰老模型。【关键词】半乳糖；细胞衰老；成纤维细胞；基因，p53；Sirt1蛋白DOI：10.3969/j.issn.1009⁃5519.2018.21.002文献标识码：A文章编号：1009⁃5519（2018）21⁃3268⁃03EstablishmentofD⁃galactoseinducedprimaryskinfibroblastsagingmodelinmice*ZHANGXin，LIJing，LUQing，HUANGHuasheng，LINYujun，TANGChunnyv，PANLulu，MOShurong△（DepartmentofPhysiology，GuangxiMedicalUni⁃versity，Nanning，Guangxi530021，China）【Abstract】ObjectiveToestablishanagingmodelofmiceskinfibroblasts（MSF）inducedbyD⁃galactose.MethodsTheskinonthebackof5-7dmicewasobtained.AndtheMSFwereobtainedbytypeⅠcollagenasedigestion.ForidentifiedMSF，morphologyobservationandcellimmunohistochemistrywasdetected.AfterMSFtreatmentwithD⁃galactosefor0，24，48h，β⁃galactosidaseagingstaining，reversetranscriptionpolymerasechainreaction（RT⁃PCR）ofsenescencerelatedgenep53andcellularimmunofluorescenceofSirt1weredetectedforanalysisofcellsenescence.ResultsThecellsobtainedfromtypeⅠcollagenasedigestionwereshowedinspindle⁃shapedorstar⁃shapedflatcellwithprotrusionsunderanopticalmicroscope.AndVimentinproteinwaspositivestainingintheimmunohistochemicalanalysiswhichsuggestedthattheprimaryculturedcellswereMSF.β⁃galactosidaseassayinMSFshowedthatthenumberofpositivecellsinMSFwithdifferentconcetrationofD⁃galac⁃toseweresignificantincreasedwhencomparedwiththoseofcontrolgroupin24hand48h，therewereStatisticalsignificance（P<0.01）.AfterinductionbyD⁃galactose（20g/L）24hand48h，therelativemRNAexpressionsofp53inMSFwerehigherthanthatofcontrolgroup，therewereStatisticalsignificance（P<0.01）.TheproteinofSirt1inMSFinducedbyD⁃galactosewerelowerthanthatofcontrolgroup.ConclusionD⁃galactoseinducedprimaryskinfibroblastsagingmodelinmiceisestablishedbytypeⅠcollagenasedigestionandD⁃galactoseinductioninthisstudy.【Keywords】Galactose；Cellaging；Fibroblasts；Gene，p53；Sirt1protein*基金项目：国家自然科学基金资助项目（81560505）作者简介：张鑫（1990—），硕士研究生，主要从事皮肤衰老的分子机制的研究△通信作者，E⁃mail：mosr28@126.com随着我国人口数量的不断增加，人口老龄化问题逐渐突出，因此衰老性疾病和亚健康的衰老性疾病等随之而来。抗衰老研究及如何预防和延缓年龄相关疾病的发生和发展将有利于提高人们的生活质量，减少其家庭的经济负担，已逐渐成为医学界关注的热点。衰老最先表现为皮肤衰老，皮肤是人体最大的器官，由表皮、真皮和皮下组织构成，其中真皮为皮肤提供各种营养物质，成纤维细胞是真皮的主要细胞组成，维系着皮肤正常的生理结构和功能[1]。衰老的皮肤在结构和功能上将发生改变[2⁃3]。因此，皮肤成纤维细胞衰老模型在研究衰老机制、表现及筛选延缓衰老药物起着重要作用。本研究旨在建立成纤维细胞（MSF）衰老模型，为开展皮肤衰老及老年相关疾病的研究提供实验基础。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物选取5~7d昆明乳鼠，购自广西医科大学实验动物中心。1.1.2主要试剂高糖DMEM培养基（美国Gibco公··3268现代医药卫生2018年11月第34卷第21期JModMedHealth，November2018，Vol.34，No.21司）、Ⅰ型胶原酶（美国Invitrogen公司）、β⁃半乳糖苷酶细胞衰老染色试剂盒（上海碧云天公司）、鼠抗Vimentin单克隆抗体（武汉博士德公司）、鼠抗Sirt1单克隆抗体（SANTACRUZ公司）、逆转试剂盒（Thermo公司）、液体DAB酶底物显色试剂盒（福州迈新生物技术有限公司）。4，6⁃二脒基⁃苯基吲哚（DAPI）（Solarbio公司）1.2方法1.2.1MSF的培养取5~7d的昆明乳鼠，用75%乙醇浸泡消毒30min，用消毒过的手术剪分离乳鼠的背部皮肤5cm×3cm，将分离下来的皮肤置于10cm的培养皿中，用含1%青霉素⁃链霉素的去离水磷酸盐缓冲液（DPBS）清洗2次，吸净DPBS，去除血管脂肪，用手术剪将皮肤组织剪碎并将组织碎块转移到15mL离心管内，然后加入10mL的0.1%Ⅰ型胶原酶（无血清的高糖DMEM培养基），并吹打使得皮肤组织碎块分散，将离心管放入到CO2细胞培养箱中消化90min，并且每隔30min振荡摇晃离心管1min。消化完后离心机以1500r/min速率离心5min，弃上清，用含10%胎牛血清的高糖DMEM清洗2次，以1000r/min离心速率离心3min，弃上清，再用含15%胎牛血清的高糖DMEM重悬组织块并用70μm的滤筛过滤，将滤液转移到培养瓶，并放入二氧化碳（CO2）细胞培养箱中培养，隔天换液。1.2.2MSF的鉴定采用形态学观察法观察MSF的形态特征；Vimentin蛋白采用细胞免疫组化法分析MSF，具体方法如下，将培养板中长好MSF的玻片用PBS洗3次，用4%多聚甲醛固定爬片15min，PBS清洗3次；0.5%TritonX⁃100室温通透20min；加滴一抗波形蛋白抗体。用PBS清洗，滴加生物素标记的二抗，PBS冲洗。滴加链亲和素⁃过氧化酶溶液孵育。DAB显色，用苏木素复染，用中性树胶封固，在显微镜下采集图像。1.2.3D⁃半乳糖诱导细胞衰老将生长状态良好的MSF接种于6孔板，用高糖DMEM培养基、37℃CO2培养箱培养。待细胞融合70%~80％，给予含有不同浓度D⁃半乳糖（10、20、30g/L）的完全培养基，分别培养0、24、48h。1.2.4β⁃半乳糖苷酶染色实验按照β⁃半乳糖苷酶染色试剂盒说明书进行实验操作，具体方法如下：吸弃旧的培养基，用DPBS清洗1次，加入1mL染色固定液，室温固定15min；吸弃固定液，用DPBS清洗3次，每次3min；吸弃DPBS，每孔加入1mL染色工作液，用保鲜膜盖住6孔板，然后放置于37℃恒温箱中孵育过夜。甘油封闭镜下观察，各组随机计数400个细胞中的阳性细胞数，计算阳性细胞率（%）。1.2.5逆转录⁃聚合酶链反应（RT⁃PCR）法检测p53基因表达D⁃半乳糖（20g/L）分别诱导MSF0、24、48h，采用Trizol法提取细胞总RNA并进行RT⁃PCR，采用荧光定量染料法检测p53mRNA表达水平（上游引物：AGTCCTTTGCCCTGAACTGC，下游引物：GCGGATCTTGAGGGTGAAAT），每个样本重复测量3次，以GAPDH（上游引物：CGGAGTCAACGGATTTGGTCGTAT，下游引物：AGCCTTCTCCATGGTGGTGAAGAC）为内参参照标准，按照2－△△Ct计算p53基因相对表达量。1.2.6细胞免疫荧光观察Sirt1基因在MSF中的表达D⁃半乳糖（20g/L）分别诱导MSF0、48h，将培养板中爬好MSF的玻片用PBS清洗3次，每次3min；4%多聚甲醛固定爬片15min，用PBS清洗3次，每次3min；0.5%TritonX⁃100室温通透20min；用PBS清洗3次，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加山羊血清室温封闭30min；吸水纸吸掉封闭液，并滴入足量稀释好的一抗小鼠单克隆抗体Sirt1，放入湿盒，在4℃孵育过夜；用PBST浸洗爬片3次，并吸干液体，滴入稀释好的荧光二抗，黑暗条件下20~37℃湿盒孵育1h，PBST洗3次，每次3min；滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，用PBST清洗；用含抗荧光淬灭剂的封片液封闭，在荧光显微镜下采集图像。1.3统计学处理所有实验均重复3次，计量资料以x±s表示，应用SPSS17.0统计软件进行数据分析。多组间比较应用单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1倒置相差显微镜观察MSF形态学变化光镜下可见细胞胞体较大，胞核较大呈椭圆形，染色质疏松着色浅，核仁明显，为多突的梭形或星形的扁平细胞，具有突起，符合皮肤MSF的形态学特征。见图1。2.2Vimentin蛋白免疫组织化学分析Vimentin蛋白免疫组织化学结果显示，原代培养细胞中Vimentin蛋白呈阳性表达。见图2。2.3β⁃半乳糖苷酶染色分析β⁃半乳糖苷酶染色后，A.第1天；B.第2天图1原代成纤维细胞形态及鉴定（4×）BAA.对照组；B.Vimentin组图2MSFVimentin蛋白免疫组化分析（4×）BA··3269
