异位成骨动物模型的研究进展

人骨形成蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究江　标,李　明△,曹豫江重庆医科大学附属儿童医院骨科(重庆400014) 【摘要】　目的　探讨人骨形成蛋白9(hum an bone mo rphogenetic9,hBM P29)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性。

方法　采用阳离子脂质体介导hBM P29基因转染兔骨髓间充质干细胞(m esenchym al stem cells, M SC s),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(AL P)活性定量测定及V on Ko ssa’s钙结节染色;M SC s 与聚乳酸2羟基乙酸(po lylactide2co2glyco lide,PL GA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察M SC s在PL GA上的黏附、生长情况;将转染与未转染hBM P29基因的M SC s分别与PL GA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4、8周后进行H E染色观察。

结果　流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%;转染组M SC s的AL P活性较未转染组明显增高(P<0.01),V on Ko ssa’s钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组;荧光显微镜及扫描电镜观察见M SC s在PL GA支架上的黏附、生长良好;异位回植术后4、8周组织H E染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。

结论　阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染M SC s,BM P29能刺激M SC s的AL P活性增强,诱导钙结节形成;BM P29基因转染的M SC s作为一种新型的种子细胞,其与PL GA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性。

【关键词】　骨髓间充质干细胞　BM P29　PL GA　组织工程【中图分类号】　R782Ectop ic Bone For ma tion of Bone M arrow M esenchy ma l Ste m Cells with Gene Tran sfer of Hu man Bone M orphogenetic Prote i n-9Gene i n Rabbit　J IA N G B iao,L I M ing△,CA O Y u2j iang.　D ep a rt m en t of P ed ia tric O rthop aed ics,Ch ild ren’s H osp ita l of Chong qing M ed ica l U n iversity,Chongqing400014,Ch ina 【Abstract】　Objective　To investigate the m ethod com b in ing hBM P29gene therapy w ith tissue2engineering techn iques to i m p rove o steogenesis in an ectop ic bone fo rm ati on model in rabb its.M ethods　R abb it m arrow M SC s w ere tran sferred w ith BM P29gene by cati on ic li po som e,and then w ere sub jected to a series tests including fluo rescen t m icro scope,F low cytom eter(FC M),AL P activity quan titative assay and V on Ko ssa’s calcium nodu s stan in ig;M SC s tran sfected w ith BM P29gene successfu lly w ere seeded on to scaffo lds of po lylactide2co2glyco lide (PL GA).Cell2m atrix in teracti on s w ere ob served w ith fluo rescen t m icro scopy and scann ing electron ic m icro scopy. T he tissue2engineered bones w ith M SC s seeded on PL GA w ere fu rther subcu taneou sly i m p lan ted in to rabb its.T he i m p lan ts w ere evaluated w ith h isto logical stain ing at4and8w eek s after su rgery.Results　T he gene tran sfer efficiency of M SC s tran sfected w ith BM P29gene w as34.15%,w h ich w as m easu red by FC M.T he AL P activity of M SC s w ith BM P29gene tran sfer w as h igher than that of non2tran sfered cells(P<0.01).T he calcium nodu s fo rm ati on of M SC s w as enhanced by the gene modificati on of BM P29gene.M SC s seeded on to PL GA show ed h igh level of cell p ro liferati on,and efficien t syn thesis of cell m atrix w as ob served w ith scann ing electron ic m icro scopy. In the ectop ic bone fo rm ati on model,new bone area w as also sign ifican tly i m p roved by BM P29gene modifiedM SC s seeded on PL GA(P<0.05).Conclusion　hBM P29gene modified M SC s cou ld enhance ectop ic new bone fo rm ati on in rabb its.T hese resu lts indicated that the strategy com b in ing BM P29gene modified M SC s w ith PL GA m igh t be su itab le fo r bone tissue engineering app licati on s.【Key words】 M SC s BM P29 PL GA T issue Engineering 骨缺损修复一直是骨科领域的难题之一,目前常用的人工合成替代物、异体骨移植、自体骨移植等在不同程度上存在一些问题。

BMP在骨科领域中的临床应用研究进展作者：彭吾训龚跃昆李世和王鑫吴仕峰【关键词】骨科1965年Urist等［1］发现骨基质中含有能够诱导异位成骨的骨形态发生蛋白以后，研究者们经过大量动物实验和临床应用研究证实，BMP能够诱导间充质细胞不可逆地分化为骨、软骨、韧带、肌腱和神经组织。

基于BMP的安全性和高效诱导成骨活性被越来越多的实验所证实，在一些国家BMP 已进入大规模的临床实验阶段。

在骨科领域中，BMP的临床应用研究进展主要有以下几个方面。

1 治疗新鲜骨折鉴于临床上某些部位和某些严重骨折发生骨不连的比例较大，研究者们试图应用BMP的高效成骨活性，辅助治疗这种类型的新鲜骨折，以降低其骨不连的发生率。

关于BMP治疗新鲜胫骨骨折、股骨骨折、尺骨骨折和桡骨骨折的大量动物模型实验研究已经证实，BMP在治疗新鲜长骨骨折方面是安全有效的。

近年来，已有学者进行BMP治疗人新鲜长骨骨折的临床研究，1997年，Michael等［2］应用BMP复合Ⅰ型胶原和自体红骨髓治疗132例新鲜骨折，对照组117例以自体髂骨移植。

随访2年，试验组与对照组愈合率差异无显着性，但对照组术后感染率高于试验组，其余并发症差异无显着性。

试验组12例术后出现一过性血浆牛胶原抗体，但对伤口愈合和骨修复无明显影响。

他们认为:与自体髂骨移植相比，BMP复合Ⅰ型胶原和自体红骨髓治疗新鲜长骨骨折是安全有效的，并且缩短了手术时间和减少了术后感染。

美国创伤中心对12例开放性胫骨骨折患者采用rhBMP-2和可吸收胶原通过伤口导入，12例患者中的9例在6个月内骨折修复［3］。

最近，Tuvek TJ等报道了用rhBMP-2和可吸收胶原结合外固定器或髓内钉治疗12例开放性胫骨骨折患者，术后16周9例患者骨折愈合，3例患者需再次行骨移植术［4］。

目前，美国FDA已经批准将开放性胫骨骨折作为评价BMP的临床实验模型。

2 治疗骨缺损、骨不连骨缺损、骨不连是矫形外科棘手的难题之一。

骨基质明胶在异位成骨区的成骨研究目的探讨不同处理后的骨基质明胶（BMG）在异位成骨区的成骨效果。

方法将36只日本大耳白兔随机分为3组，每组12只。

A组血管束植入用bFGF 预处理过的BMG中；B组血管束植入未作任何预处理的BMG中；C组单独植入BMG。

分别于术后4、8、12周给各组动物灌注墨汁后做HE及Masson染色进行组织学观察和定量分析。

结果新生骨面积定量分析，各个时间点上A组新生骨面积均最大，与C组比较差异均有统计学意义（均P ﹤0.05）。

新生骨面积比与血管面积比相关分析结果显示，r4周=0.53，P﹤0.05；r8周=0.46，P﹤0.05；r12周=0.61，P﹤0.05。

结论血管化程度越高，新生骨面积越大；新生骨面积比与血管化程度呈正相关。

[Abstract] Objective To investigate the osteogenic effect of bone matrix gelatin after different dealing in ectopic bone area femoral. Methods 36 Japanese big ears white rabbits were divided into group A, B and C (12 in each). Group A: bFGF+Vascular bundle+BMG. Group B: Vascular bundle+BMG. Group C: BMG. The animals were sacrificed after 4, 8 and 12 weeks respectively by perfusing ink. HE and Masson stained for histological observations and quantitative analysis. Results Quantitative analysis showed that the osteogenic and neovascularization areas of group A were the largest on the every time point. The correlation analysis of osteogenic area and vascular area were r4 weeks=0.53, P ﹤0.05; r8 weeks=0.46, P ﹤0.05; r12 weeks=0.61, P﹤0.05. Conclusion The better vascularization, the better osteogenesis. There is a positive correlation between osteogenesis and vascularization.[Key words] Bone matrix gelatin; Vascularization; Basic fibroblast growth factor骨折愈合是一个受多因素影响的复杂过程，其中骨折区的血液供应对骨折愈合的效果起到非常重要的作用。

异位成骨动物模型的研究进展2015-04-04 来源：中国矫形外科杂志作者：吴一龙异位成骨皮下肌袋作者:南京医科大学朱彦丞近年来随着骨组织工程学的迅速发展，应用骨组织工程技术治疗骨缺损为当前发展趋势，异位成骨动物模型相对于原位成骨可以减少实验中影响成骨的变量，能评估成骨干细胞、成骨诱导材料的效果。

异位成骨动物模型的建立方法从最早的皮下和肌肉小袋植入模型，到后来的肾被膜植入以及腹腔内植入模型，各有特点，选择一个合适的模型对实验的成功有着密切的关系。

本文将对异位成骨动物模型的研究进展作一综述。

皮下植入模型皮下植入模型操作方法简单，应用最为广泛。

模型可选择的动物大到猪、犬，小到兔、大鼠、小鼠，目前应用最广泛的是鼠类。

皮肤切口的选择在背部，不仅植入空间大，而且鼠不容易触碰到伤口的缝线，有利于切口愈合，若行对照实验，可在背部对侧皮下植入作为对照。

Kasten等为比较修饰后生长分化因子5(GDF－5)与原生GDF－5及骨形态生成蛋白2(BMP－2)的成骨能力，将分别含有修饰后GDF －5、BMP－2以及原生GDF－5的磷酸三钙材料植入24只小鼠背部皮下区域，4周后测量ALP含量比较早期成骨情况，得出修饰后GDF－5与BMP－2成骨能力差异无统计学意义，但均优于原生GDF－5的结论。

考虑到小型猪的骨再生率与人类接近，Metzler等选择35只小型猪为实验对象，切口选择在猪的椎旁皮下区域，用以模拟人类骨再生模型比较富血小板血浆(PＲP)对植入牛属羟基磷灰石(bHAP)、藻类羟基磷灰石(pHAP)、生物玻璃(BG)骨替代材料成骨效果的影响，结果提示PＲP对bHAP及pHAP成骨能力提高显著，BG实验组及对照组均未见有异位成骨出现。

骨髓间充质细胞(BMSCs)作为一种多能干细胞是经典的植入细胞，但单纯干细胞植入效果往往不佳，尤其在皮下植入模型，所以常常联合羟基磷灰石、磷酸三钙、聚己内脂等支架材料和BMP等细胞因子加以诱导，Noshi等将多孔羟基磷灰石材料(HA)、HA/BMP、HA/MSCs及HA/MSCs/BMP分别植入大鼠皮下，结果显示HA和HA/BMP组未见类骨质形成，HA/MSCs组在植入4周后可见新生骨出现，而HA/MSCs/BMP组则在2周后即可见明显的新骨生成，4周后新骨形成量及范围更大，提示三者联合使用能够更大程度地促进诱导成骨。

２００９馨２胃第１７襁第１期牵鬻实验动钫学缀ＡＣＴＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＵＭＡＮＩＭＡＬＩＳＳＣＩＥＮＴＩＡＳＩＮＩｃＡＦｅｂｒｖａｒｙ，２００９Ｖ０１．１７Ｎｏ．１子宫内膜异位症动物模型研究进展席∞∞盼艚ｅ目与）曩综述・进展霉毽Ｐｏ≈、±；≈盼艚ｅ；娆｝赖秋红，杨兆荣，钱静（扬州大学朦学院，扬州２２５００１）【獠要】为耩究子富海貘异位症瓣病霞、发病橇篌、治疗稀溪耱对策，嚣簧梅建实验秘粝模鏊。

零交逶过分掰各种模型的优点和缺点，为选择性应用动物模型提供指导，从而更利于对该病的研究。

【关键词】子宫内膜男位症；动物模型；综述【孛垂分类每ｌＲ－３３２【交藏拣谈码ｌ盍【文章编号ｌ１００５－４８４７（２００９）０１４３０８０－０３ＲｅｃｅｎｔＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＡｎｉｍａｌＭｏｄｅｌｓｏｆＥｎｄｏｍｅｔｒｉＯｓｉｓＬＡＩＱｉｕ－ｈｏｎｇ，ＹＡＮＧＺｈａｏ－ｒｏｎｇ，Ｑｌ矗嚣Ｊｉｎｇ（ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＹａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎ孕Ｊｌｏｕ２２５００１，Ｃｈｉｎａ）【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｔｉｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｓｉｓ，ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｔｈｅｒａｐｙａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｙ０ｆｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ（Ｅ醚），ｉｔｉｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓ．Ｙｎｒｏｕｇｈａｎａｌｙｚｉｎｇｔｈｅ旋ｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｖａｒｉｅｓｋｉｎｄｓｏｆａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓ，ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｃＫｎｐｒｏｖｉｄｅａｇｕｉｄａｎｃｅｆｏｒｕｓｉｎｇａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｓｄｅｅｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄｉｔｗｉｌｌｂｅｍｏｒｅｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｆｏｒｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎＯＨｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ．【№ｗｏｒｄｓ】Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｅｓｉｓ；Ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌ；Ｒｅｖｉｅｗ子宫内膜异使症（ｅｎｄｏｍｅｔｆｉｏｓｉｓ，ＥＭ）是指具有生长功麓酶子宫内膜毒瑗予子宫蕴黻羚的部蕴蒸发生的瘸变。

子宫内膜异位症动物模型研究进展[摘要] 本文对子宫内膜异症（EMs）动物模型的构建方法及优缺点综合阐述，希望建立合适的动物模型，加深EMs病因学、治疗学的研究，以深入了解EMs发病机制，开发治疗新药，探索中药作用机制，实现多方面、多角度的中西医结合治疗，全面提高中西医结合治疗EMs的水平。

中国论文网/6/view-12785809.htm[关键词] 子宫内膜异位症；动物模型；免疫机制；研究进展[中图分类号] R711.71 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）02（b）-0028-04Research progress of endometriosisanimal modelsJIN Jiyun1 XIA Qinhua21.The First School of Clinical Medicine，Nanjing University of Chinese Medicine，Jiangsu Province，Nanjing 210029，China；2.Department of Gynaecology，Jiangsu Provincial Hospital of TCM，Jiangsu Province，Nanjing 210029，China[Abstract] This paper makes a summarization for the construction method and advantages and disadvantages of endometriosis （EMs）animal models，try to establish more appropriate animal models for the study of etiology and treatment on Ems，so as to deeply know about the pathogenesis of Ems，exploit new drugs，explore mechanism of traditional Chinese medicine，realize combined treatment of traditional Chinese medicine and Western medicine from many aspects and angles，improve thelevel of combined treatment of traditional Chinese medicine and Western medicine for EMs comprehensively.[Key words] Endometriosis；Animal models；Immune mechanism；Research progress子宫内膜异位症（EMs）是指有活性的子宫内膜在被覆内膜的宫腔和子宫以外的部位生长、浸润，从而引发疼痛、结节、月经紊乱以及不孕等症的疾病。