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文件标题：黄曲霉毒素测定法操作规程 文件编码：
标准类型-类别：工作标准-质量 颁发部门：
分发部门：质量部、中心化验室
文件责任 部门/职务 姓名 签名 日期
起草人 中心化验室QC 年 月 日
审核人 中心化验室主任 年 月 日
批准人 质量负责人 年 月 日
生效日期： 年 月 日
黄曲霉毒素测定法操作规程
1目的
通过制定黄曲霉毒素测定法操作规程，以确保检验的准确性。
2适用范围
适用于中心化验室所有的高效液相色谱法-柱后衍生法对药品的黄曲霉毒素测定。
3职责
必须由经过相应知识培训的QC人员方可进行黄曲霉毒素测定法的操作。
4文件内容
4.1简述
黄曲霉毒素可以由曲霉菌黄曲霉、寄生曲霉、集封曲霉4种真菌产生，是一组化学结构类似的二呋喃香豆素的衍生化合物。中药在贮藏、制备、运输过程中如保存不当有受潮霉变而污染黄曲霉毒素的可能。黄曲霉毒素是目前世界上已知的毒性最强电话化合物之一，其致癌性肯定。对中药中黄曲霉毒素残留量进行严格控制对保证用药安全具有重要意义。
本法的基本原理为样品经有机溶剂提取、免疫亲和柱净化后，利用高效液相色谱分离，柱后衍生-荧光检测器检测进行分析测定。用于测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2总量计）。
4.2仪器及用具
4.2.1 高速匀浆器
4.2.2 高效液相色谱仪，配荧光检测器（具360nm激发波长和大于420nm发射波长） 黄曲霉毒素测定法操作规程 2/3
4.2.3 柱后衍生系统（碘衍生系统或光化学衍生系统）
4.2.4 离心机
4.2.5 超纯水处理系统
测黄曲霉毒素方法：
一．（1）色谱条件
色谱柱： Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um
流动相：甲醇：乙腈：水（40:18:42）
荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法
流 速：0.8ml/min
进样量：20ul
(2)色谱图 标品浓度 B1：B2 ：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)
533
色谱图 标品浓度 B1：B2 ：G1：G2=5: 125: 5: 125 (ng/ml)
602
色谱图 标品浓度 B1：B2 ：G1：G2=10: 2.5: 10: 2.5 (ng/ml)
603
（二）（1）色谱条件
色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um
流动相：甲醇：乙腈：水（40:18:42）
荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法
流 速：0.5ml/min
进样量：20ul
（2）色谱图 标品浓度 B1：B2 ：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)
544
色谱图 标品浓度 B1：B2 ：G1：G2=1:0.25: 1:0.25 (ng/ml)
545
色谱图 标品浓度 B1：B2 ：G1：G2=1:0.25: 1:0.25 (ng/ml) cromasil150柱
604
（三）（1）色谱条件
色谱柱：依利特 C18柱，150*4.6mm，5um
流动相：甲醇：乙腈：水（40:18:42）
荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法
流 速：0.3ml/min
进样量：20ul
（2）色谱图 标品浓度 B1：B2 ：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)
・１２・
ｒｉｅｓ，２００１，１２２３：２０５—２２０． ［２０］范秀萍，吴红棉，雷晓凌，等．珠母贝氨基多糖的分离纯 化及其抗肿瘤活性的初步研究［Ｊ］．中国海洋药物杂 志，２００５，２４（２）：３２—３６． ［２１］刘纯慧，类涛，林亲雄，等．海胆黄多糖的分离、纯化 及免疫活性测定［Ｊ］．中国海洋药物杂志，２００６，２５（３）： ７一ｌ１． ［２２］钦传光，黄开勋，徐辉碧．泥鳅中的生物活性分子及其药理 作用［Ｊ］．中国生化药物杂志，２００２，２３（１）：４７—４８．
中药中黄曲霉毒素分析方法进展 现代食品与药品杂志２００７年第ｌ７卷第３期
［２３］李润，倪杭生，罗敏，等．一种分离纯化透明质酸的 新型离子交换剂［Ｊ］．中国医药工业杂志，２００２，３３（１）： １６—１８． ［２４］黎先发．真空冷冻干燥技术在生物材料制备中的应用与进 展［Ｊ］．西南科技大学学报，２００４，１９（２）：１１７—１２１． ［２５］杨帆，潘育方，Ｍａｒｉｅ Ｎａｐｏｌｉ，等．一种新的生物纯化技 术：介体电泳技术［Ｊ］．广东药学院学报，２００２，１８（１）： ５５—５７． （收稿：２００７—０３—２７；修回：２００７—０４—２８）
欧阳佩 ，徐新军 （１．广东省连州市人民医院药剂科，广东连州５１３４００；２．中山大学药学院，广东广州５１００８０）
摘要：黄曲霉毒素是农产品及中药中普遍存在的一类有毒致癌物，给人类健康造成严重威胁。本文对目前用于中药材及中 成药中黄曲霉毒素的检测方法进行了综述，在对薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法综合分析的基础上，评述了各 方法的优劣和适用条件，可供从事中药和食品卫生检测工作者参考。 关键词：黄曲霉毒素；检测方法；中药 中图分类号：Ｒ２８４．１文献标识码：Ａ文章编号：１６７３—４６１０（２００７）０３—００１２—０５
黄曲霉毒素（Ａｆｌａｔｏｘｉｎｓ）是黄曲霉和寄生曲霉
的代谢产物，是一组化学结构类似的化合物，其基本
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黄曲霉毒素的检测技术
作者：刘艳丽 陈建华 王芳 李伟
来源：《新农村》2010年第09期
摘 要:目前黄曲霉毒素(AF)的测定方法很多,主要有薄层层析法(TLC), 酶联免疫吸附法(ELISA),高效液相色谱法(HPLC)等。本文结合国内、外有关文献,对黄曲霉毒素的检测技术的研究进展进行了综述,并且在此基础上探讨了未来对饲料安全研究的方向,旨在使人们更好的保障饲料安全,预防黄曲霉毒素中毒。
关键词:黄曲霉毒素 检测技术 酶联免疫吸附法
黄曲霉毒素(Aflatoxins,简称AF)发现于20世纪 60 年代,它是由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉产生的一组次生代谢产物,目前已知的黄曲霉毒素及其衍生物有20余种即B1、B2、B2a、G1、G2、G2a、M1、M2等。黄曲霉毒素B1是其中毒性最大的一种,有实验结果显示,其剧烈的毒性比人们熟知的剧毒药氰化钾强10 倍。它可诱发癌症和皮下肉瘤,并且可使动物的肝、肾、大脑和神经系统等产生病变。黄曲霉毒素对人、家禽、家畜的健康威胁极大[1-6], 欧盟等国家和地区普遍要求其限量为:B1+B2+G1+G2≤4μg kg,B1≤2μgkg。对此,检测方法必须具备较高的灵敏度和可靠性,以保证饲料及食品的安全。
一、薄层层析法(TLC)
测定AFT的经典方法是薄层层析法(TLC),一般先经层析后,在测定其吸收值或荧光值[7],但该方法操作比较繁琐且检出低限不能满足某些国家的卫生限量要求。王宏亮(1998)对GB5009.22—85所规定的方法进行了部分的改进,主要是在提取与净化过程中,在用氯仿抽提前,加入25%的醋酸铅溶液5ml和4%的NaCl溶液5ml,再用氯仿振动抽提。于薄层板点样后展开时先用氯仿与丙酮(90:10)的混合液正向展开,然后用无水乙醚进行反向展开。改进后的方法,黄曲霉毒素B1形成的斑点易观察,操作简便。在薄层层析法的基础上薄层荧光色谱扫描法,使检测更快捷、更准确。卢大用,利用碱能使黄曲霉素分解的原理,无需进行层析分离而测其荧光值,建立了测定微生物中黄曲霉素含量的一种新的快速荧光法。
