黄曲霉毒素（《中国药典2015版第四部》通则2351）
第一法
本法系用高效液相色谱法（通则0512)测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。
仪器与设备：反相色谱柱、高效液相色谱仪、进样针、容量瓶、电子天平、离心机、移液枪、微孔滤膜（0.45µm)、二号筛、均质瓶。
试剂：十八烷基硅烷键合硅胶、甲醇、乙腈、水、碘、黄曲霉毒素混合对照品（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2）溶液、氯化钠。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40：18:42)为流动相；采用柱后衍生法检测，①碘衍生法：衍生溶液为0.05%的碘溶液(取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃：②光化学衍生法：光化学衍生器（254nm)；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm(或365nm)，发射波长λex=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0µg/ml、0.3µg/ml、1.0µg/ml、0.3µg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液lml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。
供试品溶液的制备：取供试品粉末约5g(过二号筛），精密称定，置于均质瓶中，加人氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌1分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟>，精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45µm)滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
２０１４年０２月 第４１卷第１期 云南化工 Ｙｕｎｎｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｆｅｂ．２０１４ Ｖｏ１．４１，Ｎｏ．１
ｄｏｉ：１２．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－２７５Ｘ．２０１４．０１．０１１
高效液相色谱柱后衍生法测定中药材中的黄曲霉毒素
王娅玲 ，李维峰 ，刘 宝 ，刘 香 ，何维红
（１．云南热带作物职业学院热带作物生产与技术系，云南普洱６６５０００； ２．普洱淞茂制药股份有限公司，云南普洱６６５０００）
摘要：检测普洱城区僵蚕、陈皮、桃仁、胖大海４种中药材的黄曲霉毒素，了解其污染状况。 样品经７０％甲醇提取、免疫亲和柱净化后，用ＨＰＬＣ一柱后衍生一荧光检测器进行分析测定药材中的黄 曲霉毒素（Ｇ：、Ｇ 、Ｂ：、Ｂ ）含量。检测的８０个样品中，共有７个样品检出黄曲霉毒素，黄曲霉毒素Ｂ 的含量最高为１．８９ Ｉｘｇ／ｋｇ，黄曲霉毒素总量最高为３．５７ ｇ／ｋｇ。尽管未超出国家药典规定范围，但是 普洱城区４种中药材存在一定的黄曲霉毒素污染的风险。 关键词：僵蚕；陈皮；桃仁；胖大海；黄曲霉毒素；高效液相色谱柱后衍生法 中图分类号： Ｒ９２７．１１ 文献标识码：Ａ 文章编号： １００４—２７５Ｘ（２０１４）０１－００４２－０３
黄曲霉毒素，是黄曲霉、寄生曲霉及温特曲 霉等产毒株的代谢产物，是一类结构类似的化合
物 。黄曲霉毒素是剧毒化合物，其毒性比氰化 钾还高，也是最强的化学致癌物质 ｊ。黄曲霉毒
素主要污染粮油及其制品，而部分中药材及其制
剂在储存过程中也会发生霉变，产生黄曲霉毒 素 Ｊ。２０１０版《中国药典》一部规定陈皮、胖大
海、桃仁、僵蚕等中药材需检测黄曲霉毒素，其中 黄曲霉毒素Ｂ。的限量为５ ｋｇ，黄曲霉毒素 （Ｂｌ＋Ｂ２＋Ｇｌ＋Ｇ２）的限量为１Ｏ ｋｇ。黄曲霉 毒素的检测有多种方法，目前应用较多的是高效
液相色谱法 Ｊ。笔者通过对普洱城区市场上上
述４种中药材抽样进行黄曲霉毒素检测，以期评 估当前普洱市场上这４种药材存在的黄曲霉毒素 污染风险。
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中国药典黄曲霉毒素检测过程有关问题解析
黄曲霉毒素( aflatoxin，AF) 是由黄曲霉( asperillusflavus) ，寄生曲霉( asperillus parasiticus) 等真菌产生的一类分子结构相似的次级代谢产物，是一类毒性和致癌性很强的化合物，为第一类致癌物，是人类原发性肝癌的主要致病因素之一。中药材在生长和储存过程中，若环境条件适宜便会滋生霉菌从而产生黄曲霉毒素。目前黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法、液相色谱-质谱联用法等，中国药典20XX年版第二增补本采用高效液相色谱柱后衍生法测定。本文就中国药典黄曲霉毒素检验过程中常遇到的问题以及无衍生快速检测黄曲霉毒素的方法进行初步探讨。
1 仪器与试药
Agilent1200 型高效液相色谱仪; Pickering Vector-PCX 柱后衍生装置; Waters
含FLR 检测器的ACQUITYUPLC H-Class 系统; SB-5200D 超声清洗器( 宁波新芝生物科技有限公司) ; K2042 高速离心机( 美国Kingdom) ; AE-100 电子天平( 瑞士Mettler) 。免疫亲和层析柱( A、B、C 公司) ; 玻璃纤维滤纸( 北京中检维康科技有限公司) ; 黄曲霉毒素混合对照品溶液( 美国SUPELCO 公司，批号: LB74656，黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1浓度分别为0.302、0.965、0.306、1.021 g /mL) 。甲醇、乙腈均为色谱纯，所用水为纯化水。地龙( 批号11008ZY04)
为汕头美宝制药有限公司提供; 陈皮( 批号110901) 为广州中一药业有限公司提供; 薏苡仁( 批号20XX0101B) 为广州市香雪制药股份有限公司提供; 柏子仁A、B、C 分别购自广州大参林、广州同健和广州采芝林药店，批号自编。
・１６６８・ 光明中医２００８年１１月第２３卷第１１期 ＣＪＧＭＣＭ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００８．Ｖｏｌ ２３．１１
【实验研究】
中药黄曲霉毒素含量测定及限度标准的研究＊
张爱婷 郑州市中牟中医院（中牟４５１４５０） 石延榜 张振凌 河南中医学院（郑州４５０００８）
摘要：中药材在加工、贮藏、运输的过程中，如条件不当，很容易发生霉变，污染黄曲霉毒素。建立黄曲霉毒素ＡＦＢ。含量限度标
准非常必要。可以采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ法），在实验研究的基础上，参考食品黄曲霉毒素ＡＦＢ 含量限度标准，分别建立中药
材、中药饮片和中成药的黄曲霉毒素含量限度标准。
关键词：中药；黄曲霉毒素；限度标准
在我国，曲霉和青霉大多用于制备各种发酵食品，
也用于制备六神曲、淡豆豉、红曲等中药，尤其我国地 跨寒、温、热三带，气候条件多种多样，中药材在加工、
贮藏、运输的过程中，如条件不当，很容易发生霉变，污 染黄曲霉毒素。由于黄曲霉毒素不溶于水，并且耐热
性很高，加热到２８０￣Ｃ才能发生裂解破坏，一般的水
洗、加热炮制等对其含量影响不大，因此，中药材一旦 发生霉变污染黄曲霉毒素，很难消除，建立中药材、中
药饮片和中药制剂的黄曲霉毒素限度标准，保证临床 用药的安全，具有一定意义。
１黄曲霉毒素的结构和性质
黄曲霉毒素（Ａｆｌｕｔｏｘｉｕ）是由真菌黄曲霉 （Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）和寄生曲霉（Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓ）等产生的
一类有毒次生代谢产物。黄曲霉在自然界分布甚广，
无论是土壤、还是腐败的有机物、储藏的农产品以及食 品上都有存在，可以引起肺、外耳道真菌病及甲癣。这 些真菌分布于全世界，但只在热带地区产生毒素，因为
气温３７℃左右，相对湿度８５％左右的气候条件有利于 这些真菌生长并产毒。黄曲霉毒素发现于１９６０年，能
引起人类、各种饲养动物的急性中毒死亡，还能致癌、 致畸、致突变。在热带适宜的环境中，许多暴露的食物
