黄曲霉毒素测定
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产品号:#8030
测试前请仔细阅读本说明
Veratox○R
黄曲霉毒素定量测试盒
在2—8℃冷藏—不要冻结
黄曲霉毒素
黄曲霉毒素是一种剧毒且致癌的物质，它是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌A的某些菌株产生的。黄曲霉毒素有四种类型：B1，B2，G1和G2。黄曲霉毒素B1是毒性最大且最常有的。最容易产生黄曲霉毒素污染的物质是谷物、花生、棉子、高梁和大多数的树果。
动物食入过量黄曲霉毒素的影响从慢性健康直到死亡，已经证明黄曲霉毒素能引起肝损坏或癌症、降低奶和蛋的产出、免疫抑制和干扰再生效率。
美国食品药物管理局已经规定了食品和饲料中最大黄曲霉毒素限量。因此，准确测定黄曲霉毒素的含量，对于监测可能发生黄曲霉毒素污染的食品和饲料的质量来说，是非常重要的。测试程序包括仔细的采样、化学提取、卫生学评价和定量分析。
美国食品药物管理局已经颁布的黄曲霉毒素限量如下：
适用对象 限量 物质
人 20ppb 除牛奶外的所有食品
所有动物 20ppb 所有饲料（下列除外）
除外：
种牛，种猪，成熟的家禽 100ppb 谷物
育肥期的猪（＞100磅） 200ppb 谷物
育肥期的菜牛 300ppb 谷物
育肥期的菜牛、猪、家禽 300ppb 棉籽粉
预期范围
本产品适用于如谷物、谷物粉、谷麦粉、谷物、大豆混合物、棉籽、棉籽粉、高梁、花生、爆花玉米、稻米、麦子、大豆粉和混合饲料等中黄曲霉毒素的定量检测。
预期用户
本测试盒可供质量控制人员和其它需了解可能受到黄曲霉毒素污染的食物和饲料的人员使用。由于技术很重要，所以操作者应接受Neogen代表培训，或由已接受过Neogen培训的人进行培训。
方法原理
本测试盒的测试原理是一种竞争性的直接酶联免疫吸附剂剂测试方法（ELISA），可准确检测出样品中ppb级的黄曲霉毒素。样品和标准控制液中游离的黄曲霉毒素与轭合物中的黄曲霉毒素竞争抗体结合位臵。清洗后，加入底物，底物与轭合物反应出现兰色，兰色越深表明黄曲霉毒素越少。将其臵于微型孔阅读器中可读出透光度，以控制标准液的透光度作标准曲线，将样品的透光度与标准曲线比较计算出样品中黄曲霉毒素的准确浓度。
贮存要求
本试剂盒存放在2～8℃时，可以一直使用到标签上注明的到期日期。
提供的材料
1. 48个包被了抗体的孔。
2. 48个红色标记的混合孔。
3. 4瓶1.5ml浓度为0、5、15、50ppb黄曲霉毒素控制标准液(黄色标签)（甲醇溶液的处理，见注意事项）。
4. 1瓶7ml黄曲霉毒素-HRP轭合物溶液(兰色标签)。
5. 1瓶24mlK兰○R底物溶液(绿色标签)。
6. 1瓶32ml红色终止液(红色标签)。
需要但未提供的材料
1. 提取材料（Neogen 可提供b～d项材料，#8052产品）：
a. 70%ACS级甲醇溶液（Neogen #8055产品）
b. 250ml量筒
c. 125ml的容器
d. Neogen过滤注射器、Whatman 1号过滤纸，或者等效品
e. 样品收集试管
2. 高速混合器
3. Agri—Grind研磨机或等效品（Neogen #9419产品）
4. 称量为5～25克的秤（Neogen #9427产品）
5. 带650nm滤光片的微型孔阅读器(Neogen #9301/9302产品)
6. 12道移液器(Neogen #9273产品)
7. 100μl移液器（Neogen #9272产品）
8. 100μl吸咀和12道移液器(Neogen #9410产品)
9. 纸巾或等效的吸水材料
10. 用作废料贮存容器的塑料桶
11. 微型孔架（Neogen #9402产品）
12. 计时器（Neogen #9426产品）
13. 防水记号笔
14. 洗瓶（Neogen #9400产品）
15. 2个12道移液器用的试剂槽（Neogen #9435产品）
16. 蒸馏水或去离子水
注意事项
1. 甲醇易燃，其容器应密闭并远离热、火花、明火和烟。如果吞下或吸入蒸气，它是有毒的。应避免与皮肤接触。
2. 本测试盒不使用时应在2～8℃下存放。
3. 不要使用过期的测试盒。
4. 不要把不同测试盒中的试剂混合使用。
5. 每次试验不要超过24个以上的孔。
6. 遵守正确的移液技术，包括取液前先用该液润洗一次。
7. 放臵时间与本说明不一致时，可能会出现错误的结果。 8. 测试盒应先恢复到室温状态(18～30℃)后才开始使用。
9. 避免测试盒在室温下长时间放臵。
10. 不要使测试盒冻结。
11. 应将包括样品提取液在内的所有废液和实验器皿进行处理（如同已被黄曲霉毒素污染一样）。应始终穿戴手套和其它防护服。
12. 为了避免交叉污染，每个样品应使用清洁的吸咀和玻璃器皿，并在样品之间彻底清洗所有的玻璃器皿。
13. 待测样品的pH值应为6～8。酸碱过大的样品应进行调整。关于pH值的调整，请与Neogen代表或技术服务部门联系。
程序性的提示
K-兰底物随时可用，底物为清亮的浅兰色，如果变成了深兰，则弃去。使用时，只倒出所需量到试剂槽中，未用完的不要再倒回试剂瓶中。不使用时应盖住试剂槽，以避免光的照射。
样品制备和提取
待测样品应按公认的采样技术采集。样品应磨碎并充分混合后再提取。测试前，将样品在2～8℃存放。注：如果使用Neogen的真菌毒素提取盒，则按该程序进行。如果用自己的提取方法，则按以下程序进行：
1. 如果不使用Neogen提供的溶液，则将7份ACS级甲醇与3份蒸馏水或去离子水混合配成70%的甲醇溶液。
2. 取1份代表性样品。研磨样品至至少有75%的样品通过20目的筛子，颗粒尺寸大约相当于细的速溶咖啡。
3. 在高速混合器中，将25克研磨过的样品与125ml 70%的甲醇混合2分钟。另一种方法是：把5克研磨过的样品加入到25ml 70%的甲醇中，然后用力摇动3分钟。
4. 用Neogen过滤注射器或通过Whatman #1滤纸过滤出至少5ml的提取液。该滤液即为样品的待测液。
5. 该待测液即可用于测试。
测试程序
测试前应将所有的试剂恢复至室温（18～30℃）。
1. 对于每个样品，从箔包中取1个红色标记的混合孔和4个红色的标准控制液的混合孔，放在孔架上。
2. 取同样数量的包被了抗体的孔。把暂不使用的孔放回到箔包中，并重新密封，以保护抗体。在带子的一端标上“1”，然后放到孔架上，将有标记的一端放在左边。不要在孔的里面和底部写标记。
3. 在使用之前摇动试剂瓶，混合每种试剂。
4. 从兰色标签的瓶内吸取100μl轭合物加到每个红色标记的混合孔内。弃去吸咀。
5. 每次使用新吸咀，吸取100μl控制标准溶液和样品液按下列顺序加到红色标记的混合孔内：
0 5 15 50 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 第1条
S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 S20 第2条 6. 用12道移液器吸入、排出3次使孔内溶液彻底混合，吸取100μl加到相应的包被了抗体的孔内，在平的表面上将板前后滑动确保充分混合10～20秒钟，不要溅出试剂，混合后于室温下（18～30℃）放臵2分钟。弃去红色标记孔。
7. 倒掉包被了抗体孔内的溶液。在每个孔内加满蒸馏水或去离子水，再吸出，如此重复5次，将板朝下，在吸水材料上拍击以去除所有的水滴。
8. 从兰色试剂瓶中倒出所需量的试剂到兰色试剂槽中。
9. 用12道移液器和新吸咀，吸取100μl底物加到每个孔内，在平的表面上将板前后滑动确保充分混合10～20秒钟。
10. 混合后放臵3分钟。倒掉剩余的底物并冲洗试剂槽。
11. 从红色试剂瓶中倒出所需量的试剂到红色试剂槽中。
12. 用12道移液器吸出过量的底物溶液，再吸取100μl红色终止液（Red
Stop）加到每个孔内，在平的表面上将板前后滑动确保充分混合。弃去吸咀。
13. 用干净的布擦净板底，将板臵于微型孔阅读器于650nm滤光片下读数。由于气泡会影响结果，应削除溶液中气泡。应在加入红色终止液后20分钟内完成读数。
14. 用Neogen的Awareness Stat Fax 微型板读数器或相当产品读数和计算结果。如果采用EL301读数器或其它条/板读数器，可用Neogen的Log/logit软件计算结果。
注意:
如果你的微孔读数仪(酶标仪)无650nm滤光片而有450nm滤光片,请按以下步骤进行:
1. 将“测试程序”的第10步“混合放臵3分钟”改为“混合放臵1.5分钟”;
2. 将“测试程序”的第12步“吸取100μl红色终止液”改为“吸取100μl硫酸溶液(浓度为1mol/L)”;
3. 将“测试程序”的第13步“于650nm滤光片下读数”改为“于450nm滤光片下读数”.
确认试验
如果在以前未测试过的样品中发现阳性，则应用其它经过证明的方法进行确认。
特性参数
检出限：2ppb(10次阴性样品的平均值加2倍标准偏差)。
定量检测限：5ppb(以标准曲线的最低浓度点表示)。
定量范围：5-50 ppb(大于50 ppb时应稀释)
已测试过的样品：谷物、谷物粉、谷物麦粉、谷物/大豆混合物、棉籽、棉籽粉、高梁、爆花玉米、稻米、麦子、大豆粉和混合饲料。
本产品的优点
简单
〃无需专门培训。
〃不需要复杂的化学提取。
〃提供了测试样品所必需的所有试剂。 〃快速—获得结果仅需5-10分钟。
准确
〃完全的定量分析。
〃样品与已知浓度的控制标准液进行对照。
〃结果可与公认的PHLC和GC方法比较。
〃USDA/FGIS批准使用。
支持
〃24小时技术支持。
〃内部研发人员。
NEOGEN可提供的测试盒
天然毒素
〃黄曲霉毒素，DON，赭曲霉毒素，玉米烯酮，T—2毒素，伏马毒素，组胺
食物传染的细菌
〃大肠杆菌 O157：H7，沙门氏菌，李斯特菌，单核增生李斯特菌，弯曲杆菌，金色葡萄球菌，弧菌
公共卫生
〃ATP，酵母菌和霉菌，总平板计数，大肠杆菌和总大肠杆菌，蛋白残留
食物过敏原
〃花生，牛奶，蛋，杏
转基因
〃Cry9C（StarLink○R），CP4（Roundup Ready○R）
反刍类副产品
〃肉骨粉，饲料
