大鼠肝移植过程图

大鼠肝细胞微球皮下移植生成肝组织初探

大鼠肝细胞微球皮下移植生成肝组织初探张兰;李则学;刘海亮;李沛雨【摘要】目的探讨大鼠肝细胞微球皮下移植生成肝组织的可行性，为构建组织工程肝寻找新的方法。

方法新鲜分离的SD大鼠肝细胞接种在琼脂糖包被的培养皿上进行培养，待其形成肝细胞微球后采用直接注射方式植入大鼠腹股沟处皮下腔。

1 周后取腹股沟处组织，HE 染色法观察生成的肝组织形态。

结果体外培养3 d，肝细胞形成致密的肝细胞微球，直径大小在43 ～ 185 μm，HE 染色显示微球中的肝细胞保持天然肝细胞形态特征。

将其植入大鼠腹股沟处皮下腔1 周，HE 染色显示植入的肝细胞成活，并呈三维肝样组织团，肝细胞保持其特有形态特征：胞体为圆形，核大而圆，多为双核。

结论肝细胞微球皮下移植可形成肝组织，为组织工程肝的构建创建了新的方法。

【期刊名称】《解放军医学院学报》【年(卷),期】2014(035)005【总页数】3页(P493-495)【关键词】工程化肝组织;肝细胞微球;组织工程【作者】张兰;李则学;刘海亮;李沛雨【作者单位】解放军总医院普通外科研究所,北京100853;;;;【正文语种】中文【中图分类】R318.1对于先天性肝代谢紊乱及终末期肝病所致的急、慢性肝功能衰竭，肝移植是目前唯一有效的救治手段，但供体短缺严重制约该技术广泛应用[1-2]。

肝组织工程技术的发展为各种肝病治疗提供一种潜在方法[1-4]。

通过创建可植入工程化肝移植物体内再生工程化肝组织可为病损肝脏提供肝功能支持或直接对其进行修复[5-6]。

迄今为止已证实包括肝细胞/支架材料复合物、肝细胞片层等多种肝移植物体内植入后可再生有功能的工程化组织[7-12]。

肝细胞微球是肝细胞在非贴壁培养过程中相互聚集形成的三维类组织样细胞聚集体；体外研究表明肝细胞在形成微球后可更好的保持其活性和功能[13-15]，但尚未见将其用于体内构建组织工程肝的报道。

本研究旨在评价肝细胞微球皮下移植形成肝组织的可行性。

大鼠原位肝移植胆道并发症的原因分析

岭南现代临床外科２０年４０９月第９卷第２ＬｇａｏｅｌｉｕｇｙＡｒ，０９Ｖ１ｏ期ｉｎｎＭｄｍＣｉｃｉＳｒｒ，ｐｉ２０，ｏ９．ｎｎｓｎｅｌ．Ｎ２
１Ｏ９
・
论
著・
大鼠原位肝移植胆道并发症的原因分析
Ｔａ —ｈＬｎＨａ — ｎＬＬ— ｏｇ，ｕ —ａＹ肌一０，ａ —ｉｇ，ｎｎ，ｎｕ — ｉｎｚｕ，ｉｏｍｉｇ，ｖｉｈｎＸｕＪｎｙｏ，ｕｄＸｕＸｉｏｔｎＭｉＷａＹｎｌｅ，
ＤｐｒｅｔｆＨｅａｂｌｒｕｇｒＭｅｏｉｓｉｌｏｕＹｔｅＵｉｒｉ，ｕｎｚｏｅａｔｎｐｔｉａＳｒｅｍｏｏｉｙｙ，ｍｒｌＨｏｔＳｎａｓｎｎｖｓｙＧａｇｈｕａｐａｆ — ｅｔ
５１２００１
【ｂｔｃ】Ａｓａｔｒ
ＯｊｔｅＴｔｙｔａｓｆｉｒｃｍｌａｏｓａｄｅａｌｈｓｂｂｅｉｏｓｄｈｃｕｅｏｂｉｙｏｐｃｔｎ，ｎｓｂｓｔｌｃｖｕｅｓｌａｉｉｔｉａｅ
Ｍｅｈｄｔｏｓ１０ａｅｏｉｅｔｎｐａｔｔｎｗｅｅｃｓｓｆｌｒｒｓｌｎａｉｒ８ｖａｏ
套法” 行大鼠原位肝脏移植１０例，８即肝上下腔静脉（ｖ采用连续缝合法吻合，ｓｃ）门静脉（Ｖ）Ｐ以及肝
模型稳定后，供肝冷
胆管内支架管的
缺血时间为（０１１．）ｎ无肝期为（６０３１ｍｉ，体手术时间为（４４１．）ｎ术后胆道并５．－２０ｍｉ，＋１．＋．）ｎ受５．＋０６ｍｉ，发症的发生率为４％，０主要表现为肝脓肿、内外胆管扩张、肝胆泥形成等。结论选择以及手术技巧是影响大鼠肝移植术后胆道并发症发生发展的重要因素。

大鼠减体积肝移植术后早期死亡的原因分析

ａ．ＴｅｎＤｐｒｅｔｆＨｐｔｂｉｒｐｎｒｔｕｇｒ，ＧｎｅＡｉａｄＨｓｉｌＫｎｎｄａＣｌｇ，Ｋｎ１ｈ￡ｅａｔｎｅａｏ— ｉａｙ－ａｃａｉＳｒｅｍｏｌｅｃｙａｍｉｆｌｔｏｔｕｍｉＭｅｉｌｏｌｅｕ — ｉｅｐａｏｆｇｃｅ
ｏｓｕｔｎ（．％）ｇｓｅｂｌｍ（．％）ｌｅｄｓｎｔｎ（．％）ｎｕｏｏａ（．％）ｐｌｏａｎｅｔｎｂｔｃｏ２４ｒｉ，ａｍｏｓｉ１８，ｉｒｙｆｃｏ１８，ｐｅｍｔｒｖｕｉｈｘ１８，ｕｍｎｒｉｆｉｙｃｏ
（．％）ａｄｅｃｓｉｅａｉｇ（．％）ＣｎｌｓｎＴｅｃｍｏｅｔａｙｄａａｓｏｔｅｕｅ１２ｎｘｅｓｅｒｗｒｎ１２．ｏｃｉｈｏｍｎｓｅｒｅｔｃｕｅｆａｒｄｃｄ—ｓｅｌｅａｓｖｍｕｏｌｈｒｉｖｒｎ — ｚｉｔｒ
ｕｉｒｖｄｏｅａｉｎ，ａｄ１０ｒｃｉｅｍｐｏｅ．Ｒｅｕｔｎｍｐｏｅｐｒｔｏｎ（ｅｅｖｄｉｒｖｄ３ｓｌｓＴｎｙ— ｆｅｏ７ａｓｈｖｎｅｅｖｄｒｄｃｄ— ｓｚｉｅｗｅｔｉｆ１０ｒｔａｉｇｒｃｉｅｅｕｅｖｉｅｌｒｖ
布为：腹腔出血８只（．％）４７，肠梗阻４只（．％）气体栓塞３只（．％）２４，１８，肝功能不良３只（．％）１８，气胸３只

大鼠原位肝移植模型建立的技术要点

大鼠原位肝移植模型建立的技术要点目的探讨大鼠肝移植手术技巧与处理要点, 减少术后并发症，建立稳定的大鼠肝移植模型。

方法Wistar大鼠240只（供受体各120只）行二袖套法原位肝移植。

结果120例大鼠原位肝移植术后48小时存活率88.3 % ,1周存活率86.7%，建立了稳定的大鼠肝移植模型。

结论掌握技术要点与处理方法，是建立稳定的大鼠肝移植模型的保证。

Abstract：ObjectiveTo explore the surgical skills of Orthotopic Liver Transplantation in Rats and reduce the complications. MethodsOrthotopic Liver Transplantation was performed in 240 rats using two-cuff technique.ResultsThe survival rate for 48 hours was 88.3 %, the survival rate for one week was 86.7 %, and established stable liver transplantation model in rats. ConclusionMaster the surgical skills of Liver Transplantation in rats can improve achievement ratio and the steady livability of rats with orthotopic liver transplantation．Key words：Liver transplantation；Model；Rats大鼠原位肝移植是研究免疫耐受、免疫排斥、器官保存、肝脏缺血再灌注损伤等方面常用动物模型，1979年Kamada首次提出了二袖套法建立大鼠肝移植模型，简化了手术方式，提高了生存率[1]。

大鼠30％小体积肝移植模型两种切肝方法的比较

大鼠30％小体积肝移植模型两种切肝方法的比较宋军;丁志龙;徐为;李文美;李向农;王学浩【摘要】Objective To establish an effective and available 30% small-for-size rat liver transplantation model. Methods 30% small-for-size liver transplantation models were performed according to Kamada' s two-cuff method without arterial reconstruction. Male SD rats were divided into two groups; group A (n =40) , 30% liver transplantation using right lobe, caudate lobe and triangle lobe graft; group B (n =40) , 30% liver transplantation using a median lobe graft. Three-day survival and technical complications were compared between two groups. Results Compared to group B, the time for liver lobe reduction in the group A was shorter ( P < 0. 01) , and inferior vena cava stricture was fewer ( P < 0.05 ) . There was no significant difference in the three-day survival rate between two groups ( P > 0. 05 ). The incidence rate of liver cross-section bleeding, bile leakage and infection showed no significant differences. Conclusion Using improved method of lobe resection, a more viable and effective 30% small-for-size rat liver transplantation model with a right lobe, caudate lobe and triangle lobe graft can be established.%目的探讨建立理想的成功率较高的大鼠30％小体积肝移植模型的可靠方法.方法采用改良“二袖套法”非动脉化法建立大鼠30％小体积肝移植模型.实验组分为两组:A组,右叶+三角叶+尾状叶做供肝的30％小体积肝移植组,共40例；B组,中叶做供肝的30％小体积肝移植组,共40例.观察两组术后并发症和术后3d生存率.结果 A、B组切肝时间分别为(11±3)、( 14 ±3) min,P＜0.01；术后发生肝后下腔静脉狭窄分别有2例、8例,P＜0.05；术后3d生存率分别为53％(21/40)、40％(16/40),P＞0.05；断面出血、胆漏和感染的发生率两组无明显差异.结论通过技术改良,可以以右叶+三角叶+尾状叶为供肝建立稳定的大鼠30％小体积肝移植模型.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2011(051)052【总页数】3页(P16-18)【关键词】肝移植;模型,动物;小体积;大鼠【作者】宋军;丁志龙;徐为;李文美;李向农;王学浩【作者单位】徐州医学院附属医院,江苏徐州221002;徐州医学院附属医院,江苏徐州221002;徐州医学院附属医院,江苏徐州221002;徐州医学院附属医院,江苏徐州221002;徐州医学院附属医院,江苏徐州221002;南京医科大学第一附属医院【正文语种】中文【中图分类】R657.3近年来，供肝短缺促使活体肝移植在临床上得到广泛的开展。

建立大鼠异位辅助性肝移植模型的研究

一
、
１材料：ｓｒ鼠，．Ｗｉａ大ｔ雄性，重２０４肝素生理盐水冲出肝内残留血液，体５ ℃ 纱可得到较好的灌注效果。
－
２０ｇ购于北京卫生部生物所实验动７（
布包裹，用。（）者手术：前处理待３受术
总管固定。游离肝下下腔静脉．右肾少静脉血栓的形成。左静脉。游离门静脉至肠系膜上静脉，引
一
显微手术器械购自上海手术器械厂，清
洁手术。
４供肝置入：供肝在置入过程中．．
３套管技术：断受者门静脉及肝．剪
物中心）每笼４只，意进食颗粒饲料，随
和饮水。术前禁食１，限饮水，２ｈ不门静
同供者。腹部正中切口，右侧腹壁自下下腔静脉应尽量保留血管壁，入门左插制拉钩横向拉开，位于肝下间隙内小静脉套管时，将应将胆总管置于其左侧，这肠提出腹腔，湿纱布包裹，置于左侧腹时便很少有可能扭曲门静脉。套管不仅放
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ＣｉＯｒｎＴａｓｌｔＪｌ０２Ｖ１３Ｎ．ｈＪｇｒｐｎ，ｕ２０．ｏ．．ｏ４ｎａｎａ２
・
２５・５
建立大鼠异位辅助性肝移植模型的研究

单人行大鼠原位肝移植手术难点及技巧的探讨

ｃｐｏｐｒｔｎｔｎｎｅａｉｔｍｅｗｅｅ（７２ ± １０）ｍｉＳ（６４土１１）ｍｉｅｔｒｏｅａｉｉａｄａｈｐｔｉｒ２．２ｏｍｅｅ．３ｎＶ２．７．６ｎ，（Ｏ５士３１）ｍｉＳ（８１ ± ５．８．ＯｎＶ４．８３７）ｍｉ，（１６．０ｎ１．Ｏ士０１）ｍｉＳ（１２士００）ｍｉ．Ｔｈｕｃｓｆｌｒｔ，ｏｅｗｅｋｓｒｉａａｅｏｅｍｏｔｕｖｖｌ．１ｎＶ１．８．８ｎｅｓｃｅｓｕａｅｎ－ｅｕｖｖｌｒｔ，ｎ－ｎｈｓｒｉａ
福建医药杂志２１００年６月第３２卷第３期
ＦｊｎＭｅ，Ｊｎ００ｕｉｄＪｕｅ２１，Ｖｏ３，Ｎｏａｌ２．
６３
单人行大鼠原位肝移植手术难点及技巧的探讨
福建医科大学第一临床医学院肝病中心（州３００）黄启明吴燕斌福５０５刘景丰邱明链
ｅａｉｇｄｆｉｕｔｓａｄｔｃｎｑｅ．ＭｅｈｄＡｏａｆ０ｄｌｌＤａｓｗｅｅａｏｔｄＴｈｄｌｓｅｔｂｉｈｄｗｉｅｒｔｎｉｆｌｅｎｅｈｉｕｓｃｉｔｏｓｔｔｌ０ａｕｔｍａｅＳｒｔｒｄｐｅ．ｅｍｏｅｏ２ｗａｓａｌｅｔｒ — ｓｈｆｒｄｔ — ｕｆｍｅｈｄｂｉｇｅｏｅａｏｎｏｂｅｏｅａｏｓＦｉｙｃｓｓｏａｒｈｔｐｃｌｅｒｎｐａｔｔｎｒｅ — ｏｍｅＷＯｃｆｔｏｙｓｎｌｐｒｔｒａｄｄｕｌｐｒｔｒ．ｆａｅｆｒｔｏｔｏｏｉｉｒｔａｓｌｎａｉｓｗｅｅｐｒｔｖｏｆｒｄｗｉｎｉｅｙａｈｇｏｐＲｅｕｔＩｉｇｅｏｅａｏｒｕｎｏｂｅｏｅａｏｓｇｏｐ，ｄｎｒｏｅａｉｎｔｍｅｒ — ｏｍｅｔｕａｄｄｅｅｅｃｒｕ．ｈｓｌｓｎｓｎｌｐｒｔｒｇｏｐａｄｄｕｌｐｒｔｒｒｕｏｏｐｒｔｉ，ｅｏ

大鼠原位肝移植模型的研究进展

症等几个方面仍需要进行大量的研究，稳定的动物实验模型的建立就故
显得至关重要，是研究这些问题的有效途径Ｌ。与其他实验动物相比，２］大鼠具有解剖结构类似于人类，易饲养，殖较快，于观察等优点，容繁便故大鼠肝移植模型是目前基础与临床中最常用的动物模型。大鼠肝移植术式模型大体的分型有大鼠原位肝移植；鼠异位肝移植；鼠慢性大大排斥反应的建立；他的模型（体积式、助性原位部分、心跳供体其减辅无等）３。本文仅对大鼠的原位肝移植实验研究的进展作一综述Ｌ］１大鼠模型的优点基础和临床的肝移植模型主要以鼠为造模对象，鼠原位肝移植模大型是目前最常用的动物模型。ＲＯＴＭ主要有以下优点：与较大的实Ｌ ① 验动物（、）比，管肝移植实验在技术上更容易实施，得益于显狗猪相尽但微外科的发展，助手术显微镜的放大，借使用精细的显微手术器械及缝合材料（管）对细小的组织进行精细手术，ＲＴＭ的建立成为可套，使ＯＬ能［。②有大批基因型明确的纯系大鼠供我们选择，近交系动物、Ｉ］如封闭群和杂交群等。③单克隆抗体可以特异和灵敏的鉴定大鼠在免疫排斥异以及免疫耐受方面起重要作用的淋巴细胞，们目前对大鼠的免疫人分子的认识越来越多。④ 大鼠繁殖快（娠期和哺乳期较短）成本低、妊、易于饲养、有较强的抗病能力，人的解剖结构类似。⑤ 建立的模型具和具有良好的重复性，济性，经并发症与大动物肝脏移植基本相同。２大鼠的麻醉动物模型的建立是在动物的麻醉状态下进行的，模型的建立过程在中，凡是能影响麻醉效果的因素都会对模型的存活率和成功率造成影响Ｉ。由于每种动物对不同麻醉药的反应，ｓ］以及不同剂量的维持效果不同，故在动物的麻醉过程中，应选择对动物机体影响较小、作用持续时间短，而且对实验结果影响小的的麻醉剂，而达到维持稳定的麻醉效果。从大鼠原位肝移植模型，麻醉用药的选择及麻醉深度的掌握是保证手术顺利进行的关键之一，时也是减少大鼠术中及围手术期死亡率的关键因同素之一。目前用于大鼠肝移植模型手术的麻醉药物种类较多，要有乙主醚、氯胺酮和戊巴比妥等，种麻醉药有各自的优缺点和应用范围Ｌ。每６Ｊ２１麻醉药的使用情况：鼠肝移植模型建立过程中，．大目前主要使用乙醚和氯胺酮两种麻醉剂。乙醚采用吸人式给药，由于其对呼吸道的刺激作用，造成呼吸困难甚至窒息，会因此在给药前，行肌注阿托品的要预处理Ｌ。氯胺酮，７Ｊ化学名是２（一氯苯基）一２一２甲胺基一环己酮盐酸盐，Ｄｍｉ９５年引入临床后，自ｏｎ１６ｏ至今仍是非巴比妥类静脉麻醉药镇痛效果唯一确定的麻醉药［巴比妥类麻醉药目前仍在大鼠肝移植模型的建立中使用。因其比较大的肝脏毒性，严重影响肝脏的功能和但会实验结果，故很少使用。彭勇［等在用改进的二袖套法制作大鼠模型的。］过程中，大鼠随机分为对照组、醚组、氯胺酮组、合氯醛组巴将乙水戊比妥组，观察每种麻醉剂的麻醉过程、大鼠生理和肝功能的影响以及对无肝期开始后的死亡率，出各种麻醉对肝移植大鼠均有明显影响，得但乙醚具有对生理、功影响小，肝期开始后死亡率低的优点，可作为肝无故制作大鼠原位肝移植模型的首选麻醉方法。国内外许多文献报导，氯胺酮在大鼠肝移植中的麻醉多见于供体，受体多用乙醚。就其原因，而是由于大鼠肝移植要经历无肝期这一特殊过程，肝 ��

大鼠30%小体积肝移植模型两种切肝方法的比较

（ｆｌｔｏｉｌｆＸｚｏｄｃｌｏｅｅＸｚｏ２０２Ｐ．Ｃｉａ１ＡｉｅＨｓｔｕｈｕＭｅｉｌｇ，ｕｈｕ２１０，．Ｒｈｎ）ｉａｄｐａｏａＣｌ
Ａｓａｔｂｔｃ：０ｂｅｔｅＴｓｂｉｎｅｅｔｅａｄａａａｌ３％ｓｌｆｒｉａｌｅｔｎｐｎａｏｏｅ．ｒｊｃｉｏｅｔｌｈａｆｃｖｎｖｉｂｅ０ｖａｓｆｉｌｍａ — —ｚｒｔｉｒｒｓｌｔｔｎｍｄ１ｌｏｓｅｖａａｉ
ｌｅｃｕａｂｄｔａｇｂｒｆｇｏｐＢ（４）３％ｌｅａｓｌｔｔｎｕｉｇａｍｄａｂｒｔｈｅ— ｏ，ａｄｔｌｅｎｌｌｅａ；ｒｕｎ＝０，０ｂｅｏａｒｎｉｅｏｇｔｉｒｒｎｐａａｏｓｅｉｌｅｇａ．Ｔｒｖｔｎｉｎｎｏｆｅ
山东医药２１年第５卷第５０１１２期
大鼠３％小体积肝移植模型两种切肝０方法的比较
宋军。丁志龙徐，，为李文美李向农王学浩，，，
（１徐州医学院附属医院，苏徐州２１０；Ｉ江２０２２南京医科大学第一附属医院）
ｃｏｓｓｃｉｎｂｅｄｎ，ｂｌｅｋｇｎｎｅｔｎｓｏｄｎｉｎｆａｔｄｆｒｎｅ．ＣｏｃｕｉｎＵｉｇｉｒｖｄｍｅｈｄｒｓ —ｅｔｌｅｉｇｉｌａａｅａｄｉｆｃｉｈｗｅｏｓｇｉｃｎｉｅｅｃｓｏｅｏｉｆｎｌｓｏｓｎｍｐｏｅｔｏｏｂｅｅｔｎｒｉｂｅａｄｅｅｔｅ３％ｓｌｆｒｓｚａｉｅａｓｌｎａｉｎｍｏｅｉｇｔｌｂ．ｃｕａｅｆｌｅｒｓｃｉ，ａｍｏｅｖａｌｎｆｃｉ０ｏｏｖｍａ１ —ｉｅｒｔｖｒｔｎｐａｔｔｄｌｗｔａｒｈｏｅａｄｔ．ｏｌｒｏｈｉ

小鼠移植肝内白介素-6对移植肝功能恢复的影响

图一，肝移植物功能恢复过程图解肝脏再生的转录调控正常肝细胞处于静息期，具有潜在再生的能力。

在切除、缺血再灌注及肝移植的条件下，表现再生活性。

处于静止期的肝细胞，立即转向快速增殖，在２４—４８小时内启动第一轮的ＤＮＡ合成过程“４、“’。

在肝脏再生的复杂过程中，肝脏始终保持其它的功能相对稳定。

这其中当然有特殊类型的细胞和机制参与，目前尚未清楚上述问题的机制。

研究认为，细胞因子在再生早期转录因子的激活中起重要的作用。

参予的细胞因子有ＩＬ—ｌ、ＩＬ一６，ＴＮＦ—ｎ；转录因子有核因子。

Ｂ和信号转导，转录因子激活剂３（ＳＴＡＴ３）等““”’。

缺乏ＴＮＦ受体ｌ的转基因小鼠表现出明显的肝细胞复制缺陷，在肝切除后无明显的Ｎ卜。

Ｂ和ＳＴＡＴ３的ＤＮＡ激活的迹象“”。

在ＩＬ一６缺陷型的转基因小鼠的肝切除模型中ＳＴＡＴ３的ＤＮＡ结合活性消失，ＤＮＡ复制的现象非常迟缓“５“’。

再生过程调控系统相当复杂，需要多种转录因子和基因产物的相互作用和准确协调。

细胞因子表达、转录因子激活在炎症反应早期出现的细胞因子，ＴＮＦ—ｎ，ＩＬ－６等，也出现在大鼠肝移植模型的早期损伤修复中。

因此这些细胞因子有双重的作用，既参予炎症反应，又参加再生反应。

应用大鼠肝移植模型，发现转录因子的激活和细胞因子ＩＬ－６、ＴＮＦ—Ｑ与冷缺血时间明显相关。

随冷缺血时间延长，ＩＬ一６、ＴＮＦ—ｎ的表达增强，持续表达至再灌注后７２小时””。

其它参予的成分有ＮＦ。

Ｂ，Ｃ－ｊｕｎ，Ｎ一末端激酶（ＪＮＫ）””。

以前认为ＳＴＡＴ３参予细胞循环的激活，是否参予移植后的修复过中山大学博士学位论文：小鼠移植肝内白介素一６对移植肝功能恢复的影响正文复过程受多种因素影响。

移植物局部损伤和炎症也可引起更严重的免疫反应。

大鼠的肝移植模型证实移植后缺血再灌注损伤、免疫反应、组织修复过程相图二，肝脏的冷却血损伤和免疫反应互影响。

“３”，见图二。

另外观察到ＭＨＣ—ＩＩ类抗原，共刺激分子Ｂ７的表达增强””。