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2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体【作业】一、选择题1.关于动物细胞融合的说法，不正确的是()A．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程B．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞C．常用的诱导动物细胞融合的因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射D．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能解题分析A项为动物细胞融合的含义；B项是融合后细胞的特点；C项中紫外线照射常用于人工诱变，可诱发基因突变，而不是诱导细胞融合的因素，常用的诱导动物细胞融合的物理因素是离心、振动和电激；D项为动物细胞融合的意义。
答案 C2.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是()A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同C．所采用的原理完全相同D．都能形成杂种细胞解题分析两种细胞工程所用的技术手段不完全相同，植物体细胞杂交时要先去除细胞壁后诱导原生质体融合，而动物细胞融合时，要先使细胞分散后再诱导细胞融合，B错误；诱导的方法，除动物细胞的融合常用灭活的病毒作诱导剂外，其他的二者基本相同，A错误；二者采用的原理不同，动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性，最终形成的是杂交细胞，植物体细胞杂交还用到细胞的全能性，最终形成杂种植株，C错误。
答案 D3.动物细胞融合属于动物细胞工程的技术手段之一，下列有关动物细胞融合的叙述正确的是()A．动物细胞融合产生的细胞称为重组细胞B．融合后形成的细胞为单核或多核细胞C．常用的诱导融合的生物诱导剂是聚乙二醇、灭活的病毒等D．也称细胞杂交，可由两个或多个动物细胞结合成一个细胞答案 D解析动物细胞融合产生的细胞称为杂交细胞，核移植产生的细胞称为重组细胞，A错误；融合后形成具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，B错误；诱导动物细胞融合的生物诱导剂是灭活的病毒，聚乙二醇属于化学诱导剂，C错误；动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，D正确。
动物细胞培养和核移植技术教学设计高二年级多数学生已经掌握了一定的生物学基础知识,具备了独立思考和判断能力，合作性学习的、能力也比较强，但是个体之间还是存在着较大的差异。
因此本节课以学生的学习为主，以教师的组织引领为辅。
加强教材与生活的联系，引导和调动学生的情感体验，关注学生的心理变化，培养学生对事物有正确的情感态度。
本节课通过设计的探究问题，加强了学生的小组合作意识，提高了学生分析问题的能力。
视频的播放，给学生展示了中国在克隆技术上的发展，增强了学生的兴趣和爱国意识。
同时，每个知识点都留出记忆巩固的时间，强化了知识。
《动物细胞培养和核移植》是人教版高中生物选修三《现代生物科技专题》第2章第2节《动物细胞工程》第1节课的教学内容，主要学习动物细胞培养这一基础技术和核移植技术的过程和应用。
本节内容是本章的重点同时又是近几年的热点，又是后面学习动物细胞融合和单克隆抗体的基础。
通过本节的学习让学生充分理解和认识生物工程的前沿技术，以此激发学生热爱科学、努力学习、积极探索的精神。
专题二细胞工程动物细胞工程2.2.1 动物细胞培养和核移植技术班级：____________姓名：_____________编写：谭静审核：潍坊中学生物组【练习】（1）、在动物细胞培养过程中，下列哪种现象是不可能的（）A．细胞一直在细胞悬液中分裂生长B．有少部分细胞可能在培养条件下无限地传代下去C．有部分细胞核型会发生变化D. 个别细胞会发生基因突变（2）、下列过程与细胞培养无关的是（）A.检测有毒物质B.生产单克隆抗体C.筛选抗癌药物D.杂交育种（3）、世界上第一只克隆绵羊“多莉”的培育等程序如图所示。
请仔细看图后回答问题：⑴写出ａ所指的细胞工程名称：ａ⑵实施细胞工程ａ时，⑶多莉面部的毛色是，判断依据：。
⑷若黑面绵羊的基因型为AA,白面绵羊的基因型为aa，则克隆羊的基因型为。
【跟踪训练】一、选择题1、动物细胞工程技术的基础是（）A、动物细胞融合B、胚胎移植C、动物细胞培养D、核移植2、在动物细胞培养过程中，使用胰蛋白酶的目的是（）A．使动物组织分散为单个细胞进行培养B．去掉细胞壁成为原生质体C．去掉细胞膜暴露出原生质体便于细胞融合D．促进蛋白质水解为多肽3、在进行动物细胞培养时，通常选用的培养材料是（）A、衰老退化的动物组织细胞B、成熟动物个体的体细胞C、动物的受精卵细胞D、动物胚胎或幼龄动物个体的细胞4、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状（）A、难以预测B、像甲C、像乙D、像丙5、生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。
第1课时 动物细胞培养和核移植技术[学习目标] 1.了解动物细胞培养的概念和过程。
2.理解动物细胞培养的条件与应用。
3.了解克隆动物。
4.简述动物体细胞核移植技术。
5.说出克隆动物的应用前景。
知识点一 动物细胞工程和动物细胞培养知识梳理1.动物细胞工程(1)常用的技术手段：□01动物细胞培养、动物细胞核移植、□02动物细胞融合、生产单克隆抗体等。
(2)基础：□03动物细胞培养。
2．动物细胞培养(1)概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成□01单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
(2)原理：细胞增殖。
(3)过程 动物组织块――→剪碎胰蛋白酶或胶原蛋白酶单个细胞――→加培养液细胞悬液―→原代培养―→传代培养 ①选材a ．一般选取胚胎或幼龄动物的器官或组织。
b ．选材原因：分化程度低，增殖能力强，易于培养。
②原代培养a.□02原代培养：通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。
b.□03细胞贴壁：悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上生长的现象。
c.□04接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象。
③传代培养a ．传代培养：贴满瓶壁的细胞用□05胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程通常被称为传代培养。
b ．胰蛋白酶的作用：使细胞从瓶壁上脱离下来，使细胞相互分散。
c ．培养细胞的特点：10代以内，保持正常的□06二倍体核型；10～50代，增殖会逐渐缓慢，以至完全停止，部分细胞的细胞核型可能会发生变化；50代以后，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得□07不死性。
(4)培养条件①□08无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理；通常还要在细胞培养液中添加一定量的□09抗生素，以防止培养过程中的污染；应定期更换培养液，以便清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养：糖、□10氨基酸、促生长因子、无机盐、□11微量元素、□12血清、血浆等。
2.2.1 动物细胞培养教学设计1.讲授法：对细胞培养过程进行疑难讲解。
2.自学法：学生先自学基本知识，完成导学案。
3.学案导学4.新授课教学基本环节：情境导入、激发兴趣→合作探究、精讲点拨→阅读教材、独立思考→反思总结、当堂检测课时安排：1 课时引入：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？[动物细胞培养]动物细胞培养的概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中, 让这些细胞生长和增殖. 动物细胞的培养过程：见课本P45：动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础（一）动物细胞培养的过程学习活动一：【合作学习】阅读教材并完成下列问题：1.为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？2.如何将动物组织分散成单个的细胞？系3. 胰蛋白酶的作用是什么？ 由此可说明细胞间的物质主要是什么成分？4. 培养瓶或培养皿的内表面为何要光滑、无毒？5、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？ 【动动手】请完成动物细胞培 养的流程图。
有关概念:• 原代培养： 从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。
初次培养称为原代细胞培养。
细胞株细传代培养： 将原代细胞 胞从培养瓶中取出， 配制成细胞悬浮液， 分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养， 称为传代培养。
细胞株： 原代细胞一般传至 10 代左右细胞生长停滞， 大 部分细胞衰老死亡， 少数细胞存活到 40~50 代， 这种传代细胞为细胞株。
细胞系： 细胞株传代至 50 代后又出现细胞生长停滞状态， 只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件 下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。
传代培养原代培养细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。
学习活动二：寻根问底，加深巩固1、选用组织时，一般用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做培养材料，而不用老龄动物的，这是为什么？2、胰蛋白酶处理组织时要注意什么问题？能够用胃蛋白酶代替吗？3、动物细胞培养能否最终培养成新个体？(二）动物细胞培养的条件思考：多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题：1.动物细胞培养时通常要添加抗生素，为什么？2.动物细胞培养时通常要添加血清，为什么？3.添加5%的CO2 是为了刺激细胞呼吸，还是为了维持培养液的pH 值？（三）动物细胞培养技术的应用1.大规模生产有重要价值的生物制品。
动物细胞工程教学目的动物细胞工程的主要技术一一动物细胞培养、动物细胞融合和单克隆抗体（ A :知道）。
重点和难点单克隆抗体教学过程【板书】「动物细胞培养Y动物细胞融合动物细胞工程「单克隆抗体的制备单克隆抗体单克隆抗体的应用【注解】一、动物细胞培养（一）培养液的成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清（与植物组织培养基的区别）J取材：动物胚胎细胞或出生不久的幼龄动物的器官或组织厂分离细胞1 方法：用胰蛋白酶（二）过程原代培养传代培养10代左右细胞株：40-50代细胞系：无限传代（部分遗传物质发生了改变，具癌变特点）（三）应用：1 .生产有重要价值的蛋白质生物制品2.培养用于移植的组织或器官3.检测有毒物质4.进行生理、病理研究，为治疗和预防疾病提供理论依据【例析】.在动物细胞培养过程中，出现遗传物质改变的细胞是（A）A .细胞系B .细胞株C .原代细胞D .传代细胞.下列属于动物细胞培养与植物细胞培养区别的是（A）A •培养基成分不同B •动物细胞培养不需要在无菌条件下进行C •动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能D .动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株二、动物细胞融合（一）与植物体细胞杂交的比较1 .相同：动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是相同的，诱导融合的方法类似。
（如都可用聚乙二醇PEG ）2.不同（1）物体细胞杂交在植物原生质体融合后，还有把杂种体细胞培育成新个体这一步骤。
而动物细胞融合则无这一步。
（2）动物细胞融合常用灭活的病毒。
（二）最重要的用途一一制备单克隆抗体三、单克隆抗体（一）与血清抗体的区别单克隆抗体：由单个B细胞通过无性繁殖（克隆）形成细胞群，由它们产生出化学性质单一，特异性强的抗体。
血清抗体：从动物血清中分离所得的抗体，产量低、特异性差、纯度低，反应不够灵敏。
（二）制备小鼠脾脏B淋巴细胞+小鼠的骨髓瘤细胞（经过免疫、效应）灭活病毒或PEG （融合后有个筛选问题，易V除相同细胞的融合细胞）v「具效应B淋巴细胞分泌特异性抗体的能力杂交瘤细胞〜I 具骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的能力挑选出能产生特定抗体的细胞群、继续培养（用选择培养基选出能产生单克隆抗体的）I体内或体外培养单克隆抗体（三）应用1 .对理论研究有重要意义2.实践中的应用：疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高, 优越性非常明显。
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术1．动物细胞培养的特点是( )①细胞贴壁②有丝分裂③分散生长④接触抑制⑤减数分裂⑥传代培养一般传至10代就不易传下去A．①②④⑥B．②③④⑤C．①③④⑥D．③④⑤⑥解析：培养瓶内悬液中分散的细胞只有贴附在光滑无毒的瓶壁上才会生长增殖，称为细胞贴壁，在悬液中不会分散生长，①对、③错；动物体细胞增殖的方式是有丝分裂，没有减数分裂，②对、⑤错；当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂，这叫接触抑制，④对；传代培养的细胞一般传到10代以后就不易传下去了，⑥对。
答案：A2．动物细胞培养过程的顺序是( )①原代培养②传代培养③用胰蛋白酶处理组织，形成分散的细胞悬液A．①②③B．①③②C．②①③D．③①②解析：动物细胞培养过程的程序为选取幼龄动物或早期胚胎组织作培养材料→用胰蛋白酶处理组织，制备细胞悬液→原代培养→传代培养。
答案：D3．用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织或细胞( )A．容易产生各种变异B．具有更高的全能性C．取材十分方便D．分裂增殖的能力强解析：用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织，主要因为胚胎或幼龄动物的器官或组织分裂能力旺盛。
答案：D4．如下图为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中B、E两点表示经筛选、分装后继续培养。
下列判断错误的是( )A．B点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养B．接触抑制现象主要发生在AB段和DE段C．分瓶后的每个培养瓶中的细胞群称为一个克隆D．E点后的细胞大多数具有异倍体核型，可连续传代解析：人们通常将动物组织处理分散后的初次培养称为原代培养，分瓶后的培养称为传代培养，B点之后细胞继续生长，可见B点之后进行了传代培养，A正确；当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，即会发生接触抑制现象，在AB段和DE 段细胞几乎生长停滞，可能发生了接触抑制，B正确；细胞克隆的最基本要求是必须保证分离出来的是一个细胞而不是多个细胞，C错误；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系，无限细胞系大多已发生异倍化，具异倍体核型，D正确。
动物细胞培养和核移植教学设计〔第一课时〕一、概述本节是人教版普通高中课程标准实验教科书生物选修三第二章第三节《动物细胞培养和核移植》第一课时。
普通高中《生物课程标准》〔实验〕指出，高中生物课程目的之一是帮助学生理解生物科学、技术和社会的相互关系，增强学生对自然和社会的责任感，促进学生形成正确的世界观和价值观。
同时现代教育理论认为，从某种意义上说，主动参与的学习过程比单纯获得现成的结论更重要。
在学生通过对植物细胞工程的学习之后，可能会对是否能对动物细胞进行培养、克隆动物等问题产生疑问。
本节课在设置情景，介绍动物细胞工程相关技术之后，我采用自主学习的方法，先让学生自学动物细胞的培养过程，找出关键概念，画出动物细胞培养的流程图，在此基础上，再对学生的流程图进行修正，并强调重要的名词和概念。
对于动物细胞培养应注意的问题，我采用一系列问题串的形式，让学生讨论探究。
最后总结得出结论。
通过对植物组织培养和动物细胞培养的比较，实现对新知识进行有意义的构建。
最后通过介绍居里夫人的名言，进一步激励学生热爱科学，关爱生命的情感。
二、教学目标分析知识目标： 1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用；2、说出贴壁生长、接触抑制、原代培养、传代培养等基本概念；3、区分植物组织培养和动物细胞培养的异同能力目标： 1、通过自学概括出动物细胞培养的过程，积极参与小组讨论2、运用已学知识，分析动物细胞培养的条件。
情感目标： 1、培养热爱科学，关爱生命健康的情感2、关注细胞工程研究的发展和应用前景三、学习者特征分析本节课的学习者特征分析主要是根据教师平时对学生的了解而做出的：〔1〕学生是某某培元中学高二年学生；经过一年多的高中学习，已经掌握了一定的生物学基础知识,具备了独立思考和判断的能力。
〔2〕学生已经学习了基因工程、植物细胞工程的学习，对动物细胞工程的学习有较浓厚的兴趣。
〔3〕学生在以前较少开展课堂的自主学习和讨论，有必要加以引导四、教学策略选择与设计〔1〕情境激趣策略：通过大量动物细胞培养的图片、诗歌、名人名言激发学生的学习兴趣和热爱科学的情感〔2〕以任务驱动的自主学习策略：通过布置每位学生阅读教材相关内容，培养学生的自主学习能力。
2．2 动物细胞工程2．2.1 动物细胞培养和核移植技术 目标导航 1.结合图2－16及相关内容，归纳动物细胞培养的过程、条件及应用。
2.结合图2－21，归纳通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景。
一、动物细胞工程(阅读P 44)44－461．概念从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
2．过程动物组织块或器官――→剪碎胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理单个细胞――→加培养液细胞悬液――→初次培养原代培养―→传代培养3．相关概念(1)细胞贴壁：悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上。
(2)接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。
(3)原代培养：指动物组织消化后的初次培养。
(4)传代培养：贴满瓶壁的细胞，出现接触抑制后，需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖的培养过程。
4．培养条件(1)无菌、无毒的环境：培养液中添加一定量的抗生素，并定期更换培养液，以清除代谢产物，防止对细胞自身造成危害。
(2)营养⎩⎪⎨⎪⎧ 无机物：无机盐、微量元素等有机物：糖、氨基酸、促生长因子、和天然成分：血清、血浆等(3)温度和pH ⎩⎪⎨⎪⎧ 温度：哺乳动物多以36.5±0.5 ℃为宜pH ：多数细胞适宜pH 为7.2～7.4(4)气体环境⎩⎪⎨⎪⎧ O 2：细胞代谢所必需CO 2：维持培养液的pH5．应用(1)生产生物制品：如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。
(2)应用于基因工程：动物细胞是基因工程技术中常用的受体细胞。
(3)应用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。
(4)用于生理、病理、药理等方面的研究，如筛选抗癌药物等。
三、动物体细胞核移植技术和克隆动物(阅读P 47－50)1．概念 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体。
2．分类 包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植，其中胚胎细胞核移植较易成功。
3．过程4．应用前景(1)加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育。
(2)保护濒危物种。
(3)转基因克隆动物可作为生物反应器，生产许多医用蛋白。
(4)转基因克隆动物细胞、组织和器官可作为异种移植的供体。
(5)人的核移植胚胎干细胞经过诱导分化，形成相应的组织、器官后，可以用于组织器官的移植。
(6)研究胚胎发育及衰老过程，追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病。
5．存在问题(1)成功率非常低(低/高)。
(2)绝大多数克隆动物还存在健康问题。
(3)克隆动物食品的安全性存在争议。
判断正误：(1)动物细胞培养时，需要对细胞进行一次脱分化处理和两次胰蛋白酶处理。
( )(2)恒温条件下进行动物细胞培养，细胞周期持续时间长短不随细胞培养进程而改变。
( )(3)动物细胞培养技术可用于检测有毒物质、构建人造皮肤、大量生产药物蛋白。
( )(4)为了防止培养过程中发生微生物污染，应将培养箱抽成真空以消毒、灭菌。
( )(5)动物细胞核移植的原理是动物细胞核的全能性。
( )(6)哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。
( )(7)动物细胞在培养的过程中一些细胞会发生遗传物质的变化。
( )(8)目前使用的或冷冻保存的细胞通常是10代以内的细胞，以保持正常的二倍体核型。
( )(9)在动物细胞的培养过程中，培养液中可以不加入血清和血浆等物质。
( )答案(1)×(2)×(3)√(4)×(5)√(6)√(7)√(8)√(9)×一、动物细胞培养1．动物细胞培养过程分析(1)过程：(2)贴壁生长现象及接触抑制现象①贴壁生长：动物细胞在液体培养基中悬浮生长一段时间之后，大部分细胞会贴附在培养瓶壁上生长。
②接触抑制：细胞进行有丝分裂，数目增加到表面相互接触时，停止分裂增殖，出现接触抑制现象。
(3)原代培养和传代培养①原代培养：动物组织消化后的初次培养。
②传代培养：原代培养过程中，贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶培养，让细胞继续增殖。
2．动物细胞培养与植物组织培养的比较1．动物细胞培养为什么需要无菌、无毒的环境？答案细菌、真菌和病毒等均可造成细胞培养环境的污染，而离体培养的细胞已失去了对微生物和有毒物质的防御能力，一旦受到污染或自身代谢物质积累等，培养的细胞就会死亡。
2．根据动物细胞培养的过程，思考下列问题：(1)培养前为什么要将动物组织分散成单个细胞？(2)动物细胞培养中两次使用胰蛋白酶作用的对象有何不同？答案(1)分散后细胞能与培养液充分接触，更易进行物质交换。
(2)第一次是将组织块分散成单个细胞，第二次是将贴满瓶壁的细胞分散成单个细胞。
3．为什么进行动物细胞培养时，通常要添加血清？答案血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等物质，而且还含有多种未知的促生长因子，能促进细胞的生长、增殖和贴附。
4．进行动物细胞培养为何常选用幼龄动物组织或胚胎作培养材料？动物细胞培养需要脱分化吗？答案幼龄动物组织或胚胎的细胞分化程度低，增殖能力很强，更易于培养。
动物细胞培养不需经过脱分化过程，因高度分化的动物细胞发育潜能变弱，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。
1．某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。
下列有关说法正确的是( )A．在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，可用胃蛋白酶处理B．细胞培养应在CO2培养箱中进行，CO2的作用是作为细胞代谢原料C．取甲细胞进行培养，传至10～50代就会完全停止D．乙细胞在原代培养过程中，最终会出现停止增殖的现象问题导析(1)胃蛋白酶的最适pH大约为2，这一环境下细胞往往会受到破坏，不利于培养，所以一般用胰蛋白酶而不用胃蛋白酶处理细胞。
(2)培养液中CO2的作用是调节培养液的pH。
(3)在适宜条件下，肝肿瘤细胞可以无限增殖。
(4)正常肝细胞在原代培养过程中会出现接触抑制现象，停止增殖。
答案 D一题多变判断正误：(1)动物细胞培养的原理是动物细胞的全能性。
( )(2)原代培养的细胞是指从贴壁生长到发生接触抑制的细胞。
( )(3)传代培养的细胞以有丝分裂方式增殖，在传代过程中其遗传物质保持不变。
( )(4)只要培养条件适宜，细胞都可在体外无限繁殖。
( )答案(1)×(2)×(3)×(4)×二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1．原理克隆动物的形成利用了动物细胞核的全能性。
2．供体和受体的选择(1)供体：一般选用传代10代以内的细胞，因为10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型，保证了供体细胞正常的遗传基础。
而一般不选用生殖细胞作为供核细胞是因为生殖细胞与正常细胞相比，核遗传物质已减半。
(2)受体：去核的减数第二次分裂中期的卵母细胞。
①选取减数第二次分裂中期的卵母细胞的原因：一方面细胞大，易于操作；卵黄多，营养丰富，为发育提供充足的营养。
另一方面此时具备受精能力，细胞质中含有能刺激融合后重组细胞进行分裂分化并形成重组胚胎的物质。
②去核的原因：保证克隆动物的遗传物质最大程度地来自有重要利用价值的动物。
3．以克隆高产奶牛为例1．为什么核移植技术获得的动物与供核动物性状不完全相同？答案(1)克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。
(2)性状是基因与环境共同作用的结果。
供核动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其性状也不可能和供核动物完全相同。
(3)在个体发育过程中有可能发生基因突变，产生供核动物没有的性状。
2．结合动物细胞核移植的过程，分析为什么体细胞核移植较胚胎细胞核移植更困难。
答案由于动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易；而动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难。
因此动物体细胞核移植的难度就明显高于胚胎细胞核移植。
2．下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病的过程图解。
请据图回答下列问题：(1)图中①所示的结构名称是________________________________________________。
(2)图中③④所示的生物技术名称分别是_______________________________________________________、__________________。
(3)过程③通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它__________________________________________________________________。
(4)过程④通常用②作为受体细胞的原因是__________________________________________ ________________________________________________________________________。
(5)图示方法与一般的异体核移植相比最大的优点是___________________________________________________________________________，该种基因治疗所属类型为___________________________________________________。
问题导析(1)①是从供体(患者)体细胞分离出的细胞核。
(2)③表示核移植技术，④表示转基因技术。
(3)核移植的受体细胞一般是卵母细胞，原因是它体积大、易操作，含有供胚胎发育的营养物质，它还含有促进细胞核全能性表达的物质。
(4)早期胚胎中的细胞分化程度低，全能性高，可诱导分化成各种组织器官。
(5)图示培育出的细胞(胰岛B细胞)核遗传物质来自患者本人，所以移植后不发生免疫排斥反应；图中所示基因治疗是体外转基因，故所属类型为体外基因治疗。
答案(1)细胞核(2)核移植技术转基因技术(或基因工程、DNA重组技术、基因拼接技术) (3)含有促进细胞核全能性表达的物质(4)早期胚胎细胞分化程度低，全能性高，可诱导分化为各种组织、器官(5)细胞移植无免疫排斥反应体外基因治疗一题多变判断正误：(1)核移植过程中细胞核只来自于一个个体，因此核遗传物质与供核个体的相同，属于无性繁殖。
( )(2)克隆技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现了动物细胞的全能性。
( )(3)克隆动物可以作为异种移植的供体，克隆技术用于组织器官的移植。
( )(4)克隆技术可以用于增加濒危动物数量，改善濒危物种的基因组成。
( )(5)图中健康胰岛B细胞基因通常应该采用显微注射技术转入动物细胞中。
