渐处理对肺缺血再灌注损伤的保护作用
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·实验研究·2012年12月第9卷第35期中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD缺血/再灌注损伤主要发生在再灌注的初期，与长时间缺血后突然再灌注引起细胞呼吸爆发、氧自由基的堆积、Ca 2+超载等有关。
多年来，针对如何进行再灌注干预一直是减轻缺血器官损伤研究的热点[1]。
“渐处理”也称逐渐、温和或阶段性再灌注，是指缺血再灌注时从零开始逐渐增加血流到不加以控制。
研究证实，缓慢地再灌注可以减轻缺血再灌注损伤[2-4]。
“渐处理”作为一种改良的缺血后处理方式，不需要预知缺血事件发生的时间，又没有繁琐的再灌注/缺血循环操作，不附加额外的缺血，可能有更广阔的临床应用前景。
本实验拟通过建立大鼠在体肺缺血再灌注模型，探讨“渐处理”对肺缺血再灌注损伤的作用及机制，现报道如下：1材料与方法1.1动物与试剂健康雄性SD 大鼠40只，体重250～350g ，由南京医科大学实验动物中心提供。
参附注射液由雅安三九药业有限公司生产，国药准字Z51020664。
超氧化物歧化酶（SOD ）、丙二醛（MDA ）检测试剂盒均购置于南京建成生物工程公司；细胞凋亡检测试剂盒购置于武汉博士德生物工程公司。
1.2动物模型制备参照Eppinger 等[5]大鼠肺缺血再灌注损伤模型加以改进，健康大鼠以戊巴比妥钠（40mg/kg ）腹腔注射麻醉后，尾静脉注射肝素。
气管切开后进行气管插管，小动物呼吸机辅助通气。
胸骨右缘第四肋间开胸，于吸气末用无创血管夹阻断右肺门包括右主支气管和右肺动静脉（以肺无舒缩为阻断标“渐处理”对肺缺血再灌注损伤的保护作用麻日虎1李莹1王玉旋2张静11.广东省深圳市龙岗区人民医院外科，广东深圳518172；2.山西省肿瘤医院胸外科，山西太原030013[摘要]目的探讨“渐处理”作为一种改良的后处理方式对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。
方法采用大鼠肺原位缺血再灌注损伤模型进行研究。
将40只清洁级SD 大鼠随机分为四组：手术对照组（S 组），缺血再灌注组（I/R 组），缺血后处理组（IPO 组），缺血后渐处理组（IGR 组）。
观察肺组织病理形态变化，测定肺组织湿/干重比（W/D ），检测肺组织匀浆中丙二醛（MDA ）含量及超氧化物歧化酶（SOD ）活性。
结果与S 组比较，I/R 组光镜下见肺组织病变明显加重，肺组织W/D 明显增加，肺组织中SOD 活力明显降低，MDA 的浓度明显增高（P ＜0.01）；与I/R 组比较，IPO 组及IGR 组肺组织病变减轻，肺组织W/D 明显降低，肺组织中SOD 活力明显升高，MDA 的浓度明显降低（P ＜0.01）；IGR 组与IPO 组比较，上述各项指标均有所减轻，两者差异无统计学意义（P ＞0.05）。
结论“渐处理”对大鼠肺原位缺血再灌注损伤有保护作用。
与缺血后处理比较，是一种更有效的、更适合临床应用的、减轻再灌注损伤的方法。
[关键词]缺血再灌注损伤；缺血后处理；渐处理；肺；大鼠[中图分类号]R563[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）12（b ）-0038-03Gradual reperfusion protects against ischemia/reperfusion lung injury in ratsMA Rihu 1LI Ying 1WANG Yuxuan 2ZHANG Jing 11.Department of Surgery,Longgang District People's Hospital of Shenzhen City,Guangdong Province,Shenzhen 518172,China;2.Department of Thoracic Surgery,Shanxi Tumor Hospital,Shanxi Province,Taiyuan 030013,China[Abstract]Objective To explore protective function and mechanism of gradual reperfusion,a modified ischemic postcondi -tioning,on ischemia-reperfusion lung injury in rats.Methods The study was performed on a reliable extracorporeal rat lung ischemia-reperfusion injury model.Forty rats were randomly divided into four groups:the sham group (S group),the ischemic reperfusion group (I/R group),ischemic postconditioning group (IPO group),and gradual reperfusion group (IGR group).Lung tissue histological changes were examined;the ratio of lung wet weight to dry weight (W/D)was evaluated;malondialdehyde (MDA)content and activities of superoxide dismutase (SOD)in lung tissues were measured.Results Compared with S group,the obvious pathologic changes (including lung edema,hemorrhage,and inflammatory cells se -questration)and the W/D ratio were significantly increased in I/R group,lung tissue SOD activity were significantly de -creased,while the concentration of MDA were significantly increased (P ＜0.01).Compared with the I/R group,the patho -logic changes and the W/D ratio in the IPO and IGR group were significantly decreased,lung tissue SOD activity was sig -nificantly increased,while the concentration of MDA was significantly decreased (P ＜0.01);and the effects were especially obvious in IGR group rats,however,there were no significant difference between IPO and IGR group (P ＞0.05).Conclu -sion Gradual reperfusion has obvious protective effects on ischemia-reperfusion lung injury in rats,and can be a more ef -fective and suitable method for clinical application to reduce reperfusion injury.[Key words]Ischemia reperfusion injury;Ischemic postconditioning;Gradual reperfusion;Lung;Rat[基金项目]广东省深圳市科技计划项目（项目编号：201103251）。
[作者简介]麻日虎（1970.11-），男，硕士研究生，副主任医师，主要从事胸外科临床研究工作。
382012年12月第9卷第35期·实验研究·CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报准）。
并应用温热的37℃生理盐水棉纱敷盖创口。
缺血的时间为45min ，为缺血期。
45min 后放开结扎线，使肺脏充盈后，计时120min ，为再灌注期。
再灌注期结束后左房放血处死大鼠。
1.3动物分组及处理40只大鼠随机分成四组，每组10只。
手术对照组（S 组）：仅解剖，不阻断右肺门持续灌注165min ；缺血再灌注组（I/R 组）：在吸气末用无创伤血管夹阻断右肺门，45min 后开放再灌注120min ；缺血后处理组（IPO 组）：阻断右侧肺门45min 后，短暂再灌注10s ，缺血10s ，反复5次，然后再全面恢复灌注120min ；缺血后渐处理组（IGR 组）：阻断右侧肺门45min 后，逐步恢复再灌注血流，50%1min ，80%2min ，然后再全面恢复灌注120min 。
1.4观察指标及方法1.4.1肺组织湿干重比（W/D ）用滤纸吸去右肺上叶血，分析天平称重为湿重，置于70℃电热恒温干燥箱中烤至恒重，称重为干重，计算肺W/D 比值。
1.4.2病理检查取约1cm ×1cm ×1cm 新鲜右肺组织，沾去表面血迹，经4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋、切片，HE 染色后光学显微镜观察。
1.4.3肺组织MDA 、SOD 测定采用黄嘌呤氧化酶法测血浆SOD 活性；硫代巴比妥酸法测MDA 活性。
1.5统计学方法采用SPSS 12.0统计软件包进行资料录入、整理及统计分析处理，计量资料采用均数±标准差（x ±s ）表示，组间比较采采用单因素方差分析和t 检验，以P ＜0.05为差异有统计学意义。
2结果2.1四组大鼠肺组织湿干比比较I/R 组、IPO 组及IGR 组大鼠肺组织W/D 明显高于S 组（P ＜0.01）。
IPO 组及IGR 组大鼠肺组织W/D 值明显低于I/R 组（P ＜0.01）。
IPO 组及IGR 组大鼠肺组织W/D 比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。
见表1。
表1四组大鼠肺组织湿干比比较（x ±s ）注：与S 组比较，**P ＜0.01；与I/R 组比较，##P ＜0.012.2四组大鼠肺组织病理变化光镜下S 组肺泡腔内无水肿、出血及坏死，间隔无增宽，无炎症细胞浸润，结构清晰可见；I/R 组肺泡腔内明显出血、水肿、血管扩张、炎性细胞浸润明显，并有局灶性肺气肿，肺泡间隔增宽，偶见局灶性坏死，组织细胞结构紊乱；与I/R 组比较，IPO 组及IGR 组肺组织水肿、出血、炎性细胞浸润等明显减轻。
